安罗替尼在宫颈癌HeLa_DDP细胞中的作用及逆转顺铂耐药性机制研究.pdf

现代肿瘤医学2 0 2 3年11月第31卷第2 1期2020,28(22):3999 4002.20张怀斌，杨国清，梁文强，等.MiR-129-5p靶向HMGB1抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移J.肿瘤防治研究,2 0 2 2,49(0 1)：5.11.ZHANG HB,YANG GQ,LIANG WQ,et al.MiR-129-5p tar-gets HMGB1 to inhibit proliferation and migration of osteosarcomaMODERN ONCOLOGY,Nov.2023,VOL.31,No.2121 MO XX,SHEN XJ,MO XC,et al.CEMIP promotes small cel ungcancer proliferation by activation of glutamine metabolism viaFBXW7/c-Myc-dependent axis J.Biochem Pharmacol,2023,209;115446.3927cellsJ.Oncology Control Research,2022,49(01):5-11.（编校：巩森森）安罗替尼在宫颈癌HeLa/DDP细胞中的作用及逆转顺铂耐药性机制研究王焕焕，马军伟，高灿灿，赵晶晶，赵红延安大学附属医院肿瘤科,陕西延安7 16 0 0 0【摘要】目的：探究安罗替尼对HeLa/DDP(宫颈癌顺铂耐药细胞）细胞增殖和凋亡的影响及其逆转顺铂耐药的机制。方法：不同浓度顺铂及安罗替尼处理HeLa/DDP细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力；流式细胞术检测细胞凋亡;WestermBlot 检测P-gp的表达水平差异。结果：顺铂对HeLa/DDP细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量及时间依赖性。安罗替尼对HeLa/DDP细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性。安罗替尼、安罗替尼联合顺铂可以抑制HeLa/DDP细胞增殖(P0.05）。流式细胞术结果发现安罗替尼组及安罗替尼联合顺铂组细胞凋亡率均升高（P0.05)。结论：安罗替尼可抑制宫颈癌HeLa/DDP细胞增殖,诱导调亡;安罗替尼联合顺铂抑制细胞增殖、诱导调亡作用更显著;安罗替尼可增加宫颈癌HeLa/DDP顺铂耐药株对顺铂的敏感性,逆转耐药性,但不能介导耐药相关蛋白P-gp表达下调。【关键词】宫颈癌；安罗替尼;P-gP;顺铂耐药【中图分类号】R737.33【文章编号】16 7 2-4992-(2 0 2 3)2 1-392 7-0 6Study on the role of Anlotinib in cervical cancer HeLa/DDP cells and the mechanism ofreversing Cisplatin resistanceWANG Huanhuan,MA Junwei,GAO Cancan,ZHAO Jingjing,ZHAO HongDepartment of Oncology,Afiliated Hospital of Yanan University,Shaanxi Yanan 716000,China.Abstract Objective:To investigate the effects of Anlotinib on the proliferation and apoptosis of cervical cancerHeLa/DDP cells and its mechanism of reversing Cisplatin resistance.Methods:HeLa/DDP cells were treated withdifferent concentrations of Cisplatin and Anlotinib,and the proliferation ability of cells was detected by CCK-8 meth-od.Apoptosis was detected by flow cytometry and the difference of P-gp expression level was detected by WesternBlot.Results:Cisplatin inhibited the proliferation of HeLa/DDP cells in a dose-and time-dependent manner.Anlo-tinib inhibited the proliferation of HeLa/DDP cells in a concentration-dependent manner.Anlotinib and Anlotinibcombined with Cisplatin inhibited the proliferation of HeLa/DDP cells(P0.05).Flow cytometry results revealed anincreased apoptosis rate in both the Anlotinib group and the Anlotinib combined with Cisplatin group(P0.05).Conclusion:Anlotinib inhib-its proliferation and induces apoptosis in cervical cancer HeLa/DDP.Anlotinib combined with Cisplatin inhibits cellproliferation and induces apoptosis more significantly.Anlotinib increases the sensitivity of Cisplatin-resistant strainsof cervical cancer HeLa/DDP to Cisplatin and reverses drug resistance,but does not mediate the down-regulation ofresistance-associated protein P-gp expression.Key words cervical cancer,Anlotinib,P-gp,Cisplatin resistance宫颈癌在全球范围内罹患概率相对较高，发病率、死亡率在全球女性均位居第四位。目前针对局部晚期宫颈癌患者,放化疗仍是其标准的治疗方案。复发、转移者也可行姑息化疗2 。然而,肿瘤细胞对顺铂的耐药性降低了药效，从而导致癌症复发或转移3。有研究表明,复发性或晚期转移性宫颈癌患者预后不佳,1年生存率仅为10%2 0%4,5年生存率为16.5%5。因此，在逆转耐药的过程中，寻找顺铂耐药逆转药物及探寻顺铂的耐药机制并有针对性地寻找逆转耐药靶点对延长患者生存期、改善生活质量极其重要。顺铂耐药作用机制较为复杂。目前主要有以下几个方面：膜转运蛋白的药物外排增加、药物内流减少、自噬、凋亡异常、肿瘤微环境、表观遗传机制等6 。顺铂在细胞内药物积累减少是宫颈癌顺铂耐药的主要原因之一4。P-糖蛋白(P-gP,ABCB1,MDR1)是由多药耐药相关蛋白1(MDR1)的一类ATP结合盒（ATPb i n d i n g c a s s e t t e）转运蛋白7 。作为转运蛋白超家族中的一员,P-gp可通过ATP水解提供能量将顺铂逆浓度梯度转运至细胞外，从而导致细胞内药物浓度减少,顺铂杀灭肿瘤细胞能力减弱,肿瘤细胞对顺铂产生耐药（-。安罗替尼10 是正大天晴研发的一种新型口服小分子多激酶抑制剂,该药可以作用于以下几个靶点：血管内皮生长因子受体（VECFR2、VEG FR3）、成纤维细胞生长因子受体（FG FR14）、血小板衍生生长因子受体（PDGFR、PDGFR）、c-K i t 和 Ret!I等。安罗替尼不仅能够抑制肿瘤细胞增殖,重塑肿瘤微环境,还能抑制肿瘤血管、淋巴管生成12-3。病例报告141 和临床试验15-16 均表明安罗替尼在复发、转移宫颈癌中反应良好。但缺乏临床前的实验研究，安罗替尼在顺铂耐药宫颈癌作用及机制鲜有相关文献报道。本研究拟选取宫颈癌顺铂耐药细胞HeLa/DDP作为研究对象,探究安罗替尼对宫颈癌顺铂耐药 HeLa/DDP细胞株的增殖和调亡影响，以及是否可以增加耐药细胞对顺铂的敏感性,从而逆转耐药；并进一步分析是否通过调控P-gP的机制介导化疗耐药，为晚期和复发顺铂耐药宫颈癌患者临床治疗的选择及化疗耐药逆转的研究提供新方向。1材料与方法1.1材料宫颈癌HeLa/DDP细胞系（上海奥陆生物科技有限公司；货号：XB-0643）；安罗替尼（Anlotinib）正大天晴药业集团;注射用顺铂（Cisplatin）（冻干型）（齐鲁制药有限公司）；胎牛血清（FBS）、青霉素/链霉素双抗培养液、DMEM培养基（v i v a C e ll）;检测流式凋亡试剂盒、CCK-8检测试剂盒（碧云天）;GAPDH抗体、P-gp抗体、山羊抗兔IgG（A b c a m）；细胞培养瓶、6 孔板、96 孔板（Corning）。1.2CCK-8细胞增殖检测王焕焕等安罗替尼在宫颈癌HeLa/DDP细胞中的作用及逆转顺铂耐药性机制研究将处于对数生长期的HeLa/DDP细胞制成细胞悬液,以每孔510 细胞/10 0 L密度接种至96 孔细胞培养板中。培养2 4h后,加人含不同浓度（0.6 5、1.30、2.6 0、5.2 1、10.42、2 0.8 3、41.6 7、8 3.33、16 6.6 7,单位：mol/L）顺铂及(1.5、10、15、2 0、2 5、30.35、40,单位：mol/L）安罗替尼。对照组设置为3/千DMF（0.3%）、6/千DMF（0.6%）、空白对照组。作用2 4h、48 h、7 2 h 后，在每个孔中注人含有10 LCCK-8试剂的培养液,孵育2 h。用酶标仪测量各孔在450nm波长处的吸光度值（OD），计算细胞的增殖抑制率以及ICs0。将各孔设置为对照组、安罗替尼组（5 mol/L、10mol/L）、顺铂组（5mol/L）、安罗替尼（5mol/L、10 mol/L)联合顺铂组(5 mol/L）,上述分组药物对HeLa/DDP细胞细胞增殖情况是由相同方法测得。1.3流式细胞术检测将HeLa/DDP细胞培养2 4h,加人上述分组药物处理后继续培养48 h,进行5min、10 0 0 r/m in 的离心处理。然后加人AnnexinV-FITC/PI液后孵育15 min,在流式细胞仪下检测细胞调亡情况。1.4蛋白质印迹检测将HeLa/DDP细胞经上述分组药物处理48 h后提取蛋白,进行电泳及置人转膜液进行转膜,将稀释过的 P-gP、GAPDH加人封闭后的PVDF膜中,并在4 下过夜。用TBST洗涤3次后,将膜与山羊抗兔IgG在室温下孵育1h。使用成像系统收集化学发光信号并获取图像。1.5统计学分析使用GraphPadPrism8.0.1用于统计学分析和绘制相关图表。实验数据使用xs表示，使用t检验来比较两个独立样本组之间的差异。每组实验均重复三次并取平均值。以P0.05表示差异具有统计学意义。2结果2.1不同处理时间顺铂对HeLa/DDP细胞的增殖影响及ICso的确定如图1-2 所示,不同浓度顺铂对HeLa/DDP细胞的抑制率呈时间依赖性及剂量依赖性（P0.05），顺铂处理2 4h、48 h、7 2 h 的 ICso 分别为 40.0 mol/L、10.8 0 mol/L、9.97umol/L。综合考虑到药物毒副作用及作用效果,选用5mol/L顺铂用作后续实验顺铂浓度。2.2不同浓度梯度的安罗替尼对HeLa/DDP细胞增殖的影响为了确定安罗替尼对宫颈癌顺铂耐药HeLa/DDP细胞株的抑制作用,本课题首先使用CCK-8法来评估安罗替尼的抗增殖作用。如图3-4,安罗替尼对宫颈癌HeLa/DDP顺铂耐药细胞株的抗增殖作用呈剂量依赖性（P0.05）。现代肿瘤医学2 0 2 3年11月第31卷第2 1期1001+24h48 h-72 h(%)uoq.qul50-0图1不同浓度顺铂作用2 4h、48 h、7 2 h 后HeLa/DDP细胞抑制率Fig.1Inhibition rate of HeLa/DDP cells after 24 h,48 h and 72 h ofdifferent concentrations of Cisplatin1507100500-50图2 不同浓度顺铂作用HeLa/DDP48 h细胞抑制率与2.6 0 umol/L组比较，*P0.01，*P 0.0 0 0 1,差异具有统计学意义。Fig.2 Inhibition rate of HeLa/DDP cells with different concentrationsof Cisplatin for 48 hCompared with the 2.60 mol/L group,*P0.01,*P 0.000 1,differences are statistically.(%)uouqrul4020-0图3不同浓度安罗替尼作用2 4 h、48 h、7 2 h 后 HeLa/DDP 细胞生长抑制率Fig.3Growth inhibition rate of HeLa/DDP cells after 24 h,48 h and 72 hof different concentrations of Anlotinib2.3安罗替尼对HeLa/DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用根据CCK-8实验结果,选取无细胞毒性的抑制浓度（不超过2 0%时的浓度）作为后续实验剂量，最终选用5mol/L及10 mol/L安罗替尼作为后续实验浓度，见图4。如图5所示,结果分析表明：5mol/L及10 mol/L安罗替尼抑制率分别为（9.48 0.6 5)%、（18.2 2 0.97)%;5mol/L顺铂细胞抑制率为（16.0 7 0.95)%;5mol/L及10mol/L安罗替尼联合5mol/L顺铂细胞抑制率分别为（45.934.0 3)%、（55.191.37)%。安罗替尼对宫颈癌HeLa/DDP耐药细胞株抑制增殖的能力随着浓度增大而增强（P0.05）,差异具有统计学意义。值得注意的是,安MODERN ONCOLOGY,Nov.2023,VOL.31,No.21HeLa/DDP罗替尼联合顺铂比安罗替尼单药、顺铂单药抑制细胞增殖效果更显著(P0.001),差异具有统计学意义。5 mol/L及10mol/L安罗替尼联合5mol/L顺铂相较于5mol/L顺铂单药转倍数分别为2.9、3.4，见表1。综上所述,安罗替尼能够增加顺铂对宫颈癌HeLa/DDP细胞株的敏感性,逆转顺铂耐药,且呈浓度依赖性(P0.05)。10100Cisplatin(umol/L)*2Cisplatin(mol/L)HeLa/DDP-24 h60+48h+72h10Anlotinib(umol/L)3929.100080-60(%)uonqiqu4020-0-20-图 4不同浓度安罗替尼作用 48 h 后HeLa/DDP细胞抑制率与1 mol/L组比较，*P0.05，*P 0.0 0 1，*P0.0001,差异具有统计学意义。Fig.4 Inhibition rate of HeLa/DDP cells with different concentrations of166.Anlotinib for 48 hCompared with the 1 mol/L group,*P0.05,*P 0.001,*P0.000 1,differences are statistically.*来*(%)uoiqiqul4020-0Control5AnlotinibConcentration(mol/L)图5不同浓度安罗替尼、安罗替尼联合5mol/L顺铂作用HeLa/DDP 细胞抑制率*P0.05,*P0.01,*P0.001，*P 0.0 0 0 1,2030*1510152025303540Anlotinib(mol/L)*60*105+5,5+105Cisplatin+CisplatinAnlotinib40507差异具有统计学意义。Fig.5Inhibition rate of HeLa/DDP cells by different concentrations ofAnlotinib and Anlotinib combined with 5 mol/L Cisplatin*P0.05,*P0.01,*P0.001，*P 0.0 0 0 1,differences are statistically significant.表 1安罗替尼对 HeLa/DDP细胞顺铂耐药的逆转作用Tab.1Reversal of Cisplatin resistance in HeLa/DDP cells by AnlotinibMedications5 mol/L Cisplatin5 mol/L Anlotinib+5 umol/L Cisplatin10 mol/L Anlotinib+5 mol/L Cisplatin2.4安罗替尼、安罗替尼联合顺铂对HeLa/DDP细胞凋亡的影响流式细胞术检测凋亡结果表明,安罗替尼以及安罗替尼联合顺铂均可诱导细胞调亡。见图6-7，对照组调亡率Cell inhibitionrate(xs,%)16.1 1.045.9 4.055.2 1.4Reversalmultiplier2.93.4:3930.(11.790.09)%，顺铂组调亡率(16.8 2 0.91)%,安罗替尼组调亡率分别为(2 2.140.2 0)%、（2 3.6 8 0.17)%,联合组调亡率分别为（2 3.2 40.2 4)%、（2 5.6 51.0 2)%。随10%1Q2-10.00%10104H-Hd101002-31006188.24%1010410%1010310FITC-H5mol/LCisplatin/PI10%Q2-10.00%1010H-d1010Q2-3100J183.95%10Ls10310*1010103FITC-H图6流式细胞术检测各组宫颈腺癌HeLa/DDP细胞凋亡情况Fig.6Flow cytometry detection of apoptosis in cervical adenocarcinoma HeLa/DDP cells in each group30*冰*20-100Control5AnlotinibConcentration(mol/L)图7 流式细胞术检测安罗替尼单药及安罗替尼联合顺铂对HeLa/DDP细胞凋亡情况*P0.05,*P0.01,*P0.001,*P0.0001,差异具有统计学意义。Fig.7 Flow cytometry detection of apoptosis of HeLa/DDP cells by Anlo-tinib alone and Anlotinib combined with Cisplatin*P0.05，*P 0.0 1，*P 0.0 0 1,*P0.05）。安罗替尼联合顺铂与对照组和顺铂组以及安罗替尼单药组相比,P-gp蛋白表达上调,差异不具有统计意义(P0.05)。综上所述,安罗替尼对P-gp表达无影响。见图8-9。王焕焕，等安罗替尼在宫颈癌 HeLa/DDP 细胞中的作用及逆转顺铂耐药性机制研究着安罗替尼浓度增加,细胞凋亡率增加，且差异有统计学意义(P0.05）。安罗替尼联合顺铂组较顺铂组及安罗替尼单药组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。Fig.9Comparison of P-gp expression results afer treatment of HeLa/DDP cells with Anlotinib and Anlotinib combined with Cisplatinns:No statistically significant difference(P 0.05).Q2-214.17%Q2-49.68%Q2-215.23%Q2-410.94%Cisplatin+Anlotinib(mol/L)10+5nsnsns5105+55+10ControlCisplatin+Anlotinib10+10Control141kD36kDns现代肿瘤医学2 0 2 3年11月第31卷第2 1期3讨论妇科恶性肿瘤是危害女性健康的主要因素之一，主要包括宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌等17 。顺铂和紫杉醇联合用药是目前晚期、复发、转移宫颈癌的最常用的治疗方案18 。然而，顺铂耐药是晚期或复发转移性宫颈癌治疗失败的主要原因之一,限制了顺铂在临床的应用19-2 0 。目前针对顺铂耐药可能的机制，寻找可能逆转耐药的靶点及逆转剂，争取以此突破目前晚期、复发转移性宫颈癌治疗瓶颈期。安罗替尼10-是我国研发的在国内首个获批用于晚期非小细胞肺癌患者三线治疗的一种可以口服的小分子靶向药物。对多种实体肿瘤均具有良好的抗癌作用。该靶向药物能通过双重阻断VEGFR2和MET磷酸化和下游信号通路激活抑制骨肉瘤细胞生长、转移和血管生成2 1。也能通过抑制结直肠癌AKT/ERK信号通路抑制细胞增殖和血管生成2 2 。在宫颈腺癌HeLa细胞中，陈彦民等2 3 证实了安罗替尼通过上调miR-33b抑制癌细胞中磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B（A K T)信号通路的活性来抑制增殖、迁移侵袭。既往研究表明,无论是耐药肿瘤细胞还是未耐药肿瘤细胞,安罗替尼在体内及体外均有良好的抗肿瘤作用。结肠癌多药耐药 HCT-8/五氟尿嘧啶(5-FU)细胞对多种化疗药物（5-FU和DDP等）具有耐药性,安罗替尼通过灭活PI3K/AKT通路逆转耐药性,抑制细胞增殖,诱导凋亡2 4CZHU等2 5 的研究表明安罗替尼通过诱导G,/M期停滞和诱导体内外细胞凋亡来抑制卵巢癌疾病进展。JI 等12 的研究证实了安罗替尼在体内和体外对卵巢顺铂耐药细胞均有抑制作用,是通过 Gz/M 期阻滞细胞周期来抑制增殖。DENG等2 6 的实验表明VEGFR-2的表达与预后呈负相关。给予靶向药物安罗替尼后细胞增殖受到显著抑制（P0.05），口腔癌细胞系 Cal-27和 SCC-25 均检测到 Gz/M 停滞和凋亡。在 HE等2 7 研究者的研究中,安罗替尼可能通过抑制 B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Survivin 表达,诱导肝细胞调亡,通过细胞外调节蛋白激酶（Erk）和Akt途径促进Bax表达，抑制细胞增殖。目前,宫颈癌顺铂耐药细胞的临床前细胞实验较少有报道研究，安罗替尼在宫颈癌耐药细胞株中疗效及如何介导宫颈癌耐药性的机制尚未完全清晰。在本研究中，我们证实了无论是安罗替尼单药还是安罗替尼联合顺铂都能够抑制宫颈癌顺铂HeLa/DDP耐药株增殖,且呈浓度依赖性,并且能够诱导细胞调亡。值得注意的是,安罗替尼联合顺铂抑制细胞增殖、诱导调亡的作用更显著。这表明,安罗替尼可以增加宫颈癌HeLa/DDP细胞顺铂耐药株对顺铂的敏感性,逆转化疗耐药,提高顺铂在耐药细胞中的疗效。在宫颈瘤中 P-gp 是高表达2 8-2 ,当顺铂作用于HeLa细胞时,P-gp表达上调,顺铂诱导HeLa细胞凋亡能力减弱，即产生顺铂化疗耐药30 。其他小分子酪氨酸激酶抑制剂,如阿帕替尼通过直接抑制ABC药物转运蛋白的功能来逆转多药耐药。但不改变 P-gp 的表达31。KITAZAKI 等的研究发现吉非替尼与Pg p 直接相互作用并抑制其功能32 。阿帕替尼在多西他赛耐药A549/DTX细胞中降低了多西他赛诱导的肿瘤P-gp 的上调3。WANG等人34 指出,安罗替尼通过抑制P-gp在多药耐药骨肉瘤中的外排功能提高药物细胞内浓度,逆转了化疗耐药。提高了P-gp的ATP酶活性,但不影响P-gp的蛋白表达水平。上述研究启示笔者做出假设,安罗替尼能够通过介导P-gp表达增加对MODERN ONCOLOGY,Nov.2023,VOL.31,No.21HeLa/DDP细胞的敏感性,从而逆转顺铂耐药。因此本研究通过蛋白质印迹检测安罗替尼及安罗替尼联合顺铂作用于HeLa/DDP 细胞后 P-gp 的表达情况。我们可以看出,安罗替尼逆转HeLa/DDP细胞中的顺铂耐药性的机制可能与抑制耐药蛋白P-gp表达无关。综上所述,本研究结果表明,不同浓度的安罗替尼可抑制宫颈癌HeLa/DDP细胞的增殖,且能促进细胞凋亡;安罗替尼联合顺铂对于宫颈癌HeLa/DDP细胞抑制效果更显著；安罗替尼可增加宫颈癌HeLa/DDP顺铂耐药株对顺铂的敏感性,逆转耐药性,但不能抑制 P-gp的表达。安罗替尼不是通过抑制P-gp蛋白的表达来阻止顺铂外排，逆转细胞耐药。笔者阅读大量文献资料发现P-gp与顺铂耐药性密切相关,且有研究证实安罗替尼能够逆转化疗耐药，但尚未有安罗替尼在宫颈癌顺铂耐药细胞中的逆转相关研究,因此本实验进行了 P-gp蛋白的检测。本研究尚存在不足之处,具有一定的局限性,因顺铂耐药机制之间盘根错节，宫颈癌耐药过程中可能涉及其他基因的异常表达或信号通路调控,安罗替尼在宫颈癌HeLa/DDP细胞的逆转耐药靶点及具体分子机制有待进一步探索研究。以 PI3KA K T-m T O R 为代表的许多信号通路在宫颈癌中参与了调节6 ,后期可将思路切换至PI3K/AKT信号通路进行实验研究。本课题研究结果有望为安罗替尼在晚期复发转移宫颈癌的临床应用提供新的理论基础。【参考文献】1刘宗超，李哲轩,张阳，等.2 0 2 0 全球癌症统计报告解读J.肿瘤综合治疗电子杂志,2 0 2 1,7(0 2）：1-14.LIU ZC,LI ZX,ZHANG Y,et al.Interpretation of the 2020 globalcancer statistics report J.Electronic Journal of Integrative Oncolo-gy,2021,7(02):1-14.2 KKOH WJ,ABU-RUSTUR NR,BEA S,et al.Cervical cancer,ver-sion 3.2019,NCCN clinical practice guidelines in oncology J.Journal of the National Comprehensive Cancer Network,2019,17(1):64-84.3BHATTACHARJEE R,DEY T,KUMAR L,et al.Cellular landsca-ping of Cisplatin resistance in cervical cancer J.Biomed Pharma-cother,2022,153:113345.4ZHU X,ZHU H,LUO H,et al.Molecular mechanisms of Cisplatinresistance in cervical cancer J.Drug Design,Development andTherapy,2016,10:1885-1895.5VERGOTE I,RAY-COQUARD I,LORUSSO D,et al.Investiga-tional drugs for recurrent or primary advanced metastatic cervicalcancer:what is in the clinical development pipeline J.ExpertOpinion on Investigational Drugs,2023,32(3):201-211.6 谭顺梓，黄益玲，黄利鸣.宫颈癌的耐药机制J.生命的化学，2020,40(01):64.-69.TAN SZ,HUANG YL,HUANG LM.Mechanisms of drug resistancein cervical cancerJ.Chemistry of Life,2020,40(01):64-69.7HUANG J,ECKER GF.A structure-based view on ABC-trans-porter linked to multidrug resistance J.Molecules(Basel,Switz-erland),2023,28(2):495.8WANG JQ,WU ZX,YANG Y,et al.ATP-binding cassette(ABC)transporters in cancer:A review of recent updates JJ.J EvidBased Med,2021,14(3):232-256.9AMAWI H,SIM HM,TIWARI AK,et al.ABC transporter-media-ted multidrug-resistant cancer J.Advances in Experimental3931:3932Medicine and Biology,2019,1141:549-580.10 SYED YY.Anlotinib:first global approval J.Drugs,2018,78(10):1057 1062.11 GAO Y,LIU P,SHI R.Anlotinib as a molecular targeted therapyfor tumors J.Oncol Lett,2020,20(2):1001-1014.12 JI Y,LI X,QI Y,et al.Anlotinib exerts inhibitory effects againstCisplatin-resistant ovarian cancer in vitro and in vivo J.Mole-cules(Basel,Switzerland),2022,27(24):8873.13QIN T,LIU Z,WANG J,et al.Anlotinib suppresses lymphangio-genesis and lymphatic metastasis in lung adenocarcinoma througha process potentially involving VEGFR-3 signaling J.CancerBiology&Medicine,2020,17(3):753-767.14 潘国友，郭慧，戚元刚，等.安罗替尼单药靶向治疗子宫颈癌肺转移1例J.中华妇产科杂志，2 0 2 2,57（0 5）：38 6-38 8.PAN GY,GUO H,QI YG,et al.A case of lung metastasis fromcervical cancer treated with Anlotinib single-agent targetingJ.Chinese Journal of Obstetrics and Gynecology,2022,57(05):386 388.15YANG H,SUN S,MEI Z,et al.A retrospective cohort study evalu-ates clinical value of Anlotinib in persistent,metastatic,or recur-rent cervical cancer after failure of first-line therapy J.DrugDes Devel Ther,2021,15:4665-4674.16ZHU J,SONG C,ZHENG Z,et al.Anlotinib in Chinese patientswith recurrent advanced cervical cancer:a prospective single-arm,open-label phase II trial J.Frontiers in Oncology,2021,11:2234-2943.17殷爱军，李鹏,宋坤,等.安罗替尼在妇科肿瘤治疗中的现状及研究进展J.现代妇产科进展，2 0 2 2,31（0 5）：38 4-38 8.YIN AJ,LI P,SONG K,et al.Current status and research progressof Anlotinib in gynecologic oncology treatment J.Modern Ad-vances in Obstetrics and Gynecology,2022,31(05):384-388.18 BOUSSIOS S,SERAJ E,ZARKAVELIS G,et al.Management ofpatients with recurrent/advanced cervical cancer beyond first lineplatinum regimens:Where do we stand?A literature review J.Critical Reviews in Oncology/Hematology,2016,108:164-174.19CHOUSH S.Cisplatin:The first metal based anticancer drugJ.Bioorganic Chemistry,2019,88:102925.20 毛万丽,李杰慧，冉立.宫颈癌顺铂耐药研究进展J.现代肿瘤医学,2 0 2 1,2 9(16):2 92 7-2 932.MAO WL,LI JH,RAN L.Research progress on Cisplatin resist-ance in cervical cancer J.Modern Oncology,2021,29(16):29272932.21WANG G,SUN M,JIANG Y,et al.Anlotinib,a novel small mo-lecular tyrosine kinase inhibitor,suppresses growth and metastasisvia dual blockade of VEGFR2 and MET in osteosarcoma J.In-ternational Journal of Cancer,2019,145(4):979-993.22 YANG Q,NI L,IMANI S,et al.Anlotinib suppresses colorectalcancer proliferation and angiogenesis via inhibition of AKT/ERKsignaling cascade J.Cancer Management and Research,2020,12:4937 4948.23 陈彦民，邹明雷，李丽，等.安罗替尼通过上调miR-33b抑制PI3K/AKT信号通路来抑制HeLa增殖、迁移侵袭的作用机制王焕焕，等安罗替尼在宫颈癌 HeLa/DDP 细胞中的作用及逆转顺铂耐药性机制研究J.实用癌症杂志,2 0 2 2,37(0 5)：7 0 6-7 11.CHEN YM,ZOU ML,LI L,et al.Mechanism of action of Anlotinibto inhibit HeLa proliferation,migration and invasion by upregulat-ing miR-33b to inhibit PI3K/AKT signaling pathway J.Jour-nal of Practical Cancer,2022,37(05):706-711.24