皮质醇免疫反应试剂.doc

执行标准号: YZB/JAP 011-2005
产品注册号:

1006771001-084C ※※2004年8月修订
体外诊断试剂 ※2003年3月修订
2001年8月制成
许可号（07AM）第0239号
ST
E-test（TOSOH）Ⅱ（Cortisol）免疫反应试剂
EIA法检测血清及肝素血浆中皮质醇浓度所需的检测试剂
皮质醇（Cortisol）是于副肾皮质产生的一种重要的激素，其生理作用是调节糖类、脂质、蛋白质代谢以及抗炎症、抗过敏作用等。血液中皮质醇的浓度主要由副肾皮质刺激激素（ACTH）调节，ACTH是由下垂体分泌产生的。ACTH调节血液中皮质醇浓度，这一过程受到副肾皮质刺激激素释放因子（CRF）的影响。因此，临床上为了把握血液中皮质醇的浓度以及其分泌规律常常进行副肾疾病的诊断以及检测视床底部—下垂体—副肾皮质的机能，这种方法是极其有效的。
[特征]
1、 应用AIA全自动免疫分析装置（AIA-1200系列以及AIA-600除外），短时间内能够实现自动检测。（抗原抗体反应时间约为10分钟）。
2、 检测中使用的是高亲合性抗皮质醇抗体，并采用一步EIA竞争法。
3、 固定在磁性微球上的抗体和酶标记抗原均以冻结干燥状态下密封保存于试剂Cup中，使用时不需要配制。
4、 从抗原抗体反应到荧光检测均在专用的试剂Cup中进行，污染的可能性很小。
5、 不使用放射性同位素，因此不需要特殊的设备。
[成分]
E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）免疫反应试剂
每20个试剂并排放于一个试剂盒中，并保存在铝制的防湿袋中。每次检测所用试剂主要包括以下几种：
兔抗皮质醇（Cortisol）多克隆抗体固定化微球 12个
碱性磷酸酶联标记Cortisol抗原 140μl
※ ※[作用]
血清及血浆中Cortisol的测定
[检测原理]
该方法是应用Cortisol特异性抗体的一步EIA竞争法。固定在磁性微球上的抗Cortisol抗体和碱性磷酸酶联标记Cortisol抗原都是密封在试剂Cup中的。在该试剂Cup添加缓冲液和样品后，冰冻干燥的试剂开始溶解，抗原抗体反应随即发生。
在一定温度下孵育一定时间后，用洗脱液将多余的样品和酶联标记抗原除去（B·F分离）。之后，为了检测结合在磁性微球上的酶活性，添加酶底物；通过检测酶反应产物荧光物质的生成速度确定血清或肝素血浆中的皮质醇的浓度。
[使用方法]
在使用本品检测血清或肝素血浆中皮质醇浓度时，请与下列试剂组合使用。另外，除本使用说明书为请参照其它相关说明。
E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）标准品试剂盒
E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）样品稀释液
E-test（TOSOH）Ⅱ基质试剂盒
（标签上有粉红色“SUBII”标志）
E-test（TOSOH）Ⅱ洗脱液
E-test（TOSOH）Ⅱ缓冲液
在使用AIA全自动免疫分析装置的时候请参考装置的使用说明书。
1、 试剂的配制方法及配制后的贮存方法、使用期限
1） 免疫反应试剂
请将E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）免疫反应试剂从防湿袋中取出，开封后在15-25℃下放置可以保存一天，在2-8℃下放置可保存七天。
2） 样品稀释液
E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）样品稀释液是液体，开封后即可使用。开封后密封放置在2-8℃下可以保存七天。
※ ※3）标准液
E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）标准品（1-6）都是冰冻干燥品，使用前各自用1毫升蒸馏水溶解。配制后如果密封保存于2-8℃下可以保存1天。
E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）标准品的浓度以TOSOH公司内标准品为标准。
4） 基质液
每瓶E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）基质液用100毫升E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）基质溶解液配制。配制后避光放置在15-25℃下放置可以保存三天，在2-8℃下放置可保存七天。注意避免日光及紫外线直射。
5） 洗脱液
每瓶E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）洗脱液用适量的蒸馏水稀释到2.5升，充分混匀以免产生浓度差。配制后请放置在15-25℃下可以保存30天。
6） 缓冲液
每瓶E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）缓冲液用适量的蒸馏水稀释到5升，充分混匀以免产生浓度差。配制后请放置在15-25℃下可以保存30天。
2、检测操作方法
1） 从铝片保护层中取出E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）免疫反应试剂Cup。
2） 在试剂Cup中加入140微升缓冲液和10微升标准品或稀释后的样品溶液，在磁石磁珠振动器上搅拌磁性微球，在37℃下，使抗原抗体反应进行20分钟。
3） 用洗脱液冲洗试剂Cup，除去其中游离的酶联标记抗原及样品成分。（B·F分离）。
4） 加入基质液后，在磁石磁珠振动器上搅拌同时用荧光检测器检测荧光物质的荧光强度，激发波长363nm，荧光吸收波长447nm，并计算出荧光物质的生成速度。
5） 根据标准液检测绘制的荧光物质生成速度标准曲线，计算出样品中皮质醇的浓度。
6） 如果检测结果超过60μg/dL时，要用样品稀释液提高稀释倍数重新稀释，并按照（1-5）步骤检测。
[操作上的注意事项]
※※1、样品必须使用新鲜的血清或肝素血浆，且请不要使用除肝素血浆以外的血浆。取血清及肝素血浆样品时请注意操作以免发生溶血。样品要避光保存在2-8℃，或在-20℃冰冻保存。
2、 当样品中含有EDTA或柠檬酸存在时检测结果会偏高。
3、 避免多次进行冰冻样品冰冻溶解操作。
4、 在使用E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）样品稀释液稀释样品时请充分混匀。
[检测结果的判定方法]
应用E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）标准品试剂盒绘制标准曲线，从曲线中计算出样品中皮质醇的浓度。
对于检测结果的判定，其标准值由各机关各自设定。在进行临床诊断时，要考虑到其他检测结果及临床症状并给予一个综合的判断。
为了提高检测结果的精确度，在检测样品时请同时测定市售管理血清的Control。使用全自动免疫分析装置AIA-21检测所得的标准曲线如下(见原版说明书)所示。
[性能及相关性]
1、灵敏度
1）E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）标准品（1）的荧光单位（FU，Rate）在20nmol/（L.s）以上。
2）E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）标准品（6）的FU在E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）标准品（1）的30%以下。
2、特异性
在检测Control时，其检测值要在100±20%以内。
注释：Control是以TOSOH皮质醇标准品做对照，用E-test（TOSOH）Ⅱ（皮质醇）检测，从而得到检测结果。
5、 重复性
同时检测同一Control10次，其检测结果的变动系数在15%以下。
6、 检测范围：0.2-60μg/dL
以标准品（1-6）的检测结果绘制成标准曲线，从标准曲线中推测出标准品（1）的FU平均值（Y轴截距），以该平均值-2SD（10次检测结果的标准偏差）作为检测下限，即0.2 ug/dL。
7、 交叉反应性
交叉反应性物质 交叉率（%）
Cortisol 100
可的松（Cortisone） 34.3
皮质类固醇 2.6
17-α-羟基孕酮 0.28
睾酮 <0.001
孕酮 <0.001
17-β-雌二醇 <0.001
※ ※6、干扰物质
在检体样本中如血红蛋白、游离胆红素、饱和胆红素、脂质、白蛋白、抗坏血酸以及肝素的浓度分别低于411 mg/dl 、17mg/dl、18mg/dl、1660mg/dl、50 mg/ml、20mg/ml、100U/ml，几乎不会影响检测结果。
※ ※7、 相关性
本方法（y）与本公司EIA法（x）的相关性如下所示：
y=1.052x-0.418
r=0.998
n=61
其中，用本方法检测讨论肝素血浆（y）和血清（x）的相关性，其结果如下：
y=1.016x-0.223
r=0.997
n=67
8、参考标准范围
对266例健康者在午前8-9点采血并检测其中的Cortisol浓度，所得的参考标准范围是10.4-26.4 ug/dL。其中，血液中Cortisol浓度变化大时，采血时间不同标准值也不同。参考标准范围因为很容易受其他各种因素影响，所以希望各机关自行设定。

[SI单位的变换]
本说明书中Cortisol的浓度是以ug/dL表示的，变换到SI单位的nmol/L要用以下关系式：
nmolCortisol/ L =μg Cortisol/dL×27.59

[使用上的注意事项]
1. 本品是一种体外诊断用试剂，禁止以其他目的使用。
2. 试剂超过有效期限请勿使用。
3. 试验仪器的污染对检测结果的判断有一定影响，所以请洗净试验仪器后再进行检测。
※4. 因为本品中含有作为保存试剂的叠氮化钠，因此试验中如不慎进入眼睛、口中或沾到皮肤上的时候，请采取应急措施——用流水充分冲洗；必要时请求助医生处理。另外，叠氮化钠与铅和铜可发生反应生成有爆炸性的金属叠氮化物，因此，检测结束后请将试剂用大量水稀释后废弃。
5. 已经确认该试剂盒对HBS抗原、HIV抗体及HCV抗体呈阴性，但仍要注意使用以免意外。
6. 样本稀释液、手套等试验器具及检测结束后的试剂Cup要用高压灭菌锅在120℃下处理15分钟灭菌后废弃。
7. 本产品是血清或肝素血浆中Cortisol的检测用剂，请不要用于其它样品的检测。其中，血浆请用肝素血浆。
8、本产品不能用于AIA全自动免疫分析装置AIA-1200系列及AIA-600。

[贮存及有效期限]
请避光保存于2-8℃。有效日期见试剂盒、瓶标签。
[包装规格]
100次检测用量（20试剂Cup/板×5）。
[主要文献]
1. 西川哲男、田村　泰、吉田　尚：治疗学，12,228(1984).
2. FINN FM，STEHLE CJ，HOFMANN K： Synthetic tools for adrenocorticotropin receptor identification.,Biochemistry.,24,1960(1985).

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