层层自组装修饰PLGA纳米载体的制备及药物释放.pdf

收稿日期:基金项目:江西省教育厅科学技术研究项目(G J J );江西省中医药管理局科技计划项目(A )通信作者:王沛,助理研究员,E m a i l:n d f s k q y y n c u e d u c n.层层自组装修饰P L G A纳米载体的制备及药物释放郭俊 a,童菲 b,王沛 c,(南昌大学附属口腔医院a 牙体牙髓病科;b 正畸一科;c 中心实验室;江西省口腔生物医学重点实验室;江西省口腔疾病临床医学研究中心,南昌 )摘要:目的利用聚鸟氨酸和岩藻聚糖通过层层自组装技术对P L GA纳米粒进行表面修饰.方法首先采用超声乳化溶剂挥发法制备负载阿霉素的P L GA纳米粒,其中P L G A的二氯甲烷溶液为油相,阿霉素和牛血清白蛋白的水溶液为水相.其次利用静电作用在纳米粒表面层层自组装聚鸟氨酸和岩藻聚糖.最后通过共价键连接核酸适配体A S ,赋予其靶向功能.结果石英微晶天平电压信号的降低以及Z e t a电位正负的翻转均证实聚电解质被成功组装.经透射电子显微镜、核磁共振氢谱、红外光谱、琼脂糖凝胶电泳等检测手段证实A S 被成功修饰.修饰后的P L G A纳米粒的表面,其载药量为(),包封率为(),d的累积释放率约为.结论聚鸟氨酸和岩藻聚糖通过层层自组装技术实现了对P L G A纳米粒的表面修饰,改变了其理化性质,且可有效地缓释药物释放.关键词:层层自组装;靶向;阿霉素;表面修饰;聚鸟氨酸;岩藻聚糖中图分类号:R 文献标志码:A文章编号:()D O I:/j c n k i n c d m 如何有效实现药物的可控与持续释放,以及提高其有效性、降低不良反应,是功能性药物载体所面临的重要挑战.纳米药物载体的表面化学修饰因反应剧烈,且易破坏纳米粒的结构,一直是一个技术难点.层层自组装技术(L a y e r b y l a y e rs e l f a s s e m b l yt e c h n o l o g y,L b L技术)主要利用聚电解质的静电作用进行表面修饰,反应温和、操作简单、可控性强,为纳米载体的功能多样化提供新思路 .近年来,L b L技术在纳米药物载体方面的应用越来越多,L b L纳米药物载体凭借其多功能性和结构的可控性而备受关注 .例如L b L纳米药物载体容易实现化疗和基因治疗的结合,负载功能基团表现出的刺激响应控释,连接靶向基团对癌细胞表现出的靶向性.聚鸟氨酸(P o l y L o r n i t h i n e,P L O)是由L 鸟氨酸组成的聚阳离子,其侧链上有一个伯胺.且P L O是一种低免疫源性的聚阳离子化合物,具有多种生物活性和良好的生物安全性 .岩藻聚糖(F u c o i d a n,F u)是海带等褐藻所固有的细胞间多糖,存在于褐藻细胞壁基质中,是褐藻所特有的生物活性物质.主要由L 岩藻糖组成,并以 ,糖苷键连接,含有大量硫酸酯基团.岩藻聚糖作为聚阴离子具有抗凝血、降血脂、增强机体免疫机能等多种生理活性,以及诱导肿瘤细胞凋亡的能力 .实现靶器官、靶组织或靶细胞等特定的生理位置释放药物,是靶向药物载体的最终目标.纳米药物特异性识别肿瘤细胞有助于提高其在肿瘤部位的滞留量,以减少不良反应和提高疗效 .核仁素是真核细胞核仁中的主要蛋白质,在肿瘤细胞膜表面大量表达,充当多种蛋白质分子的共受体,可以作为肿瘤药物的标记物.核酸适配体是利用指数富集的配体系统进化技术的体外筛选技术,将核酸分子库中得到的寡核苷酸片段,折叠成明确的三维结构,为其与靶分 子 特 异 性 结 合 提 供 基 础 .核 酸 适 配 体(A p t a m e r,A p t)A S 对核仁素具有较高的亲和力,A S 含 有 个 核 苷 酸,能 形 成 稳 定 的G 四链体结构,其序列是 G G T G G T G G T G G T T G T G G T G G T G G T G G .本文选用P L GA纳米粒负载抗肿瘤药物阿霉素(D o x o r u b i c i n,D o x)(P D N P s),然后利用聚鸟氨酸和岩藻聚糖层层自组装P DN P s.并将含有氨基的P L O和含有醛基的CHO P E G C OOH进行醛胺反应形成接枝共聚物,再与氨基修饰的A S 南昌大学学报(医学版)年第 卷第期J o u r n a l o fN a n c h a n gU n i v e r s i t y(M e d i c a lS c i e n c e s),V o l N o 进酰胺反应结合,最后自组装到纳米粒,构建具有靶向功能的层层自组装纳米粒.同时,优化工艺条件,表征纳米粒各项理化性能,使其严格符合给药要求.材料与方法实验试剂P L O(分子量 k D a)购买于西格玛奥德里 奇 试 剂 有 限 公 司;F u c o i d a n(分 子 链 k D a)购买于山东洁晶集团股份有限公司;阿霉素(纯度)购买于大连美伦生物技术有限公司.负载D o x的P L G A纳米粒的制备利用超 声 乳 化 溶 剂 挥 发 法 制 备 负 载D o x的P L GA N P s(P D N P s),将 m g的P L GA溶 于m L二氯甲烷作为油相置于冰浴中,m L的B S A水溶液(即 m g的B S A溶于 m L水)和m g的D o x为水相,用注射器将油相逐滴加入水相中,冰浴下功率 W超声 s,立刻将乳液倒入 m L超纯水中,磁力搅拌h挥发有机相.转、m i n离心 收集纳米粒,超 纯 水 清 洗次,冷冻干燥后冰箱保存.P L O g P E G C O O H共聚物的合成及检测将 m g的P L O溶于m L的p H 的四硼酸钠缓冲液中,使鸟氨酸单体的浓度达到 mm o lL.随后加入 m g的OHC P E G C OOH(Mwk D a).室温下搅拌h,混合物装入截留分子量 k D a的透析袋置于超纯水中透析,每隔 h换次超纯水除去未反应的OHC P E G C OOH,透析时间为d.冷冻干燥后在 下保存.分别 对P L O、CHO P E G C OOH和P L O gP E G C OOH进行核磁共振氢谱(H n u c l e a rm a g n e t i cr e s o n a n c e,H NMR)和 红 外 光 谱(F o u r i e rt r a n s f o r mi n f r a r e ds p e c t r o m e t e r,F T I R)检测.层层自组装P DN P s的制备将m gm L的P L O溶液调节p H为,m gm L岩藻聚糖溶液用 m滤膜过滤后调节p H为.按照纳米粒聚电解质的比例进行层层组装,每层搅拌时间 m i n;组装完一层后,离心得到组装后的纳米粒,再组装下一层.最后一层组装聚电解质为P L O g P E G C OOH,得到层层自组装P DN P s(L P DN P s).核酸适配体A S 的修饰及检测将m gm L的纳米粒在 L的乙 醛(CHCHO)溶液中孵化 m i n封闭掉多余的氨基(NH).水洗遍,然后将纳米粒和 m g的N a B H反应 m i n,减少席夫基团.水洗遍,加入 m g的N 羟 基 琥 珀 酰 亚 胺 以 活 化 羧 基,m i n后加入m L的m gm L的(二甲氨基 丙 基)乙 基 碳 二 亚 胺 盐 酸 盐 和g的A S NH,震 荡 下 反 应 m i n,得 到 修 饰A S 的纳米粒(L A P DN P s).为了 检 测 核 酸 适 配 体A S 连 接 到L P AN P s,通 过 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 检 测.将l o a d i n gb u f f e r(L)和 L样品混合均匀后,分别加入不同的加样孔内,进行电泳.将分散后的纳米粒滴在 目的铜网上,置于真空干燥箱中过夜干燥,然后进行透射电子显微镜(T r a n s m i s s i o ne l e c t r o nm i c r o s c o p e,T EM)来观察纳米粒的形貌.层层自组装过程的监测通过石英微晶天平(Q u a r t zc r y s t a lm i c r o b a l a n c e,Q CM)监测层层自组装的过程.在m o lL的N a C l溶液中建立稳定的基线,石英晶体的电极吸附m gm L的(P L O/F u c o i d a n),每层吸收 m i n,m gm L的P L O g P E G C OOH注入 m i n,m gm L乙 醛(CHCHO),m gm L的NH S和E D C,gm L的A S NH依次泵入,保持 m i n,石英微晶天平记录其变化量.将每次组装后的样品取m g测定其Z e t a电位,以确定每一层是否组装上相应的聚电解质.载药自组装微球对D o x的释放率的测定紫外可见分光光度计在波长 n m的范围内对D o x溶液扫描,判断D o x的最大吸收峰为 n m,并测定D o x在纯水和p H的P B S溶液中的标准曲线,计算载药量和包 封率.将L A P DN P s装入透析袋中,分别置于p H和p H的P B S溶液中,于、转m i n摇床中进行药物释放.每隔、h取样,并加入同体积的P B S溶液.在 n m波长处检测紫外吸收值,计算释放的D o x浓度,绘制药物释放曲线.结果与讨论P DN P s的形貌利用牛血清白蛋白作为表面活性剂,通过超声乳化溶剂挥发法制备了负 载D o x的P L GA N P s(P D N P s),其T EM如 图 A和 B所 示.通 过T EM观察其形貌可以看到P DN P s分散性良好、大小均一、球形度完整,平均粒径为 n m左右.说南昌大学学报(医学版)年 月,第 卷第期明乳化溶剂挥发法不仅操作简单,而且制备得到的样品质量好,牛血清白蛋白作为表面活性剂既能保证纳米粒的稳定性,又能维持其分散性.BAA:较小倍数(s c a l eb a r m);B:较大倍数(s c a l eb a r n m).图P DN P s的形貌(T EM)P L O g P E G C O O H的验证通过核磁共振氢谱和傅立叶红外光谱检测合成的产物,如图 A所示通过H NMR对所得产 物P L O g P E G C OOH结构进行验证,化学位移处为DO的特征峰,化学位移、处为P L O的特征峰,处为P E G的特征峰,在P L O P E G的氢谱图中化学位移都向左发生偏移,且处化学位移变宽,说明P L O g P E G C OOH成功合成.在红外光谱图 B中,P L O g P E G C OOH在波数 c m处有一个强吸收单峰,是 CHO的吸收峰,在P L O和P L O g P E G C OOH中没有出现这样的强吸 收单峰,此 实 验 结 果 表 明P L O和P E G成功结合为接枝共聚物.BA123456789100化学位移/10-61000150020002500200035004000500波数/cm-1A:核磁共振氢谱;B:红外光谱图.图P L O、C H O P E G C O O H、P L O g P E G C O O H的表征检测层层自组装的监测结果为了观察聚电解质静电吸附层层自组装P DN P s的过程,通过石英微晶天平来实时监测,用Z e t a电位检测层层自组装的表面修饰.如图 A所示,首先通入N a C l溶液,依次是组装上的P L O、F u c o i d a n等.为了连接核酸适配体A S ,组装接枝共聚 物P L O g P E G C OOH,加 入 的 乙 醛 溶 液 及NH S和E D S,最后一个是共价结合上的A S .通过观察基线的变化可以看出,每一层都成功组装上了L P DN P s.且每组装一层都没有降低上一层聚电解质的吸附,说明层层自组装的聚电解质层稳定性良好.此外,如图 B所示,由于牛血清白蛋白作为其表面活性剂,故P D N P s的Z e t a电位为负值,约为 mV.P L O为聚阳离子,故组装后的P D P L ON P s的Z e t a电位为正值,实现了电荷的反转.F u c o i d a n为聚阴离子,故组装后的P D(P L O/F u)N P s的Z e t a电位为负值.同样的原理,每组装一层都实现了Z e t a电位的翻转,也说明了聚电解质郭俊等:层层自组装修饰P L GA纳米载体的制备及药物释放成功地层层自组装到P DN P s上.A10 0008000600040002000012 000时间/sBZeta电位/mV6040200-20-40-603.02.52.01.51.00.53.5层数A:石英微晶天平(Q CM)扫描图;B:Z e t a电位检测.图层层自组装过程的监测L A P DN P s的理化性质表征为了进一步确定核酸适配体A S 成功连接到纳米粒上,进行了琼脂糖凝胶电泳检测.如图所示,电泳加样孔中A是核酸适配体A S ,B是纳米粒,C是L P D N P s和A S 的 混 合,D是L P AN P s.A、C和D有荧光,而B没有荧光,因为B中不含有核酸.且A和C的核酸在电泳中的位置相同,而D的核酸位置在加样孔附近,说明通过共价结合的纳米粒和A S 结合牢固,而L P DN P s和A S 简单结合后并不牢固.故聚电解质成功地组装上P L GA纳米粒,且纳米粒和A S 结合牢固.在凝胶电泳电流的作用下,L A P D N P s上的A S 结合牢固,也说明层层自组装纳米粒的稳定性良好,受电流的影响不明显.L A P DN P s的形貌见图,与未组装前的P DN P s相比,其粒径略有增大,平均粒径约为 n m.L A P DN P s呈核壳型结构,粒径大小均一,球形度完整,自组装效果良好.说明通过温和的层层自组装过程并不会改变纳米粒的形态,且最外层修饰上核酸适配体A S 的过程也对纳米粒的形态影响很小.综上,由于静电作用层层自组装温和的表面修饰,故对纳米粒的形貌及理化性质影响很小.A:A S ;B:L PN P s;C:L P DN P s和A S 的混合;D:L A P DN P s.图琼脂糖凝胶电泳结果BAA:较小倍数(s c a l eb a r m);B:较大倍数(s c a l eb a r n m).图载药后的L A P DN P s的形貌(T EM)南昌大学学报(医学版)年 月,第 卷第期L A P DN P s的药物释放根据测定的D o x的标准曲线计算L A P D N P s的载药量及药物释放曲线.如图 A所示,D o x的最大吸收峰在 n m处.图 B所示,D o x在P B S中的标准曲线为:y x ,回归系数R为 ,说明其线性相关性良好.通过D o x的标准曲线,计算L A P D N P s的载药量为(),包 封 率 为().随 后,对L A P DN P s的体外释药行为进行测定,D o x的体外释放情况见图.在模拟生理环境(p H)的条件下,L A P DN P s持续缓慢地释放出D o x,d的释放时间 内,D o x的 累 积 释 放 率 约 为,说 明D o x仍持续地从纳米粒中释出.随着药物的持续释放,自组装层之间的组分减少,可能导致聚电解质之间的静电作用减弱,故造成 h后D o x的释放率显著升高,且释放速率越来越高.L A P DN P s的释药曲线可表明具有良好的药物缓释能力.BA吸光度0.0800700600500400300900波长/nm0.00.51.0吸光度40302010050y=0.018 0 x-0.003R2=0.999 3质量浓度/(gmL-1)1.0A:D o x全波长扫描;B:D o x在p H的P B S中标准曲线.图D o x的性质检测706050403020100600累积释放率/%5004003002001000700时间/h图L A P DN P s中阿霉素释放曲线结论本文构建的L A P DN P s首先利用超声乳化溶剂挥发法制备负载D o x的P L GA纳米粒,其次通过层层自组装技术包裹上聚鸟氨酸和岩藻聚糖,最后连接核酸适配体A S 赋予其靶向功能.超声乳化溶剂挥发法制备的P DN P s大小均一,粒径约为 n m,其Z e t a电位约为 mV,利于聚电解质的负载.通过石英微晶天平观察了其层层自组装过程,每组装一层其基线的变化说明了聚电解质组装成功,且Z e t a电位的正负翻转也证实了这点.此外,合成了接枝共聚物P L O g P E G C OOH,并通过酰胺反应连接靶向基团核酸适配体A S .经核磁共振氢谱和红外光谱验证了聚合物的结构,并通过琼脂糖凝胶色谱检测核酸适配体的成功键接.对载药纳米粒L A P DN P s进行了载药率、包封率和药物释放率的测定,结果显示L A P DN P s具有缓慢释放药物特性.故L A P D N P s通过静电作用的层层自组装技术实现了纳米药物载体的多种功能,这种弱相互作用力结合的形式相对化学键结合更方便且易操作.参考文献:MO R R I S A,S A L EM A S u r f a c eE n g i n e e r e d N a n o p a r t i c l e s:C o n s i d e r a t i o n s f o rB i o m e d i c a lA p p l i c a t i o n sJ A d v a n c e dE n g i n e e r i n gM a t e r i a l s,:D E CHE RGF u z z yn a n o a s s e m b l i e s:t o w a r d l a y e r e dp o l y m e r i cm u l t i c o m p o s i t e sJS c i e n c e,():WAN G Y,C HE NL,HOU R,e ta l R a p a m y c i n l o a d e dn a n o c o a t i n gt os p e c i a l l ym o d u l a t es m o o t hm u s c l ec e l l so nZ E Ba l l o yf o rv a s c u l a rs t e n ta p p l i c a t i o nJ A p p l i e dS u r f a c eS c i e n c e,:B O EHNK EN,C O R R E AS,HAOL,e ta l T h e r a n o s t i c l a y e r b y l a y e rn a n o p a r t i c l e sf o rs i m u l t a n e o u st u m o rd e t e c t i o na n dg e n es i l e n c i n gJ N a n oL e t t e r s,():V A R GH E S E S,KUMA W A T A,GHO R O IC M e s o p o r o u ss i l i c an a n o p a r t i c l e c o r e s h e l lm a t r i x(M S NC S M)e n g i n e e r e db yg r e e na p p r o a c hf o rp Ht r i g g e r e dr e l e a s eo fa n t i c a n c e rd r u g sJ A d v a n c e dP o w e rT e c h n o l o g y,():(下转第 页)郭俊等:层层自组装修饰P L GA纳米载体的制备及药物释放在该群体中的适用性,但从分析结果来看,保留该条目对A P GA R的信效度并未造成明显影响.为便于与其他研究进行比较,仍建议在实际应用中保留“适应度”条目.致谢:感谢华中科技大学王增珍教授及戒毒机构干警对现场调查组织、协调及实施工作的支持!参考文献:Z HAN G Y Z F a m i l yf u n c t i o n i n gi nt h ec o n t e x to fa na d u l tf a m i l ym e m b e rw i t h i l l n e s s:a c o n c e p t a n a l y s i sJJC l i nN u r s,(/):吴芳,刘神毅强制隔离戒毒人员的情感缺失与重构以再社会化理论为视角J中国药物滥用防治杂志,():HUMME LA,S HE L T ONKH,HE RONJ,e t a l As y s t e m a t i cr e v i e wo f t h er e l a t i o n s h i p sb e t w e e nf a m i l yf u n c t i o n i n g,p u b e r t a l t i m i n ga n da d o l e s c e n ts u b s t a n c eu s eJ A d d i c t i o n,():李帅奇家庭功能对甲基苯丙胺滥用者戒毒信心的影响:主观家庭支持与自尊的链式中介效应D武汉:华中科技大学,陈家言药物成瘾记忆量表编制及强制隔离戒毒患者心理干预效果评价D武汉:华中科技大学,X I A Y W,GON G Y,WAN G H B,e ta l F a m i l yf u n c t i o ni m p a c t sr e l a p s et e n d e n c yi ns u b s t a n c eu s ed i s o r d e r:m e d i a t e dt h r o u g hs e l f e s t e e ma n dr e s i l i e n c eJF r o n tP s y c h i a t r y,:S M I L K S T E I N G,A S HWO R TH C,MON T ANO D V a l i d i t ya n dr e l i a b i l i t yo f t h ef a m i l yA P GA Ra sat e s to f f a m i l yf u n c t i o nJJF a mP r a c t,():S OU S A V D,R O J J ANA S R I R A T W T r a n s l a t i o n,a d a p t a t i o na n dv a l i d a t i o no f i n s t r u m e n t s o r s c a l e s f o r u s e i nc r o s s c u l t u r a lh e a l t hc a r er e s e a r c h:ac l e a ra n du s e r f r i e n d l yg u i d e l i n eJJE v a lC l i nP r a c t,():吕繁,曾光,刘松暖,等家庭关怀度指数问卷测量脑血管病病人家庭功能的信度和效度研究J中国公共卫生,():吕繁,曾光,肖勇外伤病人家庭功能测量与分析J疾病监测,():杨婷婷,童叶青,殷晓旭,等 M o r i s k y服药依从性量表、家庭A P GA R问卷在结核病患者中的应用评价J中国社会医学杂志,():L AN D E RL,HOWS A R EJ,B Y R N E M T h ei m p a c to fs u b s t a n c eu s ed i s o r d e r so nf a m i l i e sa n dc h i l d r e n:f r o mt h e o r yt op r a c t i c eJS o cW o r kP u b l i cH e a l t h,(/):吕繁,顾湲家庭A P GA R问卷及其临床应用J国外医学(医院管理分册),():T AK E NAKA H,B AN N T h e m o s ti m p o r t a n tq u e s t i o ni nf a m i l ya p p r o a c h:t h ep o t e n t i a l o f t h e r e s o l v e i t e mo f t h e f a m i l yA P GA Ri nf a m i l ym e d i c i n eJ A s i aP a cF a m M e d,:申 自 力,蔡 太 生 R o s e n b e r g自 尊 量 表 中 文 版 条 目的 处理J中国心理卫生杂志,():何倩,王莹,冯燕,等吸毒患者成功戒毒信心量表的编制和评价J中国临床心理学杂志,():赵铁牛,王泓午,刘桂芬验证性因子分析及应用J中国卫生统计,():陈家言,郑胜利,胡芳,等新型毒品依赖患者社会适应评估量表的初步编制J中国药物依赖性杂志,():GA L NGON Z L E ZE,MA R T N E ZP R E ZG,GA S C N C A T A L NAF a m i l yf u n c t i o n i n ga s s e s s m e n t i n s t r u m e n t s i na d u l t sw i t han o n p s y c h i a t r i c c h r o n i cd i s e a s e:as y s t e m a t i c r e v i e wJ N u r sR e p,():(责任编辑:钟荣梅)(上接第 页)XUX,J I NC,Z HAN GK,e t a l A c t i v a t a b l e“M a t r y o s h k a”n a n o s y s t e md e l i v e r y N g B Rs i R NAa n dc o n t r o ld r u gr e l e a s ef o rs t e p w i s e t h e r a p ya n de v a l u a t ed r u gr e s i s t a n c e c a n c e rJ M a t e r i a l sT o d a yB i o,:C A ID,S H IL,L ON GR,e t a l Ac a r b o x y m e t h y l l e n t i n a nl a y e rb y l a y e r s e l f a s s e m b l ys y s t e ma sap r o m i s i n gd r u gc h e m o t h e r a p e u t i c p l a t f o r mJ C a r b o h y d r a t e P o l y m e r s,:X I ON G Y,S OOMR O S,HUAN G Z,e ta l P o l y L o r n i t h i n eb l o c k s t h e i n h i b i t o r ye f f e c t so f f i b r o n e c t i no no l i g o d e n d r o c y t ed i f f e r e n t i a t i o na n dp r o m o t e sm y e l i nr e p a i rJ N e u r a lR e g e n e r a t i o nR e s e a r c h,():C HO L L E T L,S A B OUR A LP,C HAUV I E R R E C,e ta l F u c o i d a n s i nN a n o m e d i c i n eJ M a r i n eD r u g s,():F I T T ON H,S T R I NG E R D,P A R K A,e ta l T h e r a p i e sf r o mF u c o i d a n:N e w D e v e l o p m e n t sJ M a r i n e D r u g s,():L UL,Z HAN GQ,WAN GZ,e t a l P e p t i d e M o d i f i e dN a n o p a r t i c l e sf o rT u m o rT a r g e t i n ga n d M o l e c u l a rI m a g i n gJ C u r r e n tM e d i c i n a lC h e m i s t r y,():J I AN G H,X uZ H y a l u r o n i c a c i d b a s e dn a n o p a r t i c l e s t od e l i v e rd r u g s t ot h eo c u l a rp o s t e r i o rs e g m e n tJ D r u gD e l i v e r y,():T ONGX,GAL,A IJ,e ta l P r o g r e s s i nc a n c e rd r u gd e l i v e r yb a s e do nA S o r i e n t e dn a n o m a t e r i a l sJJ o u r n a l o fN a n o b i o t e c h n o l o g y,:MEHR N I AS,HA S HEM IB,MOWL AS,e ta l R a d i o s e n s i t i z a t i o no f b r e a s t c a n c e r c e l l s u s i n gA S a p t a m e r c o n j u g a t e dg o l dn a n o p a r t i c l e sJ R a d i a t i o nO n c o l o g y,:L I J,Z HAN GQ,C A I J,e t a l AD o u b l e C h a m b e r“D a n d e l i o n”A p p e a r a n c eS e q u e n t i a lD r u gD e l i v e r yS y s t e mf o rS y n e r g i s t i cT r e a t m e n to fM a l i g n a n tT u m o r sJI n t e r n a t i o n a lJ o u r n a lo fN a n o m e d i c i n e,:(责任编辑:罗芳)南昌大学学报(医学版)年 月,第 卷第期