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PMP柱前衍生HPLC法测定八月瓜果皮多糖中单糖组成.pdf

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资源描述

1、食品研究与开发圆园23 年 11 月第 44 卷第 21 期DOI:10.12161/j.issn.1005-6521.2023.21.018基金项目:贵州省教育厅青年科技人才成长项目(黔教合 KY 字2022007 号);贵州省教育厅高等学校拔尖人才计划(黔教合 KY 字2019066号);大学生创新训练项目(S202110976006、S202110976022)作者简介:刘永玲(1985),女(汉),实验师,硕士,研究方向:食品和药品分析。*通信作者:谢国芳(1987),男,教授,博士,研究方向:农产品储运与加工。PMP柱前衍生HPLC法测定八月瓜果皮多糖中单糖组成刘永玲1,2,赵建国3

2、,赵治兵1,2,刘向炼1,刘元凤1,李观龙1,谢国芳4*(1.贵阳学院 食品科学与工程学院,贵州 贵阳 550005;2.贵州省果品加工工程技术研究中心,贵州 贵阳550005;3.华润雪花啤酒(黔南)有限公司,贵州 黔南 551200;4.贵州大学 酿酒与食品工程学院,贵州 贵阳 550025)摘要:为建立同时测定八月瓜果皮中 6 种单糖组分的色谱分离方法,采用 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone,PMP)柱前衍生和高效液相色谱法测定八月瓜果皮中 6 种单糖组分。色谱柱为SHIMADZU-C18(4.6 mm伊250 mm,5 滋m

3、),流动相为乙腈(A)-0.05 mol/L 甲酸铵溶液(B)梯度洗脱(010 min:18%A;1020 min:18%20%A;2040 min:20%23%A;4060 min:23%A),柱温 30 益,流速 1 mL/min,检测波长 245 nm。结果表明,所建立的 PMP-HPLC 柱前衍生化法可准确地测定八月瓜果皮中的 D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖和 D-阿拉伯糖含量,6 种单糖成分在各自质量浓度范围内线性关系良好(R2逸0.998 3),加样回收率为 92.58%100.02%。10 批八月瓜果皮样品中均检出 6 种单糖,D-甘露糖、L-鼠李

4、糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖和 D-阿拉伯糖平均物质的量比为 1.18 颐 1.00 颐 23.25 颐 11.73 颐 3.51 颐 5.88,其中 D-半乳糖醛酸含量为51.84耀212.84 mg/g,D-葡萄糖含量为 22.44耀73.23 mg/g,D-阿拉伯糖含量为 6.14耀60.01 mg/g,是八月瓜果皮中的单糖主要成分。该试验所建立的方法操作简便、重复性好和准确度高,适用于八月瓜果皮多糖中单糖成分的分析。关键词:八月瓜果皮;多糖;单糖组成;柱前衍生化;高效液相色谱Determination of Monosaccharide Composition of Po

5、lysaccharides from Akebia trifoliatePeel by PMP-HPLC with Pre-column DerivatizationLIU Yongling1,2,ZHAO Jianguo3,ZHAO Zhibing1,2,LIU Xianglian1,LIU Yuanfeng1,LI Guanlong1,XIE Guofang4*(1.College of Food Science and Engineering,Guiyang University,Guiyang 550005,Guizhou,China;2.Guizhou Engineering Res

6、earch Center for Fruit Processing,Guiyang 550005,Guizhou,China;3.ChinaResources Snow Breweries(Qiannan)Co.,Ltd.,Qiannan 551200,Guizhou,China;4.School of Liquor andFood Engineering,Guizhou University,Guiyang 550025,Guizhou,China)粤遭泽贼则葬糟贼:Six monosaccharides in Akebia trifoliate pericarp were determin

7、ed by 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone(PMP)reagent and high performance liquid chromatography(HPLC)with pre-column derivatization.The monosaccharideswere determinedby HPLC ona SHIMADZU-C18 column(4.6 mm 伊 250 mm,5 滋m)witha mobile phase composed of acetonitrile(A)-0.05 mol/L ammonium formate solution(B

8、)(0-10 min:18%A;10-20 min:18%-20%A;20-40 min:20%-23%A;40-60 min:23%A).The column temperature was 30 毅C,the flow rate 1 mL/min,and the detection wavelength 245 nm.The results showed that the PMP-HPLC with pre-column derivatization could accurately determine the contents of D-mannose,L-rhamnose,D-gala

9、cturonicacid,D-glucose,D-galactose,and D-arabinose in Akebia trifoliate peel.All six monosaccharides exhibited alinear relationship(R2逸 0.998 3)within their respective mass concentration ranges,and the sample recoveryrates were 92.58%-100.02%.Six monosaccharide components were all detected in 10 bat

10、ches of Akebiatrifoliatepeel,and the average molar ratio of D-mannose,L-rhamnose,D-galacturonic acid,D-glucose,D-galactose,检测分析131食品研究与开发圆园23 年 11 月第 44 卷第 21 期and D-arabinose was 1.18 颐 1.00 颐 23.25 颐 11.73 颐 3.51 颐 5.88.The major monosaccharides in the pericarp wereD-galacturonic acid,D-glucose,an

11、d D-arabinose with the content of 51.84-212.84,22.44-73.23,and 6.14-60.01 mg/g respectively.The method was simple,reproducible,accurate,and suitable for the analysis ofmonosaccharide compositionin Akebiatrifoliate peelpolysaccharides.运藻赠 憎燥则凿泽:Akebiatrifoliate peel;polysaccharides;monosaccharide com

12、position;pre-column derivatization;high performance liquid chromatography(HPLC)引文格式:刘永玲,赵建国,赵治兵,等.PMP 柱前衍生 HPLC 法测定八月瓜果皮多糖中单糖组成J.食品研究与开发,2023,44(21):131-137.LIU Yongling,ZHAO Jianguo,ZHAO Zhibing,et al.Determination of Monosaccharide Composition of Polysaccharides fromAkebia trifoliate Peel by PMP-H

13、PLC with Pre-column Derivatization J.Food Research and Development,2023,44(21):131-137.八月瓜Akebia trifoliate(Thunb.)Koidz属木通科藤本植物,为药食两用资源,成熟的八月瓜沿腹线自然开裂,又称“野香蕉”、“八月炸”等。八月瓜果实营养丰富,其果实、种子、茎和根在中药中的应用已有至少2 000 年的历史1,有舒肝理气、活血止痛、除烦利尿和抗菌消炎等功效2-3,具有较高的经济价值和医学发展价值。随着八月瓜大量种植的推广,加之其深加工方式的局限性,其果皮成为一种副产物大量被丢弃而污染环境,

14、因此从八月瓜果皮中探索其他活性物质具有重要的意义和价值。八月瓜果皮的研究多集中于果胶和皂苷类化合物4-5,越来越多的学者期望从果皮中探索其他活性成分,Luo 等6发现八月瓜果皮提取物具有很强的抗氧化活性,可为天然抗氧化剂的开发提供基础,Zhang 等7通过酸提法得到的三叶木通果皮提取物可用作一种新型环保、高效的缓蚀剂。针对八月瓜中多糖的研究仅限于总糖的测定,如李秀彤等8测得八月瓜鲜果中总糖含量为 15.78%,相较于常见的 16 种水果处于较高水平;张孟琴等9研究发现三叶木通果皮中总糖含量高达 32.61%。目前,深入分析八月瓜果皮多糖中单糖组成的研究鲜见报道。多糖作为天然药物资源中一种重要的

15、活性物质,在抗氧化、抗病毒、抗凝血、降血糖和降血脂等方面具有显著功效10-11,研究其单糖组成、糖苷键类型及连接顺序等结构特征成为多糖开发利用的关键12。目前,常见的单糖检测方法有薄层色谱法、离子色谱法、气相色谱法和液相色谱法,但都存在一定的局限性,如薄层色谱法灵敏度低、分离度和重现性差,仅用于简单多糖的定性分析13;离子色谱法虽然灵敏度和分离度相对较高,但其使用的氢氧化钠易使糖类分解和异构化14;气相色谱法复杂的衍生化操作易产生副衍生物,造成多峰、重叠峰等现象15;液相色谱法可用示差检测器和蒸发光检测器,但其价格昂贵,其中示差检测器平衡时间较长,基线波动大16,不宜使用梯度洗脱条件17,蒸发

16、光散射器对糖含量少的样品灵敏度低,对糖的分离和定量分析产生影响18。而衍生高效液相色谱法是通过柱前或柱后衍生,以提高无紫外或弱紫外吸收单糖的分离选择性和检测灵敏度,其中柱后衍生成本高、不常用,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone,PMP)柱前衍生结合高效液相色谱法反应条件温和,不会导致立体异构,具有较高的检测灵敏度,比其他方法更具实用性19-20。本研究采用柱前衍生高效液相色谱法建立八月瓜果皮多糖中 6 种单糖含量的测定方法,通过主成分分析对贵州不同主产地八月瓜果皮多糖中的单糖进行差异分析,旨为八月瓜果皮的开发利用及果皮多糖的进一步研究

17、提供理论依据。1材料与方法1.1材料与试剂10 批八月瓜样品分别采自贵州省不同产地,经贵阳学院杨碧仙教授鉴定为八月瓜Akebia trifoliate(Thunb.)Koidz的果实,于 4 益采样箱运回贵州省果品加工工程技术研究中心实验室。挑选果皮颜色均一、炸裂开口度占比为整个果实 2/3 的八月瓜果实采收,每批选取成熟果实 10 个。果皮和果肉分离,果皮于-80 益超低温冰箱保存备用。样品信息见表 1。L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖对照品(纯度均逸98%)、透析袋MD77-(8000-14000):北京索莱宝科技有限公司;D-甘露糖(纯度逸99%):西亚化学科技(山东)

18、有限公司;D-阿拉伯糖(纯度逸99%):北京北方伟业计量技术研究院有限公司;1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-检测分析132食品研究与开发圆园23 年 11 月第 44 卷第 21 期表 1八月瓜样品信息Table 1Sample information of Akebia trifoliatepyrazolone,PMP)、三氯乙酸(分析纯):上海阿拉丁生化科技股份有限公司;甲醇、乙腈(均为色谱纯):天津市科密欧化学试剂有限公司;甲酸铵(色谱纯):上海麦克林生化科技有限公司;氢氧化钠、盐酸(均为分析纯):国药集团化学试剂有限公司;氯仿、无水乙醇、丙酮(

19、均为分析纯):天津市富宇精细化工有限公司;其他试剂均为分析纯。1.2仪器与设备高效液相色谱仪(LC-20A 型)、SHIMADZU-C18色谱柱(4.6 mm伊250 mm,5 滋m):日本岛津公司;台式低速离心机(TD4 型):湖南赫西仪器装备有限公司;旋转蒸发仪(RE-52A 型):上海亚荣生化仪器厂;超声波清洗器(KQ-500 型):昆山市超声仪器有限公司;匀浆机(JJ-2B 型):金坛区西城新瑞仪器厂;打浆机(WBL-2501B 型):广东美的生活电器制造有限公司。1.3试验方法1.3.1对照品储备液的配制精密称取 L-鼠李糖、D-甘露糖、D-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-半乳

20、糖醛酸对照品,分别置于5 mL 容量瓶中,甲醇溶解并稀释至刻度线,混匀,配制D-甘露糖(1.624 mg/mL)、L-鼠李糖(2.000 mg/mL)、D-半乳糖醛酸(2.162 mg/mL)、D-葡萄糖(2.002 mg/mL)、D-半乳糖(1.886 mg/mL)、D-阿拉伯糖(1.890 mg/mL)的对照品储备液,放置 4 益冰箱备用。准确吸取适量各对照品储备液至容量瓶中,甲醇定容,配制系列浓度的混合标准溶液,备用。1.3.2八月瓜果皮多糖的制备1.3.2.1样品处理10 批贵州不同产地的八月瓜果皮用料理机打浆,匀浆机匀浆,分装于保鲜盒中备用。1.3.2.2八月瓜果皮多糖的提取称取 1

21、.3.2.1 的八月瓜果皮浆适量,按料液比1 颐20(g/mL)加入 95%乙醇,于 80 益下超声提取 30 min,过滤后弃去滤液除去部分单糖,滤渣重复超声 2 次。所得滤饼按料液比 1 颐 20(g/mL)加入蒸馏水,90 益水浴1 h,趁热过滤,收集滤液,残渣重复上述操作 2 次,合并滤液。将滤液浓缩至原体积的 1/3 后采用 Sevage 法21脱去蛋白,收集上清液并转移至透析袋中,将透析完的多糖溶液加入 4 倍体积的无水乙醇使多糖沉淀,4 益静置过夜 12 h,抽滤,依次用无水乙醇、丙酮各淋洗3次,真空冷冻干燥后即得八月瓜果皮多糖。1.3.2.3八月瓜果皮多糖的水解称取八月瓜果皮多

22、糖 4.0 mg 于 15 mL 具塞试管,加入 2 mol/L 三氟乙酸溶液 5 mL,氮气封口后于 100 益水解 6h,取出后冷却至室温,70 益水浴蒸干,加入 2 mL甲醇水浴蒸干,重复 3 次以除尽多余的三氟乙酸,加3 mL 甲醇溶解,即得八月瓜果皮多糖水解液,备用。1.3.2.4对照品及样品溶液的衍生化分别取 1.3.1 的混合标准溶液、1.3.2.3 的八月瓜果皮多糖水解液 0.5mL 于刻度试管中,分别加入 0.3mol/LNaOH 溶液 0.5 mL 混匀,加 0.5 mol/L PMP-甲醇溶液0.5 mL,混匀后 70 益水浴 60 min,室温冷却后加入0.3 mol/

23、L HCl 溶液 0.5 mL 中和 NaOH,加氯仿 2 mL,充分萃取后弃去氯仿层,重复 3 次以除去过量的PMP,上清液过 0.45 滋m 微孔膜备用。1.3.3高效液相色谱(high performance liquid chroma-tography,HPLC)检测条件色谱条件:SHIMADZU-C18 色谱柱;乙腈(A)-0.05 mol/L 甲酸铵溶液(B)梯度洗脱(010 min:18%A;1020 min:18%20%A;2040 min:20%23%A;4060 min:23%A),检测波长 254 nm,柱温 30 益,进样量 10 滋L,流速 1 mL/min。分别对衍

24、生后的对照品及八月瓜样品进行 HPLC 分析,按标准曲线法计算样品中6 种单糖的含量及比例。1.3.4单糖含量的计算将 6 种单糖的峰面积均值带入相应的线性方程,计算出相应的浓度,按下列公式计算八月瓜果皮多糖中单糖。Wi=(Ai-b)衣a伊Vm式中:Wi为八月瓜果皮多糖样品中各单糖的含量,mg/g;Ai为各单糖的峰面积;a 为标准曲线的斜率;b 为标准曲线的截距;V 为样品溶液的体积,mL;m 为八月瓜多糖样品的质量,mg。1.4数据处理使 用 SPSS 22.0、Microsoft Excel 2019、GraphPadPrism 7.0 等软件对数据和图像进行分析处理。编号采集时间采样地Q

25、12021 年 9 月 5 日遵义务川县茅天镇兴隆社区Q22021 年 9 月 6 日安顺关岭自治县花江镇中寨村Q32021 年 9 月 11 日黔东南麻江县宣威镇光明村Q42021 年 9 月 6 日六盘水六枝特区月亮河乡Q52021 年 9 月 6 日盘州市鸡场坪镇Q62021 年 9 月 8 日铜仁市思南县关中坝街道映山村Q72021 年 9 月 8 日长顺县白云山镇猛秋村Q82021 年 9 月 7 日黔西南兴义猪场坪镇田湾村Q92021 年 9 月 9 日毕节市黔西谷里镇Q102021 年 9 月 10 日贵阳市开阳县紫兴街道鱼上村检测分析133食品研究与开发圆园23 年 11 月第

26、 44 卷第 21 期2结果与分析2.1方法学考察2.1.1标准曲线和线性范围将 1.3.1 单糖对照品储备液配制成混合标准溶液:含 D-甘露糖 50.50 滋g/mL、L-鼠李糖 50.00 滋g/mL、D-半乳糖醛酸 480.00 滋g/mL、D-葡萄糖 240.00 滋g/mL、D-半乳糖 100.00 滋g/mL、D-阿拉伯糖 104.00 滋g/mL,对混合标准溶液进行等倍逐级稀释,分别按 1.3.2.4 方法进行柱前衍生化 HPLC 分析,选择线性范围合适的5 个混和标准溶液浓度;拟合峰面积(y)和进样浓度(x,滋g/mL)作回归曲线,结果如表 2 所示。由表2可知,6种单糖的相关

27、系数R2均大于0.9980,线性关系良好。2.1.2稳定性试验结果精密称取八月瓜果皮多糖 4.5 mg,按照 1.3.2 方法进行水解和衍生化,衍生样品于 4 益保存,每隔 2 h 进行 HPLC 分析,共 6 针,结果显示 D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-阿拉伯糖峰面积的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)值依次为 1.85%、2.21%、2.57%、1.62%、2.97%、2.88%,表明衍生化样品溶液在 12 h 内稳定性良好。2.1.3重复性试验结果精密量取 1.3.2.3 的八月瓜果皮多糖水解液 0.5 m

28、L于 10 mL 具塞试管中,平行 6 份,按照 1.3.2.4 方法进行柱前衍生化 HPLC 分析,记录峰面积值,计算得到D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-阿拉伯糖峰面积的 RSD 值依次为 2.14%、2.87%、2.33%、2.67%、2.56%、2.81%,说明该方法重复性良好。2.1.4精密度试验结果精密量取 1.3.1 的混合标准溶液 0.5 mL 于 10 mL具塞试管中,然后按照 1.3.2.4 方法进行柱前衍生化HPLC 分析,重复进样 6 次,计算 6 次所得单糖峰面积的 RSD 值,D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-

29、半乳糖、D-阿拉伯糖面积的 RSD 值依次为1.44%、0.97%、0.86%、1.52%、1.03%、1.37%,说明该方法精密度良好。2.1.5回收率试验结果取 3 份已知浓度的水解供试品溶液 0.5 mL,每份平行 3 次,分别加入 0.5、1.0、1.5 倍质量浓度的混合标准溶液,按照 1.3.2.4 方法进行柱前衍生化 HPLC 分析,依据各单糖峰面积计算回收率,结果见表 3。由表 3 可知,八月瓜果皮多糖中 6 种单糖的加标回收率为 92.58%100.02%,结果表明,该方法适用于八月瓜果皮多糖中 D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖和 D-阿拉伯糖含量

30、的测定。2.2八月瓜果皮多糖样品组分分析2.2.1八月瓜果皮多糖水解物的衍生化 HPLC 分析八月瓜果皮多糖经衍生化处理,HPLC 检测,确定了八月瓜果皮多糖中含有 6 种单糖成分,样品中各目标化合物均能实现基线分离,分离度良好。6 种单糖标准溶液的 HPLC 色谱图见图 1,八月瓜果皮多糖溶液的HPLC 色谱图见图 2。2.2.2八月瓜果皮多糖的单糖组成及含量结果10 批贵州不同产地的八月瓜果皮按照 1.3.2 和1.3.3 方法制备、进样分析,10 批样品多糖中单糖含量和物质的量比结果见表 4 和表 5。由表 4 和表 5 可知,10 批八月瓜果皮多糖中均含有 D-甘露糖、L-鼠李糖、D-

31、半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-阿拉伯糖,其含量分别为 2.21耀11.23、1.67耀12.42、51.84耀212.84、22.44耀73.23、4.85耀30.30、6.14耀60.01 mg/g,各单糖组分含量存在明显差异,其中 D-半表 26 种单糖的标准曲线及线性范围Table 2Standard curves and linear ranges of sixmonosaccharides单糖组分标准曲线R2线性范围/(滋g/mL)D-甘露糖y=46 600 x+12 1170.999 73.16耀50.50L-鼠李糖y=21 390 x-7 316.90.999 51.5

32、6耀50.00D-半乳糖醛酸y=7 529.3x+74 4920.999 630.00耀480.00D-葡萄糖y=19 604x-57 2700.998 315.00耀240.00D-半乳糖y=29 173x+33 6140.999 66.25耀100.00D-阿拉伯糖y=31 490 x+25 0380.999 66.50耀104.00表 3加标回收率测定结果Table 3Determination results of spiked recovery单糖成分样品含量/(滋g/mL)加入量/(滋g/mL)测得量/(滋g/mL)平均加标回收率/%RSD/%D-甘露糖5.632.798.23、8

33、.30、8.3495.472.185.5711.02、10.93、10.7394.372.828.4513.63、13.31、13.5393.072.12L-鼠李糖5.382.647.81、7.77、7.9192.742.885.2810.61、10.51、10.3896.972.198.0013.05、12.89、12.8094.171.66D-半乳糖醛酸121.1160.02175.64、176.48、178.0692.672.21120.04238.45、235.65、231.6395.083.00181.87297.13、301.04、292.1396.582.54D-葡萄糖36.88

34、17.9953.41、54.44、53.8294.582.4935.9871.44、70.05、70.9894.352.0954.5191.29、90.61、89.2898.171.91D-半乳糖12.555.9818.12、18.23、18.0693.491.5411.9523.94、23.75、24.2295.542.0718.1130.52、31.19、30.28100.022.60D-阿拉伯糖27.1213.3539.32、39.23、39.8892.582.8526.6953.41、52.54、53.7997.872.4540.4564.75、65.13、66.3194.642.13

35、检测分析134食品研究与开发圆园23 年 11 月第 44 卷第 21 期产地D-甘露糖L-鼠李糖D-半乳糖醛酸D-葡萄糖D-半乳糖D-阿拉伯糖Q11.011.0024.5011.363.5310.06Q21.661.0029.1610.683.167.27Q30.641.0013.564.383.047.23Q44.861.0078.2831.1412.9513.33Q50.721.0017.345.494.275.04Q60.571.0014.966.642.045.88表 410 批贵州不同产地八月瓜果皮多糖中 6 种单糖含量Table 4Content of 6 monosacchar

36、ides of Akebia trifoliate peel polysaccharides in 10 batches from different regions in Guizhou300200100003060保留时间/min10205040654321PMP515253545551.D-甘露糖;2.L-鼠李糖;3.D-半乳糖醛酸;4.D-葡萄糖;5.D-半乳糖;6.D-阿拉伯糖。图 16 种单糖标准溶液的 HPLC 色谱图Fig.1HPLC chromatogram of mixed six monosaccharide standards1.D-甘露糖;2.L-鼠李糖;3.D-半乳

37、糖醛酸;4.D-葡萄糖;5.D-半乳糖;6.D-阿拉伯糖。图 2八月瓜果皮多糖溶液的 HPLC 色谱图Fig.2HPLC chromatogram of the polysaccharide solution of Akebia trifoliate peel产地D-甘露糖L-鼠李糖D-半乳糖醛酸D-葡萄糖D-半乳糖D-阿拉伯糖Q14.08依0.074.76依0.08106.56依2.1845.84依0.6914.25依0.1833.81依0.65Q211.23依0.187.55依0.14212.84依3.1372.34依1.0121.41依0.4541.04依0.84Q36.36依0.136

38、.35依0.10145.62依3.3943.62依0.8130.30依0.5860.01依0.90Q43.50依0.071.67依0.0360.79依0.9322.44依0.459.33依0.158.01依0.11Q53.52依0.063.17依0.0590.91依1.5926.71依0.5820.79依0.4720.43依0.47Q65.80依0.105.93依0.11163.19依1.3067.28依1.0820.66依0.3549.57依0.71Q76.68依0.1112.42依0.20151.67依1.6873.23依0.7716.41依0.3933.85依0.80Q85.66依0.0

39、85.41依0.08120.12依1.5937.07依0.8212.67依0.1724.12依0.59Q92.21依0.031.84依0.0351.84依0.9871.17依0.854.85依0.106.14依0.13Q102.62依0.063.62依0.0888.18依1.4154.57依0.799.89依0.167.85依0.16mg/g表 5八月瓜果皮多糖中单糖物质的量比(n=3)Table 5Molar ratio of monosaccharides in Akebia trifoliate peelpolysaccharides(n=3)产地D-甘露糖L-鼠李糖D-半乳糖醛酸D-葡

40、萄糖D-半乳糖D-阿拉伯糖Q70.331.006.863.570.801.98Q80.601.0011.903.961.353.09Q90.911.0019.7829.262.003.03Q100.521.0016.1610.781.951.86平均值1.181.0023.2511.733.515.88续表 5八月瓜果皮多糖中单糖物质的量比(n=3)Continue table 5Molar ratio of monosaccharides in Akebiatrifoliate peel polysaccharides(n=3)注:相对标准偏差均小于 3%。检测分析250003060保留时间

41、/min10205040654321PMP135食品研究与开发圆园23 年 11 月第 44 卷第 21 期乳糖醛酸含量最高,D-葡萄糖次之。6 种单糖组分平均物质的量比为 D-甘露糖 颐 L-鼠李糖 颐 D-半乳糖醛酸 颐D-葡萄糖 颐 D-半乳糖 颐 D-阿拉伯糖=1.18 颐 1.00 颐 23.25 颐11.73 颐 3.51 颐 5.88。2.2.3主成分分析将 10 批样品中的 D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖和 D-阿拉伯糖的含量作为提取特征,导入 SPSS 22.0 统计软件进行主成分分析,结果如表 6 和表 7 所示。由表 6、表 7 可知,从八

42、月瓜果皮多糖的 6 个单糖组分中提取出了 2 个特征值大于 1 的主成分,前两个主成分累计方差贡献率为 86.463%,成分 1 主要反映D-半乳糖醛酸、D-甘露糖和 D-阿拉伯糖含量为主要影响因子,成分 2 主要反映 D-葡萄糖含量为主要影响因子。样品主成分得分、综合得分及其排序见表 8。由表 8 可知,相对于主成分 1 产地为安顺(Q2)的八月瓜多糖得分最高,相对于主成分 2 产地为黔西谷里(Q9)的八月瓜多糖得分最高,综合得分排序由高到低依次为 Q2、Q7、Q6、Q3、Q8、Q1、Q5、Q10、Q9、Q4,且单糖综合排序为正值的代表性样品 Q2、Q7、Q6、Q3 的产地位于贵州省东南方向

43、,这可能是因为糖分的积累与产地的日照、昼夜温差等因素有关。3结论本研究建立柱前衍生 HPLC 法同时测定了八月瓜果皮多糖中 D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖和 D-阿拉伯糖的含量,并对贵州省10 批不同产地的八月瓜样品检测分析,确定单糖成分及其物质的量比。经方法学验证,所建立的柱前衍生HPLC 方法可靠、适用性强,适用于八月瓜果皮多糖中6 种单糖的定性和定量分析。经 HPLC 检测 10 批样品中均含有 6 种待测单糖,各单糖含量及组成比例有明显差异,6 种单糖组分平均物质的量比为 D-甘露糖 颐L-鼠李糖 颐 D-半乳糖醛酸 颐 D-葡萄糖 颐 D-半乳糖 颐

44、D-阿拉伯糖=1.18 颐 1.00 颐 23.25 颐 11.73 颐 3.51 颐 5.88。10 批样品经主成分分析发现 D-半乳糖醛酸和 D-葡萄糖含量明显高于其他 4 种单糖,主成分得分经排序发现安顺(Q2)、长顺(Q7)、铜仁(Q6)和麻江(Q3)产地的单糖综合排序为正值,这些产地基本位于贵州省的东南方向,推测主成分的含量与产地的气候环境有相关性。后期研究中,将对不同产地八月瓜果皮单糖组分在果实发育过程中的积累变化进行进一步研究,考察糖分的积累是否与产地不同而有不同的趋势。参考文献:1WANG L,DENG H G,QIU X F,et al.Determining the imp

45、act of keyclimatic factors on geographic distribution of wild AkebiatrifoliateJ.Ecological Indicators,2020,112:106093.2IWANAGA S,WARASHINA T,MIYASE T.Triterpene saponinsfrom the pericarps of AkebiatrifoliataJ.Chemical and Pharmaceu原tical Bulletin,2012,60(10):1264-1274.3郭林新,马养民,李梦云,等.三叶木通利尿活性部位筛选及其化学

46、成分J.中国实验方剂学杂志,2017,23(3):66-70.GUO Linxin,MA Yangmin,LI Mengyun,et al.Screening of diureticactivity fractions and chemical compositions in rattan of Akebia tri原foliateJ.Chinese Journal of Experimental Traditional Medical For原mulae,2017,23(3):66-70.4曾荣妹,蔡倪,张东亚.八月瓜特征成分研究、果实加工及综合利用J.食品工业,2020,41(12):28

47、4-288.ZENG Rongmei,CAI Ni,ZHANG Dongya.Research on characteris原tic components of Akebia,fruit processing and comprehensive uti原lizationJ.The Food Industry,2020,41(12):284-288.5周宏炫,谭书明,陈萍,等.炮制法对三叶木通果皮果胶提取及理化性质的影响J.食品与生物技术学报,2022,41(3):75-82.ZHOU Hongxuan,TAN Shuming,CHEN Ping,et al.Effects of pro原成分特

48、征值方差贡献率/%累计方差贡献率/%14.01966.99066.99021.16819.47286.46330.3796.31492.77740.3275.45498.23150.0761.26299.49460.0300.506100.000表 6特征值及累计方差贡献率Table 6Eigenvalue and cumulative variance contribution rate成分12D-甘露糖0.8940.058L-鼠李糖0.8160.295D-半乳糖醛酸0.9690.052D-葡萄糖0.4850.801D-半乳糖0.777-0.573D-阿拉伯糖0.881-0.324表 7主成

49、分载荷矩阵Table 7Load matrix of principal components表 8样品主成分得分、综合得分及其排序Table 8Scores,comprehensive scores,and ranking of principalcomponents编号Y1Y2Y0排序Q1-0.409-0.252-0.3236Q23.0640.6342.1761Q31.988-1.6841.0044Q4-2.512-0.710-1.82110Q5-1.078-1.403-0.9957Q61.5590.0551.0553Q71.9111.4091.5542Q8-0.351-0.220-0.2

50、785Q9-2.4581.501-1.3549Q10-1.7130.670-1.0178检测分析136食品研究与开发圆园23 年 11 月第 44 卷第 21 期cessing methods on extraction and physicochemical properties ofpectin from Akebia trifoliata peelJ.Journal of Food Science andBiotechnology,2022,41(3):75-82.6LUO M,ZHOU D D,SHANG A,et al.Influences of microwave-as原siste

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