不同质量浓度MS-222对红尾副鳅麻醉效果的影响.pdf

54卷南 方 农 业 学 报 1884不同质量浓度MS-222对红尾副鳅麻醉效果的影响肖贵榜1，2，张浩然3，黄胜3，赵谱远3，杨玉能1，鲍娟1，周林1，陆武军1，廖丽1，姜秋霞4（1遵义职业技术学院现代农业系，贵州遵义563000；2四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室，四川成都610041；3贵州省生态渔业有限责任公司，贵州贵阳550022；4贵州师范学院生物科学学院，贵州贵阳550018）摘要：【目的】探究不同质量浓度间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（MS-222）对红尾副鳅（Paracobitis variegatus）的麻醉效果及其生理行为特征，为鱼类野外活体样本采集、驯养和繁育等科研生产活动提供麻醉技术并丰富鱼类麻醉理论。【方法】采用静水生物测试法，设置35.0、45.0、60.0、70.0、85.0、110.0、140.0、150.0、180.0和210.0 mg/L共10组MS-222质量浓度进行红尾副鳅麻醉试验，检测不同质量浓度MS-222药浴红尾副鳅后的麻醉和复苏阶段经过时间及呼吸频率，筛选适宜红尾副鳅驯养、繁育和疾病防治的MS-222麻醉剂质量浓度。【结果】依据MS-222麻醉红尾副鳅后其不同呼吸频率和行为特征，可将红尾副鳅麻醉程度分为应激期、轻度镇静期、深度镇静期、轻度麻醉期、麻醉期和深度麻醉期（A1A6期）6个麻醉阶段，将复苏过程分为复苏期1复苏期4（R1R4期）4个复苏等级；10个质量浓度MS-222麻醉均能使红尾副鳅达到A6阶段，且均能复苏至R4等级。相关分析结果表明，MS-222质量浓度与麻醉时间呈显著负相关（R=-0.6003）（P0.05，下同），与复苏时间呈显著正相关（R=0.7440）；麻醉剂量均显著影响红尾副鳅的麻醉与复苏。各质量浓度MS-222处理红尾副鳅的呼吸频率均呈波浪式变化，麻醉和复苏阶段的呼吸频率均存在差异。在充氧条件下，35.0210.0 mg/L MS-222处理红尾副鳅的复苏率均达100.0%。【结论】不同质量浓度MS-222处理红尾副鳅在麻醉和复苏阶段的呼吸频率均存在差异，理想的麻醉浓度区间为45.0180.0 mg/L，110.0180.0 mg/L的MS-222可用于红尾副鳅短时麻醉，45.085.0 mg/L的MS-222可用于红尾副鳅较长时间麻醉。关键词：红尾副鳅；间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（MS-222）；麻醉效果；复苏率；呼吸频率中图分类号：S965.199文献标志码：A文章编号：2095-1191（2023）06-1884-09收稿日期：2023-03-21基金项目：贵州省科技计划项目（黔科合支撑 2020 1Y103号）第一作者：肖贵榜（1970-），https:/orcid.0000-0003-1171-7093，副教授，主要从事鱼类生态营养及鱼类生物化学与分子生物学研究工作，E-mail：南方农业学报Journal of Southern Agriculture2023，54（6）：1884-1892ISSN 2095-1191；CODEN NNXAABhttp:/DOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2023.06.030Anesthetic effect of MS-222 at different mass concentrations onParacobitis variegatusXIAO Gui-bang1，2，ZHANG Hao-ran3，HUANG Sheng3，ZHAO Pu-yuan3，YANG Yu-neng1，BAO Juan1，ZHOU Lin1，LU Wu-jun1，LIAO Li1，JIANG Qiu-xia4（1Department of ModernAgriculture，Zunyi Vocational and Technical College，Zunyi，Guizhou 563000，China；2De-partment of Biochemistry and Molecular Biology，West China School of Basic Medical Sciences&Forensic Medicine，Sichuan University，Chengdu，Sichuan 610041，China；3Guizhou Ecological Fishery Co.，Ltd.，Guiyang，Guizhou550022，China；4School of Biological Sciences，Guizhou Education University，Guiyang，Guizhou 550018，China）Abstract：【Objective】This paper investigated the physiological behavior characteristics of Paracobitis variegatusand the anesthetic effects of various concentrations of 3-aminobenzoic acid ethyl ester methanesulfonate（MS-222）in orderto provide anesthesia technical support for the collection of live fish samples in the wild，fish domestication and breeding，and to advance the theory of fish anesthesia.【Method】Ten groups of MS-222 were set up with the mass concentrations of35.0，45.0，60.0，70.0，85.0，110.0，140.0，150.0，180.0 and 210.0 mg/Lto carry out the anaesthesia test of P.variegatus，using static water bioassay.Duration of anesthesia and resuscitation，and the respiratory frequency of P.variegatus underMS-222 immersion baths of different mass concentrations was measured so as to screen mass concentrations of MS-2226期18850引言【研究意义】水生动物麻醉剂有乙醚、美托味酯、间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（MS-222）、丁香酚、2-苯氧乙醇和苯唑卡因等（杜浩等，2007；刘长琳等，2008；He et al.，2020）。MS-222作为一种肌肉松弛剂，能阻断神经膜上的钠电流和少量钾电流（Jenni-fer and Robert，2021），且在清水中活鱼肌肉内代谢时间较短（任洁等，1997）因此被美国食品和药物管理局（FDA）批准为用于食用鱼的唯一麻醉剂，并广泛应用于鱼类活体运输、免疫和激素注射、亲鱼采卵采精、标志放流及外科手术等领域（韩光明等，2015）。红尾副鳅（Paracobitis variegatus）隶属于鲤形目鳅科副鳅属，是分布于我国汉江支流源流、堵河、长江支流沿渡河及金沙江、南盘江和渭河水系等水域的特有小型经济食用鱼类（杨君兴等，1994；周中艳等，2007），因其体色艳丽，还可兼作观赏鱼类。近年来，因受生存环境恶化和过度捕捞的影响，红尾副鳅资源已急剧减少（杜宗君等，2013），亟待开展红尾副鳅驯化、繁育和人工养殖研究以保护和持续利用该物种资源（肖贵榜等，2021），而开展红尾副鳅生物学、生态学、人工驯养、繁殖及种质资源保护研究等工作需适度使用水产麻醉剂（丁亚涛等，2019），但目前使用MS-222麻醉红尾副鳅的剂量尚不清楚。因此，探究不同浓度MS-222麻醉后红尾副鳅的行为特征，对红尾副鳅及其他鱼类野生活体的样本采集、驯养、繁育及丰富鱼类麻醉理论具有重要意义。【前人研究进展】国内学者已开展MS-222麻醉斑马鱼（Danio rerio）（Huang et al.，2010）、尖吻鲈（Latescalcarifer）（Xue et al.，2017）、暗纹东方鲀（Takifuguobscurus）、草 鱼（Ctenopharyngodon idellus）和 鲫（Carassius auratus）（陈永平等，2019）、鳊（Parabramispekinensis）（丁亚涛等，2019）、硬头鳟（Oncorhyn-chusmykis）（李乐等，2019）、黄颡鱼（Pelteobagrusfulvidraco）（林丽珍等，2019；刘阳等，2021；Liu etal.，2022）、大鳞鲃（Luciobarbus capito）（张龙岗等，2019）、花鲈（Lateolabrax maculatus）（Wang et al.，2020）、银鲳（Pampus argenteus）（Yu et al.，2020）、亚东鲑（Salmon trutta）（王金林等，2021）、黄条鰤（Seri-ola aureovittata）（王维鑫等，2021）、凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）（徐德峰等，2021）、大黄鱼（Larimichthys crocea）（杨 乐 等，2021；章 霞 等，2022）、史氏鲟（Acipenser schrencki）（周文等，2021）、大菱鲆（Scophthalmus maximus）（Cao et al.，2021）、细鳞鲑（Brachymystax lenok）和美洲红点鲑（Salveli-nus fontinalis）（彭思博等，2022）等的研究，主要分析MS-222处理试验鱼的呼吸频率、麻醉后空气暴露复苏、保活运输中的抗氧化应激、MS-222在鱼体组织中富集、消除及对鱼体内酶活性的影响等。国外学者主要开展MS-222对模式动物斑马鱼（Felix et al.，2020，2021；Zanin et al.，2020；Leyden et al.，2022）及海产鱼类大西洋鲑（Salmo salar）（Chance et al.，2018）、金头鲷（Sparus aurata）（Jerez-Cepa et al.，2019）、克林雷氏鲶（Rhamdia quelen）（Teixeira etal.，2021）和三刺鱼（Gasterosteus aculeatus）（Barneset al.，2023）等的联合用药、胚胎发育、生殖激素调控及生殖细胞影响方面的研究。目前，国外学者采用MS-222麻醉鳅科鱼类的研究较少，而国内研究人员采用MS-222对鳅科鱼类进行麻醉仅主要涉及长薄anesthetics suitable for domestication，breeding and disease control of P.variegatus.【Result】Based on different respiratoryfrequencies and behavioral characteristics after treatment of MS-222 of P.variegatus，the anesthesia degrees could bedivided into 6（A1-A6）anesthesia stages：irritability，slight sedation，deep sedation，slight anesthesia，anesthesia anddeep anesthesia，and resuscitation duration was divided into 4 resuscitation levels，namely resuscitation stage 1-resuscita-tion stage 4（R1-R4）.All the 10 mass concentrations of MS-222 could make P.variegatus reach the A6（deep anesthesia），and resuscitate to the R4level.According to correlation analysis，significant negative correlations were found between themass concentration of MS-222 and anesthesia time（R=0.6003）（P0.05，the same below），and the mass concentrationof MS-222 significantly positively correlated with resuscitation time（R=0.7440）；the anesthetic dose significantlyaffected the anesthesia and resuscitation of P.variegatus.Different mass concentrations of MS-222 had a wavy variation inthe respiratory frequency of treated P.variegatus.There were differences in respiratory frequency between anesthesiastage and resuscitation stage with different mass concentrations of MS-222.Under oxygenation，the resuscitation rate of P.variegatus treated with MS-222 at the concentration of 35.0-210.0 mg/L reached 100.0%.【Conclusion】The respiratoryfrequency of P.variegatus treated with different mass concentrations of MS-222 is discrepant during the anesthesia and theresuscitation stages.The ideal anesthetic concentration of MS-222 for P.variegatus is 45.0-180.0 mg/L.MS-222 at theconcentration of 110.0-180.0 mg/L can be used for short-term anesthesia of P.variegatus，while MS-222 at the concentra-tion of 45.0-85.0 mg/L can be used for long-term anesthesia of P.variegatus.Key words：Paracobitis variegatus；3-aminobenzoic acid ethyl ester methanesulfonate（MS-222）；anesthesiaeffect；resuscitation rate；respiratory frequencyFoundation items：Guizhou Science and Technology Plan Project（QKHZC 2020 1Y103）肖贵榜等：不同质量浓度MS-222对红尾副鳅麻醉效果的影响54卷南 方 农 业 学 报 1886鳅（Leptobotia elongata）（张建明等，2014）、泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus）（韩光明等，2015）、西昌华吸鳅（Sinogastromyzon sichangensis）、峨眉后平鳅（Metahomaloptera omeiensis）（胡佐灿等，2019）和四川华吸鳅（S.szechuanensis）（陈小江等，2020）。【本研究切入点】迄今，针对MS-222麻醉红尾副鳅效果及其生理行为特征的研究未见报道。【拟解决的关键问题】采用静水生物测试法进行红尾副鳅MS-222麻醉试验，探究不同浓度MS-222麻醉的红尾副鳅行为特征、复苏特点及不同麻醉和复苏阶段的呼吸频率等生理表征，确定MS-222麻醉红尾副鳅的质量浓度范围，为开展红尾副鳅的驯养、繁育和增殖放流等科研生产活动提供参考依据。1材料与方法1.1试验材料试验于2022年10月在贵州3种土著经济鱼类驯养与繁育关键技术应用研究课题示范基地（贵州省遵义市）进行。红尾副鳅样本以蚯蚓活饵引诱且采用无损法收集于乌江流域大娄山境内，共采集到各鳍完整、无伤病及游动灵活的红尾副鳅样本55尾，平均体长99.57718.053 mm，平均体重6.2342.664 g。试验药品MS-222购自北京格林恒兴生物科技有限公司，纯度99%。试验前用分析天平按所需质量准确称量药品，用容量瓶配制母液，于内盛2 L纯净水的玻璃缸内稀释至所需浓度。试验用水和药品配制用水均为纯净水，pH 6.0，溶解氧8.0 mg/L，试验环境温度15.8024.10，平均19.122.13。红尾副鳅为冷水性鱼类，养殖时用冰袋和温热水凋控水温以满足红尾副鳅对低温的需求。试验容器为10 L水簇箱（鄞州华丰电子仪器厂），箱体内白色，以便于观察试验鱼的生理行为。主要仪器设备：小型便携式多参数水质分析仪W-型，奥克丹（无锡）科技有限公司、数显游标卡尺（DL3944型，测量精度0.03 mm，宁波得力工具有限公司）、电子分析天平（FA1004型，感量0.0001 g，力辰科技宁波市鄞州华丰电子仪器厂）、微量移液器 Thermo Fisher Scientific F1单道移液枪，赛默飞世尔科技（中国）有限公司、视频设备HUAWEIMate 40 Pro（NOH-AN01型，华为技术有限公司）。1.2试验方法1.2.1鱼体麻醉生理行为观察参考丁亚涛等（2019）、林丽珍等（2019）的方法，根据鱼体对麻醉剂的不同反应，从平衡性、刺激反应、游动行为和呼吸频率等方面定义试验鱼的生理行为。（1）呼吸频率：呼吸频率为1.0 min内红尾副鳅鳃盖张合的次数（曹杰和谢晶，2021），通过录像观察并根据视频人工完整计数红尾副鳅鳃盖的开合频率，记录不同麻醉和复苏阶段鱼的呼吸次数，其平均值即为呼吸频率。（2）鱼体平衡性：观察鱼身是否能维持正常体位，如出现侧倾或翻转则视为无法保持平衡。（3）刺激反应（麻醉分期和复苏分期）：参考Cooke等（2004）、刘长琳等（2008）、彭思博等（2022）的分期标准，将红尾副鳅麻醉程度分为应激期、轻度镇静期、深度镇静期、轻度麻醉期、麻醉期和深度麻醉期（分别设为A1A6期）6个阶段（表1），复苏过程分为复苏期1复苏期4（分别设为R1R4期）4个阶段（表2）。用经消毒的木棍触碰鱼体，查看试验鱼对外界刺激的触觉反应以确定麻醉分期和复苏分期；以试验鱼在180.0 s内进入麻醉状态（A5期）、300.0 s内完全复苏（R4期）且成活率为100.0%作为衡量标准（Flix et al.，1985）。1.2.2MS-222麻醉红尾副鳅试验设计正式试验前进行MS-222麻醉质量浓度范围预试验，以确定正式试验的麻醉质量浓度范围。根据预试验结果，将MS-222质量浓度设为35.0、45.0、60.0、70.0、85.0、110.0、140.0、150.0、180.0和210.0 mg/L共10个梯度，麻醉时间为30.0 min（短时麻醉）。每个质量浓度设5个重复。观察试验红尾副鳅行为的变化情况，记录其进入不同麻醉阶段的行为特征、麻醉和复苏阶段的呼吸频率及经过时间等。1.3统计分析试验数据采用SPSS 26.0进行整理，统计分析前对所有数据进行极端值和错误值分析。在单因素方差（One-way ANOVA）基础上采用LSD和塔姆黑尼法进行多重比较，以Excel 2019绘制图表。2结果与分析2.1红尾副鳅的麻醉、复苏分期及行为特征观察发现，经10组质量浓度MS-222麻醉，红尾副鳅均达A6期，经充氧复苏，均可复苏至R4期（复苏率100.0%）。2.2红尾副鳅的入麻时间和复苏时间及其与MS-222质量浓度的相关性从图1可看出，在短时（30.0 min）麻醉条件下，随着MS-222质量浓度的增加，红尾副鳅的入麻时间呈下降趋势，MS-222质量浓度与入麻时间呈显著负相关（R=-0.6003）（P0.05，下同）；随着MS-222质量浓度的增加，红尾副鳅的复苏时间逐渐延长，6期1887450.0400.0350.0300.0250.0200.0150.0100.050.00.00.0050.00100.00150.00200.0250.00MS-222质量浓度（mg/L）MS-222 mass concentrationR2=-0.6003R2=0.7740系列 Series 1系列 Series 2MS-222质量浓度与入麻时间MS-222 mass concentrations to anaesthesia timeMS-222质量浓度与复苏时间MS-222 mass concentrations to resuscitation time入麻/复苏时间（s）Anaesthesia time/resuscitation timeMS-222质量浓度与复苏时间呈显著正相关（R=0.7440）。2.3不同质量浓度MS-222处理红尾副鳅呼吸频率与麻醉时间的关系从图2可看出，各质量浓度MS-222处理红尾副鳅的呼吸频率均呈波浪式变化；在麻醉时间为20.040.0 s阶段，低浓度（35.0和60.0 mg/L）和高浓度（110.0和140.0 mg/L）处理红尾副鳅的呼吸频率增加，自麻醉20.0 s开始，110.0和140.0 mg/L处理红尾副鳅的呼吸频率一直上升，至150.0 s后才下降，其余6个处理红尾副鳅的呼吸频率在处理后前40.0 s内均逐渐降低，且45.0 mg/L处理的降幅最大；在麻醉时间为40.0300.0 s阶段，35.0、45.0、60.0和70.0 mg/L4个处理红尾副鳅的呼吸频率总体上呈下降趋势，且变幅较小，其波动范围分别在95.88164.06次/min、145.25183.74次/min、91.87156.56次/min和86.08132.04次/min；85.0和210.0 mg/L处理红尾副鳅的呼吸频率自麻醉40.0 s后保持平缓增加趋势，其波动范围分别为110.55198.65次/min和210.82301.97次/min；110.0、140.0、150.0和180.0 mg/L 4个处理红尾副鳅的呼吸频率自麻醉40.0 s后急速增加，至麻醉90.0 s后下降，且在麻醉90.0 s时达峰值，分别为复苏过程分期Recovery stageR1R2R3R4主要行为特征Main behavior characteristics身体侧躺，呼吸开始恢复身体恢复部分平衡和运动，体态未完全正常身体完全恢复平衡，体态完全正常，触觉恢复，但反应迟钝鱼体行为完全恢复至正常麻醉程度分期Anesthetic stageA1A2A3A4A5A6主要行为特征Main behavior characteristics产生应激，在试验容器中迅速游动触觉略失（人为触碰反应稍迟缓）触觉丧失（人为触碰没有反应），身体失去平衡（在水中出现侧翻）身体完全失去平衡，偶尔出现腹部朝上姿态肌肉张力丧失，静止侧躺于水中，鳃盖偶尔急促张合，节律性运动暂停静止水中，鳃盖振动无连续性，偶尔发生咧鳃现象，呼吸暂停，此时应立即转入清水中进行复苏表 1红尾副鳅麻醉程度分期及行为特征Table 1The anesthetic stages and behavior characteristics ofP.variegatus表 2红尾副鳅复苏过程分期及行为特征Table 2The recovery stages and behavior characteristics fromanesthetia in P.variegatus图 1不同质量浓度MS-222麻醉红尾副鳅的入麻时间和复苏时间及其与MS-222质量浓度的相关分析结果Fig.1Anaesthesia time and resuscitation time of P.variegatusanesthetized with MS-222 at different mass concentra-tions and their correlation with MS-222 mass concentra-tions图 2不同质量浓度MS-222处理红尾副鳅在各处理时间段的呼吸频率变化情况Fig.2Changes of respiratory frequency of P.variegatus at different time periods after treatment withdifferent mass concentrations of MS-222535.00485.00435.00385.00335.00285.00235.00185.00135.0085.0035.000.020.040.060.080.0 100.0 120.0 140.0 160.0 180.0 200.0 220.0 240.0 260.0 280.0 300.0 320.0处理时间（S）Treatment time呼吸频率（次/min）Respiratory frequency（times/min）35.0 mg/L45.0 mg/L60.0 mg/L70.0 mg/L85.0 mg/L110.0 mg/L140.0 mg/L150.0 mg/L180.0 mg/L210.0 mg/L肖贵榜等：不同质量浓度MS-222对红尾副鳅麻醉效果的影响54卷南 方 农 业 学 报 1888MS-222质量浓度（mg/L）Mass concentration of MS-22235.045.060.070.085.0110.0140.0150.0180.0210.0尾数Fish5555555555麻醉呼吸频率（次/min）Respiratory frequency on anaesthesia（times/min）161.285.45aA135.866.06abcABCD112.248.44cdCD105.445.56dD156.194.63abAB123.846.30cdBCD141.606.47abcABC156.656.90abAB140.265.29abcABC128.324.94bcdBCD复苏呼吸频率（次/min）Respiratory frequency on resuscitation（times/min）138.785.67abAB153.908.54aA121.567.82bcdBDE115.846.44cdeBDE133.415.70abcABD118.696.02bcdeBDE107.037.56deDEF107.307.73deDE98.438.69efEF79.279.86fF表 4不同质量浓度MS-222对红尾副鳅麻醉呼吸频率和复苏呼吸频率的影响Table 4Effects of respiratory frequency on anaesthesia and resuscitation of P.variegatus treated with different mass concentrationsof MS-222486.65、469.29、533.32和394.48次/min。可见，随着麻醉时间的增加，不同质量浓度MS-222处理红尾副鳅的呼吸频率均有所增加，其中，低浓度（35.085.0mg/L）处理组的呼吸频率变幅平稳，高浓度（110.0210.0 mg/L）处理组的呼吸频率变幅较大；无论是低浓度还是高浓度处理，呼吸频率均在麻醉90.0 s达峰值，且几乎在麻醉至300.0 s时均高于麻醉初始阶段。2.4不同质量浓度MS-222对红尾副鳅麻醉时间和复苏时间的影响不同质量浓度MS-222处理红尾副鳅的麻醉和复苏时间见表3，其中，以35.0 mg/L处理红尾副鳅的麻醉时间最长，为521.033.2 s，140.0 mg/L处理的麻醉时间最短，为90.86.8 s；以180.0 mg/L处理红尾副鳅的复苏时间最长，为387.681.5 s，35.0 mg/L处理的复苏时间最短，为90.614.5 s。35.0 mg/L处理的麻醉时间极显著长于其他处理（P0.05，下同）。35.0 mg/L处理的复苏时间极显著短于180.0和210.0 mg/L处理，45.0 mg/L处理的复苏时间极显著短于180.0 mg/L处理，显著短于210.0 mg/L处理，180.0 mg/L处理的复苏时间显著长于60.0、70.0和85.0 mg/L处理。说明低浓度MS-222处理的红尾副鳅麻醉时间长于高浓度处理；低浓度MS-222处理红尾副鳅的麻醉时间和复苏时间与高浓度处理间存在差异，浓度相差越大，差异越明显。2.5不同质量浓度MS-222对红尾副鳅麻醉呼吸和复苏呼吸频率的影响不同质量浓度MS-222处理红尾副鳅后的麻醉呼吸和复苏呼吸频率见表4，其中，以35.0 mg/L处理的麻醉呼吸频率最高，为161.285.45次/min，以70.0mg/L处理的麻醉呼吸频率最低，为105.445.56次/min；以45.0 mg/L处理的复苏呼吸频率最高，为153.908.54次/min，以210.0 mg/L处理的复苏呼吸频率最低，为79.279.86次/min。35.0 mg/L处理的麻醉呼吸频率极显著高于60.0、70.0、110.0和210.0 mg/L处理，85.0 mg/L处理的麻醉呼吸频率显著高于110.0和210.0 mg/L处理，60.0 mg/L处理的麻醉呼吸频率极显著低于85.0和150.0 mg/L处理，70.0 mg/L处理的麻醉呼吸频率极显著低于85.0、140.0、150.0和MS-222质量浓度（mg/L）Mass concentration of MS-22235.045.060.070.085.0110.0140.0150.0180.0210.0尾数Fish5555555555麻醉时间（s）Duration of anesthesia521.033.2aA281.742.9bcB327.542.2bB272.08.5bcB238.622.6cB91.812.1dC90.86.8dC105.212.8dC137.221.7dC117.23.7dC复苏时间（s）Duration of resuscitation90.614.5cC136.019.8cBC226.254.6bcAB227.639.3bcAB187.428.0bcAB237.247.8abcAB243.225.2abcAB265.479.2abcAB387.681.5aA323.077.2abAB表 3不同质量浓度MS-222处理的红尾副鳅麻醉时间和复苏时间比较Table 3Comparison in duration of anesthesia and resuscitation of P.variegatus treated with different mass concentrations of MS-222同列数据后不同大、小写字母分别表示差异极显著（P0.01）和显著（P0.05）。表4同Different uppercase letters in the same column represented extremely significant difference（P0.01），and lowercase letters represented significant dif-ference（P0.05）.The same was applied in Table 46期1889180.0 mg/L处理，45.0 mg/L处理的麻醉呼吸频率显著高于70.0 mg/L处理，其余处理间无显著差异。35.0 mg/L处理的复苏呼吸频率极显著高于140.0、150.0、180.0和210.0 mg/L处理，45.0 mg/L处理的复苏呼吸频率极显著高于60.0、70.0、110.0、140.0、150.0、180.0和210.0 mg/L处理，60.0、70.0和110.0mg/L处理的复苏呼吸频率极显著高于210.0 mg/L处理，85.0 mg/L处理的复苏呼吸频率极显著高于180.0和210.0 mg/L处理；35.0 mg/L处理的复苏呼吸频率显著高于70.0 mg/L处理，60.0 mg/L处理的复苏呼吸频率显著高于180.0 mg/L处理，85.0 mg/L处理的复苏呼吸频率显著高于140.0和150.0 mg/L处理，140.0mg/L处理的复苏呼吸频率显著高于210.0 mg/L处理，其余处理间无显著差异。说明高浓度MS-222处理红尾副鳅的麻醉呼吸频率高于低浓度处理，低浓度MS-222处理红尾副鳅的复苏呼吸频率高于高浓度处理；浓度间相差越大，麻醉呼吸频率和复苏呼吸频率差异越明显。3讨论根据麻醉剂对鱼体的抑制原理，麻醉剂作用于鱼体可分为以下几个阶段，首先抑制脑的皮质部位，划分为触觉丧失阶段，进一步作用于起基底神经节与小脑，划分为兴奋阶段，最后作用于脊髓，划分为麻醉阶段，麻醉剂逐渐从鱼体排出后，鱼体即可复苏（李思发，1988；谢晶和曹杰，2021）。本研究结果表明，可将MS-222对红尾副鳅麻醉的触觉丧失阶段区分为应激期和轻度镇静期，将复苏阶段分为4个等级，其中，将兴奋阶段区分为深度镇静期和轻度麻醉期，将麻醉阶段区分为麻醉期和深度麻醉期。刘长琳等（2008）、赵明等（2010）、曲焕韬等（2017）研究表明，MS-222麻醉半滑舌鳎（Cynoglos-sus semilaevis）、圆斑星鲽（Verasper variegatus）和岩原鲤（Procypris rabaudi）的浓度范围分别为120.0210.0 mg/L、150.0230.0 mg/L和120.0220.0 mg/L。本研究结果表明，35.0210.0 mg/L的MS-222均可使红尾副鳅进入麻醉阶段，且能完全复苏，理想的麻醉浓度为45.0180.0 mg/L，与上述研究结较接近。也有研究发现，MS-222处理长薄鳅（Leptobotia elonga-ta）（张建明等，2014）和黄颡鱼（林丽珍等，2019）的有效质量浓度为40.080.0 mg/L，处理细鳞鲑的有效质量浓度为80.0100.0 mg/L，处理美洲红点鲑的有效质量浓度为100.0 mg/L（彭思博等，2022），本研究结果与其存在明显差异，原因除试验环境条件不同外，还与红尾副鳅属底栖性鱼类，其呼吸频率和耗氧率水平低于游泳性鱼类有关。渔用麻醉剂处理鱼类入麻后的呼吸频率是反映麻醉深度的重要指标。前人研究普遍认为，随着麻醉时间的持续，鱼类的呼吸频率不断降低（胡望娇等，2023）。本研究中，麻醉时间与呼吸频率间呈波浪式变化，与李乐等（2019）的研究结果相似。出现上述现象的原因是否与麻醉剂MS-222处理红尾副鳅后其神经感受与生理反应的适应机制有关，需进一步探究。人们对麻醉剂作用效果的评价虽然具有一定的主观性（韩光明等，201