大黄素通过TGF-β1_SMAD4通路对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响及其机制.pdf

大黄素通过 /通路对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响及其机制王晓暖温云花韦秋圆李婷娜海口市妇幼保健院妇产科海南 海口【摘要】目的:探讨大黄素()对子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭、上皮间质转化()的影响及作用机制 方法:使用不同浓度的大黄素(./)分别处理人子宫内膜癌 细胞检测细胞增殖确定最佳给药浓度 细胞分为对照组(组)、转化生长因子 ()组、组、组、(抑制剂)组分别检测 细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及 钙黏蛋白()、钙黏蛋白()、波形蛋白()、家族成员()蛋白表达 建立荷瘤小鼠模型检验大黄素对子宫内膜癌移植瘤生长的影响 结果:./的大黄素可显著抑制 细胞增殖选择浓度为./的大黄素进行后续实验 与 组比较 组 细胞集落形成数、迁移与侵袭数及 、表达水平显著升高 、表达水平降低(.)组与 组 细胞集落形成数、迁移与侵袭数及 、表达水平显著降低细胞凋亡率及 、表达水平显著升高(.)与 组比较 组 细胞集落形成数、迁移与侵袭数及 、表达水平显著升高细胞凋亡率及 、表达水平降低(.)大黄素可显著抑制移植瘤生长 结论:大黄素通过调控 /通路抑制子宫内膜癌肿瘤生长【关键词】大黄素 /通路子宫内膜癌细胞增殖凋亡迁移与侵袭【中图分类号】.【文献标识码】:./.【文章编号】()/.【】:().:(./).()().().:././.(.)【收稿日期】【修回日期】【作者简介】王晓暖()女海南海口人主治医师主要从事妇产科常见疾病的研究 :.【通信作者】温云花()女海南万宁人副主任医师主要从事妇产科常见疾病的研究 :.王晓暖等 大黄素通过 /通路对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响及其机制 (.).(.).:/.【】/():子宫内膜癌是常见妇科肿瘤其发病率呈上升趋势早期患者主要采取手术治疗方式晚期患者常以放化疗方式治疗但复发与耐药影响治疗效果患者预后较差寻找新的治疗药物具有重要意义 转化生长因子 ()/家族成员()通路参与细胞增殖、分化等多种生理过程在肿瘤中 可诱导细胞发生上皮间质转化()促进肿瘤侵袭与转移 大黄素()是从大黄根和根茎中提取的活性物质具有抗肿瘤的作用如卵巢癌、宫颈癌 研究显示大黄素可能通过调节磷脂酰肌醇 激酶()/蛋白激酶()和丝裂原活化蛋白激酶()信号通路诱导子宫内膜癌细胞凋亡但大黄素对子宫内膜癌的具体作用机制仍需进一步研究本研究旨在探索大黄素对子宫内膜癌细胞的生物学行为影响及其机制为子宫内膜癌的治疗提供理论支持 材料与方法.主要材料人子宫内膜癌细胞 购于中科院上海细胞库大黄素(纯度)购自美国 公司 检测试剂盒()、/试剂盒()、()及 抑制剂()购自北京百奥莱博科技有限公司 钙黏蛋白()()、钙黏蛋白()()、波形蛋白()()、()、()抗体购自碧云天生物科技公司.方法.细胞增殖实验将对数生长期的 细胞以每孔 个细胞接种于 孔板中分别使用浓度为、.、.、.、.、./的大黄素处理 、后 法检测细胞增殖绘制生长曲线.细胞处理及分组将 细胞随机分为 组:对照组(组)、组、组、组、组 组使用 /的 处理 细胞 组使用./的 处理 细胞 组分别使用./的 与 /的 处理 细胞 组使用 /的 处理 细胞 .平板克隆形成实验将各组处理的 细胞在 孔板中接种约 个细胞每隔 更换新鲜培养液连续培养 周后多聚甲醛固定.结晶紫染色 观察各组集落形成数.细胞凋亡检测各组处理的 细胞按照每孔 个细胞接种于 孔板中培养 后使用 /试剂盒检测细胞凋亡 将各组 细胞用 结合缓冲液重悬 然后将 和 (/)添加到细胞悬液中在室温下避光孵育 通过流式细胞仪检查细胞凋亡率.小室法检测细胞迁移与侵袭使用无血清培养基将各组处理的 细胞稀释成 个/的细胞悬液 下室加入 含 的培养液上室加入 细胞悬液继续培养 后将膜下表面的细胞在 多聚甲醛中固定.结晶紫染色显微镜下从随机选取的 个视野中计数迁移细胞数取平均值 在侵袭实验中 上室预先用基质胶包被其余步骤同迁移实验.检测蛋白表达收集各组处理的 细胞加入放射免疫沉淀()裂解液提取总蛋白蛋白定量后十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白并转膜将膜用 脱脂牛奶封闭 分别加入一抗 ()、()、()、()、()抗体稀释液 孵育过夜次日二抗()室温孵育 显影后以 为内参使用 软件(.)分析蛋白表达.荷瘤小鼠模型建立 细胞生长至对数期时胰酶消化细胞 调整细胞浓度为 个/每只/裸鼠接种.接种 天后将小鼠分为 组与 组每组 只 组小鼠每 天腹腔注射 /的大黄素 组注射等剂量 每隔 天测量肿瘤体积直至肿瘤移植第 天麻醉处死大鼠检测移植瘤重量及 、蛋白表达 该动物实验经我院动物伦理委员会审核批准.统计学方法采用 .统计软件进行统计分析实验数据经正态分布检验符合正态分布以均数 标准差()描述两组比较采用独立样本 检验多组间比较采用单因素方差分析组间两两比较采用 检验 以 .表示差异有统计学意义现代肿瘤医学 年 月 第 卷第 期 .结果.大黄素对子宫内膜癌 细胞增殖的影响使用浓度为、.、.、.、.、./的大黄素分别处理 细胞 、后可明显抑制 细胞增殖作用 时大黄素对 细胞的半数抑制浓度()为./其中./的大黄素处理 细胞 后细胞存活率约下降约且低于 值故选择./的大黄素进行后续实验见图.大黄素对子宫内膜癌 细胞集落形成的影响与 组比较 组 细胞集落形成数显著升高(.比.)组与 组 细胞集落形成数显著降低(.、.比.)与 组比较 组 细胞集落形成数显著升高(.比.)见图 图 不同浓度的大黄素对 细胞增殖的影响.图 各组 细胞集落形成数.大黄素对子宫内膜癌 细胞凋亡的影响与 组比较 组 细胞凋亡率差异无统计学意义(.)比(.).组与 组 细胞凋亡率显著升高(.)、(.)比(.).)与 组比较 组 细胞凋亡率显著降低(.)比(.).见图 图 各组 细胞凋亡水平.大黄素对子宫内膜癌 细胞迁移与侵袭的影响与 组比较 组 细胞迁移与侵袭数显著升高(.)组与 组 细胞迁移与侵袭数显著降低(.)与 组比较 组 细胞迁移与侵袭数显著升高(.)见图 与表.大黄素对子宫内膜癌 细胞 的影响与 组比较 组 表达水平显著降低 、蛋白表达水平显著升高(.)组与 组 表达水平显著升高 、蛋白表达水平显著降低(.)与 组比较 组 表达水平显著降低 、蛋白表达水平显著升高(.)见图 与表 王晓暖等 大黄素通过 /通路对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响及其机制图 各组 细胞迁移与侵袭(结晶紫染色).()表 大黄素对子宫内膜癌 细胞迁移与侵袭的影响().().注:与 组比较.与 组比较.:.图 各组 细胞 、蛋白表达:组:组:组:组:组.:.:.:.:.:.大黄素对子宫内膜癌 细胞 、蛋白表达的影响与 组比较 组 表达水平显著升高 表达水平降低(.)组与 组 表达水平显著降低 表达水平升高(.)与 组比较 组 表达水平显著升高 表达水平降低(.)见图 与表 表 大黄素对子宫内膜癌 细胞 的影响().()/.注:与 组比较.与 组比较.:.图 各组 细胞 、蛋白表达:组:组:组:组:组.:.:.:.:.:.现代肿瘤医学 年 月 第 卷第 期 .表 大黄素对子宫内膜癌 细胞 /通路相关蛋白表达的影响()./()/.注:与 组比较.与 组比较.:.大黄素对移植瘤生长的影响给与裸鼠大黄素治疗后与 组比较 组移植瘤生长缓慢移植瘤质量与瘤体 蛋白表达水平显著降低 蛋白表达水平显著升高(.)见图 与表 图 大黄素对移植瘤生长的影响与 组比较.图 各组移植瘤 、蛋白表达.讨论子宫内膜癌的发病呈年轻化趋势早期患者 年生存率可达 晚期患者 年生存率较低子宫内膜癌的发病机制复杂选择有效的治疗药物对于改善患者预后具有重要意义 表 大黄素对移植瘤质量及 、蛋白表达的影响().()()/.大黄素具有抗氧化、抗炎、促进骨愈合、保护神经损伤与心肌损伤等多种药理学作用 研究发现大黄素具有抗肿瘤活性可诱导细胞周期阻滞与细胞凋亡抑制肿瘤细胞生长与迁移对甲状腺癌、肝癌、乳腺癌、口腔癌等多种肿瘤的生长具有抑制作用 薛飞等研究显示大黄素可通过抑制 表达抑制子宫内膜癌细胞增殖促进癌细胞自噬和凋亡 另有研究显示大黄素联合顺铂可抑制子宫内膜癌细胞细胞生长增加凋亡通过抑制 介导的耐药基因表达增强顺铂对子宫内膜癌的化疗敏感性 本研究使用./的大黄素处理 细胞显示 细胞存活率显著下降表明大黄素可显著抑制 细胞增殖与报道结果类似 本研究使用浓度为./的大黄素处理 细胞细胞集落形成数、迁移与侵袭数显著降低细胞凋亡率显著升高裸鼠移植瘤实验结果显示大黄素可抑制子宫内膜癌细胞 移植瘤生长提示大黄素在子宫内膜癌中表现为抗肿瘤性与先前报道结果类似 是肿瘤转移与侵袭的关键步骤是肿瘤复发转移的重要原因 、是 标志物与肿瘤的侵袭、浸润和转移密切相关 本研究结果提示大黄素可显著抑制 细胞的 的过程但大黄素在子宫内膜癌中的抗肿瘤机制尚不清楚 在调控细胞增殖、分化、诱导血管生成过程中发挥重要作用 可诱导肿瘤细胞增殖及 与受体结合后可调控 蛋白表达形成 /通路参与肿瘤的恶性进展 在食管鳞癌中上调 表达抑制 表达可促进食管鳞癌细胞的增殖、迁移及侵袭 研究显示螺旋藻藻蓝蛋白提取物及其活性成分可通过靶向调控 /信号通路抑制子宫内膜癌 本研究使用大黄素处理 细胞后 表达水平降低 表达水平升高提示大黄素具有调控 /通路的作用且 可逆转大黄素对 细胞增殖、迁移、侵袭及 的作用 另外本研究还显示使用 抑制剂处理 细胞后可显著抑制 细胞增殖、迁移、侵袭与 与大黄素对 细胞的作用一致证实大黄素可能通过调控 /通路抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭与 诱导细胞凋亡综上所述大黄素通调控 /通路抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭与 诱导细胞凋亡大黄素对子宫内膜癌的作用机制仍需结合动物模型做进一步研究【参考文献】.:王晓暖等 大黄素通过 /通路对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响及其机制.():.杨宝芹刘高仁邵艳社等.白术多糖通过调控线粒体凋亡途径诱导人子宫内膜癌 细胞凋亡.中国免疫学杂志():.():./.()():.():.():./.():./.():.刘松齐放赵宇等.青蒿琥酯对人结肠癌细胞侵袭转移及 /信号通路表达的影响.中国医科大学学报():./.():.刘亚楠王炳先路臣桂等.紫草素对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响.中成药():.():.杨亚男郭剑锋蔡晶等.二甲双胍在早期子宫内膜癌中的应用.现代肿瘤医学():.():.齐曼芦秋彤刘少卿等.白蛋白结合型紫杉醇联合阿帕替尼辅助中药治疗晚期子宫内膜癌疗效观察.现代肿瘤医学():.():.():.():.刘欣魏炜樊钦等.大黄素通过抑制半乳糖凝集素 诱导甲状腺癌细胞内质网应激.中华实验外科杂志():.():.王赫董丽邵明敬等.芦荟大黄素纳米脂质体介导光动力疗法抑制人口腔癌 细胞增殖并促进其自噬.现代肿瘤医学():.():.薛飞董传莹田莉等.芦荟大黄素调控 促进子宫内膜癌细胞自噬的研究.中国比较医学杂志():.():.():.李瑞锋崔燕曾湘晖等.桔梗皂苷 基于 /通路调控上皮 间质转化对人子宫内膜癌 细胞迁移及侵袭的作用.西部医学():./.():.田滢舟陈思达梁雪芳等.莪术醇通过上调 抑制 诱导的 细胞生长及纤维化相关蛋白表达.中国病理生理杂志():.():./.():.杨子霖王志莲.调控 /通路对宫颈癌 细胞自噬基因 的影响.现代肿瘤医学():./.():.李雨珊张仁静侯维等.过/降表达 的食管鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及 /通路蛋白表达观察.山东医药():./.():.(编校:蔺玥)现代肿瘤医学 年 月 第 卷第 期 .