霉菌酵母菌及空气检测.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,食品中霉菌、酵母菌数的测定,由于遭到霉菌和酵母菌的侵染，食品和粮食常常发生霉坏变质，有些霉菌的有毒代谢产物引起各种急性和慢性中毒，特别是有些霉菌毒素具有强烈的致癌性。实验证明，一次大量食入或长期少量食入，皆能诱发癌症。目前已知的产毒霉菌如青霉、曲霉和镰刀菌。,方法一、霉菌和酵母计数法,霉菌数的测定是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得,1 g,或,1 mL,检样中所得的霉菌落数。,除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：,一、设备和材料,冰箱：,2,5,恒温培养箱：,28 1,均质器,恒温振荡器,显微镜：,10,100,电子天平：感量,0.1 g,无菌锥形瓶,:,容量,500 mL,、,250 mL,无菌广口瓶：,500 mL,无菌吸管：,1 mL(,具,0.01 mL,刻度,),、,10 mL(,具,0.1 mL,刻度,),无菌平皿：直径,90 mm,无菌试管,:10 mm75 mm,无菌牛皮纸袋、塑料袋,加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装后，,121,灭菌,20 min,。倾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。,1,、马铃薯,-,葡萄糖,-,琼脂培养基,二、培养基,马铃薯,(,去皮切块,)300 g,葡萄糖,20.0 g,琼脂,20.0 g,氯霉素,0.1 g,蒸馏水,1000 mL,制法：,将马铃薯去皮切块，加,1000mL,蒸馏水，煮沸,10 min,20 min,。用纱布过滤，补加蒸馏水至,1000 mL,。,上述各成分加入蒸馏水中，加热溶化，补足蒸馏水至,1000 mL,，分装后，,121,灭菌,20 min,。倾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。,2,、孟加拉红培养基,蛋白胨,5.0 g,葡萄糖,10.0 g,磷酸二氢钾,1.0 g,硫酸镁（无水）,0.5 g,琼脂,20.0 g,孟加拉红,0.033 g,氯霉素,0.1 g,蒸馏水,1000 mL,制法：,三、检验程序,检样,处理,稀释,平板分离培养,菌落计数,报告,四、操作步骤,1,、样品的采集,用灭菌工具采集可疑霉变食品,250 g,，装入灭菌容器内送检。,谷物加工制品（包括熟饭、糕点、面包等）、发酵食品、乳及乳制品以及其他液体食品，用灭菌工具采集可疑霉变食品,250g,，装入灭菌容器内送检。,粮食（包括粮库贮粮，粮店或家庭小量存粮）样品的采集，可根据粮囤或粮垛的大小和类型，分层定点取样，一般可分三层五点，或分层随机采取不同点的样品，充分混合后，取,500 g,左右送检。小量存粮可使用金属小勺采取上、中、下各部位的混合样品。,样品的稀释,在制备,10,倍系列稀释样品匀液时，用吸管反复吹吸,5,次,用吸管反复吹吸,50,次，使霉菌孢子充分散开。,根据对样品污染状况的估计，选择,2,个,3,个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），每个稀释度分别吸取,1 mL,样品匀液于,2,个无菌平皿内。,2,、接种,同时分别取,1 mL,样品稀释液加入,2,个无菌平皿作空白对照。,及时将 冷却至,46 ,的马铃薯,-,葡萄糖,-,琼脂或孟加拉红培养基,(,可放置于,461,恒温水浴箱中保温,),倾注平皿，每皿倒,15 mL,20 mL,，并转动平皿使其混合均匀。,3,、倒培养基,4,、培养,待琼脂凝固后，将平板倒置，,281,培养,5d,，观察并记录。,5,、菌落计数,肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位（,CFU,）表示。,霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。,选取菌落数在,10 CFU,150 CFU,的平板。,根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。,菌落数应采用两个平板的平均数。,6,、结果计数,（,1,）计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。,（,2,）若所有平板上菌落数均大于,150 CFU,，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。,（,3,）若所有平板上菌落数均小于,10 CFU,，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。,（,4,）若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于,1,乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于,1,计数。,7,、报告,（,1,）菌落数在,100,以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。,（,2,）菌落数大于或等于,100,时，前,3,位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前,2,位数字，后面用,0,代替位数来表示结果；也可用,10,的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字。,（,3,）称重取样以,CFU/g,为单位报告，体积取样以,CFU/mL,为单位报告，报告或分别报告霉菌和,/,或酵母数。,方法二、霉菌直接镜检计数法,常用的为郝氏霉菌计测法，本方法适用于番茄酱罐头。,1,、设备和材料,折光仪,显微镜,郝氏计测玻片：具有标准计测室的特制玻片,测微器：具标准刻度的玻片,盖玻片,霉菌可以作为一种指示菌，表明加工制品的原料有霉菌所致的腐烂存在。,2,、操作步骤,检样的制备：,取定量检样，加蒸馏水稀释至折光指数为,1.3447,1.3460,（即浓度为,7.9%,8.8%,），备用。,显微镜标准视野的校正：,将显微镜按放大率,90,125,倍调节标准视野，使其直径为,1.382 mm,。,涂片：,洗净郝氏计测玻片，将制好的标准液，用玻璃棒均匀的摊布于计测室，以备观察。,按,100,个视野计，其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数，即为霉菌的视野百分数。,观测：,将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测，一般每一检样观察,50,个视野，同一检样应由两人进行观察。,结果与计算：,在标准视野下，发现有霉菌菌丝其长度超过标准视野（,1.382mm),的,1/6,或三根菌丝总长度超过标准视野的,1/6,（即测微器的一格）时即为阳性（,+,），否则为阴性（,-,）,第一节 空气洁净技术,1.,空气微生物的卫生标准及检测方法,室内空气中细菌总数规定撞击法,4000cfu/m,3,;,沉降法,45cfu/,皿。（,GB/T17093-1997,）,高效过滤器、紫外线消毒，空气熏蒸法（过氧乙酸）,空气检测技术和净化技术,检验环境中空气微生物检测,沉降法检测程序,采样器消毒,-,倒平皿,采样,(30,150L)-,恒温箱,(361,，,48h,）,-,计算菌落数（,cfu/m3,）,根据平板上所生长的菌落数计算出,1m,3,或,1L,空气中的细菌总数。,空气中微生物的测定方法,灭菌培养皿、天平、称量纸、恒温箱、培养基,实验器材,自然沉降法,(1),将肉汤蛋白胨琼脂培养基、查氏琼脂培养基、高氏一号琼脂培养基溶化后，各倒十五个平板，冷凝。,可以同时检测空气中细菌、放线菌和霉菌浓度。,X X,X,X X,测定空气微生物的,5,点采样法,（,2,）在一定面积的房间内，按下图的,5,点所示，每种培养基每个点放三个平板，打开皿盖，暴露于空气中,30,分钟或,60,分钟后盖上盖子。,（,3,）肉膏蛋白胨平板于,37,，倒置培养,1,天；查氏琼脂平板和高氏一号琼脂平板倒置于,28,培养分别培养,2448h,各自计算其菌落数，观察菌落形态、颜色。,（,4,）,计算每,m,3,空气中微生物的数量。,面积为,100cm,2,的平板培养基，暴露在空气中,5,分钟相当于,10,升空气中的细菌数。,奥氏公式：,5,t,100,A,1000,10,N,C=,式中：,C,空气细菌数；,A,捕集面积，,cm2,；,t,暴露时间，,min,；,N,菌落数，个。,计算的浮游细菌数比实测的浮游细菌少。原因是此公式没有考虑尘埃粒子大小、数量、气流情况、人员密度和活动情况。,根据落菌数，记录空气中微生物的种类和相对数量，填写下表，推算出,1m,3,空气中细菌数。,空气微生物的测定结果,例：对火车站候车室进行,5min,检测，皿底直径为,9mm,的平板经,37 24h,后所生长的菌落数为,76,个；请计算火车站候车室空气的微生物浓度，是否超过标准？,公共场所空气微生物标准（,GB,）,9673-1996,公共场所类别,撞击法（,CFU/m,3,）,沉降法（,CFU/m,3,）,商场、书店,7000,75,医院候诊室,4000,40,候车室、候船室,7000,75,候机室,4000,40,室外空气污染：应采取预防为主，防止污染源扩散，控制污水回用和生物固体利用中生物气溶胶的传播，如在污水曝气池上安装隔离塑料膜，改喷灌为滴灌，以减少含菌气溶胶的传播。同时，对再生污水利用前应适当消毒。,室内空气：某些特殊的环境需进行空气净化与消毒，如洁净车间、微生物实验室、病房、外科手术室等。控制室内空气微生物污染常用下述几种方法。,2.,空气的净化与消毒,在洁净车间、微生物实验室等应尽量减少人员的数目和走动，减少开关门的次数，以防止将地面微生物扬起和外界微生物的带入。对表面应进行湿式清扫。被污染的器皿及时灭菌。,控制室内空气微生物污染常用下述几种方法。,(1),控制污染来源,自然对流通风 开窗通风以排除空气中微生物。,湍流通风 效果优于自然通风，但远不及过滤层流通风。,过滤层流通风 过滤器中的过滤介质多为醋酸纤维，空气穿过滤过层，能除去小到,0.3m,的粒子，过滤后的空气沿平行线以均匀速度流动，根据需要可设计成垂直式或水平式层流，可用于微生物操作的超净工作台、洁净病房和手术室。,(2),物理通风法,除菌效果：自然对流通风为,17.4%,，湍流通风为,46.9%,，过滤层流通风为,96.7%,。,(3),紫外线照射法,如紫外光照射的强度和时间得当，紫外光可以杀死几乎所有的传染因子，它更适用于手术室、病房、无菌实验室等处消毒之用。注意定期检测灯管照射强度，并注意人体的防护，防止臭氧污染。,使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需,30W,紫外灯，距离在,1.0m,处，照射时间不少于,30min,，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。,(4),化学消毒剂消毒,常用的空气消毒化学药品有过氧乙酸、过氧化氢、乳酸、三乙烯乙二醇、丙二醇、次氯酸钠、甲醛（福尔马林）等。,过氧乙酸的分解产物是乙酸、过氧化氢、水与氧，这些都对人体无害。其缺点是已稀释的过氧乙酸易分解，宜临用时稀释配制，此外高浓度的过氧乙酸溶液对金属和纺织品有一定的腐蚀作用。,喷雾法消毒,用,5,10,过氧乙酸溶液喷雾，如为,80m,3,的房屋用,100200 mL,，即可达到室内空气及物品表面消毒的目的。消毒后应密闭,lh,，经通风换气后再进入。,应用过氧乙酸消毒空气，通常有两种方式：,熏蒸法消毒,将过氧乙酸水溶液置于耐腐蚀的容器中加热，使其产生过氧乙酸蒸气和水蒸气，使室内空气和物品表面达到消毒目的。过氧乙酸熏蒸用量为,0.751g/m,3,，熏蒸后密闭,lh,。,第二节 水中微生物控制技术,自来水厂常用的方法有：,加氯消毒、臭氧消毒、紫外线消毒和,微电解消毒。,1.,目前最常用的是加氯消毒,-,液氯或漂白粉。,水中加氯后，生成次氯酸（,HOCl,）和次氯酸根（,OCl-,）。两者都有氧化能力，,HOCl,是中性分子，可能扩散到带负电的细菌表面，并渗入细菌体内，借氯原子的氧化作用破坏菌体内的酶，而使细菌死亡，而,OCl-,带负电，难于靠近带负电的细菌，所以虽有氧化能力，但很难起消毒作用。氯加入水中后,一部分被能与氯化合的杂质消耗掉,剩余的部分成为余氯。,(TJ20-76),规定的余氯量只能保证杀死肠道传染病菌,即伤寒、霍乱和细菌性痢疾等几种疾病。一般说，当水的,pH,值为,7,左右，钝化病毒所需的游离性余氯约为杀死一般细菌的,2,20,倍，其用量随病毒的种类而异，并与水温成反比。杀死赤痢阿米巴需游离余氯,3,10mg/L,左右，接触时间,30min,。而杀死炭疽杆菌可能需投加更多的氯。,我国生活饮用水卫生标准,(TJ20-76),规定,氯接触,30min,后,游离性余氯不应低于,0.3mg/L,。集中式给水处理厂的出厂水除符合上述要求外,管网末梢的水的游离性余氯不应低于,0.05mg/L,。,0.05mg/L,余氯这个数字大致相当于,5,万个细菌重量的,1000,倍,所以即使每升水重新繁殖出,5,万个细菌,0.05mg/L,的余氯还足以杀死它们。,干燥空气放电时，部分氧气即转化为臭氧，浓度可达,25mg/L,左右。只能现场制备，不能像液氯那样工业化生产，因此在费用上常高于加氯消毒。,2.,臭氧消毒,优点：,不会造成异臭异味,;,提高溶解氧量,;,氧化有机物等。,缺点：,没有余量，也就没有后续的杀菌能力。,优点：,经过消毒的水化学性质不变，不会产生臭味和有害健康的产物。,缺点：,因悬浮物和有机物干扰杀菌效果和费用较高，所以只适用于少量清水的消毒，如优质水及纯水的消毒。,3.,紫外线消毒（有效波长在,200,300nm,之间）,紫外线穿透的水层深度决定于灯输出的功率（以,mWcm,-2,计）。,消毒机理：,短波射线改变细胞组成，从而促使细胞突变死亡；,紫外线的照射改变核酸分子的结构从而杀死细菌。,微电解,H,2,O,产生活性氧（如,O,2-,、,OH,-,）和,H,+,。,O,2-,和,OH,-,具有强氧化能力，可杀死细菌及藻类。活性氧还可与水中氯离子作用生成,HOC1,，更增强了杀菌能力。活性氧还可氧化水中的,NH,3,和,NO,2-,为,NO,3-,。,4.,微电解消毒,微电解消毒法已应用于优质饮用水的消毒，尤其是桶装饮用水因为细菌数量极少，,H,2,O,2,可起到抑菌和保质作用。也用于高层楼顶上水箱水的消毒和清除管道微生物垢。,H,2,O,2,是活泼的氧化剂，但,H,2,O,2,不是对所有的微生物都起作用，有很多好氧菌和兼性厌氧菌都具有过氧化氢酶，能将,H,2,O,2,分解为,O,2,和,H,2,O,而使之失效。,饮用水中消毒剂常规指标及要求,消毒剂名称,与水接触,时间,出厂水中,限值,出厂水中,余量,管网末梢水中,余量,氯气及游离氯制剂,（游离氯,mg/L,）,至少,30min,4,0.3,0.05,一氯胺,（总氯，,mg/L,）,至少,120min,3,0.5,0.05,臭氧,（,O,3,，,mg/L,）,至少,12min,0.3,0.02,如加氯,总氯,0.05,二氧化氯,（,ClO,2,，,mg/L,）,至少,30min,0.8,0.1,0.02,国家标准：新标准执行时间为,2007,年,7,月,1,日,GB/T5749-2006,中华人民共和国国家标准 生活饮用水标准检验方法,规定生活饮用水中微生物指标及限制为,:,细菌总数（,CFU/mL,）不得超过,100,个；,总大肠菌群（,MPN/100mL,或,CFU/100mL,）不得检出；,耐热大肠菌群（,MPN/100mL,或,CFU/100mL,）不得检出；,大肠埃希氏菌（,MPN/100mL,或,CFU/100mL,）不得检出。,注：,MPN,表示最可能数；,CFU,表示菌落形成单位。当水样检出总大肠菌群时，应进一步检验大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群；水样未检出总大肠菌群，不必检验大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群。,第三节 分质供水,按不同要求提供不同质量的自来水,深度制取的水,用于烹调、饮用等，占每天用水量的,5%,；,一般自来水,用于洗碗、洗菜、洗衣等；,中水,用于冲厕所。,分质供水既是解决水污染问题的需要，又是科技经济发展水平的体现。,一、分质供水方式,1.,管道分质供水,深度处理或优质地下水,独立封闭管道,用户：社区、机关、学校,质量要求：课直接饮用,优点：可有效监控生产过程,可即时监测水质,2.,水厂为用户配装家用净水器,市售家用净水器存在问题：水质针对性差、处理效果不理想、材料更换频繁。,如果水厂为用户提供配套净水器，可以较顺利地选用水处理材料和进出水系统，用于针对性的深度处理。,存在问题：人们认可度、信任度,3.,桶装水,以符合,生活饮用水卫生标准,的水为原料,电渗析法,离子交换法,反渗析法,蒸馏法,其他方法,密闭于容器不含任何添加物可直接饮用的水,特点：基建成本低，但存放过久易造成细菌超标,合适老城区和经济欠发达城市中的居民采用。,二、分质供水的处理技术,传统工艺：,混凝,沉淀,过滤,消毒,去除对象：,悬浮物,胶体物,少量小分子溶解物,病原微生物。,去除对象：,溶解性有机物,重金属离子,氯化消毒副产物,先进方法：,反渗透法膜,缺点：成本较高，去除了有益的矿物质和微量元素,纯净水,普通自来水,根据水源水质分析，和不同地区水质特点采取适宜的处理工艺：,1,、活性炭,作用：去除异味、吸附有机物和固定微生物,部分有机物可被微生物有效降解,对失效的活性炭可以进行再生，多次使用；,净水器中用炭量少，如无再生条件，可以弃去，另换新炭。,经活性炭处理后的水，因炭的粉末、微生物残骸等回产生浊度，需要进行过滤，若选用超滤膜，同时可以起到深度处理的作用。,2,、离子交换树脂,作用：降低水的硬度、去除重金属离子和盐类,阳离子交换树脂,用于去除钙、镁、汞、镉、铅等,阴离子交换树脂,用于去除氟离子、硝酸根离子,两种交换树脂搭配使用时可阴离子、阳离子都除去（成为脱盐）。,在小型净水器中尽量使用交换容量大的树脂，以免失效过快。失效后可进行再生，因此可以反复使用。,实际水处理中常采用离子交换树脂和活性炭组合的工艺。,3,、沸石,作用：降低水的硬度和去除重金属离子、少量有机物。,一般使用前先用,3%,的食盐水溶液进行预处理。,4,、膜,应用最多是有机高分子膜,微滤膜,0.110m,超滤膜,51000nm,纳滤膜,15nm,反渗透膜,0.55nm,大分子有机物,微粒,细菌,病毒,胶体物,蛋白质,500,物质,终端过滤,预处理,脱盐,200,有机物,纯水制备,只许,H,2,O,通过,5,、消毒剂,液氯,副产物的“三致”作用,二氧化氯,杀菌力强，副产物少，高效、广谱、快速,不产生氯酚、氯胺、氯仿等有害物质,二氧化氯和液氯的组合处理工艺可降低成本、保持持续杀菌。,臭氧,杀菌能力大,臭氧与二氧化氯均不稳定，需使用时制备，生产成本都较高。,紫外线,杀菌速度快、管理简单，一般没有副产物。,分质供水系统的原水一般为自来水时，大致的工艺流程如下：,原水,活性炭,过滤,消毒,出水,原水中有机质含量较高时，只有活性炭吸附会使吸附装置的负担过重，使用周期缩短。宜选用臭氧和活性炭的组合工艺。,原水,活性炭,过滤,消毒,出水,臭氧,原水中存在有机物、重金属离子且水的硬度较大时宜采用工艺：,原水,活性炭,过滤,消毒,出水,阳离子交换树脂或浮石,