不同投喂频率下复合非粮蛋白源替代鱼粉饲料对大口黑鲈生长性能和健康的影响.pdf

doi:10.7541/2023.2023.0111不同投喂频率下复合非粮蛋白源替代鱼粉饲料对大口黑鲈生长性能和健康的影响罗 涵1,2 刘昊昆2 杨云霞2 金俊琰2 张志敏2 韩 冬2 朱晓鸣2 解绶启2,3(1.华中农业大学水产学院,武汉 430070;2.中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室,武汉 430072;3.中国科学院大学现代农业科学学院,北京 100049)摘要:为探究投喂频率对不同水平的复合非粮蛋白源替代饲料鱼粉对大口黑鲈(Micropterus salmoides)生长性能、血浆生化、肠道形态和抗氧化的影响,设计了棉籽浓缩蛋白、乙醇梭菌蛋白、黄粉虫粉和小球藻4种非粮蛋白源混合(8534)后替代0、30%、60%和90%的鱼粉的四种等氮等脂饲料(D1、D2、D3和D4),设置3个投喂频率(1、2和4次/d)。每个处理组3个重复,每个重复50尾体重为(14.230.07)g的大口黑鲈幼鱼,进行为期8周的室外养殖实验。结果显示,在不同投喂频率条件下,摄食D4饲料组大口黑鲈的特定生长率(SGR)和蛋白质沉积率(PRE)显著低于D1D3组,饲料系数(FCR)显著升高(P0.05)。在各饲料组中,投喂1次/d组的特定生长率显著低于2和4次/d投喂组(P0.05)。在不同投喂频率条件下,摄食D4饲料组大口黑鲈血浆胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量显著低于D1组,谷丙转氨酶(ALT)活性显著高于D1组(P0.05)。在各饲料组中,投喂1次/d大口黑鲈血浆葡萄糖(Glu)含量,碱性磷酸酶(AKP)和谷草转氨酶(AST)活性显著高于2和4次/d组(P0.05),而总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)含量显著低于其他两组(P0.05)。在投喂1次/d的处理组中,摄食D4饲料组的全鱼粗脂肪和血浆低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量显著降低,水分含量显著高于其他各组(P0.05)。各投喂频率下,D4饲料组大口黑鲈肠道组织丙二醛(MDA)含量显著高于D1组,而超氧化物歧化酶(SOD)活性显著低于D2组(P0.05)。在各饲料组中,投喂2次/d组的总抗氧化能力(T-AOC)和过氧化氢酶(CAT)活性显著高于1次/d组(P0.05)。组织学结果显示,在摄食不同饲料条件下,投喂2次/d的大口黑鲈肠道绒毛高度、杯状细胞数量、肌层厚度和绒毛表面积显著高于投喂1次/d,投喂4次/d的大口黑鲈肠道隐窝深度显著低于1次/d(P0.05)。综上所述,以2次/d投喂60%替代水平新型蛋白源复合饲料的大口黑鲈可以获得较好的生长和饲料利用。关键词:投喂频率;鱼粉替代;非粮蛋白源复合物;抗氧化能力;肠道健康;大口黑鲈中图分类号:S965.1 文献标识码:A 文章编号:1000-3207(2024)01-0063-14 养殖鱼类的生长受到许多因素的影响,其中饲料的营养成分、投喂频率等是非常重要的因素1,2。适宜的投喂频率不仅可以改善水产动物的生长,还有助于提高免疫力、改善鱼类健康36。通常,投喂频率过低会导致水产动物的生长性能和存活率降低,而过高的频率则会造成饲料的浪费,增加养殖成本甚至造成严重的水体污染7。因此,有必要探究养殖对象的适宜投喂频率。近年来,受水产养殖的发展和海洋渔业资源保护等影响,水产饲料中鱼粉的供应越来越不能满足需求;同时,为了解决“与人争粮”的问题,饲料用新型非粮蛋白源的开发受到越来越多的关注8。棉籽浓缩蛋白、黄粉虫粉、乙醇梭菌蛋白、小球藻等被证明在大口黑鲈饲料中可替代一定比例鱼粉,对大口黑鲈的生长、免疫、抗氧化、肝脏健康及提升品质具有积极作用912。有研究表明提高投喂频率可以通过影响氨基酸代谢改善异育银鲫由于豆粕高水平替代鱼粉导致的饲料利用能力的下降第 48 卷 第 1 期水 生 生 物 学 报Vol.48,No.1 2024 年 1 月ACTA HYDROBIOLOGICA SINICAJ a n.,2 0 2 4 收稿日期:2023-04-11;修订日期:2023-05-23基金项目:国家重点研发计划“蓝色粮仓科技创新”专项(2019YFD0900200)资助 Supported by the National Key R&D Program of China(2019YFD0900200)作者简介:罗涵(1998),男,硕士研究生;主要从事鱼类生理生态学研究。E-mail:通信作者:解绶启,研究员;E-mail:The Author(s)2024.This is an open access article under the CC-BY 4.0 License(https:/creativecommons.org/licenses/by/4.0/).以及肠道的健康13。在对草鱼的研究中发现;提高投喂频率可以改善草鱼对于不同饲料蛋白源的利用14。然而,单一蛋白源替代可能会受限于其自身某一营养素缺乏或抗营养因子等,导致替代水平受到一定的限制。不同类型蛋白源混合可通过营养元素的互补,从而提高替代鱼粉的比例1517。根据已测得的氨基酸组成数据(表 2)可见:棉籽浓缩蛋白的苏氨酸、异亮氨酸含量较低但精氨酸含量高,菌蛋白必需氨基酸含量丰富但异味较大,小球藻的缬氨酸、精氨酸含量较缺乏,黄粉虫粉的组氨酸含量偏低,采用复合的形式可以使得异味得到稀释,氨基酸组成更为均衡。而这几种新型非粮蛋白源的混合替代大口黑鲈(Micropterus salmoides)饲料中鱼粉的能力及投喂频率的影响尚无研究报道。大口黑鲈为肉食性淡水鱼类,具有生长速度快、产量高、肉质鲜嫩,无肌间刺等优点,在我国广泛养殖,2021年产量超过70万吨18,19。由于大口黑鲈饲料的高蛋白需求(48%51%),其饲料中鱼粉的使用量居高不下20,21。因此,本研究使用四种新型非粮蛋白源(小球藻、黄粉虫粉、棉籽浓缩蛋白、乙醇梭菌蛋白)模拟大口黑鲈必需氨基酸需求模式进行混合,分别替代饲料中0、30%、60%和90%鱼粉,以3种投喂频率(1、2和4次/d)进行投喂。拟通过分析生长与饲料利用、血浆生化指标、肠道相关酶活与肠道基本形态等参数,探究不同投喂频率下大口黑鲈对不同替代水平的复合新型非粮蛋白源饲料的利用情况,探索新型蛋白源在大口黑鲈饲料中的利用潜力及适宜的投喂策略,为水产养殖业提供理论依据。1 1 材料与方法 1.11.1 实验饲料以鱼粉、玉米蛋白粉、棉籽浓缩蛋白、乙醇梭菌蛋白、小球藻和黄粉虫粉为蛋白源,以鱼油和豆油为脂肪源,饲料配方及基本营养成分见表 1。所有原料粉碎过40目筛后,充分搅拌混匀,按比例均匀加水后经双螺杆膨化饲料机(EXT50A,洋工机械,北京)制成粒径为2 mm的膨化饲料颗粒,经过烘箱60烘干,最后采用后喷涂方式进行油脂的添加。制备的4种等氮等脂饲料(表 2和表 3)置于冷库中(4)保存以待使用。1.21.2 实验动物与实验设计本实验所用大口黑鲈幼鱼(由湖北正好鱼苗养殖基地提供)暂养于湖北省荆州市石首老河四大家鱼原种场(29.83518 N,112.488092 E)池塘网箱(2 m2 m1.8 m)中,用大口黑鲈商品饲料(通威,型表 1 实验饲料配方及化学组成(%干物质)Tab.1 Formulation and proximate composition of experimentaldiets(%dry matter)原料Ingredient(%)实验饲料Experimental dietD1D2D3D4鱼粉Fish meal148.0 33.6 19.2 4.8玉米蛋白粉Corn gluten meal22.0 22.0 22.0 22.0棉籽浓缩蛋白Cottonseed proteinconcentrate20.05.8 11.6 17.4乙醇梭菌蛋白Clostridiumautoethanogenum protein30.03.67.2 10.9小球藻Chlorella meal40.02.95.88.7黄粉虫粉Mealworm meal50.02.24.36.5木薯淀粉Cassava starch612.0 12.0 12.0 12.0微晶纤维素Microcrystalline cellulose9.18.17.25.9豆油Soybean oil3.23.64.04.5鱼油Fish oil73.23.64.04.5多维多矿预混Vitamin and mineral premix81.01.01.01.0磷酸二氢钙Calcium biphosphate1.01.01.01.0L-蛋氨酸L-crystalline methionine0.00.10.20.3氯化胆碱Choline chloride0.50.50.50.5近似组成Proximate composition(%drymatter)粗蛋白Crude protein49.7850.0849.5249.07粗脂肪Crude lipid9.41 9.62 10.21 9.73灰分Ash9.54 8.11 6.46 5.03注:1鱼粉:秘鲁塔萨鱼制品有限公司;2棉籽浓缩蛋白:新疆金兰植物蛋白有限公司;3乙醇梭菌蛋白;河北首朗新能源科技有限公司;4小球藻粉:武汉德默特生物科技有限公司;5黄粉虫粉:广东泽和诚生物科技有限公司;6木薯淀粉:武汉一腾淀粉有限公司;7秘鲁鱼油,购自武汉高龙饲料有限公司;8多维多矿复合预混料:北京英惠尔生物技术有限公司;多维多矿复合预混料(P301)(每kg预混料中):维生素A,810000 IU;维生素D3,198000 IU;维生素E,4500 mg;维生素K3,1440 mg;维生素B1,900 mg;维生素B2,1350 mg;维生素B6,830 mg;维生素B12,1.8 mg;烟酸,3150 mg;泛酸钙,2700 mg;叶酸,110 mg;生物素,10.8 mg;L-抗坏血酸-2-磷酸酯,13000 mg;肌醇,12000 mg;L-左旋肉碱,5000 mg;铁,12000 mg;铜,400 mg;锌,3000 mg;锰,1500 mg;钙,100 mg;硒,35 mg;钴,40 mg;镁,60000 mg,载体:稻壳粉、石粉。无机盐剂型(硫酸亚铁、碱式氯化铜、硫酸锌、硫酸锰、碘酸钙、亚硒酸钠、氯化钴、硫酸镁)Note:1Fish meal:TASA Fish Product Co.Ltd,Peru;2Cot-tonseed protein concentrate:from Xinjiang Jinlan Plant ProteinCo.,Ltd,Xinjiang,China;3Clostridium autoethanogenum protein:from Hebei Shoulang Novel Energy Technology Co.,Ltd;4Chlorella meal:from Demeter Bio-Tech Co.,Ltd.,Wuhan,Hubei,China;5Mealworm meal:from Guangdong ZehechengBiotechnology Co.,Ltd,Guangzhou,China;6 Cassava starch:fromWuhan Yiteng Starch Co.,Ltd,Wuhan,China;7 Fish oil:Peruanchovy oil,purchased from Coland Feed Co.,Ltd.,Wuhan,China;8 Vitamin and mineral premix:from Beijing EnhalorBiotechnology Co.,Ltd,Beijing,China.Vitamin and mineralpremix(P301)(contents in per kilogram premix):Vitamin A,810000 IU;Vitamin D3,198000 IU;Vitamin E,4500 mg;VitaminK3,1440 mg;Vitamin B1,900 mg;Vitamin B2,1350 mg;VitaminB6,830 mg;Vitamin B12,1.8 mg;Nicotinic acid,3150 mg;Calcium pantothenate,2700 mg;Folic acid,110 mg;Biotin,10.8 mg;L-ascorbic acid-2-phosphate,13000 mg;Inositol,12000 mg;L-carnitine,5000 mg;Fe,12000mg;Cu,400 mg;Zn,3000 mg;Mn,1500 mg;Ca,100 mg;Se,35 mg;Co,40 mg;Mg,60000 mg,Carrier:rice husk powder,stone powder.Inorganic salts(FeSO4,Cu2(OH)3Cl,ZnSO4,MnSO4,Ca(IO3)2,Na2SeO3,CoCl2,MgSO4)64水 生 生 物 学 报48 卷号:8901)对大口黑鲈进行两周的驯化以适应养殖环境。实验在池塘网箱中进行。在实验开始前将鱼禁食24h,挑选规格均匀、表观健康无外伤的大口黑鲈50尾初始体重为:(14.230.07)g放入每个网箱;同时,取6尾作为实验前初始样。实验为双因素设计,设置3个投喂频率1次/d(17:30)、2次/d(7:00和17:30)、4次/d(7:30、10:50、14:10和17:30)和4个替代水平(0、30%、60%和90%)饲料,投喂遵循表观饱食原则。每个处理设置3个重复,养殖周期为8周(2021年7月29日2021年9月23日)。在实验期间,每天记录水温、死鱼情况和投喂量,每周测定1次水体溶氧。养殖期间使用气泵曝气以维持养殖水体溶解氧为6.0 mg/L以上,水温为29.133.0。1.31.3 样品采集实验结束前鱼禁食12h,对每个网箱的鱼进行记数、称总重,随机选取8尾进行取样。用MS-222(70 mg/L)麻醉后,取3尾鱼测量体长和体重,并解剖肝脏和内脏团称重,用以计算肝体比(HSI)、脏体比(VSI)和肥满度(CF)。另取2尾鱼用经肝素钠溶液润洗过的注射器进行尾静脉采血。采集的血液样本在低温离心机(Eppendorf,5417R)3000 r/min离心10min后吸取上层血浆于PCR管中然后迅速放入液氮中。将采血后的鱼解剖分离肠道组织,截取中肠分为两段,全过程在冰盘上进行。采样的肠道用于测定酶活的一段用锡箔纸包好立刻置于液氮中,用于制作HE染色切片的一段置于装有多聚甲表 2 四种非粮蛋白源、蛋白源复合物与鱼粉氨基酸组成和粗蛋白含量Tab.2 Amino acid composition and crude protein content of fournon-food protein sources,protein sources complex and fish meal(g/kg,dry matter)项目Item棉籽浓缩蛋白乙醇梭菌蛋白小球藻黄粉虫粉蛋白源复合物鱼粉必需氨基酸Essential amino acids(EAAs)苏氨酸Thr17.946.222.724.026.928.4缬氨酸Val23.852.225.835.633.630.5蛋氨酸Met6.721.89.112.612.018.5异亮氨酸Ile16.249.917.124.526.425.2亮氨酸Leu33.565.340.146.845.148.9苯丙氨酸Phe32.536.724.826.631.226.2组氨酸His15.611.18.35.711.420.7赖氨酸Lys24.979.325.644.342.551.5精氨酸Arg51.028.124.928.736.931.3总必需氨基酸TotalEAAs222.1390.6198.4248.8266.0281.2非必需氨基酸Non-essential amino acids(NEAAs)谷氨酸Glu119.286.652.069.291.081.0天冬氨酸Asp41.570.131.734.645.843.4甘氨酸Gly23.640.026.648.533.138.7丙氨酸Ala21.553.739.829.733.942.5胱氨酸Cys1.41.00.90.62.32.2丝氨酸Ser20.932.018.947.228.623.7酪氨酸Tyr15.730.915.922.320.919.2脯氨酸Pro20.525.721.049.427.724.3总非必需氨基酸TotalNEAAs264.3340.0206.8301.5283.3275.0总氨基酸Total AAs486.4730.6405.2550.3549.3556.2粗蛋白Crudeprotein667.0858.2629.9768.3727.4726.3表 3 实验饲料氨基酸组成Tab.3 Amino acids composition of the experimental diets(g/kg,dry matter)氨基酸Amino acidD1D2D3D4需求量Requirement(%inprotein)1必需氨基酸Essential amino acids(EAAs)苏氨酸Thr19.3420.4218.4517.812.63缬氨酸Val21.3322.0822.1822.772.95蛋氨酸Met13.7614.4014.0213.811.69异亮氨酸Ile17.4618.2918.3518.652.64亮氨酸Leu49.8250.4748.7447.925.12苯丙氨酸Phe22.7422.9824.2123.942.56组氨酸His12.8311.9510.149.651.31赖氨酸Lys27.6128.7024.7824.104.9精氨酸Arg20.3721.0019.8420.165.32总必需氨基酸TotalEAAs205.26210.29200.71198.81必需氨基酸指数EAAI1.4471.4711.4121.410非必需氨基酸Non-essential amino acids(NEAAs)谷氨酸Glu84.1985.1187.3286.02天冬氨酸Asp42.7444.6743.5943.71甘氨酸Gly23.6723.6421.0220.59丙氨酸Ala36.7135.2032.3830.67胱氨酸Cys0.550.810.830.85丝氨酸Ser20.6122.0622.6322.14酪氨酸Tyr18.8518.4717.7917.59脯氨酸Pro29.7630.7731.7032.45总非必需氨基酸TotalNEAAs257.08260.73257.26254.02总氨基酸Total AAs462.34471.02457.97452.83注:1必需氨基酸需求量(%蛋白)参考文献22关于60.96 g规格大口黑鲈氨基酸需求Note:1Essential amino acid requirement(%in protein)referto Ding Qingqiu et al.22 for amino acid requirement of 60.96 glargemouth bass1 期罗 涵等:不同投喂频率下复合非粮蛋白源替代鱼粉饲料对大口黑鲈生长性能和健康的影响65醛固定液的离心管中。最后的3尾用于测定鱼体组分。1.41.4 理化指标测定本实验所有饲料和鱼样样品的基本组分测定均参照AOAC23标准方法进行。水分含量采用失重法测定,即将样品置于烘箱中105烘干至恒重待冷却后称取烘干前后质量之差;灰分在马弗炉(中国湖北省英山县建立电炉制造厂)中550锻烧3h,通过失重法测定;粗蛋白使用凯氏定氮仪(Kjeltec AutoAnalyzer 8400,FOSS Tecator,Haganas,瑞典)测定;粗脂肪使用索氏抽提仪(SoxtecTM 2005,FOSS Tecat-or,Haganas,瑞典)用乙醚对样品进行脂肪抽提测定。血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、葡萄糖(Glu)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)含量采用全自动生化分析仪(BS-460,深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司,深圳)测定。血浆谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)活性采用南京建成生物技术研究所生产的试剂盒(C009-2-1、C010-2-1和A059-2)进行测定。肠道碱性磷酸酶、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC)采用南京建成生物技术研究所生产的试剂盒(A060-2、A007-1-1、A001-3、A003-1和A015-2-1)进行测定。肠道HE切片使用中国科学院水生生物研究所大屏幕全自动数字玻片扫描仪(DM1000,Leica Mi-crosystems,Germany)获取高清切片扫描图片后,使用ImageScope软件进行肠道基本形态参数:绒毛长度(Villus length)、隐窝深度(Crypt depth)、杯状细胞(Goblet cell)数量、肌层厚度(Muscle thickness)、绒毛表面积(Villus surface area)的测量与统计。统计与计算参照Balan 等24的实验方法。1.51.5 数据处理所有数据均使用SPSS 20.0 进行统计分析。使用Shapiro-Wilk检验对数据进行正态性检测,再用Levene检验检测方差同质性。然后使用双因素方差分析(Two-way ANOVA)进行检验;若两个因素间存在交互作用,则用Duncans多重比较对所有处理组采取单因素方差分析(One-way ANOVA)评估各组间的差异性,若不存在交互作用则固定一个因素水平,对另一个因素进行单因素方差分析。显著性水平为0.05。2 2 结果 2.12.1 生长与饲料利用如表 4所示,在不同投喂频率下,随着复合蛋白源替代鱼粉比例的增加,大口黑鲈的生长速度下降,摄食D4饲料的大口黑鲈SGR显著低于其他组(P0.05),FCR显著高于其他饲料组(P0.05),PRE和FR显著低于D2饲料组(P0.05)。在各饲料组中,投喂1次/d大口黑鲈SGR和FR显著低于2和4次/d组(P0.05)。在D4饲料组中,投喂4次/d大口黑鲈PRE显著低于1和2次/d 组(P0.05)。2.22.2 全鱼体成分指标在投喂1次/d组中,摄食D4饲料大口黑鲈全鱼粗脂肪含量显著低于其他各饲料组(P0.05;表 5),全鱼水分含量高于其他各饲料组(P0.05)。在投喂4次/d 组中,摄食D1饲料大口黑鲈灰分含量显著高于D4饲料组(P0.05)。在D4饲料组中,投喂1次/d大口黑鲈全鱼粗脂肪含量显著低于其他投喂频率组(P0.05)。2.32.3 形体指标在投喂1和4次/d组中,摄食D1饲料大口黑鲈CF显著高于其他饲料组(P0.05;表 6)。在不同饲料组中,投喂1次/d大口黑鲈VSI和HSI显著高于其他组(P0.05)。2.42.4 血浆生化指标投喂频率和饲料对血浆TC、HDL-C、TP和ALB含量的影响存在交互作用,摄食D4饲料并且投喂1次/d大口黑鲈血浆TC、HDL-C含量显著低于其他各组(P0.05;表 7;图 1c和1d)。在各饲料组中,投喂1次/d大口黑鲈血浆ALT、AST、血浆Glu含量和AKP活性显著高于投喂2和4次/d组(P0.05;图 1a和1b)。在1和2次/d组,随着复合蛋白替代鱼粉比例的提高,大口黑鲈血浆TC含量下降(P0.05),LDL-C和HDL-C含量逐渐下降(P0.05)。在不同投喂频率下,随着替代比例的提高,大口黑鲈血浆ALT活性逐渐升高(P0.05),而AST活性在2次/d的投喂频率下随着替代比例的提高而下降(P0.05)。在1次/d投喂频率下,血浆Glu含量随替代比例提高而上升(P0.05);在2次/d投喂频率下,血浆Glu含量在D2和D3饲料组较高(P0.05);在4次/d投喂频率下,血浆Glu含量随替代水平提高而下降(P0.05)。血浆AKP活性仅在1次/d的投喂频率下随替代水平的提高而上升(P0.05)。血浆TP含量随着投喂频率的提高而上升(P0.05),在1次/d的投喂频率下,在D2和D3饲料组最高(P0.05);血浆ALB含量在4次/d的投喂频率下,随着替代比例的提高而上升(P0.05)。2.52.5 肠道抗氧化指标投喂频率和饲料中鱼粉替代对大口黑鲈肠道66水 生 生 物 学 报48 卷T-AOC的影响存在交互作用。在不同投喂频率下,随着复合蛋白替代鱼粉比例的提高,大口黑鲈肠道MDA含量上升,摄食D4饲料大口黑鲈肠道MDA含量显著高于D1饲料组(P0.05;图 2a)。摄食D2饲料并且投喂2次/d大口黑鲈肠道T-AOC显著高于其他各组(P0.05);在2次/d 投喂下,T-AOC随着替代比例的增加而下降(P0.05;图 2b)。在投喂4次/d时,摄食D4饲料大口黑鲈肠道SOD活性显著低于D2饲料组(P0.05;图 2d)。在各饲料组中,投喂4次/d大口黑鲈肠道MDA含量显著低于投喂1次/d组,并且在D1、D2饲料组中,投喂2次/d大口黑鲈肠道CAT、SOD、APK活性显著高于投喂1次/d组(P0.05;图 2c和2e)。2.62.6 肠道形态参数如图 3所示,投喂频率和饲料对大口黑鲈肠道杯状细胞数量的影响存在交互作用。摄食D2饲料并且投喂2次/d大口黑鲈肠道杯状细胞数量显著高于其他各组(P0.05;图 4b)。在不同投喂频率下,摄食D4饲料大口黑鲈肠道绒毛高度、肌层厚度和绒毛表面积显著下降(P0.05;图 4a、4c和4e)。在投喂1次/d和2次/d组中,摄食D2饲料大口黑鲈肠道隐窝深度显著低于摄食D3饲料组(P0.05;图 4d)。表 4 不同实验饲料在不同投喂频率下对大口黑鲈生长与饲料利用的影响Tab.4 Effects on growth and feed utilization of largemouth bass fed with different experimental diets at different feeding frequencies指标Index投喂频率Feedingfrequency(次/d)饲料DietP valueD1D2D3D4投喂频率Feedingfrequency饲料Diet频率饲料FeedingfrequencyDiet初始体重114.210.0614.210.0614.190.0714.210.05IBW1(g)214.240.0614.250.0314.250.0614.230.03414.230.0614.220.0614.230.0314.240.03摄食率11.910.05yAB2.010.07yA1.930.02zAB1.790.07zB0.0010.0240.054FR2(%BW/d)22.040.03y2.170.04y2.180.07y2.170.02y42.260.05xB2.340.04xAB2.490.02xA2.430.08xAB终末体重149.601.56yA50.981.550A45.410.65yB28.390.83yC0.0010.0010.508FBW3(g)254.781.16xA57.402.60A57.403.22xA37.311.77xB454.471.07xA56.922.38A54.172.44xA38.922.19xB特定生长率12.230.06yAB2.280.05A2.080.03yAB1.230.05yC0.0010.0010.177SGR4(%/d)22.400.05xA2.490.08A2.370.09xA1.720.09xB42.430.04xA2.470.08A2.380.08xA1.790.11xB存活率194.000.0086.672.4085.334.6788.001.150.9060.6650.503SR5(%)288.674.0688.671.3390.003.0589.334.05488.002.0088.002.0089.333.5392.001.15饲料系数10.930.02yB0.970.03B1.030.02B1.540.04xA0.010.0010.106FCR620.930.01yB0.990.04B1.030.07B1.330.04yA41.040.02xB1.050.04B1.1370.04B1.490.06xyA蛋白质沉积率135.460.34xA34.853.12A31.692.61AB26.931.77xB0.0310.0010.238PRE7(%)229.961.59yAB31.120.83A29.841.58AB26.151.00 xyB434.100.95xA32.300.88AB31.490.75B21.960.68yC注:结果用均值标准误(n=3)表示;当饲料和投喂频率存在交互作用时(P0.05),同一列上用小写字母(a,b或c所有处理组之间的差异;当饲料和投喂频率不存在交互作用时,用大写字母A和B表示不同饲料间的差异(P0.05),小写字母x和y表示投喂频率间的差异(P0.05);1初始体重IBW(g):Initial body weight;2摄食率FR(%BW/d)=100干物质摄入量/天数(初始体重+终末体重)/2;3终末体重FBW(g):Final body weight;4特定生长率SGR(%/d)=100ln(终末体重)ln(初始体重)/天数;5存活率SR(%)=100终末鱼数/初始鱼数;6饲料系数FCR=饲料摄入量干重/(终末鱼体重+死亡鱼体重初始鱼体重);7蛋白质沉积率PRE(%)=100(鱼体蛋白质沉积量/蛋白摄入量);下同Note:Values are expressed as meanSE of three replicates.Significant differences among all groups are indicated by differentsuperscripts on each column(a,b,or c)(P0.05).The capital superscripts A and B represent significant differences between diets(P0.05);and the letters x and y represent significant differences between feeding frequencies(P0.05);1IBW(g):Initial body weight;2Feed rate(%BW/d)=100dry feed intake/days(IBW+FBW)/2;3FBW(g):Final body weight;4Specific growth rate(%/d)=100ln(FBW)ln(IBW)/days;5Survival rate(%)=100(final number of fish/initial number of fish);6Feed conversion ratio=Feed intake in dry matter/(finalbody weight+dead fish weightinitial body weight)100;7Protein retention efficiency(%)=100(body retained protein/dietary proteinintake);the same applies below1 期罗 涵等:不同投喂频率下复合非粮蛋白源替代鱼粉饲料对大口黑鲈生长性能和健康的影响67在不同饲料组中,投喂2次/d大口黑鲈肠道绒毛高度高于其他频率组,在D2饲料组中,投喂1次/d大口黑鲈肠道肌层厚度和绒毛表面积显著低于投喂2和4次/d组(P0.05)。3 3 讨论 3.13.1 饲料鱼粉替代比例的影响本研究发现,随着饲料中复合蛋白源替代鱼粉比例的提高,大口黑鲈的生长和饲料利用下降,肝脏和肠道的健康下降。饲料中鱼粉的用量可由48%下降至19.2%,60%的饲料鱼粉可被新型蛋白源复合物替代。这一比例和前人利用乙醇梭菌蛋白替代大口黑鲈饲料中鱼粉的结果相近,通过替代,饲料中的鱼粉可降至12.5%21.0%9,2528;而前人利用小球藻替代可将饲料中的鱼粉降至10%31%12,29,30;但利用棉籽浓缩蛋白只能将饲料的鱼粉降至20%38.5%10,3134;黄粉虫粉单独替代,可将饲料的鱼粉降至24.2%37%35,36。本研究中棉籽浓缩蛋白乙醇梭菌蛋白小球藻黄粉虫为8534,采用该配比模式可以使得蛋白源复合物的氨基酸组成更加均衡化,总必需氨基酸含量以及粗蛋白含量与鱼粉更为接近。可见,通过蛋白源的复合,可以提高新型蛋白源在饲料中替代鱼粉的能力。最高替代组大口黑鲈的生长较差可能与其相对较低的必需氨基酸指数(EAAI)有关。在本研究中,随着复合蛋白源替代鱼粉比例的提高,大口黑鲈血浆TG、HDL-C含量下降,ALT活性上升;在低投喂频率时,鱼体脂肪、LDL-C含量表 5 不同实验饲料在不同投喂频率下对大口黑鲈全鱼体成分指标的影响Tab.5 Effects on body composition of largemouth bass fed with different experimental diets at different feeding frequencies(%wetweight;n=6)指标Index投喂频率Feedingfrequency(次/d)饲料DietP valueD1D2D3D4频率Feedingfrequency饲料Diet频率饲料FeedingfrequencyDiet粗蛋白116.040.1315.890.0715.950.1916.050.230.3650.5690.511Crude protein216.360.7317.000.8915.870.3216.160.34415.750.4316.350.0716.380.2516.040.31粗脂肪16.700.14A6.170.15A6.400.23A4.970.16yB0.050.050.067Crude lipid26.760.427.140.516.190.286.790.62x47.160.196.420.477.040.416.210.71xy水分171.820.25B72.640.17AB72.240.99B73.480.47A0.1760.050.252Moisture271.530.1671.340.4572.870.2272.110.10470.980.1671.740.6171.360.3372.871.10灰分13.680.053.620.053.450.033.600.120.5610.0090.390Ash23.800.123.970.113.530.323.370.6943.720.77A3.700.78AB3.570.71AB3.310.18B表 6 不同实验饲料在不同投喂频率下对大口黑鲈形体指标的影响Tab.6 Effects on body indexes of largemouth bass fed with different experimental diets at different feeding frequencies(n=9)指标Index投喂频率Feedingfrequency(次/d)饲料DietP valueD1D2D3D4频率Feedingfrequency饲料Diet频率饲料FeedingfrequencyDiet肥满度12.270.012.25