大孔树脂纯化艾草多酚及其对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用.pdf

基金项目:安徽省科技重大专项(编号:a );企业委托项目(编号:HX )作者简介:吴萍香,女,安徽工程大学在读硕士研究生.通信作者:魏明(),男,安徽工程大学教授,博士.E m a i l:wm r a i n b o w c o m收稿日期:改回日期:D O I:/j s p j x 文章编号 ()大孔树脂纯化艾草多酚及其对葡萄糖苷酶活性抑制作用P u r i f i c a t i o no f p o l y p h e n o l s f r o mw o r m w o o db ym a c r o p o r o u s r e s i na n d i n h i b i t o r ya c t i v i t yo f i t sa g a i n s t g l u c o s i d a s e吴萍香WUP i n g x i a n g魏明WE IM i n g丁凯莉D I NGK a i l i聂风N I EF e n g(安徽工程大学生物与食品工程学院,安徽 芜湖 )(S c h o o l o fB i o l o g i c a la n dF o o dE n g i n e e r i n g,A n h u iP o l y t e c h n i cU n i v e r s i t y,W u h u,A n h u i ,C h i n a)摘要:目的:分离纯化艾草多酚,并研究其对葡萄糖苷酶的抑制活性.方法:对比了种大孔树脂对艾草多酚的吸附与解吸性能的差异,得到较合适的树脂,优化了其纯化条件.采用乙醇溶液进行梯度洗脱,研究了不同梯度乙醇洗脱组分对葡萄糖苷酶活性的抑制作用.结果:D 树 脂 是 较 好 的 艾 草 多 酚 吸 附 剂,静 态 吸 附 m i n即达到饱和,最佳分离纯化条件为:粗多酚质量浓度m g/m L,p H,上样流速m L/m i n,吸附平衡后,以 乙醇为洗脱液,m L/m i n流速进行洗脱,纯化效果良好,多酚纯度由 提升到 ,纯度提高了 倍.对比不同梯度乙醇洗脱组分对葡萄糖苷酶抑制活性,其中 乙醇洗脱组分可以很好地抑制葡萄糖苷酶活性.乙醇洗脱的艾草多酚主要含有异槲皮苷、根皮苷、芦丁等,其可能对葡萄糖苷酶活性具有抑制作用.结论:艾草多酚具有一定的降血糖效果.关键词:艾草;多酚;大孔树脂;纯化;葡萄糖苷酶活性A b s t r a c t:O b j e c t i v e:T h i s s t u d y a i m e d t o p u r i f y c r u d ep o l y p h e n o l s f r o m w o r mw o o da n dt os t u d yi n h i b i t o r ya c t i v i t yo fi t sa g a i n s t g l u c o s i d a s e M e t h o d s:T h ea d s o r p t i o n d e s o r p t i o np r o p e r t i e s o f w o r mw o o d p o l y p h e n o l s b y s e v e n k i n d s o fm a c r o p o r o u s r e s i n s w e r e s t u d i e d T h e s u i t a b l e r e s i n f o rs e p a r a t i n ga n dp u r i f y i n g W o r mw o o dp o l y p h e n o l s w a so b t a i n e da n dt h ep u r i f i c a t i o np a r a m e t e r sw e r eo p t i m i z e d U s i n gd i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o ne t h a n o l s o l u t i o n f o rd y n a m i c e l u t i o n,t h e i n h i b i t o r ya c t i v i t y o f d i f f e r e n t e l u t i o n f r a c t i o n s o n g l u c o s i d a s e w a si n v e s t i g a t e d R e s u l t s:T h e r e s u l t s i n d i c a t e d t h a tD r e s i nw a s as u i t a b l em a t e r i a lf o rp u r i f y i n g w o r mw o o dp o l y p h e n o l sa n dt h em a c r o p o r o u sr e s i n r e a c h e d e q u i l i b r i u m w i t h i n m i n T h eo p t i m a l c o n d i t i o n sf o rp u r i f y i n gw o r mw o o dp o l y p h e n o l sw e r ea sf o l l o w s,c r u d ep o l y p h e n o l m g/m L,p H,f l o wv e l o c i t yo fm L/m i n,a n d e t h a n o lw a su s e da st h ee l u e n tw i t ht h ee l u t i o nf l o w r a t eo f m L/m i n T h ep u r i t yo fp o l y p h e n o l si n c r e a s e df r o m t o a f t e rp u r i f i c a t i o nb y D r e s i n,w h i c h w a s e n h a n c e d t i m e s D i f f e r e n t e l u t i o nc o m p o n e n t s w e r e o b t a i n e d b y u s i n g d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o ne t h a n o la s e l u e n t s,r e s p e c t i v e l y T h e e t h a n o l e l u t i o nf r a c t i o nt h a t c o n t a i n e d i s o q u e r c i t r i n,p h l o r i d z i na n dr u t i nh a dt h eb e s ti n h i b i t o r y e f f e c t o n g l u c o s i d a s e a c t i v i t y C o n c l u s i o n:w o r mw o o dp o l y p h e n o l sh a v eg o o d d e v e l o p m e n tp r o s p e c t sf o rh y p o g l y c e m i ce f f e c t K e y w o r d s:w o r mw o o d;p o l y p h e n o l s;m a c r o p o r o u s r e s i n;p u r i f i c a t i o n;g l u c o s i d a s ea c t i v i t y艾草(A r t e m i s i aa r g y i)是蒿属草本植物,属菊科,常以叶入药,具有温经止血、祛寒祛湿、抑菌抗虫、调理经络和安胎等功效.艾草含有黄酮、三萜、多酚、挥发油、多糖等活性成分,具有镇痛镇静、抑菌、抗病毒、抗氧化和抗炎等药理作用,这些药理作用与其活性成分有关.糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病.据报道,葡萄糖苷酶可延缓碳水化合物的合成,同时降低餐后高血糖.紫山药多酚、橡子仁多酚均存在一定体外葡萄糖苷酶的抑制活性.C h a n g等分析发现,青蒿叶片中的酚类物质对葡萄糖苷酶有抑制活性.艾草含有大量酚类物质,然而对于艾草中多酚类物质的降血糖研究尚未见报道.金属离 子 沉 淀 法、凝 胶 柱 层 析 法、树 脂 吸 附F OO D&MA CH I N E R Y第 卷第期 总第 期|年月|法、膜分离技术 和高速逆流色谱法 是植物多酚分离纯化的主要方法,各方法均存在不同的优缺点.大孔树脂具有产品纯度较高、成本低、选择性较好、树脂可再生、工艺简单等优点,有利于大批量生产,已被广泛应用于天然产物中目标化合物的富集.酚类物质的性质具有差异性,大孔树脂纯化多酚的效果也不尽相同,因此选择合适的树脂就显得尤为重要.Y a n g等 利用大孔树脂分离洛神花中的花青素;H u等 利用大孔树脂纯化苜蓿多糖,均取得了较好的效果,而大孔树脂纯化艾草多酚的工艺目前还未见报道.研究拟采用大孔树脂分离纯化艾草多酚,确定最佳分离纯化工艺.利用乙醇进行梯度洗脱,并分析其多酚组成及抑制葡萄糖苷酶的活性.材料与方法材料与试剂艾草:安徽国绿艾草生物科技有限公司;D 、H Z 、A B 、D 、D 、NKA 、A D S 型大孔树脂:东鸿化工有限公司;葡萄糖 苷酶、硝 基 苯D吡 喃 葡 萄 糖 苷:分 析纯,美国Am r e s c o公司;阿卡波糖、没食子酸、绿原酸、儿茶素、表儿茶素、芦丁、异槲皮苷、根皮素、木犀草素、咖啡酸、阿魏酸、槲皮素、山奈酚:色谱纯,美国Am r e s c o公司;乙醇:分析纯,国药化学试剂有限公司.仪器与设备超声波清洗器:J K D B型,合肥金尼克机械制造有限公司;高效液相色谱仪:L C 型,日本岛津公司;真空冷冻干燥机:L G J 型,北京松源华兴科技发展有限公司;全自动酶标仪:型,北京S o l a r b i o公司;旋转蒸发器:R E AA型,上海亚荣生化仪器厂.试验方法艾草粗多酚的制备将 g阴干艾草用研磨机打成艾绒,用环己烷脱脂,加入体积分数为 乙醇水溶液 m L,超声 m i n.过滤将滤液浓缩后加入倍无水乙醇,放入冰箱,静置过夜后除去絮状沉淀,将浓缩后的滤液置于冷冻干燥机内干燥 h,得艾草粗多酚备用.总 酚 含 量 的 测 定参 考 文 献 .制 备 g/m L没食子酸标准溶液,回归方程为y x ,R .大孔树脂的筛选根据朱延胜等的方法稍加修改,将大孔树脂预处理,风干后使用,种大孔树脂各称量 g,分别加入 m L、m g/m L艾草粗多酚溶液于个 m L锥形瓶中,在室温下以 r/m i n振荡 h,然后测定溶液中多酚的浓度;将已经吸附饱和的树脂取出,分别 加入 m L、乙 醇 溶 液,相 同 条 件 下 振 荡 h后,测定多酚含量,按式()、式()计算树脂的吸附率和解吸率.RCCC,()RCCC ,()式中:R 大孔树脂对多酚的吸附率,;R 洗脱液对大孔树脂中多酚的解析率,;C 初始多酚质量浓度,m g/m L;C 吸附后溶液剩余的多酚质量浓度,m g/m L;C 解吸后的多酚质量浓度,m g/m L.吸附时间对D 树脂吸附率的影响将 gD 树脂精确称量,放入 m L锥形瓶中,分别添加 m L、m g/m L艾 草 粗 多 酚 溶 液.在 室 温 下 以 r/m i n振 荡,每 m i n测 量 每 个 锥 形 瓶 中 多 酚 的浓度.多酚浓度对D 树脂吸附率的影响精确称量份D 树脂各 g,装入个 m L锥形瓶中.然后添加质量浓度为,m g/m L的艾草粗多酚溶液 m L,以 r/m i n振荡 m i n,测量每个锥形瓶中多酚的浓度.p H值对D 树脂吸附率的影响精确称量份D 树脂各 g,装入个 m L的锥形瓶中,分别添加 m Lp H,的艾草粗多酚溶液,多酚质量浓度为m g/m L.以 r/m i n振荡 m i n,测量每个锥形瓶中多酚的浓度.乙醇体积分数对D 树脂解吸率的影响将D 树脂精确称量份,每份 g,放入个 m L锥形瓶中,加入 m L、p H、质量浓度为m g/m L的艾草多酚溶液,以 r/m i n振荡 m i n.测量每个锥形瓶中多酚的浓度.将树脂过滤后,分别添加 m L,的乙醇溶液振荡 h,测量每个锥形瓶中多酚的浓度.上样流速对D 树脂吸附效果的影响D 大孔树 脂 湿 法 装 入 mm mm的 色 谱 柱 中.m g/m L的艾草粗多酚溶液以,m L/m i n的流速分别上样,利用自动收集器每管收集m L,并测定多酚的浓度.洗脱流速对D 树脂解吸率的影响D 树脂吸附量达到饱和后,以 乙醇为洗脱剂,流速分别为,m L/m i n,利用自动收集器每管收集m L,并测定多酚的浓度.基础研究F UN DAME NTA LR E S E AR CH总第 期|年月|乙醇梯度洗脱分离艾草多酚D 树脂吸附量达到 饱 和 后,设 置 乙 醇 洗 脱 梯 度 分 别 为,洗脱流速为m L/m i n.设置自动收集器每管m L,每管吸收m L溶液,测定多酚浓度.H P L C分析单酚成分精确称量各种多酚标准品,用甲醇配制为m g/m L的单一标准溶液.将每个标准溶液 取 L混 合,在 紫 外 波 长 n m下 进 行H P L C检测.流动相梯度洗脱工艺参照朱延胜等的方法.分 析 条 件:S u p e r s i l AQ C 色 谱 柱(mm mm,m);柱 温 ,进 样 量 L,流 速m L/m i n.不同洗脱组分对葡萄糖苷酶活的抑制率参照文献 的方法稍作修改,分别以,乙醇进行洗脱,测定各组分对葡萄糖苷酶的抑制活性,阿卡波糖作为对照组.按式()计算酶活性抑制率.EA(AA)A ,()式中:E 酶活性抑制率,;A 不含样品的吸光值;A 样品、酶与底物反应的吸光值;A 样品吸光值.数据处理试验进行次平行测定,结果用均数标准差表示,使用S P S S(I BM S P S SS t a t i s t i c s)进行计算;采用单因素方差分析(ANOVA)确定各属性值在P 处的显著性;对应的图表用O r i g i n 绘制.结果与分析最优树脂筛选如图所示,吸附率最高的是D ,为 ,而D 的吸 附 率 最 低,仅 为 .从 解 吸 效 果 来 看,NKA 的解吸率 最高,为,而D 的解 吸 率为 ,二者差异不明显(P).虽然NKA 的解吸率最大,但是它对艾草多酚的吸附量较低,为 ,可能是因为NKA 大孔树脂的吸附位点“无法容纳”更多的艾草多酚,导致吸附能力降低.此外,树脂的表面积、极性和孔径大小也对树脂的吸附能力有影响.综合考虑吸附率和解吸率,选择D 型大孔树脂分离纯化艾草多酚.吸附时间对吸附率的影响从图可以看出,在前 m i n,D 树脂的吸附速率与吸附时间呈显著正相关.当吸附时间超过 m i n时,吸附速率增长缓慢且趋于稳定,是因为D 树脂对艾叶多酚的吸附已接近饱和.虽然后续各时间段仍有差字母不同表示组间差异显著(P)图不同大孔树脂的吸附解吸性能比较F i g u r e C o m p a r i s o n o fa d s o r p t i o n a n d d e s o r p t i o np r o p e r t i e so fd i f f e r e n tm a c r o p o r o u sr e s i n s图吸附时间对D 树脂吸附的影响F i g u r eE f f e c t so f a d s o r p t i o nt i m eo na d s o r p t i o no fD r e s i n异,但差异不显著(P).因此,选择D 树脂的吸附时间为 m i n.多酚浓度对吸附率的影响由图可知,当多酚类物质浓度较低时,吸附速率与浓度呈正相关,可能是因为浓度的提高可以增大树脂吸附位点与多酚分子的接触概率,从而提高吸附速率.当多酚质量浓度m g/m L时,吸附速率与浓度呈负相关,树脂表面附着了过量的多酚分子或其他物质,使其进入树脂内部受到阻碍,抑制其扩散,导致吸附率下降.多酚浓度提高的同时与多酚竞争的杂质增多,这也降低了多 酚 的 吸 附 速 率,因 此,多 酚 最 佳 质 量 浓 度 约 为m g/m L.样品溶液p H对吸附率的影响由图可知,当p H时,吸附率逐渐升高,当p H时,吸附率逐渐降低.这可能是因为酸性条件下艾草多酚的解离受到了抑制,多酚以分子形式存在,而分子状态的 多酚在吸附时更容易被吸附在D 树脂内部的孔状|V o l ,N o 吴萍香等:大孔树脂纯化艾草多酚及其对葡萄糖苷酶活性抑制作用字母不同表示组间差异显著(P)图多酚浓度对D 树脂吸附率的影响F i g u r eE f f e c t so fp o l y p h e n o l c o n c e n t r a t i o no na d s o r p t i o nr a t eo fD r e s i n字母不同表示组间差异显著(P)图p H对D 树脂吸附的影响F i g u r eT h ee f f e c to fd i f f e r e n tp Ho fp o l y p h e n o lo na d s o r p t i o no fD r e s i n结构上.p H值增大,艾草多酚的解离受到促进作用,酚羟基电离增多,溶液中的阴离子数量增加,同时艾草多酚在酸性条件下更稳定,因此p H为时最为适宜.洗脱剂体积分数对D 树脂解吸率的影响从图可以看出,解吸率随乙醇体积分数的增加先升后降.解析率在乙醇体积分数达到 时达到最大,不同浓度梯度的乙醇溶液极性不同.根据“相似相溶”原理,低浓度乙醇解吸的组分极性更强.解吸率在乙醇体积分数为 时最大,可能是因为此时艾草中酚类物质的极性与 乙醇溶液的更相似.上样液流速对D 树脂吸附率的影响动态吸附曲线又称泄漏曲线,当流出液中艾草多酚浓度达到上样液中艾草多酚浓度的 时,上样体积记为艾草多酚的“泄露点/饱和上样体积”,可作为树脂动态吸附饱和度的指标.由图可知,泄漏点出现的时间随流速的增加出现得越快,树脂的吸附能力随流速的增加而降低,其原因可能为过快的流速会使已经吸附的多字母不同表示组间差异显著(P)图乙醇体积分数对多酚解吸率的影响F i g u r eT h ee f f e c to fd i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o no f e t h a n o lo nd e s o r p t i o nr a t eo fp o l y p h e n o l图上样液流速对D 树脂吸附率的影响F i g u r eT h ee f f e c to f l o a d i n gl i q u i dv e l o c i t yo na d s o r p t i o nr a t eo fD r e s i n酚又被洗脱下来.当上样流速为,m L/m i n时,泄漏点分别在 ,m L,吸附量分别为,m g.试验结果表明,上样流速的快慢与树脂吸附多 酚 的 能 力 息 息 相 关.因 此,选 择 上 样 液 流 速m L/m i n较为恰当.D 树脂动态洗脱曲线如图所示,当洗脱流速为m L/m i n时,洗脱下来的多酚主要分布在 管;当流速为 m L/m i n时,洗脱下来的多酚主要分布在 管;而流速为 m L/m i n时洗脱下来的多酚主要分布在 管.可以看出,酚类物质的洗脱时间相对较短且集中.当洗脱液流速过快时,洗脱液与树脂的接触时间较短,可能造成严重的拖尾现象或树脂解吸不完全,从而降低了脱附速率.而当洗脱液流速过慢时,会使已经洗脱的多酚再一次被树脂吸附 从 而 导 致 洗 脱 速 率 降 低.因 此,洗 脱 流 速 在m L/m i n比较合适,在m L/m i n的流速下收集洗脱液体积 m L,此时多酚回收率为,多酚纯度由 提升到 ,纯度提高了 倍.基础研究F UN DAME NTA LR E S E AR CH总第 期|年月|图D 树脂动态洗脱曲线F i g u r eD y n a m i ce l u t i o nc u r v eo fD r e s i n乙醇梯度洗脱分离艾草多酚如图所示,浓度曲线与管数的积分面积与各组分多酚含量有一定关系,当用,乙醇洗脱时,所 得 多 酚 组 分 所 占 比 重 分 别 为 ,.不同洗脱组分中多酚的组成分析由图可知,乙醇洗脱组分主要含有没食子酸、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和芦丁,乙醇洗脱组图D 树脂乙醇梯度洗脱多酚图谱F i g u r eE t h a n o l g r a d i e n t e l u t i o np r o f i l eo fp o l y p h e n o l so nD r e s i n分主要含有异槲皮苷、根皮苷和芦丁,乙醇洗脱组分中主要含有芦丁、山奈酚和木犀草素.不同溶剂洗脱组分对葡萄糖苷酶活性的抑制率分别以,的乙醇进行梯度洗脱,并测定其对葡萄糖苷酶的抑制活性.从图 和表可以看出,对葡萄糖苷酶活性的抑制作用依次是 洗脱组分 洗脱组分 洗脱组分.在一定浓度范没食子酸儿茶素绿原酸咖啡酸表儿茶素阿魏酸异槲皮苷芦丁根皮苷 槲皮素 山奈酚 木犀草素图多酚标准品和目标组分的H P L C图谱F i g u r eH P L Cc h r o m a t o g r a mo fp o l y p h e n o l s t a n d a r da n dt a r g e t c o m p o n e n t|V o l ,N o 吴萍香等:大孔树脂纯化艾草多酚及其对葡萄糖苷酶活性抑制作用图 不同梯度乙醇洗脱的艾草多酚对葡萄糖苷酶的抑制率F i g u r e I n h i b i t i o n o f g l u c o s i d a s e b y w o r mw o o dp o l y p h e n o l se l u t e dw i t hd i f f e r e n te t h a n o l g r a d i e n t s表不同梯度乙醇洗脱的艾草多酚对葡萄糖苷酶活性抑制率比较T a b l eC o m p a r i s o no ft h ei n h i b i t i o nr a t eo f g l u c o s i d a s ea c t i v i t yo fw o r mw o o dp o l y p h e n o l se l u t e dw i t hd i f f e r e n t e t h a n o l g r a d i e n t s样品I C 值/(m gm L)阿卡波糖 乙醇洗脱组分 乙醇洗脱组分 乙醇洗脱组分 围内,样品浓度与葡萄糖苷酶的抑制活性呈明显的正相关性,但是不同洗脱组分对葡萄糖苷酶的抑制活性差异较大.曾桥等 发现绿原酸对葡萄糖苷酶有较强的抑制作用,但抑制能力低于阿卡波糖;W a n g等 发现槲皮素对葡萄糖苷酶与阿卡波糖表现出相似的抑制作用;Y a n等 发现芦丁对葡萄糖苷酶抑制活性随芦丁浓度的增加而增加;王斯慧等 发现槲皮素及 芦 丁对葡萄糖苷酶活性有抑制作用,且芦丁的抑制作用强于槲皮素.这些研究与试验结果一致.乙醇洗脱组分中芦丁成分较多,乙醇洗脱组分中含有绿原酸和少量的芦丁,洗脱组分中芦丁含量较少.结论D 树脂较适合艾草多酚的 分离 纯化,静 态 吸附 m i n,多酚质量浓度为m g/m L,p H,上样液流速m L/m i n.以流速m L/m i n,乙醇洗脱,得到洗脱液体积 m L,多酚回收率达到,多酚纯度由 提高到 ,纯度提高了 倍.采用乙醇梯度洗脱艾草多酚获得不同洗脱组分,乙醇洗脱组分主要含有没食子酸、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和芦丁,乙醇洗脱组分主要含有异槲皮苷、根皮苷和芦丁,乙醇洗脱组分主要含有芦丁、山奈酚和木犀草素.乙醇洗脱组分对葡萄糖苷酶抑制活性较强.但艾草多酚降血糖的具体成分尚未明确,还需进一步研究.参考文献1 薛贵民,赵晨光,薛金凤,等.艾草种子的化学成分研究J.中草药,2022,53(9):2 6052 611.XUE G M,ZHAO C G,XUE J F,et al.Chemical constituents fromseeds ofArtemisia argyiJ.Chinese Traditional and Herbal Drugs,2022,53(9):2 6052 611.2 NGUYEN H T,RADCSI P,GOSZTOLA B,et al.Effects oftemperature and light intensity on morphological and phytochemicalcharacters and antioxidant potential of wormwood(ArtemisiaabsinthiumL.)J.Biochemical Systematics and Ecology,2018,79:17.3 梁峰,王巧利,王一飞.艾草抗氧化活性成分研究进展J.中国野生植物资源,2020,39(10):6166.LIANG F,WANG Q L,WANG Y F.Research progress onantioxidant active components ofArtemisia argyiJ.Chinese WildPlant Resources,2020,39(10):6166.4 WANG M T,JIANG J,TIAN J H,et al.Inhibitory mechanism ofnovel allosteric inhibitor,Chinese bayberry(Myrica rubraSieb.etZucc.)leaves proanthocyanidins againstglucosidaseJ.Journalof Functional Foods,2019,56:286294.5 朱延胜,魏明,钱森和,等.紫山药多酚分离纯化及其对葡萄糖苷酶活性的抑制作用J.食品与发酵工 业,2022,48(16):182187.ZHU YS,WEIM,QIANSH,etal.Purificationandglucosidance inhibitory activity of polyphenols from purple yamJ.Food and Fermentation Industries,2022,48(16):182187.6 WU M,YANG Q,WU Y,et al.Inhibitory effects of acorn(QuercusvariabilisBlume)kernelderived polyphenols on the activities ofamylase,glucosidase,and dipeptidyl peptidase IV J.FoodBioscience,2021,43:101224.7 CHANG Y,FAN W,SHI H,et al.Characterization of phenolics anddiscovery ofglucosidase inhibitors inArtemisia argyileavesbased on ultraperformance liquid chromatographytandem massspectrometry and relevance analysisJ.Journal of Pharmaceuticaland Biomedical Analysis,2022,220:114982.8 李媛,刘石泉,谢丹,等.茯砖茶中茶多酚的纯化工艺研究J.湖南城市学院学报(自然科学版),2018,27(6):7578.LI Y,LIU S Q,XIE D,et al.Study on the purification process of teapolyphones in Fuzhuan teaJ.Journal of Hunan City University(Natural Science),2018,27(6):7578.9 MA Z,HUANG Y,HUANG W,et al.Separation,identification,andantioxidant activity of polyphenols from lotus seed epicarp J.Molecules,2019,24(21):4 007.基础研究F UN DAME NTA LR E S E AR CH总第 期|年月|10 陈明威,魏明,陶良凡,等.大孔树脂分离纯化霍山石斛多酚及其抗氧化活性研究J.食品与机械,2020,36(11):148153.CHEN M W,WEI M,TAO L F,et al.Purification of polyphenolsfromDendrobium huoshanenseby macroporous resin and itsantioxidant activityJ.Food&Machinery,2020,36(11):148153.11 CONIDI C,CASSANO A.Recovery of phenolic compounds frombergamot juice by nanofiltration membranesJ.Desalination andWater Treatment,2015,56(13):3 5103 518.12 LI Y Y,LI L X,CUI Y,et al.Separation and purification ofpolyphenols from red wine extracts using high speed countercurrent chromatographyJ.Journal of Chromatography B,2017,1 054:105113.13 刘永玲,赵治兵,马风伟,等.基于大孔树脂与制备液相色谱技术快速分离野地瓜茎中的绿原酸J.分析试验室,2021,40(6):692696.LIU Y L,ZHAO Z B,MA F W,et al.Rapid separation ofchlorogenic acidfromthestemsofFicustikouaBur.bymacroporous resin and preparative liquid chromatography J.Chinese Journal of Analysis Laboratory,2021,40(6):692696.14 GUO C X,QIAO J P,ZHANG S W,et al.Purification ofpolyphenols from kiwi fruit peel extracts using macroporous resins andhighperformance liquid chromatography analysis J.InternationalJournal of Food Science&Technology,2018,53(6):1 4861 493.15 YANG D,LI M M,WANG W J,et al.Separation and purificationof anthocyanins from Roselle by macroporous resinsJ.LWTFood Science and Technology,2022,161:113371.16 HU Z,ZHOU H,LI Y,et al.Optimized purification process ofpolysaccharides fromCarex meyerianaKunth by macroporousresin,its characterization and immunomodulatory activity J.International Journal of Biological Macromolecules,2019,132:7686.17 LUENGO E,LVAREZ I,RASO J.Improving the pressingextraction of polyphenols of orange peel by pulsed electric fieldsJ.Innovative Food Science&Emerging Technologies,2013,17:7984.18 GHANI U,NUREAALAM M,YOUSAT M,et al.Naturalflavonoidglucosidase inhibitors from Retama raetam:Enzymeinhibition and molecular docking reveal important interactionswith the enzyme active siteJ.Bioorganic Chemistry,2019,87:736742.19 周莹婷,张涛俊,刘楚瑶,等.比较两种大孔树脂动态分离多种甜菊糖苷的研究J.中国食品添加剂,2021,32(5):1319.ZHOU Y T,ZHANG J T,LIU C Y,et al.A comparison of twomacroporous resins in dynamic separation of multiple steviaglycosidesJ.China Food Additives,2021,32(5):1319.20 曾桥,韦承伯,夏飞,等.响应面法优化超声波辅助提取杜仲叶茯砖茶绿原酸及其体外降血糖抗氧化活性J.食品与发酵工业,2018,44(9):204211.ZENG Q,WEI C B,XIA F,et al.Optimization of ultrasonicassisted extraction of eucommia ulmoides leaves Fu brick teachlorogenicacidviaresponsesurfaceanalysisanditshypoglycemic and antioxidant activities in vitro J.Food andFermentation Industries,2018,44(9):204211.21 WANG L,WANG L,WANG T,et al.Comparison of quercetin andrutin inhibitory influence on Tartary buckwheat starch digestion invitro and their differences in binding sites with the digestiveenzymeJ.Food Chemistry,2022,367:130762.22 YAN J,ZHANG G W,PAN J H,et al.Glucosidase inhibition byluteolin:Kinetics,interactionandmoleculardocking J.International Journal of Biological Macrom