重组技术的基本工具.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/2/9,#,原理,操作环境,操作对象,操作水平,基本过程,结果,优点,关于基因工程的概念,基因重组,生物体外,基因,/DNA,DNA,分子水平,切割拼接导入表达,创造出人类需要的新的生物类型和生物产品,定向,地改造生物的,遗传性状,1.1 DNA,重组技术的基本工具,“,分子手术刀,”,限制酶,“,分子缝合针,”,DNA,连接酶,“,分子运输车,”,基因进入受体细胞的载体,识别,双链,DNA,分子的某种,特定核苷酸序列,，并且使每一条链中特定部位的,两个核苷酸之间,的,磷酸二酯键,断开。,主要从,_,生物,中分离纯化出来,约,4000,种,1,、来源：,2,、种类：,3,、作用：,一、“分子手术刀”,限制酶,原核,磷酸二酯键,限制酶,识别,双链,DNA,分子的某种,_,，并且使每一条链中特定部位的,两个核苷酸之间,的,_,断开。,主要从,_,生物,中分离纯化出来,约,4000,种,1,、来源：,2,、种类：,3,、作用：,4,、结果：,产生,_,末端或,_,末端,一、“分子手术刀”,限制性核酸内切酶,原核,特定的核苷酸序列,磷酸二酯键,黏性,平,什么叫黏性末端？,当限制酶,从识别序列的,中心轴线两侧切开时,，,被限制酶切开的,DNA,两条单链的切口，带有几个,伸出的核苷酸,，他们之间正好,互补配对,，这样的切口叫,黏性末端,。,什么叫平末端？,当限制酶,从识别序列的,中心轴线处切开时,，,切开的,DNA,两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫,平末端,。,1,、种类：,2,、作用：,两类,E,coli DNA,连接酶,T,4,DNA,连接酶,将双链,DNA,片段,“,缝合”起来，恢复被,限制酶切开的两个核苷,酸,之间的,磷酸二酯键,二、,分子缝合针,DNA,连接酶,可把双链,DNA,片段,互补的黏性末端,之间连接起来,Ecoli DNA,连接酶或,T,4,DNA,连接酶,G,C,T T,A A,C C,G G,C,G,G,C,T T,A A,T T,A A,C,G,T,4,DNA,连接酶,还可把,平末端之间“缝合”,起来，但效率较低,T,4,DNA,连接酶,以下是两种限制酶切割后形成的,DNA,片段，试分析：,GC,AATTC,GC ,CTTAA,CG,G,CG,G,(1),其中和,是由一种限制酶切割形成的,末端，两者要重组成一个,DNA,分子，所用,DNA,连接酶通常是,。,（,2,）,和,是由另一种限制酶切割形成的,末端，两者要形成重组,DNA,片段，所用的连接酶通常是,。,反馈练习：,基因的针线：,DNA,连接酶,G,A A,T T,C,C,T T,A A,G,G,A A,T T,C,C,T T,A A,G,G,C,T T,A A,A A,T T,C,G,G,C,T T,A A,A A,T T,C,G,G,C,T T,A A,A A,T T,C,G,用同种限制酶切割,DNA,聚合酶,DNA,连接酶,作用过程,是否需要模板,连接的,DNA,链,相同点,DNA,连接酶与,DNA,聚合酶是一回事吗,?,为什么,?,只能将,单个核苷酸,连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键,形成磷酸二酯键,在,两个,DNA,片段,之间形成磷酸二酯键,以一条,DNA,链为模板,不需要模板,用于,DNA,复制,用于基因工程,三、基因进入受体细胞的载体,分子运输车,为什么质粒可以作为基因工程的载体？,有一个至多个限制酶切割位点,有特殊的标记基因，,供重组,DNA,的鉴定和选择,有复制原点，可以进行自我复制,质粒,是基因工程常用的载体，一种,裸露的、结构简单、独立于细菌拟核,DNA,之外,，能,自我复制,的,很小的双链环状,DNA,分子,。,作为载体的条件,1.,有一个至多个限制酶切割位点,2.,能自我复制,3.,有标记基因,4.,对受体细胞无害、分子大小适合,其他的载体,噬菌体衍生物、动植物病毒等,进行基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。,