阿魏酸钠通过miR-216b-3p_Nrf2通路减轻缺氧缺血胚胎大鼠氧化应激反应.pdf

神经解剖学杂志2023,39(5):529 536Chinese Journal of Neuroanatomy阿魏酸钠通过miR-216b-3p/Nrf2通路减轻缺氧缺血胚胎大鼠氧化应激反应黄一伟12，部萌，牟宸希，徐伟靖”，孙逊，陈天浩，徐辉1,2*（佳木斯大学：1.基础医学院；2.微生态-免疫调节网络与相关疾病重点实验室；3公共卫生学院，佳木斯1540 0 7）摘要】目的:探究阿魏酸钠(SF)通过miR-216b-3p/Nrf2 通路对缺氧缺血性脑病(HIE)胚胎大鼠大脑的干预作用以及减轻氧化应激损伤的作用机制。方法：将成年雌性SD大鼠和雄鼠，按照3:1比例合笼获得怀孕的雌鼠。然后将孕鼠分为假手术组（sham）、缺氧缺血性脑病模型组（HIE）、SF低剂量组（HIE+SF-L）和SF高剂量组(HIE+SF-H)。通过无创止血钳夹闭子宫两侧动脉和卵巢血管法制备胚胎大鼠HIE模型。SF治疗组腹膜腔注射SF。采用HE染色观察胚胎大鼠大脑皮质的病理变化；免疫荧光观察核因子红细胞系2 相关因子2（Nr f 2）、过氧化还原酶1（PRDX1)的表达情况；WestermBlot检测胚胎大鼠脑组织中Nrf2和PRDX1蛋白的表达；real timeRT-PCR检测miR-216b-3p的表达以及Nrf2和PRDX1的mRNA表达；WST-8法和TBA法检测脑组织中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果：与sham组对比,HIE组胚胎大鼠的大脑损伤加重，病理改变明显;HIE组中Nrf2蛋白表达和mRNA水平降低（P0.05）,PR D X1的蛋白水平和mRNA水平显著上调（P0.05）,mi R-2 16 b-3p 表达水平显著升高（P0.05）；并且Nrf2的平均荧光强度显著降低（P0.05），PRDX1的平均荧光强度显著增加（P0.05）;SO D 活性显著下调,MDA含量显著增加（P0.05）。与HIE组对比,各剂量SF组的大脑皮质病理结构明显改善,脑损伤减轻;Nrf2和PRDX1的蛋白表达、mRNA水平以及平均荧光强度均显著上升（P0.05）;mi R-2 16 b-3p 表达水平均显著下调，以SF高剂量组下调最为显著（P0.05）；并且SOD活性显著上调,MDA含量显著下调（P0.05）。结论：SF通过miR-216b-3p/Nrf2信号通路在HIE的发生发展过程中发挥重要作用,并减轻胚胎大鼠受到的氧化应激损伤。【关键词阿魏酸钠；缺氧缺血性脑病；氧化应激；核转录因子红系2 相关因子2；过氧化物还原蛋白1；大鼠D0I;10.16557/ki.1000-7547.2023.05.005Sodium ferulate attenuates oxidative stress reaction via miR-216b-3p/Nrf2pathway in hypoxic-ischemi embryonic ratsHUANG Yiwei-,GAO Meng,MU Chenxi,XU Wejing,SUN Xu,CHEN Tianhao,XU Huil.2*(Jiamusi University:1.School of Basic Medicine;2.Key Laboratory of Microecology-Immune RegulationNetwork and Related Diseases;3.College of Public Health,Jiamusi 154007,China)Abstract Objective:To Investigate the interventional effects of sodium ferulate(SF)on the brain of hypoxic-ischemic encephalopathy(HIE)embryonic rats via miR-216b-3p/Nrf2 pathway and the mechanism of action of SF inreducing oxidative stress damage.Method:Adult female SD rats and male rats were caged together in a 3:1 ratio toobtain Pregnant female rats.The pregnant rats were then divided into sham group(sham),model group(HIE),SF low-dose group(HIE+SF-L)and an SF high-dose group(HIE+SF-H).The HIE model was prepared by non-invasivehemostatic forceps clamping the arteries on both sides of the uterus and the ovarian vessels.SF was injected intraperito-neally into the SF treatment group.HE staining was used to observe the pathological changes in the cerebral cortex of基金项目：黑龙江省教育厅基本科研业务费基础研究项目（2 0 19-KYYWF-1337）*通信作者：徐辉电话：1394546 590 3，E-mail：x u h u i 197 8 2 0 0 3 16 3.c o m530embryonic rats;immunofluorescence was used to observe the expression of nuclear factor-erythroid 2-related factor 2(Nr2),and peroxiredoxin 1(PRDX1);Western Blot detection of Nrf2,and PRDX1 protein expression in embryonicrat brain tissue;real time RT-PCR to detect the expression of miR-216b-3p and the mRNA expression of Nrf2 andPRDXI;determination of superoxide dismutase(SOD)activity and malondialdehyde(MDA)content in brain tissue byWST-8 and TBA methods.Results:Compared with the Sham group,the embryonic rats in the HIE group showed in-creased brain damage and significant pathological changes;Nrf2 was significantly down-regulated in protein level andmRNA level in the HIE group(P0.05),PRDX1 was significantly up-regulated in protein level and mRNA level(P0.05),and miR-216b-3p expression levels were significantly increased(P0.05);and the average fluorescenceintensity of Nrf2 was significantly decreased(P0.05)and the mean fluorescence intensity of PRDX1 was significantlyincreased(P0.05);SOD activity was significantly down-regulated and MDA content was significantly increased(P0.05).Compared with the HIE group,the cortical pathological structure was significantly improved and brain damagewas reduced in the SF group at all doses;and protein expression,mRNA levels and mean fluorescence intensity of Nrf2and PRDX1 were significantly increased(P0.05);miR-216b-3p expression levels were significantly down-regulated,with the most significant down-regulation in the SF high-dose group(P0.05);And SOD activity was significantly up-regulation and MDA content was significantly down-regulation(P0.05).Conclusion:SF plays an important role inthe development of HIE through miR-216b-3p/Nrf2 signaling pathway and reduces oxidative stress damage in embryonicrats.Key words s缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopa-thy,HIE)是新生儿受到围产期室息后由于脑部血氧输送障碍，引发的一种不可逆的缺氧缺血性脑损伤。宫内窘迫是导致新生儿缺氧缺血性脑损伤的主要原因，是指胎儿宫内缺氧导致胎儿酸中毒、神经系统受损，严重时出现后遗症甚至胎儿死亡2.3OHIE发生后，由于机体受到缺氧/缺血应激,细胞受损引发不同miRNA表达的失调,造成神经元永久损伤4。一些miRNA被认为是缺氧条件下的损伤因子,能促进细胞炎症、线粒体功能障碍、氧化应激和凋亡5。它们能够调节靶蛋白的合成,miRNA-mRNA信号通路成为限制脑缺血事件后神经元损伤的一种可能的治疗策略。核转录因子红系2 相关因子 2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)在缺氧缺血性脑损伤中的作用受到广泛关注6,7 。相关研究显示氧化应激发生后,Nrf2 从胞质穿过核膜进人细胞核,与核内的小Maf 蛋白(small Maf pro-teins，s M a f)形成异源二聚体,再与抗氧化反应元件（a n t i o x i d a n t r e s p o n s e e l e m e n t，A R E）相互结合能激活下游抗氧化基因血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、过氧化物还原酶1(peroxiredoxin1,PRDX1)的转录8 。阿魏酸钠（sodium ferulate,SF）是一种抗氧化药物,它具有酚羟结构,在氧化应激反应中发挥重要的抗氧化作用9。然而,SF抑制HIE发生后的氧化应神经解剖学杂志，2 0 2 3年9月第39卷第5期sodium ferulate(SF);hypoxic-ischemic encephalopathy(HIE);oxidative stress;nuclear factor-ery-throid 2-related factor 2(Nrf2);peroxiredoxin 1(PRDX1);rat1.1实验动物SPF级SD大鼠共15只购于辽宁长生生物技术股份有限公司，在佳木斯大学实验动物中心进行适应性饲养和取材实验，其中雌鼠10只,雄鼠5只，初始体重在18 0 2 2 0 g，无交配史。实验单位使用许可证编号：SYXK（黑）2 0 2 1-0 18。实验程序获得佳木斯大学伦理委员会批准。1.2药品、试剂和仪器阿魏酸钠粉末（纯度：98%）购自上海源叶公司。苏木精-伊红染色试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司，兔抗Nrf2多克隆抗体、兔抗PRDX1多克隆抗体、兔抗GAPDH多克隆抗体均购自北京博奥森生物技术有限公司，辣根过氧化物酶（horseradishperoxidase，H R P）标记羊抗兔多克隆二抗购自武汉博士德生物工程有限公司，RIPA裂解液购自大连美仑生物技术有限公司，miR-cute miRNA提取分离试剂盒和miRNA cDNA第一链合成试剂盒、miRNA荧光定量试剂盒均购自天根生化科技(北京)有限公司,U6引物购自生工生物工激反应的作用机制暂不明确,本研究基于miR-216b-3p/Nrf2通路探究胚胎大鼠发生宫内窘迫前施加SF干预,对胚胎大鼠大脑的保护作用及 SF的抗氧化应激损伤的作用机制。材料与方法1.材料黄一伟：阿魏酸钠通过miR-216b-3p/Nrf2通路减轻缺氧缺血胚胎大鼠氧化应激反应程（上海）股份有限公司，miR-216b-3p引物购自北京睿博兴科生物技术有限公司,总RNA提取试剂和SOD试剂盒均购自合肥白鲨生物Nrf2、PR D X1和GAPDH引物均购自生工生物工程（上海）股份有限公司,MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所，反转录试剂盒和qPCRMasterMix试剂盒均购自赛文创新（北京)生物科技有限公司。反转录PCR仪和转印电泳仪均购自美国Bio-Rad公司，荧光定量PCR扩增仪购自美国应用生物系统公司,多功能酶标仪购自美国BioTek仪器有限公司,蛋白电泳仪购自北京六一生物科技有限公司，荧光显微镜购自德国Leica公司，超微量分光光度仪购自美国Ther-moFisher科技公司。2.方法2.1模型制备参考国内外文献中的造模方法10.11,术前 10 12 h 将妊娠 19 d 的雌鼠单独隔离并禁食，正式手术前应安抚孕鼠，尽量减少应激反应。采用戊巴比妥钠35mg/kg腹膜腔麻醉,将其四肢固定于手术台上。用剪刀行正中切口沿腹部中线逐层剪开肌肤，打开腹腔暴露出子宫及卵巢血管。用两个无创止血钳分别钳夹两侧子宫动脉和卵巢血管并计时,使胚胎大鼠发生宫内窘迫。10 min后去除止血钳夹恢复子宫的血流供给。用碘伏消毒腹部切口部位，将子宫和腹腔器官放回，并用2-0 号缝合线逐层缝合腹部伤口，最后再用碘伏消毒表面缝合好的伤口,待苏醒后放回笼中单独饲养。关腹6 h后，麻醉孕鼠，按照原切口逐层剪开，暴露出子宫，可以观察到胚胎大鼠脐带血管及子宫动脉内血流清晰视为造模成功,取胚胎大鼠的脑组织保存于液氮中。2.2分组给药将孕19 d的雌鼠,按处理方式不同编号后分为sham组、HIE组、HIE+SF-L组和HIE+SF-H组,每组3 只。sham 组和 HIE组于相同时间注射等量的生理盐水。HIE+SF-L组和HIE+SF-H组于怀孕12 d起,开始腹腔注射2 5mg/kg和100 mg/kg的 SF,为期一周直至术前30 min 注射最后一次。2.3HE染色含4%多聚甲醛的磷酸缓冲液固定脑组织2 4h后，进行脱水、包埋、切片等操作，厚度为4 m。然后于6 5条件下烤片,二甲苯和酒精脱蜡，再用苏木精溶液染色，三蒸水洗涤后经盐酸分化,氨水反蓝,用伊红溶液染色,再用无水乙醇和二甲苯脱水,最后中性树胶封片，于光学显微镜下观察大脑病理形态并拍摄图像。2.4生物信息学预测靶基因531miRDB和miRanda数据库,预测miR-216b-3p的下游靶基因。2.5Western Blot称取10 0 mg左右的脑组织用RIPA裂解液提取总蛋白,用BCA试剂盒定量蛋白。蛋白样品加人5上样缓冲液在99下煮沸使之变性。随后进行 SDS-PAGE凝胶电泳、转印操作,转膜完毕用5%脱脂牛奶在室温下封闭1h，稀释一抗（兔抗Nrf2多克隆为1:50 0；兔抗PRDX1多克隆为1:800)并在4下孵育过夜，次日回收一抗并用TBST洗膜30 min,在37 孵育辣根过氧化氢酶标记的羊抗兔IgG二抗（稀释比例为1:10 0 0 0)2 h,TBST洗膜30 min，上机曝光并拷贝图片。利用ImageJ软件中计算条带灰度值，目的蛋白的条带参照内参蛋白进行归一化处理,并分析出目的白的表达量。2.6?real time RT-PCR按照说明书提取总RNA和miRNA，测定RNA浓度和纯度，纯度参照A260/280比值在1.8 2.0 之间。用反转录试剂盒合成对应的cDNA,将反应体系各成分依次加入至0.1 mL的八连管中,扣紧上盖。在离心机上混匀，上机检测，待反应结束后拷贝CT值进行分析。对数据进行相对定量分析，遵循2-AC方法。2.7免疫组织荧光染色石蜡切片经过烤片、脱蜡和灭活操作后,置于枸缘酸钠溶液中高温加热进行抗原修复，PBS洗涤后进行透膜封闭操作。按照比例稀释Nrf2 和PRDX1,加人一抗（兔抗来源 Nrf2 为1:500;兔抗来源PRDX1为1:2 0 0）孵育4过夜；然后洗涤孵育DyLight标记的羊抗兔（H+L）二抗（稀释比例为1:30 0），用抗荧光淬灭封片剂避光封片，最后用荧光显微镜拍摄图像并保存，所有图像批量采用相同伽马值并用ImageJ软件分析平均荧光强度。2.8氧化应激指标检测采用WST-8法和TBA法检测超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SO D）活性和丙二醛（malondialdehyde，M D A）含量，按照试剂盒说明书提取组织样品并稀释，在9 6 孔板上，依次加人样品和其余试剂并混匀，用酶标仪测定OD值。其中，SOD保存450 nm处的OD值，MDA保存532nm处的 OD 值。2.9统计学分析所有实验数据导人SPSS21.0软件中进行数据分析,数据用平均值标准差（s)表示,数据符合正态分布且方差齐性者多组数据的组间差异采用单因素方差分析（one-wayANOVA）处理，多组间两两比较采用LSD-t检验。当P0.05使用 Targetscan、认为组间差异显著,具有统计学意义。网状结构。而给予不同剂量的SF干预治疗可减轻5321.阿魏酸钠改善胚胎大鼠皮质病理损伤HE染色结果显示：HIE组的大脑皮质对比sham组已出现严重病理学损伤,表现为细胞排列紊乱,细胞核产生皱缩且核染加深，神经纤维受损出现Sham神经解剖学杂志，2 0 2 3年9月第39卷第5期结果HIE胚胎大鼠大脑皮质的病理学损伤，并恢复至接近sham 组的病理形态。HIE+SF-H 组脑组织的病理改变较HIE+SF-L组更佳，表现为大脑皮质细胞排列相对紧密有序,空泡网状结构显著减少。以上结果显示,SF 能改善HIE 胚胎大鼠的大脑皮质的病理结构,并随着SF剂量的增加,改善效果越明显（Fig.1)。HIE+SF-LHIE+SF-HFig.1 Histopathological morphology in the cerebral cortex of embryonic rats.Bar=30 m.2.生物信息学确定核转录因子红系2 相关因子2 为miR-216b-3p的靶基因Targetscan、m i R a n d a 和 miRDB 预测出的结果显示miR-216b-3p靶向调控Nrf2（NFE2 L2），且miRan-Position 230-237ofNFE223UTRS.GCUAGUCUGUG-UAGUGUA.mo-miR-216b-3pAMicroRNA and Target Gene Description:miRNANameTargetScoreNCBIGeneIDGeneSymbolGeneDescription3UTRSequencel gttcgggagg atggagcctt ttctgagcta gtgtttgttt tgtacggcta aaacttccta6i ctgtgatgtg aaatgcagaa acactttata agtaactatg cagaattata gccaaagcta121gtgtagaaataatatgaaac tttacaaagc attaaagtct caatgttgaa tcagtttcat181tttaactcte241actacagaac301gctaaaagca aactattgaa aactaaccaa accactatac ttttttatat actgtatgaa361caagaaatgaBcatttttata ttaaattgtt tagctctgat aaaaattaaa aggagctagc421actaataaaggaatatcatgacttFig.2 Bioinformatics predicts miR-216b-3p may target and regulate Nrf2(NFE2L2).A:Targetscan 8.0 database prediction results.B:miRDB database prediction results.3.阿魏酸钠显著提高缺氧缺血性脑病胚胎大鼠Nrf2和PRDX1蛋白表达量与 sham 组相比,HIE 组的 Nrf2 蛋白表达显著下降(P0.05），而PRDX1表达量显著上调（Pda预测结果显示序列匹配评分为155,最小自由能为-16.6 kcal/mol。可以推测miR-216b-3p 可能与Nrf2 的3-UTR序列结合(Fig.2)。Predicted consequential pairing of target region(top)andsiteContext+miRNA(bottom)typeI8merUUAGAGAUGUCALUCACACrno-miR-216b-3pmiRNASequence8283619Nfe212nuclearfactor,erythroid2-like2aagttaatttcttgggcaceatttgggctagtttctgtgt aagtgtaaatttatttatactgttctcatt tgttacagtc atagacttat atgacatctgContext+scorescorepercentile-0.2898CACACUUACUUGUAGAGAUUSeed Location230GenBankAccessionNM0317893UTRLength0.05）。给予SF干预后,HIE+SF-L组的Nrf2和PRDX1表达量相比较于HIE组均上调（P0.05）；与HIE+SF-L组相比,HIE+SF-H组的Nrf2和PRDX1蛋白表达量均显著上调（P0.05,Fig.3）。Weightedcontext+score-0.28444Conservedbranchlength0PCTN/A黄一伟：阿魏酸钠通过miR-216b-3p/Nrf2通路减轻缺氧缺血胚胎大鼠氧化应激反应533bcbPRDX11.5r-Nrf2ShamHIEHIE+SF-LHIE+SF-HPRDXINf2GAPDHA工1.0F23 kDa110kDa36kDaB0.50.0ShamaHIE+SF-LFig.3 The protein expression of Nrf2 and PRDX1 in the brain of embryonic rats.A:Schematic diagram of Western Blot.B:Semi-quantitative analysis of Nrf2 and PRDX1 expression.P0.05 us Sham group;bP0.05 us HIE group;P0.05 us HIE+SF-L group.4.阿魏酸钠改变胚胎大鼠miR-216b-3p、核转录因子红系2 相关因子2 和过氧化物还原蛋白1mRNA的表达与 sham组相比,HIE组miR-216b-3p的表达显著上调(P0.05）,而给予 SF治疗后,对比HIE组，HIE+SF-L组和HIE+SF-H组的miR-216b-3p表达均显著下降(P0.05）。与 sham组相比,HIE组的Nrf2 mRNA水平显著降低(P0.05）,PR D X1m R NA显著上调（P0.05）。与HIE组相比,HIE+SF-L组的 Nrf2 mRNA表达显著上调，（P0.05）,PR D X1mRNA 也显著上调（P0.05）,与HIE+SF-L组相比,HIE+SF-H组的 Nrf2和PRDX1 mRNA表达水平均显著上调(P0.05,Fig.4)。2.0r1.51.00.5F0.0ASham2.0m1.5b1.0bc0.5F0.0HIEBSham3.0rbc2.01.00.0CShamHIEHIE+SF-HFig.4 The expression of miR-216b-3p and mRNA in the brain of embryonic rats.A:The relative expression of miR-216b-3p.B:Therelative expression of Nrf2 mRNA.C:The relative expression of PRDX1 mRNA.P0.05 us Sham group;bP0.05 us HIEgroup;P0.05 us HIE+SF-L group.5.阿魏酸钠显著提高胚胎大鼠核转录因子红系2 相关因子2 和过氧化物还原蛋白1平均荧光强度与 sham 组相比,HIE 组的 Nrf2 平均荧光强度降低(P0.05）,PR D X1平均荧光强度增加（P0.05）;在给予不同剂量的 SF干预治疗后,HIE+SF-L组的 Nrf2和 PRDX1的平均荧光强度对比 HIE组均显著增加（P0.05）,H I E+SF-H 组的Nrf2荧光强度也显著增加（P0.05）,平均荧光强度随着SF剂量的增加呈上升趋势（Fig.5,Fig.6）。6.阿魏酸钠抑制胚胎大鼠氧化应激水平与 sham组相比,HIE组的MDA含量显著上调(P0.05）,SO D 活性显著下调(P0.05）。与HIE组相比,HIE+SF-L组的MDA含量显著下调（P0.05),SOD活性显著上升(P0.05），M D A 含量显著下调(P0.05,Fig.7)。534神经解剖学杂志，2 0 2 3年9月第39卷第5期ShamHIEHIE+SF-LHIE+SF-HIdvaA20,babc1510F5B0ShamHIEHIE+SF-HFig.5 Immunofluorescence staining was used to detect the mean fluorescence intensity of Nrf2 in the brain of embryonic rats.A:IFstaining.B:The average fluorescence intensity of Nrf2.P0.05 us Sham group;bP0.05 us HIE group;P0.05 us HIE+SF-L group.Bar=50 m.讨 论胎儿在产前发生宫内窘迫会导致大脑血流中断和供氧不足，对大脑造成不同程度的缺损。这主要是缺氧缺血诱导的氧化应激损伤，缺血和缺氧减少了神经元的氧供应，导致ATP消耗和ATP依赖离子泵的失活12 在一些HIE的动物模型研究中,miRNAs参与了缺氧缺血性脑损伤本身的机制,这种损伤可能发生在低氧损伤前、损伤中和损伤后13。本研究发现缺氧缺血再灌注产生的氧化应激反应刺激胚胎大鼠脑中的miR-216b-3p的表达,可以认为miR-216b-3p对胚胎大鼠有损伤作用，表达上调意味着胚胎大鼠发生严重的脑损伤;SF干预后的表达下调意味着miR-216b-3p可能是SF的潜在作用靶点。这为保护胚胎大鼠免受缺氧缺血性脑损伤提供一种基于miRNA的治疗策略。Nrf2 是机体内最重要的抗氧化应激调节因子14。在氧化应激下，体内ROS含量增加，Nrf2系统被激活,细胞表达更多的抗氧化酶和合成抗氧化剂的蛋白酶,抗氧化机制增强，从而达到动态氧化还原平衡15.16 。Nrf2的下游抗氧化基因PRDX1是过氧还蛋白家族成员，通过解毒过氧化物来保护细胞免受氧化应激的影响17.18 。据报道，PRDX1可清除机体释放的大量氧自由基,并与多种激酶、转录因子结合发挥作用，阻止氧化应激诱导的细胞死亡19.2 0 。研究显示,SF 起到 Nrf2 激动剂的作用,并且可以促进Nrf2 的表达和生物效应2 1。SF干预后的胚胎大鼠脑组织中 Nrf2 和PRDX1 的蛋白黄一伟：阿魏酸钠通过miR-216b-3p/Nrf2通路减轻缺氧缺血胚胎大鼠氧化应激反应Sham535HIEHIE+SF-LHIE+SF-HIdVaA15105B0ShamHIHHIE+SF-LHIE+SF-HFig.6 Immunofluorescence staining was used to detect the mean fluorescence intensity of PRDX1 in the brain of embryonic rats.A:IFstaining.Bar=50 m.B:The average fluorescence intensity of PRDX1.P0.05 us Sham group;bP0.05 us HIE group.604020252015105DCAShamBHIEShamHIEHIE+SF-LHIE+SF-LFig.7 The SOD activity and MDA content in the brain of embryonic rats were measured by WST-8 and TBA.A:SOD activity in thebrain of embryonic rats.B:MDA content in the brain of embryonic rats.P0.05 us Sham group;bP0.05 us HIE group;P0.05 us HIE+SF-L group.和mRNA水平以及平均荧光强度都显著提升,并呈剂量依赖性。可以说明SF激活Nrf2抗氧化途径上调Nrf2表达和抗氧化蛋白PRDX1的表达,提升脑组织的抗氧化能力,实现对HIE胚胎大鼠模型的药物干预治疗,并减轻缺氧/缺血再灌注引发的氧化应激损伤。表明Nrf2是调节氧化应激的重要分子,Nrf2的表达水536平可以影响缺氧缺血性脑损伤事件的恢复和预后。因此,可以推测Nrf2 和 PRDX1参与大脑中氧化应激反应以及维持细胞氧化还原稳态等,这可能是HIE诊断的潜在标志物。但是Nrf2 和 PRDX1 之间的关系还需进行深入研究。本研究还发现,SF干预治疗后,能抑制 MDA的产生,并且提升 SOD活性,说明 SF 提升大脑清除氧自由基的能力,有效抑制宫内窘迫后引发的氧化应激反应,发挥其抗氧化损伤的保护作用。而且还发现SF能明显改善模型胚胎大鼠的神经损伤，说明在宫内窘迫前给予SF干预能减轻胚胎大鼠大脑受到的再灌注损伤,起到优秀的治疗作用。综上所述,SF可以下调miR-216b-3p的表达,在HIE模型中起到神经保护作用，减轻宫内窘迫发生后造成胚胎大鼠大脑的氧化应激损伤,并提高脑组织的抗氧化能力,其机制可能与上调Nrf2 以及PRDX1表达水平有关。miR-216b-3p/Nrf2通路或许可以成为HIE模型中诊治和预防的新靶标，为新生儿缺氧缺血性脑病的治疗提供实验基础。参考文献1姚远，赵曼，杜静怡，等6-姜酚改善新生小鼠缺氧、缺血性脑损伤后认知行为及其机制J解剖学报,2 0 2 3,54（0 3）：296-304.D01:10.16098/j.issn.0529-1356.2023.03.007.2张阳，邹丽胎儿窘迫诊断相关问题J中国实用妇科与产科杂志，2 0 19,35（0 9）：10 58-10 6 2.D01:10.19538/jfk2019090126.3曲乐，吴君燕，袁青，针刺对宫内窘迫导致的缺氧缺血脑损伤大鼠海马炎性反应的影响J针刺研究,2 0 2 1,46（0 1）：14-20.D01I:10.13702/j.1000-0607.200669.4 Neag MA,Mitre AO,Burlacu CC,et al.MiRNA involvement incerebral ischemia-reperfusion injury J.Front Neurosci,2022,16:901360.D0I:10.3389/fnins.2022.901360.5 Wang F,Li J,Zhao Y,et al.MiR-672-3p promotes functional re-covery in rats with contusive spinal cord injury by inhibiting ferrop-tosis suppressor protein 1 J.Oxid Med Cell Longev,2022,2022:6041612.D0I:10.1155/2022/6041612.6 Li Y,Zhang JJ,Chen RJ,et al.Genistein mitigates oxidative stressand inflammation by regulating Nrf2/HO-1 and NF-kB signalingpathways in hypoxic-ischemic brain damage in neonatal miceJ.Ann Transl Med,2022,10(2):32.D0l:10.21037/atm-21-4958.7 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