大柴胡汤对结石性胆囊炎豚鼠胆囊动力的影响及其机制.pdf

大柴胡汤对结石性胆囊炎豚鼠胆囊动力的影响及其机制马亦湘周春宇杨成城张少辉张 涛钱嘉惠王馨悦郭彦每安佳琳(.北京中医药大学北京.北京中医药大学东方医院北京)摘要 目目的的 观察大柴胡汤对结石性胆囊炎豚鼠血清炎症因子水平和胆囊动力的影响探讨大柴胡汤治疗结石性胆囊炎的作用机制 方方法法 将 只雌性豚鼠随机分为正常组、模型组、消炎利胆片组、大柴胡汤组每组 只 模型组、消炎利胆片组、大柴胡汤组连续喂以高胆固醇致石饲料 周建立结石性胆囊炎模型 造模成功后大柴胡汤组给予大柴胡汤颗粒剂灌胃消炎利胆片组给予消炎利胆片灌胃正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃均连续灌胃 周 灌胃结束后腹主动脉取血测定血清肿瘤坏死因子 ()、白细胞介素 ()、胆囊收缩素()、小窝蛋白()水平测量胆汁量取胆囊检测胆囊肌条收缩活性 结结果果 与正常组比较模型组豚鼠血清 、水平均明显升高(均.)血清 水平明显降低(.)胆汁量明显减少(.)胆囊收缩频率明显减慢(.)与模型组比较消炎利胆片组和大柴胡汤组豚鼠血清 、水平均明显降低(均.)血清 水平均明显升高(均.)胆汁量均明显增加(均.)胆囊收缩频率均明显变快(均 )与消炎利胆片组比较大柴胡汤组豚鼠胆汁量更多血清 、水平更高血清 水平更低胆囊肌条收缩频率更快差异均有统计学意义(均.)结结论论 大柴胡汤可以明显减轻结石性胆囊炎豚鼠的炎症反应增加胆汁量促进胆囊运动其作用机制可能与下调血清 、水平发挥抗炎作用上调血清 水平并下调血清 水平发挥利胆作用相关关键词 大柴胡汤结石性胆囊炎胆囊动力炎症因子:./.中图分类号 文献标识码 文章编号 ()作者简介 马亦湘男在读硕士研究生研究方向为中西医结合外科通信作者 安佳琳 :.基金项目 北京中医药大学 年度基本科研业务费青年教师项目()(.):.()().现代中西医结合杂志 ()()()()().(.)(.)(.)(.).(.)()(.)(.).(.).:结石性胆囊炎是由胆囊结石引起的胆囊急慢性炎症常因肥胖、饮食、情绪等因素导致反复发作临床上常表现为反复发作的右上腹疼痛不适严重影响患者的生活质量 现代研究认为结石性胆囊炎的主要病理机制为胆囊结石导致胆囊管阻塞、扩张、水肿胆汁淤积引起胆汁酸代谢途径障碍胆固醇清除能力下降引起炎症因子趋化胆囊动力降低胆囊炎性细胞浸润进一步加重炎症反应 中医将结石性胆囊炎归为“胆胀”“胁痛”“黄疸”范畴 多运用大柴胡汤疏肝理气、利胆消石 本实验旨在通过高脂饲料诱导建立结石性胆囊炎豚鼠模型观察大柴胡汤对豚鼠血清炎症因子水平及胆囊动力的影响探讨该方治疗结石性胆囊炎的作用机制以期为临床应用提供实验依据 实验材料与方法 实验动物普通级健康成年雌性豚鼠 只体重()购自北京维通利华实验动物技术有限公司动物合格证号:(京)动物饲养于斯贝福(北京)生物技术有限公司动物实验室(级)室温条件()相对湿度保持在 光照保持正常昼夜节律分笼饲养 本实验通过斯贝福(北京)生物技术有限公司动物伦理审批()药物消炎利胆片(广东万年青制药有限公司生产国药准字)大柴胡汤复方颗粒制剂(由柴胡 、大黄、枳实、黄芩、姜半夏 、白芍 、生姜 、大枣 组成北京医珍堂中医诊所有限公司生产)按 成年人日有效剂量为 (/)参考中药药理实验方法学中人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值豚鼠灌胃剂量 人的每日剂量(/)././故 豚鼠的用药剂量为./按照 /的标准稀释颗粒制剂豚鼠的灌胃剂量为./试剂及致石饲料 通用型 组织固定液、苏木素染液、豚鼠肿瘤坏死因子 ()检测试剂盒、豚鼠白细胞介素()检测试剂盒、豚鼠胆囊收缩素()检测试剂盒、豚鼠小窝蛋白 ()检测试剂盒、切片石蜡购自北京泰科美生物科技有限公司综合参考文献 的造模方法选取含 酪蛋白、.蔗糖、猪油、.胆酸、.胆固醇与普通饲料混合的致石饲料购自北京欧北实验科技有限公司 实验方法 将 只豚鼠按照随机数字法分为正常组、模型组、消炎利胆片组、大柴胡汤组每组 只 模型组、消炎利胆片组和大柴胡汤组豚鼠普通饲料适应性饲养 后连续喂以高胆固醇致石饲料 周建立结石性胆囊炎模型 造模成功后参考文献方法消炎利胆片组给予消炎利胆片现代中西医结合杂志 ()/灌胃大柴胡汤组给予大柴胡汤./灌胃正常组和模型组给予生理盐水灌胃灌胃量均为./次/连续灌胃 周各组喂养的饲料与灌胃前相同 检测指标与方法 豚鼠一般情况造模成功后观察各组大鼠的精神状态、皮毛的光泽度、进食量、排便量、大便形态分别在造模后的第 天、第 天、第 天、第 天、第 天测量每只大鼠的体重计算体重变化率(体重变化率 本次测量体重/上次测量体重)血清学指标末次灌胃后禁食 称重用 水合氯醛./麻醉豚鼠打开腹腔取腹主动脉血 在室温下静置 下 /离心 分离得到上层血清按照 检测试剂盒说明测定 、水平 胆汁量腹主动脉取血后结扎胆囊管行胆总管插管收集胆汁共 测量胆汁量 胆囊肌条收缩活性 收集胆汁后完整切除豚鼠胆囊于胆囊颈部离断 每枚胆囊沿纵轴制备长 、宽 肌条 条连于张力换能器.前负荷下没于(.)液待出现自发节律性收缩并稳定 后记录机械收缩信号(胆囊收缩频率、胆囊收缩振幅)统计学方法所有获取的实验相关数据均使用 统计软件分析 符合正态分布的数据采用 方法进行组间比较多重比较采用 法不符合正态分布的数据采用非参数检验 .为差异有统计学意义 结 果 各组豚鼠一般情况比较豚鼠在造模后出现行动迟缓皮毛暗淡易脱弓背扎堆尿液色黄大便稀溏消炎利胆片组和大柴胡汤组豚鼠药物干预后排便排尿情况、日常活动、皮毛光泽度及精神情况均较模型组明显改善体重明显增长但未恢复到正常水平 造模后第 天模型组豚鼠的体重增长率均明显低于正常组(均.)消炎利胆片组和大柴胡汤组豚鼠造模后第 天和大柴胡汤组豚鼠造模后第 天的体重增长率均明显高于模型组(均.)见表 表 正常组和结石性胆囊炎各组豚鼠各时间点体重变化率比较组别第 天第 天第 天第 天正常组.模型组.消炎利胆片组.大柴胡汤组.注:与正常组比较.与模型组比较.各组豚鼠血清 、水平比较 模型组豚鼠血清 、水平均明显高于正常组(均 .)消炎利胆片组和大柴胡汤组豚鼠血清 、水平均明显低于模型组(均.)但大柴胡汤组豚鼠血清 、水平均明显高于消炎利胆片组(均 .)见图 图 正常组和结石性胆囊炎各组豚鼠血清 、水平 各组豚鼠血清、水平比较与正常组比较模型组豚鼠血清 水平明显降低血清 水平明显升高差异均有统计学意义(均.)与模型组比较消炎利胆片组和大柴胡汤组豚鼠血清 水平均明显升高血清 水平均明显降低差异均有统计学意义(均 )与消炎利胆片组比较大柴胡汤组豚鼠血清 水平更高血清 水平更低差异均有统现代中西医结合杂志 ()计学意义(均.)见图 各组豚鼠胆汁量比较模型组豚鼠的胆汁量明显少于正常组(.)消炎利胆片组和大柴胡汤组豚鼠的胆汁量均明显多于模型组(均 )且大柴胡汤组豚鼠的胆汁量明显多于消炎利胆片组(.)见图 图 正常组和结石性胆囊炎各组豚鼠血清、水平图 正常组和结石性胆囊炎各组豚鼠胆汁量 各组豚鼠胆囊肌条收缩活性比较与正常组比较模型组豚鼠的胆囊收缩频率明显减慢(.)与模型组比较消炎利胆片组和大柴胡汤组豚鼠的胆囊收缩频率均明显增快(均 .)与消炎利胆片组比较大柴胡汤组豚鼠的胆囊收缩频率更快(.)见图 讨 论中医认为结石性胆囊炎病位在肝胆其病机多图 正常组和结石性胆囊炎各组豚鼠胆囊肌条收缩活性为饮食不节、情志不畅、湿热蕴结等导致肝胆疏泄不利肝调达受阻胆升发不畅胆内精汁不能排出聚集成石阻滞胆道不通则痛发为胆胀、协痛 结石阻遏胆道胆液不循常道发为黄疸本着治病求本的中医思想临床多运用大柴胡汤治疗 大柴胡汤是仲景伤寒杂病论和解少阳、内泻热结的代表方方中君以柴胡解热疏肝除少阳之邪气臣以黄芩和解清热柴胡、黄芩合用得以疏肝解郁、清热利湿大黄逐瘀泻热芍药柔肝缓急止痛与枳实配伍可理气和血使疏肝而不伤肝半夏、生姜可调和脾胃缓解恶心呕吐诸药合用共同发挥疏肝理气、利胆消石之功 现代药理学研究表明柴胡中的柴胡皂苷 和 能够通过抑制炎症介质和内源性糖皮质激素的释放发挥抗炎作用且柴胡皂苷 能够通过干扰 和 活化有效抑制脂多糖诱导的促炎介质的释放从而阻止 的激活黄芩苷可通过阻断 、等炎症信号通路发挥抗炎作用大黄中所含的大现代中西医结合杂志 ()黄酸、大黄素、芦荟大黄素等蒽醌类化合物可双靶点(和)抑制脂多糖刺激巨噬细胞产生的炎症反应大柴胡汤中的槲皮素可以参与调控 的表达从而治疗结石性胆囊炎目前研究认为结石性胆囊炎因胆囊黏膜层受到淤积胆汁中胆汁酸刺激和胃肠道细菌移位或者门静脉菌血症等因素影响而出现炎症反应引起炎性细胞浸润和胆囊运动障碍等病理改变其中 、等炎性因子在结石性胆囊炎的发生发展中起了关键作用 能增强血管内皮细胞对白细胞的黏附作用使白细胞聚集于炎症反应部位 可通过吸引中性粒细胞趋化浸润、细胞因子合成、细胞内颗粒释放等过程来推进和加剧急、慢性炎症反应 、的活化可以激活 信号通路从而引发炎症级联效应致使机体内炎性反应扩大并弥散蔓延 本实验结果显示大柴胡汤组豚鼠血清 、水平明显低于模型组表明大柴胡汤可以降低结石性胆囊炎豚鼠血清 、水平调控炎症反应减轻胆囊炎症 胆囊动力的变化与胆囊疾病密切相关 胆囊收缩运动功能异常排空延迟使得胆囊内过饱和胆固醇胆汁形成的胆固醇结晶不能被及时地排入肠道聚集成石这是胆石形成的动力学机制 为人体分泌的脑肠肽激素能促进胆囊的收缩运动促进胆汁排泄当体内 水平降低时胆囊运动受到抑制胆汁排泄障碍容易在胆囊内淤积形成胆囊结石 为胆囊平滑肌上的一种结构性蛋白质可以抑制胆囊收缩素受体()的表达从而抑制胆囊运动导致胆汁淤滞促进胆固醇结晶析出、聚集进而形成胆囊结石 本实验结果显示与模型组和消炎利胆片组比较大柴胡汤组血清 水平明显升高血清 水平明显降低胆汁量和胆囊肌条的收缩频率明显增加提示大柴胡汤可以促进结石性胆囊炎豚鼠胆囊收缩而发挥利胆功效且其利胆功效明显优于消炎利胆片分析其促进胆囊收缩运动作用可能与调节血清、的表达相关综上所述炎症因子诱导趋化、胆囊收缩运动障碍在结石性胆囊炎的发生过程中扮演了重要角色大柴胡汤可通过下调血清 、水平发挥抗炎作用通过上调血清 水平、下调血清 水平发挥利胆作用从而减轻炎症反应促进胆汁分泌和胆囊运动利益冲突:所有作者均声明不存在利益冲突参考文献 方旭东姚宁姜朝晖等.腹腔镜胆囊切除术治疗急性结石性胆囊炎的效果分析.腹腔镜外科杂志():.刘祯发程启文龙建林等.五金化石方对胆色素结石性胆囊炎模型豚鼠血清炎性因子的影响.现代养生():.张丽丽陈慧君蒋雪梅等.针刺阳陵泉穴不同留针时间对慢性炎性高张力胆囊动力的影响.中华中医药杂志():.殷光辉.柴胡疏肝散加味联合西药治疗急性结石性胆囊炎的疗效.实用临床医学():.程征王琴石岩.大柴胡汤加减治疗急性胆囊炎的疗效及对内毒素、内皮素的影响.现代中西医结合杂志():.李仪奎.中药药理实验方法学.上海:上海科学技术出版社.张纯徐晓娟王张等.致石饲料致动物胆固醇结石模型造模要素及中医药防治的数据挖掘.世界中医药():.谭丹枫陶月英姜媛等.胆石六号颗粒对模型小鼠非酒精性脂肪肝的改善作用研究.中国药房():.章小燕叶露闵莉.小鼠与豚鼠胆固醇结石造模方法比较.长春中医药大学学报():.叶露周亚男丁珊珊等.胆固醇结石模型豚鼠灌胃给药方法探讨.云南中医学院学报():.李军祥陈誩杨胜兰.急性胆囊炎中西医结合诊疗共识意见.中国中西医结合消化杂志():.贾艮林谢晶日张启佳等.谢晶日教授从“气湿瘀”论治慢性胆囊炎经验举隅.中国中西医结合消化杂志():.张宇欣陈波刘昱秀.李延辨治胁痛经验撷要.江苏中医药():.李云虎李东王春勇.伤寒论大柴胡汤临证应用辨析.中医杂志():./.():.朱正文蒋晴罗煜等.基于中效方程的黄芩苷与汉黄芩苷调控 信号通路的协同作用.中国实验方剂学杂志():.(下转第 页)现代中西医结合杂志 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