采用不同血清学检测方法对猪蓝耳病免疫效果调查.pdf

卷第 期青海畜牧兽医杂志 /收稿日期:作者简介:张 成()兽医师主要从事畜牧兽医工作采用不同血清学检测方法对猪蓝耳病免疫效果调查张 成钟卫东赵 婧李生福(民和县畜牧兽医站青海 民和)摘 要:本文采用猪蓝耳病通用型抗体 检测法和猪蓝耳病通用型抗体快速检测卡检测法(胶体金法)对 份已免高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征苗的猪血样进行免疫抗体检测 结果显示采用 检测法检测的猪蓝耳病免疫抗体阳性率为 用胶体金法检测的猪蓝耳病免疫抗体阳性率为 二者相比阳性符合率高()即胶体金法抗体滴度大于 以上者在 法检测中为阳性阴性符合率低即胶体金法抗体滴度大于 小于 之间者在 法检测中也为阳性只有小于 者 种方法检测结果都为阴性 胶体金法简单快速易操作可用于乡镇畜牧兽医站或养殖场的自行检测关键词:猪蓝耳病抗体 试验胶体金法中图分类号:文献标识码:文章编号:()猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒引起的以厌食、发热、怀孕后期发生流产、早产、产出死胎和木乃伊及仔猪呈呼吸道疾病为特征的高度接触性传染病 根据临床表现可分为经典性猪蓝耳病和高致病性猪蓝耳病 高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒变异株引起的急性高致死性传染病仔猪发病率可达 死亡率达 以上母猪流产率可达 该病自 年 月首次在我国南方发生后迅速蔓延至全国各养猪区对我国养猪业造成了很大冲击和经济损失 为此世界动物卫生组织将其列为法定报告的动物疫病我国将其列为一类动物疫病采取严格防疫措施控制疫情实施春秋两季集中免疫月月补针的防控策略并开展防疫效果监测及风险评估确保防疫效果达标 经过多年的预防控制民和县猪蓝耳病防控工作取得了显著成果十多年来没有发生该病 同时我们采用不同检测方法(猪蓝耳病病毒抗体快速检测卡、猪蓝耳病病毒抗体正向间接血凝试验、猪蓝耳病病毒抗体 检测法)开展防疫效果监测掌握抗体效价制定防控措施确保生猪生产安全 材料 猪血清用高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征苗批号:生产日期 有效期:由新疆天康生物股份有限公司生产 采集免疫 后的耳静脉血液分离血清置 冰箱保存待检 诊断液 猪蓝耳病通用型抗体检测 试剂盒批号:有效期 年由深圳市康百得生物科技有限公司生产 猪蓝耳病通用型抗体快速检测卡批号:有效期:(个月)由深圳市康百得生物科技有限公司生产 仪器设备恒温培养箱、酶标仪、洗板机、移液器、移液槽、移液嘴等 年第 卷第 期(总第 期)青海畜牧兽医杂志 方法对同一份样品采用猪蓝耳病通用型抗体 检测法和猪蓝耳病病毒抗体胶体金法进行检测 猪蓝耳病通用型抗体 检测法按国标/执行具体操作步骤按试剂盒说明书进行 洗涤液配制用纯净水将洗涤液 按 稀释充分混匀即为工作浓度洗涤液 样品稀释及加样用样品稀释液将待检样品按 稀释在样品孔每孔加入已稀释的待检样品 加对照品设阳性、阴性对照孔各 孔每孔加入 阳性、阴性血清 盖好封板模在条件下避光反应 洗板 甩去孔内液体每孔注满工作浓度的洗涤液洗涤 次每次停留 最后 次甩净拍干 加酶反应 每孔加酶标结合物 盖好封板模在 条件下避光反应 按 步骤洗板 显色反应按所需用量取等体积底物液和显色液充分混匀每孔加入 盖好封板膜在条件下避光反应 终止反应 加终止液 用酶标仪双波长(作为主波长 作为参比波长)读取 值 结果计算/样品 值/阳性对照平均 值 当/判为猪蓝耳病病毒抗体阳性/判为猪蓝耳病病毒抗体阴性 猪蓝耳病通用型抗体胶体金法按国标/执行具体步骤按试剂盒说明书操作 将检测卡平衡至室温后从铝箔袋中取出水平放置并做好标记 在检测卡的加样孔内加入 滴()待检血清 室温下静置 内判定结果超过 的结果作为参考 结果判定 稀释度 为阳性稀释度 为阴性(见图、图)病毒抗体快速检测卡 结果 猪蓝耳病病毒抗体 检测猪血清 份从中检出阳性血清 份阴性血清 份阳性率为 猪蓝耳病病毒抗体快速检测卡检测血清 份从中检出阳性 份阴性血清 份阳性率为 (见表)图 猪蓝耳病抗体快速检测判定标准卡 图 猪蓝耳病抗体快速检测卡 卷第 期青海畜牧兽医杂志 /表 不同滴度下猪蓝耳病病毒抗体 和快速检测卡检测结果稀释度 结果(份)分析与建议 采用猪蓝耳病通用型抗体 检测法与猪蓝耳病通用型抗体胶体金法两种检测方法检出的阳性结果符合率为 但阴性结果符合率低即胶体金法抗体滴度大于 、小于 者在 法检测中为阳性只有小于 者 种方法检测结果都为阴性造成检测结果不一致 用胶体金法检测猪蓝耳病方法简单快速易操作可用于乡镇畜牧兽医站或养殖场的自行检测 胶体金法抗体滴度大于 、小于 者在 法检测中为阳性是否与 种方法待检样品稀释度不同、原理不同有关?建议统一稀释度如口蹄疫病毒 型抗体检测 试剂盒和口蹄疫病毒 型抗体快速检测卡 种方法的判定标准相统一(牛羊口蹄疫病毒 型免疫抗体大于 为阳性猪口蹄疫病毒 型免疫抗体大于 为阳性)参考文献:杨毅青 青海省主要动物疫病流行病学调查(年)北京:中国农业出版社():.中国标准出版社第一编辑室 动物防疫卷(上).北京:中国标准出版社.宋忠旭 胶体金免疫层析试纸条与 检测猪蓝耳病抗体的对比试验.猪业科学():.(上接第 页)魏春华夏伟李娜等.福建省谱系 的分离及其 基因序列分析.中国兽医杂志():张新月庞明张煜琛等.猪流行性腹泻病毒陕西地方株的分离鉴定及序列分析.动物医学进展():史秋颖段宝敏李颖等.年中国部分地区猪流行性腹泻病毒 基因遗传变异分析.中国畜牧兽医():杨克礼陈文杰郭锐等.与 混合感染的实验室检测 江西农业学报():刘京赵雪王云霄等.猪流行性腹泻病毒与产硫化氢大肠杆菌混合感染的实验室诊断.中国兽医杂志():