激素对血糖浓度影响及血糖浓度的测定.doc

生物化学实验
实验名称：激素对血糖浓度影响及血糖浓度的测定
时间：2014年6月9日星期一
姓名：
学号：201312201202003
指导老师：毛水龙老师

一，实验目的
掌握血糖的测定原理和方法；掌握血糖的正常范围及意义；熟悉调节血糖的激素对血糖浓度的影响。
二，实验原理
家兔动物实验。获取家兔注射激素前后的血液样本并对其；进行血糖测定。邻苯甲胺方法测定血糖浓度。
实验采取前后对照的方法，对家兔注射肾上腺素和胰岛素，并通过耳缘静脉采血，获取激素注射前后的血液样本，采用邻甲苯胺法处理样本，最终与标品比色得出结论。
1.调节血糖的激素有：胰岛素、肾上腺素、胰高血糖素、肾上腺皮质激素、生长素和甲状腺素等。胰岛素是体内唯一能使血糖降低的激素，其他激素均使血糖升高。
2.肾上腺素升高血糖的机制主要作用于肝细胞膜受体，通过cAMP-蛋白激酶系统激活肝磷酸化酶，同时抑制糖原合成酶，导致肝糖原分解加速。胰岛素降低血糖的机制是：降低肝细胞cAMP水平，从而抑制肝磷酸化酶，激活糖原合成酶，促进肝糖原的合成；胰岛素诱导糖酵解关键酶类的合成，阻遏糖异生关键酶的合成；胰岛素促进葡萄糖进入红细胞、肌肉等组织的异化扩散，促进糖的利用。
3.血液中的葡萄糖，在热的冰醋酸溶液中可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛（或称羟甲基糠醛）。后者在与邻甲苯胺缩合，生成蓝绿色的西夫式碱（Schiffbase）。其色泽的深浅与葡萄糖浓度成正比。与同样处理的标准葡萄糖溶液比色，即可求得待测血液中葡萄糖的含量。
三，实验材料
1.材料：家兔两只,刀片，草酸钠，小烧杯。
2.试剂：①肾上腺素(1mg／lml)②胰岛素(20单位／ml)③碘酒、消毒酒精④饱和硼酸溶液⑤邻甲苯胺-硼酸⑥5％ 三氯醋酸溶液⑦饱和苯甲酸溶液⑧标准葡萄糖贮存液⑨标准葡萄糖应用液
四，实验方法
1.取健康正常家兔一只，实验前饥饿14~16h左右，称体重。
2.耳缘静脉采血。小刀刮去耳缘的毛，用酒精棉球擦拭使其充血，再用干棉球擦干。 刀片划开耳缘静脉，使血液滴入成有足够草酸钠的小烧杯中，注意收集期间要不断地晃动烧杯防止血液凝固。采集完毕后干棉球压迫血管止血。
3.给家兔注射肾上腺素（0.5mg/只），半小时后同样方法采得血液。
4.缓缓放入洁净试管内，加5%三氯醋酸3.6ml，同时摇动使之充分混匀。3000rpm离心5min，制得无蛋白血滤液（上清液）。
5.取四支试管，分别加入2.5ml邻甲苯胺试剂。并向试管1加入1ml蒸馏水，试管2加入1ml标准葡萄糖应用液，试管3加入1ml注射激素前的血液的无蛋白滤液，试管4加入1ml注射激素后的血液的无蛋白滤液。
6.混匀后沸水加热8min，取出并用自来水冲洗试管使之冷却。而后置于722型分光光度计630nm比色，空白管校正零点。
7.表加试剂如下表：
ml
空白管
标准管
待测管甲（药前）
待测管乙（药后）
蒸馏水
1.0
―
－
－
标准葡萄糖应用液（1mg/ml）
－
1.0
－
－
无蛋白血滤液（药前）
－
－
1.0
－
无蛋白血滤液（药后）
－
－
－
1.0
邻甲苯胺试剂
2.5
2.5
2.5
2.5
同理，对家兔进行肾上腺素注射（剂量为5单位/公斤体重）并进行上述步骤，最终得出结果。
五，实验结果
据试验，在注射胰岛素实验中，家兔重量为2.95公斤，依照比例注射15单位的胰岛素。在注射肾上腺激素的实验中，家兔重量为2.90公斤，注射1mg的肾上腺激素。

血糖测定：（葡萄糖标准液浓度为5.50mmol/L）

空白管
标准管
注 射胰岛素前
注射 胰岛素后
注射肾上腺激素前
注射肾上腺激素后
血清/ml
-
-
0.02
0.02
0.02
0.02
葡萄糖标准液/ml
-
0.02
-
-
-
-
生理盐水/ml
0.02
-
-
-
-
-
酶酚混合液/ml
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
曝光值
0
0.135
0.363
0.116
0.315
0.508
由此得出：
注射胰岛素前血糖浓度为14.79mmol/L。
注射胰岛素后血糖浓度为4.73 mmol/L。
注射肾上腺激素前血糖浓度为12.83 mmol/L。
注射肾上腺激素后血糖浓度为20.70 mmol/L。
得出结论：注射胰岛素可有效的降低血糖。2．注射肾上腺素能使血糖上升。

六，讨论
实验中要注意如下问题：
1.采血及注射激素时，应尽量使家兔保持安静。家兔不安静的情况下，肾上腺素分泌增多，血糖浓度升高，对实验结果有影响。
2.采血后要及时分离出血浆，避免溶血。溶血时红细胞内糖类扩散到血浆中，会对实验结果有影响。
3.采血量要准确，不能采得太少不够实验需要的血量，也不能采得太多伤及家兔。
4.由于血细胞不断从血浆摄取葡萄糖加以利用，因此, 采血后及时进行检测，否则血糖浓度将逐渐降低。