地塞米松对异氟醚麻醉手术大鼠SIRT1_NF-κB信号通路的影响.pdf

论著地塞米松对异氟醚麻醉手术大鼠S I R T 1/N F-B信号通路的影响高勤 左友波 刘琪琳(川北医学院附属医院麻醉科,四川 南充 6 3 7 0 0 0)【摘要】目的 探究地塞米松对异氟醚麻醉手术大鼠沉默信息调节因子1(S I R T 1)/核因子(N F)-B信号通路的影响。方法 选取4 0只S P F级S D大鼠随机分为4组:S h a m组(不做任何处理);I S O组(持续4 h吸入1.4%异氟醚);5 D e x I s o组(吸入异氟醚前3 0 m i n腹腔注射5 m g/k g地塞米松);1 0 D e x I s o组(吸入异氟醚前3 0 m i n腹腔注射1 0 m g/k g地塞米松)。采用M o r r i s水迷宫实验和物体位置识别实验评估大鼠认知功能,HE染色观察大鼠海马区形态学变化,TUN E L染色观察大鼠海马区神经元凋亡情况,E L I S A法检测海马组织中I L-6、I L-1和TN F-水平,W e s t e r n b l o t法检测含半胱氨酸 的天 冬氨 酸 蛋白 水解 酶3(c a s p a s e-3)、c a s p a s e-9、S I R T 1、N F-B、磷 酸 化(p)-N F-B、N F-B抑制 蛋 白(I B)。结果 与S h a m组比较,I S O组第3至5天逃避潜伏期和物体记忆时间延长,原平台位置穿越次数减少,海马区神经元凋亡率、c a s p a s e-3、c a s p a s e-9相对表达量、I L-6、I L-1、T N F-及p-N F-B/N F-B水平明显升高,S I R T 1和I B 表达量明显降低(P0.0 5);与I S O组比较,1 0 D e x I s o组第4至5天逃避潜伏期和物体记忆时间缩短,原平台位置穿越次数增加,海马区神经元凋亡率、c a s p a s e-3、c a s p a s e-9相对表达量、I L-6、I L-1、T N F-及p-N F-B/N F-B水平明显降低,S I R T 1和I B 表达量明显升高(P0.0 5)。结论 地塞米松可改善异氟醚麻醉所致大鼠认知功能障碍,减轻神经元凋亡,可能与调节S I R T 1/N F-B信号通路有关。【关键词】地塞米松;异氟醚;认知功能;神经元凋亡;S I R T 1/N F-B信号通路【中图分类号】R 9 6 4 【文献标志码】A D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.1 2.0 0 5 通讯作者:刘琪琳,副主任医师,E-m a i l:5 7 4 6 4 7 4 3 9q q.c o m引用本文:高勤,左友波,刘琪琳.地塞米松对异氟醚麻醉手术大鼠S I R T 1/N F-B信号通路的影响J.西部医学,2 0 2 3,3 5(1 2):1 7 4 0-1 7 4 4,1 7 5 0.D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.1 2.0 0 5E f f e c t s o f d e x a m e t h a s o n e o n S I R T 1/N F-B s i g n a l i n g p a t h w a y s i n r a t s u n d e r g o i n g i s o f l u r a n e a n e s t h e s i aG A O Q i n,Z U O Y o u b o,L I U Q i l i n(D e p a r t m e n t o f A n e s t h e s i o l o g y,T h e A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f N o r t h S i c h u a n M e d i c a l C o l l e g e,N a n c h o n g 6 3 7 0 0 0,S i c h u a n,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T o e x p l o r e t h e e f f e c t s o f d e x a m e t h a s o n e o n s i l e n t i n f o r m a t i o n r e g u l a t o r 1(S I R T 1)/n u c l e a r f a c t o r(N F)-B s i g n a l i n g p a t h w a y s i n r a t s u n d e r g o i n g i s o f l u r a n e a n e s t h e s i a.M e t h o d s A t o t a l o f 4 0 S D r a t s w e r e r a n-d o m l y d i v i d e d i n t o S h a m g r o u p(n o t r e a t m e n t),I S O g r o u p(i n h a l a t i o n o f 1.4%i s o f l u r a n e f o r 4 h),5 D e x I s o g r o u p(i n-t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o n o f 5 m g/k g d e x a m e t h a s o n e a t 3 0 m i n u t e s b e f o r e i s o f l u r a n e i n h a l a t i o n)a n d 1 0 D e x I s o g r o u p(i n t r a-p e r i t o n e a l i n j e c t i o n o f 1 0 m g/k g d e x a m e t h a s o n e a t 3 0 m i n u t e s b e f o r e i s o f l u r a n e i n h a l a t i o n).T h e c o g n i t i v e f u n c t i o n o f r a t s w a s e v a l u a t e d b y M o r r i s w a t e r m a z e t e s t a n d o b j e c t p o s i t i o n r e c o g n i t i o n t e s t.T h e m o r p h o l o g i c a l c h a n g e s o f h i p p o c a m p u s w e r e o b s e r v e d b y HE s t a i n i n g.T h e a p o p t o s i s o f n e u r o n s i n h i p p o c a m p u s w a s o b s e r v e d b y TUN E L s t a i n i n g.T h e l e v e l s o f i n t e r l e u k i n-6(I L-6),I L-1 a n d t u m o r n e c r o s i s f a c t o r (T N F-)i n h i p p o c a m p u s w e r e d e t e c t e d b y E L I S A.T h e e x-p r e s s i o n s o f c y s t e i n e p r o t e i n a s e-3(c a s p a s e-3),c a s p a s e-9,S I R T 1,N F-B,p h o s p h o r y l a t e d(p)-N F-B a n d N F-B i n h i b i-t o r y p r o t e i n(I B)w e r e d e t e c t e d b y W e s t e r n b l o t.R e s u l t s C o m p a r e d w i t h S h a m g r o u p,e s c a p e l a t e n c y a n d o b j e c t m e m o r y t i m e w e r e p r o l o n g e d o n t h e 3r d-5t h d a y w e r e p r o l o n g e d,t h e t i m e s o f c r o s s i n g t h e o r i g i n a l p l a t f o r m w e r e r e d u c e d,a p o p t o s i s r a t e o f h i p p o c a m p u s n e u r o n s,t h e r e l a t i v e e x p r e s s i o n l e v e l s o f c a s p a s e-3 a n d c a s p a s e-9,a n d l e v e l s o f I L-6,I L-1,T N F-a n d p-N F-B/N F-B w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d,a n d e x p r e s s i o n l e v e l s o f S I R T 1 a n d I B w e r e s i g n i f i c a n t l y 0471西部医学 2 0 2 3年1 2月 第3 5卷第1 2期 M e d J W e s t C h i n a,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 2d e c r e a s e d i n I S O g r o u p(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h I S O g r o u p,t h e e s c a p e l a t e n c y a n d o b j e c t m e m o r y t i m e w e r e s h o r t-e n e d o n t h e 4r d-5t h d a y,t i m e s o f c r o s s i n g t h e o r i g i n a l p l a t f o r m w e r e i n c r e a s e d,t h e a p o p t o s i s r a t e o f h i p p o c a m p u s n e u-r o n s,t h e r e l a t i v e e x p r e s s i o n l e v e l s o f c a s p a s e-3 a n d c a s p a s e-9,a n d t h e l e v e l s o f I L-6,I L-1,TN F-a n d p-N F-B/N F-B w e r e s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d,a n d t h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f S I R T 1 a n d I B w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d i n 1 0 D e x I s o g r o u p(P0.0 5).C o n c l u s i o n D e x a m e t h a s o n e c a n i m p r o v e c o g n i t i v e d y s f u n c t i o n i n d u c e d b y i s o f l u r a n e a n e s t h e s i a a n d r e d u c e n e u r o n s a p o p t o s i s i n r a t s,w h i c h m a y b e r e l a t e d t o r e g u l a t i n g S I R T 1/N F-B s i g n a l i n g p a t h w a y s.【K e y w o r d s】D e x a m e t h a s o n e;I s o f l u r a n e;C o g n i t i v e f u n c t i o n;N e u r o n a p o p t o s i s;S I R T 1/N F-B s i g n a l i n g p a t h w a y 异氟醚是临床常用的吸入性全身麻醉药物,麻醉诱导平稳、迅速、舒适,苏醒快,肌肉松弛良好,且无交感神经系统兴奋作用1。有研究报道,异氟醚可能诱导大鼠脑神经细胞凋亡,从而严重影响其脑功能,而且这种影响可长期存在,甚至出现行为功能障碍2。故对异氟醚麻醉导致术后认知功能障碍诱因、预防、诊断及治疗的分析成为研究热点。地塞米松可用于风湿性疾病、严重过敏、哮喘、脑水肿等多种疾病3。近年来,研究报道地塞米松在修复血脑屏障4、减轻神经损伤5方面发挥重要作用。韩佳6研究显示,地塞米松可降低七氟烷所致新生大鼠记忆障碍和神经元损伤,可能与上调沉默信息调节因子1(s i l e n t i n f o r-m a t i o n r e g u l a t o r 1,S I R T 1)表达有关。由此推理,地塞米松在异氟醚麻醉引起的认知功能损伤中可能也存在保护作用。核因子(n u c l e a r f a c t o r,N F)-B通路是经典的炎症信号通路,S I R T 1可负向调控N F-B表达,抑制炎症反应水平,在脑组织炎性损伤中有重要作用。为了评价地塞米松对异氟醚麻醉手术大鼠认知功能及S I R T 1/N F-B信号通路的作用,本研究将通过吸入异氟醚模拟异氟醚麻醉状态,观察地塞米松处理后大鼠认知功能、海马区形态学改变、炎症细胞因子水平及S I R T 1/N F-B信号通路蛋白的影响,为临床麻醉药物的合理使用提供理论依据。1 材料与方法1.1 主要仪器 R 4 1 9型动物麻醉呼吸机(深圳瑞沃德生命科技有限公司),X R-XM 1 0 1型M o r r i s水迷宫实验系统、X R-X X 1 1 7型物体位置识别系统(上海欣软信息科技有限公司)。1.2 主要药品与试剂 地 塞 米 松 片(国 药 准 字H 4 4 0 2 4 6 1 8,批号1 9 0 5 2 0)购自广东南国药业有限公司,异氟醚(C A S 2 6 6 7 5-4 6-7,批号:5 4 8 3 2 6 0 1)购自美国ME R C K公司,大鼠I L-6、I L-1和T N F-E L I S A试剂盒均购自北京索莱宝科技有限公司,批号分别为T 1 5 6 8、T 1 8 4 0、T 3 3 4 9,苏木精-伊红(HE)染色试剂、末端 标 记 法(t e r m i n a l-d e o x y n u c l e o i t i d y l t r a n s f e r a s e m e d i a t e d n i c k e n d l a b e l i n g,TUN E L)细胞凋亡检测试剂盒、蛋白裂解液均上海碧云天生物技术有限公司,批号分别为2 0 2 0 0 5 1 8、2 0 2 1 0 1 3 0、2 0 2 1 0 2 1 0,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(c y s t e i n e p r o t e i n a s e-3,c a s p a s e-3)、c a s p a s e-9、S I R T 1、N F-B、磷 酸化(p h o s-p h o r y l a t e d,p)-N F-B、N F-B抑 制 蛋 白(N F-B i n-h i b i t o r y p r o t e i n,I B)、-肌动蛋白(-a c t i n)抗体均购自美国A b c a m公司,批号分别为a b 3 2 4 9 9、a b 3 2 5 3 9、a b 1 1 0 3 0 4、a b 2 0 9 7 9 5、a b 2 8 8 4 9、a b 1 8 3 5 0 3、a b 8 2 2 6。1.3 实验动物 4 0只S P F级S D大鼠购于川北医学院动物实验中心,雄性,68周龄,体质量2 0 02 5 0 g,动物生产合格证编号为S C X K(川)2 0 1 8-0 0 1 8。大鼠饲养于温度为2 22 5、相对湿度为4 0%6 0%的动物房,光照和黑暗每1 2 h交替,适应环境饲养3 d再正式进入实验。本研究经我院动物伦理委员会批准(批准号:2 0 2 2 1 9)。1.4 动物分组与处理 将4 0只S D大鼠随机分为4组:S h a m组,不做任何处理;I S O组,持续4 h吸入1.4%异氟醚7;5 D e x I s o组,吸入异氟醚前3 0 m i n腹腔注射5 m g/k g地塞米松6;1 0 D e x I s o组,吸入异氟醚前3 0 m i n腹腔注射1 0 m g/k g地塞米松6,每组1 0只。麻醉过程中注意观察大鼠呼吸情况,防止发生呼吸抑制,其中异氟醚吸入后大鼠翻正反射消失即为麻醉成功。麻醉大鼠结束后需要继续吸入2 L/m i n的氧气,待其恢复翻正反射,再放入各自笼中。1.5 大鼠行为学观测 大鼠麻醉3 d后进行M o r r i s水迷宫实验和物体位置识别实验。M o r r i s水迷宫实验:定位航行实验,第1至5天,每天固定时间,将大鼠从任一点面向池壁放入水池,记录1 2 0 s内大鼠找到平台的时间(逃避潜伏期);空间探索实验,第6天撤除平台,将大鼠从任一点面向池壁放入水池,记录1 2 0 s内大鼠在原平台位置穿越的次数。物体位置识别实验:将A、B两个物体放在一侧壁的左右两端,大鼠背朝两物体放入场地内,记录1 0 m i n内大鼠与这两个物体接触的情况,结束后立即将大鼠放回原来饲养的鼠盒内,待大鼠休息1 h后再进行测试,这时将场地内物体移到新的位置,仍将大鼠背向两物体放入,记录5 m i n内大鼠对物体的探索时间(物体记忆时间)。1.6 大鼠海马组织病理染色 行为学观测结束后处死大鼠,采集脑组织,分离海马组织,部分固定于4%多聚甲醛溶液,制备石蜡组织切片,分别行HE染色1471西部医学 2 0 2 3年1 2月 第3 5卷第1 2期 M e d J W e s t C h i n a,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 2和TUN E L染色,观察海马区形态学变化和细胞凋亡情况。1.7 E L I S A 检测大鼠海马组织I L-6、I L-1和T N F-水平 取海马组织,混入预冷生理盐水制备海马组织匀浆液,4 下5 0 0 0 r/m离心1 0 m i n分离上清液,参照酶联免疫吸附法(e n z y m e-l i n k e d i mm u n o s o r b e n t a s s a y,E L I S A)试剂盒说明书操作,检测海马组织中I L-6、I L-1和T N F-水平。1.8 W e s t e r n b l o t法检测大鼠海马组织相关蛋白表达量 采用取海马组织,加入蛋白裂解液提取总蛋白,采用二喹啉甲酸法(b i c i n c h o n i n i c a c i d,B C A)法检测蛋白浓度,再经过聚丙烯酰胺凝胶电泳至蛋白完全分离,以3 0 0 mA恒流转移至聚二偏氟乙烯(p o l y v i-n y l i d e n e f l u o r i d e,P V D F)膜,5%脱脂牛奶中封闭2 h,然后分别孵育c a s p a s e-3、c a s p a s e-9、S I R T 1、N F-B、p-N F-B、I B 及-a c t i n抗体,稀释比均为1 1 0 0 0,4 下摇床过夜,次日取出洗膜5次(8 m i n/次),再孵育二抗,稀释比为1 5 0 0 0,3 7 下摇床孵育1 h,最后暗室发光显影。1.9 统计学分析 采用S P S S 1 8.0软件进行分析,实验数据先行正态性检验和方差齐性检验,符合正态分布且方差齐的数据以(xs)表示,组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用L S D-t检验。以P0.0 5为差异有统计学意义。2 结果2.1 4组大鼠行为学检测数据的比较 与S h a m组比较,I S O组第3至5天逃避潜伏期和物体记忆时间延长,原平台位置穿越次数减少(P0.0 5);与I S O组比较,1 0 D e x I s o组第4至5天逃避潜伏期和物体记忆时间缩短,原平台位置穿越次数增加(P0.0 5),且1 0 D e x I s o组第5天逃避潜伏期和物体记忆时间短于5 D e x I s o组,原平台位置穿越次数多于5 D e x I s o组(P0.0 5)。见表1。表1 4组逃避潜伏期、原平台位置穿越次数和物体记忆时间的比较(xs)T a b l e 1 C o m p a r i s o n o f e s c a p e l a t e n c y,n u m b e r o f c r o s s i n g o f o r i g i n a l p l a t f o r m p o s i t i o n a n d o b j e c t m e m o r y t i m e i n e a c h g r o u p组别n逃避潜伏期(s)第1天第2天第3天第4天第5天原平台位置穿越次数(次)物体记忆时间(s)S h a m组1 03 9.6 57.2 73 0.5 56.8 11 8.8 35.9 71 4.2 24.3 51 3.4 73.2 01 2.3 73.2 69 0.6 81 1.2 7I S O组1 04 2.3 36.8 53 8.9 66.2 73 3.5 75.6 32 8.6 55.1 12 5.5 94.8 34.6 81.2 11 2 1.3 51 5.8 35 D e x I s o组1 04 3.5 87.5 43 6.2 76.5 93 0.1 86.2 12 5.0 74.8 62 1.1 95.4 66.3 51.8 41 1 7.6 31 2.2 51 0 D e x I s o组1 04 0.2 46.3 13 5.5 46.7 52 7.6 25.7 51 9.9 65.3 21 7.7 54.2 58.2 92.3 41 0 5.5 41 2.7 6F0.6 8 02.8 2 11 1.4 3 71 6.2 7 31 3.6 7 02 0.9 3 71 1.0 9 2P0.5 7 00.0 5 30.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 0 10.0 0 1注:与S h a m组比较,P0.0 5;与I S O组比较,P0.0 5;与5 D e x I s o组比较,P0.0 5。2.2 4组大鼠海马组织形态学变化的比较 S h a m组大鼠海马区细胞形态规则、排列整齐,细胞核染色均匀;I S O组海马区细胞核存在不同程度的固缩深染与空泡化,排列杂乱,1 0 D e x I s o组病理损伤较I S O组、5 D e x I s o组轻微,见图1。2.3 4组大鼠海马组织神经元凋亡情况的比较 与S h a m组 比 较,I S O组 海 马 组 织 神 经 元 凋 亡 率、c a s p a s e-3及c a s p a s e-9相 对 表 达 量 明 显 升 高(P 0.0 5);与I S O组比较,1 0 D e x I s o组神经元凋亡率、c a s p a s e-3及c a s p a s e-9相 对 表 达 量 明 显 降 低(P0.0 5),且1 0 D e x I s o组上述指标低于5 D e x I s o组(P0.0 5)。见图2、3,表2。2.4 4组大鼠海马组织I L-6、I L-1和T N F-水平的比较 与S h a m组比较,I S O组海马组织I L-6、I L-1和T N F-水平明显升高(P0.0 5);与I S O组比较,1 0 D e x I s o组I L-6、I L-1和T N F-水平明显降低 图1 4组大鼠海马组织H E染色形态学变化的比较(4 0 0)F i g u r e 1 C o m p a r i s o n o f h i p p o c a m p a l h i s t o m o r p h o l o g i c a l c h a n g e s i n a l l g r o u p s注:A.S h a m组,B.I S O组,C.5 D e x I s o组,D.1 0 D e x I s o组。2471西部医学 2 0 2 3年1 2月 第3 5卷第1 2期 M e d J W e s t C h i n a,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 2图2 4组海马组织神经元T U N E L染色凋亡情况(2 0 0)F i g u r e 2 H i p p o c a m p a l n e u r o n a p o p t o s i s i n e a c h g r o u p注:A.S h a m组,B.I S O组,C.5 D e x I s o组,D.1 0 D e x I s o组;细胞核呈蓝色,凋亡细胞呈绿色。图3 4组海马组织凋亡蛋白的表达F i g u r e 3 E x p r e s s i o n o f a p o p t o s i s p r o t e i n s i n h i p p o c a m p a l t i s s u e s o f e a c h g r o u p注:1.S h a m组,2.I S O组,3.5 D e x I s o组,4.1 0 D e x I s o组。表2 4组海马组织神经元凋亡率和凋亡蛋白表达量的比较(xs)T a b l e 2 C o m p a r i s o n o f a p o p t o s i s r a t e a n d a p o p t o t i c p r o t e i n e x p r e s s i o n o f h i p p o c a m p a l n e u r o n s i n e a c h g r o u p 组别n神经元凋亡率(%)c a s p a s e-3c a s p a s e-9S h a m组1 04.2 3 1.2 61.3 2 0.1 91.1 5 0.1 6I S O组1 02 5.5 9 4.3 72.4 2 0.3 21.9 1 0.2 45 D e x I s o组1 02 2.6 1 4.1 52.2 9 0.2 51.8 3 0.2 71 0 D e x I s o组1 01 1.2 7 2.8 41.7 8 0.1 81.5 6 0.2 1F8 6.0 0 64 3.5 4 62 3.4 7 5P0.0 0 10.0 0 10.0 0 1注:与S h a m组比较,P0.0 5;与I S O组比较,P0.0 5;与5 D e x I s o组比较,P0.0 5。(P0.0 5),且1 0 D e x I s o组上述指标低于5 D e x I s o组(P0.0 5)。见表3。表3 4组海马组织I L-6、I L-1 和T N F-水平的比较(xs,n g/L)T a b l e 3 C o m p a r i s o n o f l e v e l s o f I L-6,I L-1 a n d T N F-i n h i p p o c a m p a l t i s s u e s o f e a c h g r o u p组别nI L-6I L-1T N F-S h a m组1 01 8.6 9 3.2 51 3.4 5 3.5 83 6.2 4 5.1 7I S O组1 04 0.3 2 6.7 33 8.6 0 5.9 27 8.7 2 8.9 55 D e x I s o组1 03 7.1 4 7.4 13 4.4 6 6.3 17 3.6 5 7.8 41 0 D e x I s o组1 02 6.8 8 5.4 92 3.3 7 4.7 54 9.5 1 7.3 2F2 7.7 1 04 6.6 9 87 2.7 4 0P0.0 0 10.0 0 10.0 0 1注:与S h a m组比较,P0.0 5;与I S O组比较,P0.0 5;与5 D e x I s o组比较,P0.0 5。2.5 4组大鼠海马组织S I R T 1/N F-B信号通路蛋白表达量的比较 与S h a m组比较,I S O组海马组织S I R T 1和I B 表达量明显降低,p-N F-B/N F-B水平明显升高(P0.0 5);与I S O组比较,1 0 D e x I s o组S I R T 1和I B 表达量明显升高,p-N F-B/N F-B水平明显降低(P0.0 5),且1 0 D e x I s o组S I R T 1和I B 表达量高于5 D e x I s o组,p-N F-B/N F-B水平低于5 D e x I s o组(P0.0 5)。见图4、表4。图4 4组海马组织S I R T 1/N F-B信号通路蛋白的表达F i g u r e 4 E x p r e s s i o n o f S I R T 1/N F-B s i g n a l i n g p a t h w a y p r o t e i n i n h i p p-o c a m p a l t i s s u e s o f e a c h g r o u p注:1.S h a m组,2.I S O组,3.5 D e x I s o组,4.1 0 D e x I s o组。表4 4组大鼠海马组织S I R T 1/N F-B信号通路蛋白表达量比较(xs)T a b l e 4 C o m p a r i s o n o f S I R T 1/N F-B s i g n a l i n g p a t h w a y p r o t e i n e x p r e s-s i o n i n h i p p o c a m p a l t i s s u e s o f r a t s i n e a c h g r o u p组别nS I R T 1I B p-N F-B/N F-BS h a m组1 01.1 4 0.2 01.1 9 0.2 30.4 2 0.1 4I S O组1 00.2 7 0.0 80.3 0 0.0 90.9 7 0.1 95 D e x I s o组1 00.3 4 0.1 00.3 2 0.0 90.9 5 0.1 31 0 D e x I s o组1 00.9 1 0.2 40.8 6 0.1 80.6 3 0.1 6F6 4.0 1 27 4.3 3 52 8.7 1 4P0.0 0 10.0 0 10.0 0 1注:与S h a m组比较,P0.0 5;与I S O组比较,P0.0 5;与5 D e x I s o组比较,P0.0 5。3 讨论随着医学技术的不断发展与进步,全身麻醉或监测麻醉下手术、有创检查的病例越来越多,虽然麻醉的介入大幅提高患者的舒适度与配合度,但麻醉药物3471西部医学 2 0 2 3年1 2月 第3 5卷第1 2期 M e d J W e s t C h i n a,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 2导致其行为异常也时有发生。研究表明,异氟醚可介导炎症反应8、氧化应激9、细胞凋亡1 0等多种途径损害脑组织,影响脑功能。地塞米松属于长效糖皮质激素,除具有强效的抗炎作用外,还可逆转空间记忆障碍、减轻神经元细胞病理变化:冯安琪等1 1对3 0 0例接受单侧全髋/膝关节置换术的老年患者予以不同剂量的地塞米松,发现0.1 5 m g/k g地塞米松可降低患者术后认知功能障碍的发生率,可能与改善血清T N F-、中枢神经特异蛋白、神经元特异性烯醇化酶水平有关;J e o n g等1 2发现,过度和长期的神经炎症会导致创伤性脑损伤后的神经元细胞死亡,水凝胶介导的地塞米松局部注射可减轻创伤性脑损伤后的神经炎症。本研究采用M o r r i s水迷宫实验和物体位置识别实验评估实验动物空间学习能力与记忆能力,发现异氟醚持续吸入会延长大鼠逃避潜伏期和物体记忆时间,并减少大鼠穿越原平台的次数,表明异氟醚会减弱大鼠空间学习能力和参考记忆力。与I S O组比较,5 D e x I s o组各指标无明显差异,1 0 D e x I s o组第4至5天逃避潜伏期和物体记忆时间缩短,原平台位置穿越次数增加,且1 0 D e x I s o组第5天逃避潜伏期和物体记忆时间短于5 D e x I s o组,原平台位置穿越次数多于5 D e x I s o组,提示地塞米松作用与其浓度有关,1 0 m g/k g地塞米松可部分逆转异氟醚麻醉引起的大鼠认知功能损伤。本研究在明确地塞米松可提升动物高级脑功能的基础上,对其分子作用机制作进一步分析。有文献 报 道,地 塞 米 松 可 改 善 脑 组 织 病 理 损伤1 3-1 4。本研究通过对海马组织进行HE染色结果显示,与S h a m组比较,吸入异氟醚后大鼠海马区细胞核存在不同程度的固缩深染与空泡化,排列杂乱,而注射1 0 m g/k g地塞米松干预后,上述病理损伤明显减轻。TUN E L染色结果显示,地塞米松可减轻异氟醚所 致 海 马 神 经 元 凋 亡,通 过 检 测 海 马 组 织 内c a s p a s e-3和c a s p a s e-9蛋白表达,结果显示,异氟醚暴露前给予地塞米松可显著降低c a s p a s e-3和c a s p a s e-9表达,抑制神经元凋亡,与S k e l l y等1 5报道地塞米松可抑制脑神经元凋亡,从而改善记忆功能障碍的作用相符,这可能是地塞米松对异氟醚致大鼠认知功能障碍的治疗作用机制之一。S I R T 1在细胞生长、代谢、应激及炎症反应等多种病理生理过程中均有重要的调控作用,主要依赖对底物的去乙酰化修饰作用1 6-1 7。研究显示,S I R T 1可去乙酰化修饰N F-B亚基P 6 5的L y s 3 1 0残基,抑制N F-B的转录活性,负向调控炎症反应,减少I L-6、I L-1和T N F-等炎性因子和促凋亡基因表达1 8-1 9。T a n g等2 0研究发现,通过调节小胶质细胞S I R T 1/N F-B通路可改善七氟醚暴露小鼠的认知功能损害。还有研究6显示,地塞米松可能通过促进S I R T 1表达,维持线粒体正常代谢,实现对七氟烷麻醉致新生大鼠神经元损伤的保护。本研究观察到I S O组大鼠海马组织中S I R T 1和I B 表达量明显减少,p-N F-B/N F-B、I L-6、I L-1和T N F-水 平 明 显 升 高,5 D e x I s o组和I S O组各指标无明显差异,而1 0 D e x I s o组较I S O