放射免疫学分析法.doc

放射免疫学分析法： 检测的是游离降钙素原、 结合型降
钙素原和降钙素基因相关肽前体的混合物， 而不能区分上述
3 种物质。 其检测灵敏度为 4 ng／ L ， 线性范围为 lO 77 ng／ L 。 该
法检测耗时长(19～ 22 h)， 而且有放射性元素的污染 ， 使用受
到限制。
1． 2
双抗夹心法： 使用 2 个单克隆体 ： 一个为单克隆抗降钙素
抗体 ， 另一个为单克隆抗降钙素抗体， 分别结合到降钙素原分
子的2 个部位， 这样可排除交叉反应。 其检测低限值为0． 1 g／ L。
该法操作简便 、 特异性强、 敏感性高， 2 h 可以出结果。
1． 3
胶体金比色法 ： 一种半定量检测降钙素原的方法， 是专门
制备好 的 PCT． Q 检测卡 ， 简便快捷 ， 整个检测过程不超过
30 m i n ， 结果分为 4 级： 正常(0． 5 ng／ m L ； 轻度升高>0． 5 ng／ m L ；
明显升高>2 ng／ m L ； 显著升高> 10 ng／ m L。此法不依赖仪器、 操
作简便 、 快速， 适合床旁监测。
1． 4
透射免疫浊度法： 该测定方法简便 、 快速 ， 可自动化 ， 适
合于批量检测。虽然免疫透射比浊的方法学及临床应用尚需
做进一步的验证 ， 但其应用前景非常看好。
2
降钙素原的临床应 用
2． 1
降钙素原与感染性疾病
2． 1． 1
降钙素原与血行感染 、 菌血症 、 败血症 ： 研究发现降钙
素原是诊断血行感染、 菌血症、 败血症的一个较好指标陆 3 1 。在
感染发生后 3~6 h ， 即可检测到降钙素原水平升高。降钙素原
水平可以用来对败血症的预后进行预测，若降钙素原水平持
续升高或一直维持在比较高的水平， 常常提示预后不 良； 若降
钙素原水平快速降低至正常水平 ， 常提示预后良好。 还可用降
钙素原预测社区获得性肺炎和尿路感染后菌血症的发生t 41 。 降
钙素原<0． 25
L 可排除菌血症的发生。
2． 1． 2
降钙素原与泌尿系感染 ： Peei le等阁 发现肾盂肾炎患儿
血清降钙素原与 c 反应蛋白相比敏感性相同， 但特异性前者
明显高于后者， 且与肾脏受累程度呈正相关 ， 并随治疗后的恢
复而下降，血清降钙素原水平可作为泌尿系感染患儿上下尿
路定位及疗效观察的指标。
2． 1． 3
降钙素原与腹腔内感染 ：降钙素原可作为排除肠阻塞
综合征造成的穿孔和局部缺血的一项非常好的指标1 6 1 ， 然而在
急性阑尾炎和胰腺炎时， 降钙素原的前瞻性作用非常有限1 7 1 。
2． 2
降钙素原与其他疾病
2． 2． 1 降钙素原与结缔组织病 ： 在结缔组织疾病的发病机制
中都涉及到细胞因子，它们在血浆中常常增高。当继发感染
时， 这些炎性检测标志不能全面反映患者的病情。 如炎性反应
仍持续或加重， 肿瘤坏死因子(TNF)一 0【 、 白细胞介素(IL)． 6 往
往因半衰期短而下降， 但降钙素原半衰期较长， 经较长时间后
降钙素原仍维持较高水平或继续增加。Shi n 等 寸19 例系统
性红斑狼疮(SLE )患者的研究发现， 合并细菌或真菌感染时
患者血清降钙素原水平明显高于病毒性感染、 SLE 活动期和
健康对照组，但 PCT 在病毒性感染、 SLE 活动期和健康对照
·948 ·
组间差异无统计学意义。
2． 2． 2
降钙素原与 2 型糖尿病 ： M ehment等 利用免疫化学发
光的方法。通过对 18 例 2 型糖尿病患者与健康无糖尿患者
的血清降钙素原水平进行研究 ， 经统计学分析 ， 证实二者差
异有统计学意义 (P<O． 05)， 2 型糖尿病患者血清降钙素原水
平升高。患者血清降钙素原水平可用来解释 2 型糖尿病的临
床和生物学特点及其并发症。
3
问题与展望
降钙素原作为一种新的感染性炎性标志物目前已被广泛
认可 ， 具有快捷 、 有效的特点 ， 也具有早期敏感特异的特性 ，
优于传统的炎性标志物， 具有对病情的早期评估 、 预后 、 评价
的价值。但其确切的产生机制还不甚明了， 其病理 、 生理特点
还不完全清楚 ， 有待于进一步的研究。
参 考 文 献

4 P CT 实验 室检 测 方 法
4． 1
双抗夹心免疫化学发光法 双 抗夹心法 运用双 单克 隆抗
体 ， 抗钙素抗体作为捕 获抗体直接 结合 P CT 96 —106 氨 基酸 残
基即未成 熟 CT ： CC P 一1 部分 ， C T 抗体作为示踪 抗体直接结合
PCT T0 —76 氨基酸残基未成熟 c T 分子 ， 以人 工合成 的 PC T 作
为标准检测 ， 绘成 标 准曲线 。该方 法特 异强 ， 无交 叉 反应 。未
经标记的抗体固定反应管内壁， 两个抗体与 PC T 相结合， 形成
“ 双杭夹心复合物 ” ， 发荧光 部分位 于反 应管 表 面， 通 过测 量荧
光强度 ， 可计算出荧光标记物的含量 。荧 光信号 的强度 与标本
中 P CT 浓度成正 比 ， 与同条件下测定标准品绘成的标准曲线对
比可计算 出样本 中 PCT 含 量。免疫 化学发光 法灵 敏度 高、 特异
性强 、 操作简便 ， 最低检测浓度值为 0 ． 1ng／ m l， 可在两 小时 内发
出报 双抗夹心免疫化学发光法 双 抗夹心法 运用双 单克 隆抗
体 ， 抗钙素抗体作为捕 获抗体直接 结合 P CT 96 —106 氨 基酸 残
基即未成 熟 CT ： CC P 一1 部分 ， C T 抗体作为示踪 抗体直接结合
PCT T0 —76 氨基酸残基未成熟 c T 分子 ， 以人 工合成 的 PC T 作
为标准检测 ， 绘成 标 准曲线 。该方 法特 异强 ， 无交 叉 反应 。未
经标记的抗体固定反应管内壁， 两个抗体与 PC T 相结合， 形成
“ 双杭夹心复合物 ” ， 发荧光 部分位 于反 应管 表 面， 通 过测 量荧
光强度 ， 可计算出荧光标记物的含量 。荧 光信号 的强度 与标本
中 P CT 浓度成正 比 ， 与同条件下测定标准品绘成的标准曲线对
比可计算 出样本 中 PCT 含 量。免疫 化学发光 法灵 敏度 高、 特异
性强 、 操作简便 ， 最低检测浓度值为 0 ． 1ng／ m l， 可在两 小时 内发
出报 告。
告。
4 ． 2
胶体金技术
金标法 使用包被胶 体金标 记 的抗 C T 单抗
和非特异性 的抗抗 体 ， 样本加 入检测 孔 后 ， 金 标 单抗 与样 本 中
的 PCT 结合 ， 产物是带金标记的抗原抗体复合 物 ， 保 留 PC T 原
有 的蛋 白质生 物学特性 。在渗透 作用 下复合 物 在反应 膜 条上
移动 ， 膜 上固定的抗抗体 与金标 记复合物 结合而形成 抗原 抗体
抗抗体复合物 。在样本 P CT 含量 大于 0． 5ng／ m l时 ， 反应呈 红
色 ， 颜色深浅与 PCT 浓度成正 比， 与标准 比色板 颜色相 比对得
出样本 PC T 的浓 度范 围。结果 可分 为 四级 ： < 0 ． 5ng／ m l为正
常； > 0 ． 5ng／ m l轻度 升高 ； > 2． 0ng／ m l为明显 升高 ； > 10 ． 0ng／
m l是显著 升高。金标胶体方 法通 过观察 颜色 判断 ， 易 观察 、 不
需要检测仪器 ， 快速 ， 操作简便等特点 ， 但价格 昂贵 。
4 ． 3
放射免疫学分析法
利用人工合成 P CT 多抗特异地识别
并连接合成氨基酸 PC T 。此方法检测 的血清 PC T 浓 度可精 确
到 4pg／ m l， 但检 测的物质是游 离 PCT 、 结 合型 P CT 和 C T 基因
相关肽前体的混合物 ， 无法 区分 出这三种 物质 。该法 虽提 高了
检测 的灵敏度 ， 但 检测过程耗时长 ， 需 9～12h ， 并 带有放射性 元
素的污染 ， 故 临床应用受到 限制 。
4 ． 4
透射免疫浊度法 是利 用样本 中 PC T 与试 剂 的 PCT 单 抗
发生抗原 一抗体反 应 ， 反应产物 使体 系浊 度增 加 ， 在一定 的浓
度范 围内， 标本 中 PC T 浓度 与浊度 呈 线性正 比。在 600nm 波
长处用生化分析仪测定吸光度值 ， 其值与 P CT 含 量成 正 比。该
法适用于全 自动生化分析仪 ， 操 作简便 、 快速 ， 可进行 大批量 检
测 。2005 年国 内一些 试剂 公 司就 研 发 了 P CT 免 疫 比浊 试 剂
盒 ， 供临床检验使 用 ， 但 检测 的方法 学和 临床 诊断 应用 还需 做
进一步 的验证。
4 ． 5
凝胶层 析法及高效液相色谱 分析法
目前凝胶 层析法 及
高效液相色谱分析法已有研究开发 ， 因费 时且 不易 自动化很少使用
5 PCT 在临床 上的应 用
PC T 在细菌感染的患者， 特别是表现为全身严重细菌感染
的患者血清中明显升高， 在外国被认为是诊断严重败血症的敏
感指标 ， 广泛应 用于临 床诊断 及预 后观 察。近 年来 ， 国内一 些
学者对 PC T 的研究也越来越热 门起来。
5． 1 P CT 在细菌性感染疾病 中的应用 全身性炎症反应 发生
早期 时(2 ～3h) P CT 水平 即可升 高， 因此有早期 诊断价值 。研
究表 明 ， 与现有炎症 反应传统 临床诊断 指标相 比 ， P CT 检测 更
为理想 ， 更具 特异性， 且随着病情发展 ， 可与疾 病 的严 重程度 高
一
5 31
—
2012 年
右江 民族 医学 院学报
第 4 期
度相关 。D agm araE 】 通过研 究指 出 PC T 是系统性炎症反应综合
征 (system i c i nf lam m a~ ry response syndrom e， SIR S )的一 个诊 断
指标 ， 在脓毒症 (败血症)时 ， 患者血清 PCT 水平显著 升高 ， 可达
1 000ng／ m l， 超 出健 康人 2 000 倍 以上 ， 可 作为其 血清 学标 志，
尤其对d'JL败血 症 的诊 治方 面起到 了非 常重要 的作 用。很 多
研究验证 了细菌感染时血清 PC T 早期 即升高 ， 在d ,JL败血症时
可显著升高 ， 所以 PC T 可作为新生儿败血症早期诊 断有价值 的
指标 ， 在指导早期治 疗并减 少并 发症 、 降低病 死率 具有 非常重
要 的作 用[ ． 6]。 PC T 与炎症 的严重程度高度相关 ， 在 SIRS 、 脓毒
症(败 血症 )、 严 重脓 毒 症及 脓毒 性休 克病 人 的水平 有显 著 差
异 。E ndo 等[ 】 把 SIR S 患者分类 成非细菌 感染 、 脓 毒症和重 度
脓 毒症 (或脓 毒症休 克)三组 ， 测定三组 患者血浆 PCT 、 IL 一6、
CR P 、 T N F —a 项 目， 结果显 示脓毒 症 SIR S 组 血浆 PCT (2 ． 9 ±
2 ． 3ug／ L )水平 明显高 于非感染 性 SIR S 患者 (0 ． 7 ±1． 1ug／ L )，
而其他指标无 明显差别 。重 度脓毒症 (或脓 毒性休克 )SIR S 组
血浆 P cT (172 ±276． 3ug／ L )水平 又 明显 高于 脓 毒症 SIR S 患
者。结 果表明 S IR S 患者血浆中 P CT 水平与病情 的程度有显著
相关 性 ， 提示检测 SIR S 患者血浆 PCT 浓度 可用于细菌感 染性
SIR S 的诊断和病 情 的判 断。PCT 在 寄生 虫、 真 菌感染 疾 病诊
断中 的作用 与细菌感 染时相 比， PC T 在寄生虫 、 真菌感染 升高
程度要低 ， 但很明显 ， 故也可作为他们 的诊断指标。M ul l er等_8】
曾对 79 例 疑似细菌感染的住院儿 童进行研究 ， 发现在 寄生虫 、
真菌 感染或 严重 细菌感染 并有全 身表 现时 ， PCT 明显 升高 ； 但
在局部 细菌感染及病毒感染没有全 身表现 的患者 PCT 仅 出现
轻度 升高。也 有学者提出 ， PC T 水平 与真菌感染 的关 系须进 一
步探讨 。
5 ． 2 PC T 在感 染性疾病鉴别诊断中的作用
P CT 几乎特异性
地升高于细菌感染 的 SIR S， 而在病毒或局部感染性疾病及 自身
免疫性疾病时则 不升高或 升高幅度很 小。大 手术 、 严 重创伤 和
器官移植 ， 重症胰腺炎 、 脑 膜炎、 腹膜炎 、 肺炎 的患者 ， 血清 P CT
不升高或升高 幅度不 大 ， 但在合并或细 菌感染 的情 况下会大 幅
度升高 。另 外 ， 小 手 术也 不 会 导致 P CT 大 幅度 升高 。所 以，
P CT 浓度可作 为这些 疾病是否伴发细菌感染 的鉴别诊断指标 。
A m m ori等[ 】 指出 PCT 含量 是诊 断细菌性 坏死性 胰腺炎 的 良
好 指标 ， 而较 IL 一6 和 CR P 具有更高的特 异性及敏感性 。他们
对 照研 究 60 例 患者 ， 其结 果发现 重症急性胰腺 炎血清 PCT 含
量 明 显 地 高 于 轻 型 的患 者 PC T 水 平 ， 当 PC T 水 平 值 高 于
2 ． 0ng／ m l 时 即可做 出感染性坏死性 胰腺炎或 脓毒血症 的诊断 。
Cel ebi等[11】 研究 33 例 接受 开放 性心 脏外 科手 术 的患 儿血 清
PC T 水平 ， 将患手术儿分成两组 ， 分 为 SIR S 加 O F (器官 功能 衰
竭 )组和 SIR S 组 ， 分别 于术前 、 术 后及 术后 的第 1⋯ 2 3 4 天 6
个 时间点分别采血 检测 每例 患儿 的血浆 PCT 值 ， 评估 患儿 的
器 官功能 。结 果两组 患儿 P CT 均 明显 升高 ， 但 SIR S 加 O F 组
的 P CT 水平升 高显著 于 SIRS 组 ， 其升高 峰值 和器官衰 竭严重
程度 及死亡率成正相关 ， S IRS 加 0 F 组的患儿在手术后 重症监
护期间发生感染 时 P CT 可 出现双 峰值 ， 表 明 PCT 的峰 值可 以
作为患儿大手术后器 官衰竭发 生发展及死亡 的一个预警 指标 ，
故每 日的常规 P CT 水平检测可 监测大手 术患儿 的术后重症监
护期 问细菌 感染 情况。
5． 3 P CT 在其他疾病 中的应用
5 ． 3 ． 1 PCT 对川 崎病诊 断 的应用 川崎病 (K D )是 以全身 血
管 炎为主要 病变的 急性发 热 出疹 性疾病 ， 临床表 现为皮 疹、 发
热 、 眼结合膜充血 、 颈 部非 脓性 淋 巴结 肿大 等。又称 皮肤黏 膜
淋巴结综合征。发病 可能与多种 细菌 、 病 毒、 支 原体、 立克 次体
等感染所致 免疫异常有关 。前些 年 ， K D 患 儿血清 中 P CT 浓度
已有报道 ， 但 结 论不 同。 日本 O kada[
等 报 道认 为 K D 患 儿
PC T 明显 高于正常 人。汪芸等L1 3J 对 2003 年 1O 月～2005 年 12
月住 院 91 例 K D 患 儿测 定其 血清 PCT 水 平 并分 析 ， 认 为 K D
患儿 血清 PCT 水平的增高 ， 以急性期较 明显 ， 检测其 PCT 水平
有助 于监测 K D 病程发展 。
透射免疫浊度法 是利 用样本 中 PC T 与试 剂 的 PCT 单 抗
发生抗原 一抗体反 应 ， 反应产物 使体 系浊 度增 加 ， 在一定 的浓
度范 围内， 标本 中 PC T 浓度 与浊度 呈 线性正 比。在 600nm 波
长处用生化分析仪测定吸光度值 ， 其值与 P CT 含 量成 正 比。该
法适用于全 自动生化分析仪 ， 操 作简便 、 快速 ， 可进行 大批量 检
测 。2005 年国 内一些 试剂 公 司就 研 发 了 P CT 免 疫 比浊 试 剂
盒 ， 供临床检验使 用 ， 但 检测 的方法 学和 临床 诊断 应用 还需 做
进一步 的验证。
P CT 是 Ⅱ型糖尿病 的一
个特异性的标志物 ， M ehm ent[1 】 等使用 免疫 化学发 光分 析法 ，
检测 18 例 Ⅱ型糖尿病患者与健康体 检人 的血 清 P CT 进行对 比
研究 ， 经统计学分析 ， 两组结果差异具有显著 性( P < 0 ． 02 )， 表
明 Ⅱ型糖尿病患者血清中 PCT 水平升高。血清 PC T 水平可用
来解 释 Ⅱ型糖尿病患者的病程发展 及并 发症 情况。
5． 4 PC T 在指 导I 缶 床治 疗和 预后评估 中的作 用
P CT 血 清
水平的升高或降低可反应全身炎症 的活动度 即病情 发展情况 ，
参考 P CT 的变 化有 助 于 制定 治 疗方 案 和 调 整 用药 。Schuet z
等【 15]进行一项大型临床研 究 ， 将 1 002 例下 呼吸道感染 的患者
包括急性支气管炎 、 CA P 、 CO PD 等 ， 分成 PCT 指 导治疗组 和常
规治疗组 ， 均做随访 18 个月 ， 两 组患者 的l 临床预 后和再 入院率
无明显差异 ， 但 PC T 治疗 组在抗生 素的使 用、 住 院时 间和花 费
均低 于常规治疗组 。说明以 PCT 作为指导指标 ， 可减少下 呼吸
道感染的抗生 素使用和耐药情况 ， 而不影响最 终预后 。PC T 在
CO P D 急 性 发 作 时 升 高 ， 可 以指 导 抗 生 素 的 使 用 和 使 用 时
间It6]。有文献报道[" 】 ， 血清 PCT 水 平越 高 ， 创伤 大手 术 患者
的伤情越严重 ， 持续 重度升 高患者 常提示 预后 不 良， 若 治 疗结
果有效时 ， 血清 P CT 水平 明显下降 ， 研究表 明血清 P CT 是发生
感染创伤患者 和严 重 M O D S 敏感 的预测指 标 ， 检 测 PC T 水平
可早期预测创伤后并发症 ， 对患者并 发感染 的危险性 作早期 评
价。重症监护室 中， 脓毒症和感染性休克患者依照 PC T 浓度监
测应用抗生素可以减少抗生素使用 时问和用 量 ， 对 患者 的预后
无不 良影响 l 引。
6
血 P CT 水平测定与传统炎性参考指标的 比较
6 ． 1 P CT 与 W B C 计数 比较
蒋玉莲 等【 1 9J比较 PCT 和 W B C
计数在儿童感染性疾病 中的监测作 用 ， 结果 发现 PCT 与 W B C
的测定 ， 都 可用 于细菌 感染 与病毒 感染 的鉴 别诊 断 。但 W BC
在不同细菌感染下 可 以是 升高 的， 甚 至有些 是 降低 的 ， 且影 响
W BC 计数的因素较 多， 所以 W BC 计数作为 临床诊 断感染 的特
异性和敏感性较低 ， 而 PCT 具有 明显 的敏感性和特异性 。
6． 2 PC T 与 E SR 比较
ESR 可作 为许 多感 染 和非感 染 疾病
诊断 的辅助参考 指标 ， 但在风湿性疾病 、 结核 分支杆 菌感染 、 心
血管疾病的患者 的血清 中也会 明显 升高 ， 所 以， ESR 与 PCT 比
较而言 ， 无 特异性 ， 影 响因素太多 。
6 ． 3 P CT 与 C R P 比较
C R P 作为 一种急 性时 相蛋 白在 各 种
急性炎症 、 心梗 、 手术创伤和多种 感染或 非感染 的因素下 ， 其 血
清浓度 均可 引起升高 。在全身重度 细菌感染 时 ， 血 PC T 水平 升
高 比 CR P 水平更早和快 速 ， 在 全身 感染受 控制 后 PC T 水平 回
到正常 范围也 比 C R P 快 ； 但 感染 只是局部 时 P CT 水平 一般 不
升高 ， 而检测 C R P 时可 升高 。所 以在全 身严重 感染 时 PC T 是
敏感性 、 特异性更高的检测指 标 ， 在局部 感染 时， CR P 是 重要 的
观察指标。K oksal等- 2oj比较 PC T 和 CR P 在诊 治 新生 儿 败血
症及随诊过程中 的作 用 ， 结 果证 实在早 期诊 断新 生儿 败血 症 ，
评定疾病的严重程度 及评估 对抗生 素治疗 的反 应方 面 可能更
具有优势 。
6． 4 P CT 与 IL 一6 比较 IL 一6 主要是 由巨噬细胞 和单核 细
胞产生的致炎 因子 ， 在脓毒血症 时 ， 机体 的 内皮 细胞 、 巨噬 细胞
和单核细胞受到 T N F —a、 IL 一1、 内毒 素刺激后 分泌 出 IL 一6 ，
IL 一6 启动炎症反应。PCT 和 IL 一6 的 出现有助于早期诊 断小
儿败血症 ， 并可评价疾病 的严重程度【 2¨。但 IL 一6 的半衰 期较
短(在几分钟至几 小时 内)， 检测结 果受 到采样 时机 的影 响 ， 稳
定性差 ， 且存在于体腔 内的 IL 一6 水 平 常 比血浆高 ， 部 分 严重
全身细菌感染者的血浆 IL 一6 浓度反而降低 ， 而 P CT 有较长 的
半衰期(约 24h )， 并且在全身 细菌感染时血 浆 PCT 水平 升高 的
幅度很大 (可 能升高数百倍 )， 因此 与 IL 一6 相 比， PCT 具 有更
理想 的感染检测指标。
近年来 ， 大量 的研究 比较证 明 PC T 与 W BC 、 C R P 、 IL 一6 、
IL 一8 、 T N F —a、 SA A 等在感染性疾病 中的l 临床应 用 ， 特别是 在
全身性感染疾病 的诊断及预后治疗观察 中， PCT 更具有特 异性
和灵敏性 。大多认为 PCT 是评价感染的严重程度 、 评估治疗 效
果和估计 预后 的重要指标。
2012 年
右江 民族 医学 院学 报