白藜芦醇协同多黏菌素B对碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的体外抗菌活性研究.pdf

辅助检查医学文章编号：（）白藜芦醇协同多黏菌素对碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的体外抗菌活性研究钟春，黄远虹，张裕芳，赖慧娟（广东省人民医院赣州市立医院，江西 赣州 ）摘要目的：分析白藜芦醇协同多黏菌素对碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的体外抗菌效应。方法：从临床分离获得 株碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌，其中，耐碳青霉烯肠杆菌（）株，耐碳青霉烯铜绿假单胞菌（）株，耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌（）株。用肉汤稀释法测多黏菌素单独与联合白藜芦醇时最低抑菌浓度（），用棋盘试验计算部分抑菌浓度指数（），判定多黏菌素与白藜芦醇之间是否存在协同作用。结果：各菌株对白藜芦醇的 值均在 以上；加入白藜芦醇前，个菌株中多黏菌素的 值 的有 株，其他 个菌株为；加入白藜芦醇后，分离株中针对多黏菌素的 显著降低。在 ，三类菌株中，白藜芦醇均可发挥相似作用。株细菌菌株 指数均小于，表明多黏菌素和白藜芦醇之间存在协同效应。不同浓度多黏菌素协同 白藜芦醇时，其抑菌率与单独应用多黏菌素比较，明显升高。结论：白藜芦醇协同多黏菌素对碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌可发挥较好抗菌作用。关键词白藜芦醇；多黏菌素；碳青霉烯；耐药肠杆菌；体外抗菌中图分类号：文献标识码：犐 狀狏 犻 狋 狉 狅犪 狀 狋 犻 犫 犪 犮 狋 犲 狉 犻 犪 犾犪 犮 狋 犻 狏 犻 狋 狔狅 犳狉 犲 狊 狏 犲 狉 犪 狋 狉 狅 犾犪 狀 犱狆 狅 犾 狔 犿 狔 狓 犻 狀犅犪 犵 犪 犻 狀 狊 狋犮 犪 狉 犫 犪 狆 犲 狀 犲 犿狉 犲 狊 犻 狊 狋 犪 狀 狋犲 狀 狋 犲 狉 狅 犫 犪 犮 狋 犲 狉 犪 犾 犲 狊 ，（，）犃 犫 狊 狋 狉 犪 犮 狋 ：，（），（），（）（）（）：，：犓 犲 狔狑 狅 狉 犱 狊 ；在目前加强抗菌药物使用的大背景下，多黏菌素等新型药物逐步应用于临床，被认为是治疗耐碳青霉烯肠杆菌（）感染的最后防线。控制抗菌药物的使用量、减少抗菌药物选择压力是控制细菌耐药性发展的主流要求。所以，对联合应用抗菌药物采取慎重态度尤为重要。碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的感染性和耐药性逐年上升，针对该病原菌的治疗是临床尤其是重症感染患者救治的难点。多黏菌素是强效抗生素，在防微生物感染中发挥重要作用，并且是宿主免疫反应的关键效应物。白藜芦醇是发现于植物中的一大类生物活性物质，广泛存在于葡萄、花生等植物中，其潜在治疗优势 受 到 医 疗 领 域 的 广 泛 关 注。有 研 究 表明，白藜芦醇中提取的活性成分具有一定的抗菌 本课题为赣州市指导性科技计划项目（项目编号：），能力，可显著增强庆大霉素、阿米卡星等药物的抗菌作用。本研究从临床选取 株碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌，探讨白藜芦醇能否增强多黏菌素在体外的抗菌活性，为临床诊疗及合理选用抗菌药物提供指导依据。材料与方法 菌株来源本研究所用菌株均从临床样本中分离而来，株碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌包括 株、耐碳青霉烯铜绿假单胞菌（）株、耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌（）株。本研究已获得我院伦理委员会审批，涉及患者均获得书面知情同意书。试剂制备白藜芦醇与多黏菌素均购自北京索莱宝科技有限公司。将白藜芦醇与多黏菌素分别于去离子水、二甲亚砜（）中溶解，制备浓度为 ，的试验试剂，用醋酸纤维素（上海源叶生物科技有限公司）注射过滤器进行灭菌。将所制配原液储存于 环境中，保存时间不超过个月。方法 最低抑菌浓度测定采用肉汤微量稀释方式对抗菌药物最低抑菌浓度（）进行测定。选 肉汤（采购自北京索莱宝科技有限公司）新鲜制备在 孔微量滴定板中测 。设定细菌样本最终体积 ，浓度 ，于 孵育 后目视读取微量滴定板数值记录结果。整个实验流程均参照 年美国临床实验室标准化协会（）标准。设定敏感为 ，耐药为 。棋盘试验选 孔无菌微孔板实施棋盘稀释测定。每种抗菌药物都用无菌 肉汤稀释至最大浓度为药物 浓度的倍，通过稀释制备每种药物个浓度，将 适当药物与 细菌溶液（予 最终接种物）稀释至板孔中。为无细菌生长最低药物浓度，根据 值计算出抑菌浓度指数（），通过 评估药物间协同作用。指数 （药物）（药物），其中 （联合）（单独）。判读：指数在 以内（含）为具有协同效应，指数超过 为具有拮抗作用，指数为 范围内（不含）为无相互作用。抑菌率曲线测定采用微孔板生物监测法，于 微孔板取微孔为对照孔，每孔内装 无菌培养液，再取孔装 浓度 细菌培养液，其他孔设为样品测定孔，于测定孔内加入 细菌培养液，再依次加入 不同浓度药物，在 下培养，酶标仪测波长 微孔板中培养液吸光度（）值，计算孔内样品抑菌率。抑菌率（）。（为菌液对照孔吸光度值；为空白对照孔吸光度值；为样品测定孔吸光度值）。统计学方法采用 软件包对数据进行统计学分析。计数资料以百分率（）表示，用检验；计量资料以珚狓狊表示，用狋检验。犘 为差异有统计学意义。结果 细菌分离物选取 株碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌，主要包括 株、株、株。其中 株来自呼吸内科（），株来自重症医学科（），株来自神经外科（），株来自神经内科（）。多黏菌素单药与白藜芦醇联合对碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的 值通过监测多黏菌素单药与白藜芦醇联合对 ，抗菌效果可知，各菌株对白藜芦醇的 值均在 以上。加入白藜芦醇前，个菌株中多黏菌素的 值 有 个菌株，其他 个菌株为。加入白藜芦醇后，分离株中针对多黏菌素的 显著降低。在 ，三类菌株中，白藜芦醇均可发挥相似作用（见表）。多黏菌素单药与白藜芦醇联合对碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的 值本研究选取了 株菌株，结果发现 株细菌菌株 指数均小于，表明多黏菌素和白藜芦醇之间存在协同效应（见表）。多黏菌素单药与白藜芦醇联合抑菌率分析不同浓度多黏菌素 白藜芦醇时，其抑菌率比单独应用多黏菌素有明显升高（见图）。临床医药实践 年 月第 卷第 期表多黏菌素单药及联合白藜芦醇对碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的 值菌类单独应用白藜芦醇浓度 （狀）（狀）（狀）表多黏菌素与白藜芦醇 指数菌株多黏菌素的 白藜芦醇 指数口译 协同的 协同的 协同的 协同的 协同的 协同的 协同的 协同的 协同的 协同的 协同的 协同的 协同的 协同的 协同的图多黏菌素与白藜芦醇单药及联合抑菌率分析讨论碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌是一类具有强大获得性耐药以及克隆、传播能力的细菌，也是我国院内感染的重要病原菌之一 。近年来，随着医疗技术的发展，抗生素药物的广泛应用，多重耐药菌显著上升，碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的感染性和耐药性也呈现上升趋势，针对此类菌目治疗是重症感染患者救治的难点。多黏菌素是强效抗生素，在宿主防御微生物感染中发挥重要作用，并且是宿主免疫反应的关键效应物。多黏菌素通过与细菌脂多糖的脂质体结合，改变细胞膜结构，通透性增强 。有研究证实，多黏菌素与其他抗生素联合可提高药物抗菌活性，但目前尚未对此联合用药方案作出统一规定。白藜芦醇是一种天然抗自由基、抗氧化剂，最早从葫芦中分离出来，能够阻止低密度脂蛋白氧化，可防治心血管疾病如高脂血症、动脉粥样硬化等。有学者表示，白藜芦醇有一定抗菌作用，且作为天然化合物，联合用药安全性更有保障。本研究以上述理论为基础，探讨了多黏菌素与白藜芦醇联合在碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌中的应用价值。研究选取了 株碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌，包括 株、株、株。通过监测多黏菌素单药与白藜芦醇联合对 ，抗菌效果可知，各菌株对白藜芦醇的 值均在 以上，加入白藜芦醇前，个菌株中多黏菌素的 值 有 个菌株，其他 个菌株为。加入白藜芦醇后，分离株中针对多黏菌素的 显著降低，且 ，在 ，三类菌株中，白藜芦醇均可发挥相似作用。值是药物活性指标，上述结果说明与单独应用多黏菌素相比，添加白藜芦醇能够在某种程度上增加多黏菌素的药物活性，且对种菌株均有效果，说明白藜芦醇发挥的协同作用普适性较好 。通过棋盘试验可知，株细菌菌株 指数均小于，表明多黏菌素和白藜芦醇之间存在协同效应。在探讨不同浓度多黏菌素 白藜芦醇时，药物抑菌率明显提升。参考文献：，：，（）：，：，（）：边明艳，张强硫酸多黏菌素治疗多重耐药革兰阴性菌感染的医院获得性肺炎的临床分析实用药物与临床，（）：全国细菌耐药监测网全国细菌耐药监测网 年临床分离非发酵革兰阴性杆菌耐药性变迁中国感染控制杂志，（）：丶，（），（）：，（）：肖晓，杭修兵，王梦，等耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌耐药性、临床感染特征及 基因分析中国感染控制杂志，（）：王妍，郭晓芳，陈显成，等多黏菌素为基础联合治疗泛耐药菌重症肺炎的临床观察中国感染控制杂志，（）：周金凤，王晨林，田梦丽，等基于理化性质生物利用度和靶向递送的白藜芦醇现代药剂学研究进展中国现代中药，（）：刘柯，石瑾，丁军颖白藜芦醇调控细菌耐药性研究进展中医学报，（）：，：，（）：，：，（）：，（），（）：，（）：史煜波，董燕替加环素与多黏菌素对泛耐药鲍曼不动杆菌体外研究中国微生态学杂志，（）：袁?，张婷婷，王纯睿多黏菌素治疗多重耐药革兰阴性菌的新策略西部医学，（）：，：，（）：，：，（）：张光艳，卓超，黎晓强 年金黄色葡萄球菌对万古霉素 值变化的研究中国抗生素杂志，（）：吴正海，刘海洋，陈华乐，等多黏菌素联合不同抗菌药物对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的体外抗菌作用温州医学院学报，（）：收稿日期：修回日期：（本文编辑：郝煜）作者简介：钟春（），女，江西省赣州市人，学士学位，主管技师，主要从事临床检验工作。：临床医药实践 年 月第 卷第 期