QuEChERS-HPLC法测定食用菌中克百威及3-羟基克百威的残留量.pdf

Analysis and Testing199XIANDAISHIPIN现代食品分析检测克百威（carbofuran），又名呋喃丹、虫螨威，是一种因具有高效、低毒、选择性强等优点而被广泛应用的氨基甲酸酯类农药。克百威在农作物中，除了本体残存外，还存在相关降解物，其降解物又分为 3-羟基克百威（3-hydroxycarbofuran）和 3-酮基克百威（Carbofuran-3-keto）。其中，3-羟基克百威毒性大1。GB 27632021食品中农药最大残留限量规定，克百威残留物为克百威和 3-羟基克百威之和，在食用菌中的最大残留限量定为 0.02 mgkg-12-3。现行的国家标准和其他标准体系中，较为常用 的 有 C18 固 相 萃 取 小 柱、Carb/NH2固 相 萃 取 小柱、QuEChERS 净化管、凝胶色谱仪等方法，多使用 OPA 进行衍生，再柱后衍生法进行测定，如 GB 23200.1122018 植物源性食品中 9 种氨基甲酸酯类doi:10.16736/41-1434/ts.2023.20.063作者简介：苏肯明（1985），男，本科，工程师，研究方向为化学分析。QuEChERS-HPLC 法测定食用菌中克百威及3-羟基克百威的残留量Determination of Carbofuran and 3-Hydroxy Carbofuran Residues in Edible Mushrooms by QuEChERS-HPLC 苏肯明，罗诗泳（佛山市沃特测试技术服务有限公司，广东 佛山 528000）SU Kenming,LUO Shiyong(Waltek Services Testing Group Co.,Ltd.,Foshan 528000,China)摘要：本研究采用 HPLC-FLD，建立了同时测定食用菌中克百威、3-羟基克百威残留量的检测方法。结果表明，该方法具有前处理简单、高效、实验耗时短、准确度和灵敏度较高的优势，可用于食用菌中克百威、3-羟基克百威残留量的测定。关键词：克百威；3-羟基克百威；QuEChERS；高效液相色谱Abstract：This study used HPLC-FLD to establish a detection method for the simultaneous determination of carbofuran and 3-hydroxycarbofuran residues in edible mushrooms.The results indicate that this method has the advantages of simple pre-treatment,high efficiency,short experimental time,high accuracy and sensitivity,and can be used for the determination of carbofuran and 3-hydroxycarbofuran residues in edible mushrooms.Keywords:carbofuran;3-hydroxycarbofuran;QuEChERS;HPLC中图分类号：TL271+.8200现代食品XIANDAISHIPIN分析检测 Analysis and Testing农药及其代谢物残留量的测定 液相色谱-柱后衍生法和 NY/T 7612008 的第三部分4-5。目前，国内外的主流检测仪器有 GC、HPLC、GC-MS/MS、HPLC-MS/MS 等。由于克百威属于极性强、热稳定性较差的物质，因此，更适合使用 HPLC 或 HPLC-MS/MS 进行检测。虽然 HPLC-MS/MS 技术已日趋成熟，但其成本昂贵，在一般实验室中难以得到推广和应用。用高效液相色谱法检测克百威和 3-羟基克百威，具有选择性强、灵敏度较高、重现性较好，且易于实现等优点。基于此，本研究期望建立一种液相色谱法检测食用菌中克百威和 3-羟基克百威的分析方法，旨在保证食用菌的质量安全、加强环境保护。1 材料与方法 1.1 仪器设备高效液相色谱仪 U3000 analytical（配FLD检测器，Thermo Fisher）；高速均质仪（德国 IKA 集团）；多功能涡旋混合器（上海力辰）；24 位氮吹仪（上海安浦）；冷冻离心机（湖南湘仪）。1.2 标准物质与试剂克 百 威 标 准 品、3-羟 基 克 百 威 标 准 品（1 000 mgL-1，上海安浦）；乙腈、甲醇（色谱 纯，默 克）；MgSO4、NaCl（分 析 纯，国 药）；Na3C6H5O72H2O、C6H6Na2O71.5H2O（分析纯，阿拉丁）；PSA（分析纯，上海安浦）；Milli-Q 超纯水。1.3 试验方法 1.3.1 溶液配制 混合标准溶液：吸取一定量的克百威、3-羟基克百威贮备液，置棕色容量瓶中，用乙腈稀释成浓度为 5 mg L-1 混合标准工作液避光-18 及以下条件保存，有效期 1 个月。用乙腈逐级稀释成浓度分别为 0.05、0.10、0.20、0.50、1 mgL-1的标准工作曲线。1.3.2 样品前处理 称取 10 g 食用菌试样于 50 mL 离心管中，加 入 20 mL 0.1%甲 酸 乙 腈 溶 液，用 高 速 均 质机 20 000 rmin-1均质 1 min，加入 4 g MgSO4、1 g NaCl、1 g Na3C6H5O72H2O、0.5 g C6H6Na2O71.5H2O及 1 颗陶瓷均质子，3 000 rmin-1涡旋 1 min 后8 000 rmin-1冷冻离心 5 min6。取 10 mL 上清液加入含 1 500 mg MgSO4、250 mg PSA 的 15 mL 塑料离心管中，3 000 rmin-1涡旋 1 min，8 000 rmin-1离心5 min。取 2 mL 上清液于 40 水浴氮吹至近干，残渣用乙腈定容至 1 mL，过微孔滤膜，用于测定7。1.3.3 色谱条件色谱柱：C18 柱，1504.6 mm，5 m；流动相：甲醇+0.1%甲酸溶液=30+70；流速：1 mLmin-1；荧光检测器：em=209 nm，ex=307 nm；进样量：10 L。2 结果与分析 2.1 线性范围和检出限克百威、3-羟基克百威混合系列工作液浓度分别为 0.05、0.10、0.20、0.50、1 mgL-1。以目标农药的保留时间定性，被测定的试样中克百威、3-羟基克百威的色谱峰的保留时间与标准物质中所对应的色谱峰的保留时间作比较，相差应在 0.05 min 之内。采用外标法定量，以标准物质中克百威、3-羟基克百威的质量浓度和色谱峰的峰面积，绘制其标准曲线，结果如表 1 所示，标准曲线图谱如图 1 所示。在 0.051 mgL-1的线性范围内，克百威相关系数（r2）为0.998 95，3-羟基克百威相关系数（r2）为 0.999 44，定量限均为 0.01 mgkg-1，各考察参数均满足标准限值要求。图 1 克百威、3-羟基克百威的线性曲线图表 1 克百威、3-羟基克百威线性关系与检出限表化合物名称回归曲线方程相关系数r2方法检出限 DL/mgkg-1克百威Y=1 042 246.858 3X-9 073.090 20.998 950.013-羟基克百威Y=10 789 295.241 5X-76 338.838 70.999 440.012.2 方法的准确度和精密度准确度指在一定实验条件下多次重复性试验测定值与参考值之间的接近程度。在本方法中，准确度以试验回收率进行评估，精密度以变异系数（CV）进行Analysis and Testing201XIANDAISHIPIN现代食品分析检测评估。取 18 份阴性食用菌样品，每份试样质量为 10 g，分别添加克百威、3-羟基克百威混合标准溶液至0.05、0.10、0.20 mgkg-1 3 个水平浓度，每个水平做 6 个平行试样。样品按 2.3.3 步骤进行前处理后进行上机测试，分别计算平均值、平均回收率和实验室内变异系数。结果显示，当添加浓度为 0.05、0.10、0.20 mgkg-1时，克 百 威 回 收率为 85.29%101.1%，CV 值（n=6）为 1.48 6.25；3-羟基克百威回收率为 93.04%98.29%，CV 值（n=6）为 1.16 1.77。具体计算结果如表2 所示，加标图谱如图 2 所示。结果表明，克百威、3-羟基克百威的回收率和实验室内变异系数均满足规定要求。图 2 添加水平为 0.20 mgkg-1样品的液相色谱图3 结语本试验建立了一种经 QuEChERS 净化，液相色谱法（HPLC）测定食用菌中克百威、3-羟基克百威残留量的检测方法。QuEChERS 净化法是目前用于农残检测的热门前处理方法，具有步骤便捷、试验耗时短、过程损失小的优势，整体过程具有简单、高效、成本低、易于推广的特点，且该试验方法线性范围、检测限、精密度和准确度均满足现行标准的要求，可以为今后建立食用菌的其他农药残留检测提供参考。参考文献1 姚丽君，杨璐，代弟，等.液相色谱-串联质谱法同时检测蔬菜中克百威和 3-羟基克百威残留 J.食品安全质量检测学报，2017，8（4）：1370-1375.2 李国烈，蒋金芳，苏旭，等.桑葚中克百威和 3-羟基克百威残留量测定 J.世界农药，2018，40（2）：57-62.3 张冠华，毕忠泽，黄海，等.食品中农药最大残留限量标准（GB 27632021）特点分析及应用 J.现代农业，2021（6）：90-93.4 杨琳琳.用液相色谱-质谱联用法测灭多威、多菌灵及嘧霉胺等 20 种农药残 J.农业开发与装备，2022（5）：164-165.5 赵宏梅，卞红正，方玲.QuEChERS-GC-MS/MS 方法测定蔬菜、水果中的联苯菊酯和溴氰菊酯农药残留J.安徽农学通报，2019，25（8）：94-97.6 黄霞，刘芳，聂立，等.高效液相色谱法测定牛奶中速灭威、克百威、异丙威农药残留 J.中国酿造，2017，36（1）：168-170.7 聂荣荣，何啸峰，沈洁，等.GCMS 法测定红薯中克百威和 3-羟基克百威的残留量 J.食品安全导刊，2019（3）：152-154.表 2 克百威、3-羟基克百威回收率和变异系数测定结果表化合物添加浓度/mgkg-1测定结果/mgkg-1平均值/mgkg-1 CV123456克百威0.050.043 40.044 30.042 70.039 70.043 00.042 80.042 685.293.630.100.087 10.093 70.077 30.090 20.091 50.087 70.087 987.916.520.200.1830.1800.1830.1860.1790.1820.182101.11.483-羟基克百威0.050.046 3 0.047 0 0.046 8 0.045 6 0.046 4 0.047 0 0.046 5 93.041.160.100.085 5 0.082 4 0.082 5 0.082 7 0.083 8 0.081 3 0.083 0 83.021.770.200.176 0.178 0.175 0.179 0.173 0.180 0.177 98.291.52