李斯特氏菌快速检测方法.doc

*************公司·品管部
李斯特氏菌快速检测方法
文件编号
QS/TH-ZY-PG-401
版 本
A0
实施日期
2010年10月3日
1、内容及范围
本标准规定了李斯特氏菌快速检测方法
适用于肉品李斯特氏菌检测
2、测试步骤
2.1将1瓶Half Fraser Broth Plus移入可均质的取样袋中，用量杯加入225ml灭菌生理盐水从封口处向下折叠2-3英寸，封口并用力摇匀直到溶解。
2.2加入25g无菌操作铰碎的样品，于上述样品袋中，抓紧袋口搓揉样品或用力摇匀直至混合充分。
2.3轻轻封上取样袋，于30℃培养至少21h，但不要超过24小时。
2.4从培养箱中取出样品袋之前，加入10ml无菌水水化1瓶BLEB培养基，拧紧瓶盖充分摇匀直至溶解
2.5 从培养箱中取出样品袋，取0.1ml（或4滴）于已水化的BLEB瓶中。
2.6轻轻地拧上BLEB瓶盖，于30℃培养21-24h，但不要超过24小时。
2.7小心地从培养箱中取出BLEB样品瓶，从培养液上吸取2ml培养液于-玻璃试管中。
2.8 将玻璃试管放在80℃水浴中加热20mm。
2.9从冰箱中取出所需数量的REVEAL李斯特菌检测板，在使用前使其平衡到室温大约25℃。
2.10打开包装，置于一小平台面上，做好标准。
2.11用吸管取出一定量的样品培养液。
注意：
1.不要涡旋，搅拌，摇动样品
2．不要搅动样品底部的颗粒
3．从样品中只取培养液，不要含有碎片
2.12垂直的将吸管移到检测板的样品孔，自然滴下6滴培养液。
2.13 20分钟观察并记录检测结果，如果超20分钟，可能会因为检测板反应时间过长而导致错误结果。
结果判定：当检测区出现一条兰色色带表明LBEB中存在李斯特菌，结果为阴性，质控区出现的兰色表明检测板工作正常。
废弃物处理：使用后的REVEAL检测板、吸管、培养基等实验物品用121℃15分钟湿热灭菌处理。