NFKB1基因多态性与冠心病(心血瘀阻证)及炎症因子的相关性研究.pdf

中国中医急症 2023年10月第32卷第10期JETCM.Oct.2023，Vol.32，No.10 研究报告 冠心病属于中医学“胸痹”“真心痛”“厥心痛”范畴，具有发病率高、致残率高及致死率高1。流行病学研究证实，除了经典（如血脂异常、高血压）的危险因素，遗传因素参与冠心病发病机制得到了医学界学者们的普遍认同2。心血瘀阻证是冠心病最为常见的证候类型3，国内多项研究表明心血瘀阻证与基因多态性相关4-5。近些年研究发现NFKB1-rs28362491基因多态性与中国西北地区人群冠心病易感性相关，纯合突变DD基因型携带者冠心病发病风险增加6，但与冠NFKB1基因多态性与冠心病（心血瘀阻证）及炎症因子的相关性研究陈云李超（浙江省金华市人民医院，浙江 金华 321000）中图分类号：R541.4文献标志码：A文章编号：1004-745X（2023）10-1737-04doi：10.3969/j.issn.1004-745X.2023.10.009【摘要】目的 探讨NFKB1启动子区-94ins/del ATTG（rs28362491）与冠心病（心血瘀阻证）及炎症因子的关系。方法 选取冠心病患者173例，根据中医辨证分型，分为心血瘀阻证69例和非心血瘀阻证104例，同期非冠心病患者107例为对照组。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术分析NFKB1-rs28362491基因多态性，检测肿瘤坏死因子-（TNF-）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）水平。结果 冠心病（心血瘀阻证）NFKB1基因多态性位点DD基因型及D等位频率明显高于冠心病非心血瘀阻证及对照组（P0.05）；冠心病（心血瘀阻证）患者血清TNF-、IL-6、IL-8水平明显高于冠心病非心血瘀阻证及对照组（P0.05）；DD基因型组TNF-、IL-6、IL-8水平均高于ID和II基因型组（P0.05）。结论 NFKB1-rs28362491基因多态性与冠心病（心血瘀阻证）有关联，DD基因型可能干预TNF-、IL-6、IL-8水平成为冠心病（心血瘀阻证）易感性遗传因素。【关键词】冠心病基因多态性NFKB1心血瘀阻证Study on the Correlation between NFKB1 Gene Polymorphism and Coronary Heart Disease（Syndromeof Blockade due to Heart Blood Stasis）and Inflammatory FactorsChen Yun，Li Chao.Jinhua PeoplesHospital，Zhejiang，Jinhua 321000，China.【Abstract】Objective：To investigate the association of NFKB1 promoter region-94ins/del ATTG（rs28362491）of coronary heart disease（syndrome of blockade due to heart blood stasis）and inflammatory factors.Methods：Atotal of 173 patients with coronary heart disease were enrolled.According to TCM syndrome differentiation，theywere divided into 69 patients with syndrome of blockade due to heart blood stasis and 104 patients withnon-syndrome of blockade due to heart blood stasis；another 107 non coronary heart disease patients in thesame period were served as the control group.NFKB1-rs28362491 gene polymorphism was analyzed by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism technique，and TNF-，IL-6 and IL-8 levelswere detected.Results：NFKB1 polymorphisms in the DD genotype and D allele frequency were significantly higher in patients with syndrome of blockade due to heart blood stasis than non-syndrome of blockade due to heartblood stasis and control group（P 0.05）；serum levels of TNF-，IL-6，and IL-8 were significantly higher inpatients with syndrome of blockade due to heart blood stasis than non-syndrome of blockade due to heart bloodstasis and control group（P0.05）；the levels of TNF-，IL-6 and IL-8 in DD genotype were higher than those inID and II genotype（P 0.05）。1.3治疗方法1）冠状动脉造影术。采用Judkin法造影，阳性诊断标准为至少有1支主要冠脉或其主要分支血管内径狭窄50%。由两位经验丰富的介入治疗专家共同进行及判断。2）NFKB1 基因多态性检测。空腹抽取静脉血 5 mL，采用低渗法分离白细胞，提取DNA，利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术（PCR-RFLP）扩增NFKB1基因启动区-94位点，进行NFKB1基因多态性检测（I/D），具体方法参照文献 10。3）炎症因子分析。抽取清晨空腹肘正中静脉血 5 mL，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管收集，ALLEGRAX-15R医用低速离心机，1 000 r/min，离心15 min，血清于-80 冰箱储存。采用酶链免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-（TNF-）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）水平。1.4统计学处理应用 SPSS22.0 统计软件。使用Hardy-Weinberg 平衡检验样本的群体代表性。计量资料以（xs）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验；计数资料以“n、%”表示，组间比较采用2检验。P 0.05）。心血瘀阻证NFKB1基因rs28362491位点DD基因型频率高于非心血瘀阻证和对照组，II、ID基因型频率低于非心血瘀阻证和对照组，差异有统计学意义（P0.05）。各组D、I等位基因频率比较，差异有统计学意义（P0.05）。2.2各组炎症因子水平比较见表 2。各组患者TNF-、IL-6、IL-8水平比较，差异均有统计学意义（P0.05）。心血瘀阻证TNF-、IL-6、IL-8水平均高于非心血瘀阻证和对照组（P 0.05）。非心血瘀阻证与对照组TNF-、IL-6、IL-8水平比较，差异亦有统计学意义（P0.05）。2.3不同基因型患者炎症因子水平比较见表3。不同基因型组TNF-、IL-6、IL-8水平比较，差异有统计学意义（P0.05）。DD基因型组TNF-、IL-6、IL-8水平均高于ID和II基因型组（P0.05）。3讨论冠心病属中医学“胸痹”“真心痛”“厥心痛”范畴，其发病与血瘀、痰浊、气滞等有关，冠状动脉痉挛表1各组基因型及等位基因分布比较n（%）组 别心血瘀阻证非心血瘀阻证对照组n69104107基因型DD22（30.44）20（14.23）13（12.15）ID27（36.23）49（47.11）51（47.66）II20（33.33）*35（33.64）43（40.19）等位基因D71（48.55）89（42.79）77（36.98）I67（51.45）*119（57.21）137（64.02）注：与对照组比较，P0.05；与非心血瘀阻证比较，P0.05。下同。组 别心血瘀阻证非心血瘀阻证对照组n69104107TNF-27.832.19*20.523.16*18.421.85IL-630.571.92*24.231.29*19.281.39IL-825.721.59*20.121.27*17.511.38表2各组TNF-、IL-6、IL-8水平比较（ng/L，xs）基因型DDIDIIn5512798TNF-24.232.52*18.234.2817.972.72IL-623.792.73*18.381.5719.532.42IL-826.541.65*19.231.8321.782.42表3不同基因型患者TNF-、IL-6、IL-8水平比较（ng/L，xs）-1738中国中医急症 2023年10月第32卷第10期JETCM.Oct.2023，Vol.32，No.10中医病机可用气滞解释，血液流速异常近似于中医之血瘀证，冠状动脉粥样斑块形成则与“痰浊”有关11。目前研究证实基因单核苷酸多态性与冠心病中医证候有明显的相关性，尤其在冠心病（心血瘀阻证）方面，包含血瘀证、血瘀阻滞证、瘀血痹阻证、瘀血闭阻证、瘀血阻脉证。宋曙霞等研究发现冠心病血瘀证患者ACE基因多态性与血管病变严重程度相关，ACE 基因 DD、I/D 型患者血管狭窄支数较型多5。徐长福等采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测血瘀证组、非血瘀证及非冠心病MMP-3-1171 5A/6A 的基因型，发现 MMP-3-16125A/6A基因多态性与冠心病血瘀证发生相关，5A/5A基因型成为血瘀证易感性遗传因素12。郑景辉等研究证实IL-8-251A/T SNP AT基因型可增加家族聚集性冠心病血瘀证的易感性13。NFKB1基因上游启动子区域-94位点存在基因多态 性（NFKB1-94-ins/del ATTG，rs28362491）是NFKB1 基因中唯一具有表达功能的 SNP，表现为ATTG 碱基的插入/缺失，编码野生纯合基因型（ins/ins，II），杂合突变基因型（ind/del，ID），纯合突变基因型（del/del，DD）3种基因。相关研究表明，在不同人群中，携带NFKB1基因rs28362491 D等位基因或DD基因型的携带者易患冠心病14。辨证论治是中医精髓，证候是疾病发生过程中不同阶段病因病机的高度概括。一病可有多证，一证还见于多种疾病，“同病异治，异病同治”，不同证候类型间存在的基因多态性差异表达或许正是其物质基础15。本研究结果提示冠心病（心血瘀阻证）NFKB1基因多态性位点DD基因型及D等位频率明显高于冠心病非心血瘀阻证及对照组，证实DD基因型成为心血瘀阻的危险因素，但发病机制尚不明确。炎症因子参与动脉粥样硬化斑块、血栓形成进程，与冠心病的发生、发展密切相关16。TNF-破坏血管内皮细胞，诱发其他炎症因子的合成及释放，加速粥样硬化斑块形成17。此外，其促进冠心病患者的心肌收缩力下降及膜电位改变，导致恶性心律失常等心血管事件发生风险增加。IL-6刺激心血管平滑肌分泌血小板源性生长因子，形成血栓，同时加快脂质在内皮细胞沉积速度，易患粥样斑块18。IL-8引起血管细胞内钙离子浓度超载，产生细胞变形反应、脱颗粒反应现象，影响活性氧产生效率，从而对冠心病患者的心肌细胞造成损伤19。由此可见，TNF-、IL-6、IL-8可能通过血管内皮细胞损伤、打破血凝-抗血凝平衡、加快脂质沉积等病理生理过程参与心血瘀阻证的形成。本研究结果表明，冠心病（心血瘀阻证）患者血清TNF-、IL-6、IL-8含量显著高于冠心病非心血瘀阻证及对照组。进一步深入研究，NFKB1-rs28362491基因DD基因型TNF-、IL-6、IL-8水平高于II基因型和ID基因型。究其原因可能是等位基因D调控NF-B的转录水平，抑制p50蛋白合成，打破p50/p65 异源二聚体与p50/p50 同源二聚体在细胞内的平衡，进而影响其下游TNF-、IL-6、IL-8的表达。综上所述，NFKB1-rs28362491 基因多态性与浙中地区汉族人群冠心病（心血瘀阻证）有关联，DD基因型可能干预TNF-、IL-6、IL-8水平成为冠心病（心血瘀阻证）易感性遗传因素。基因-冠心病证候中西医结合研究可作为中医辨证的参考指标。由于本研究入组病例样本量相对较少，且单中心患者，故今后需扩大样本量及多中心开展深入研究，进一步揭示NFKB1-rs28362491 基因多态性-冠心病（心血瘀阻证）的相关性。参考文献1 中国心血管健康与疾病报告编写组.中国心血管健康与疾病报告2019概要 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J.Gene，2019（689）：84-89.（下转第1751页）-1739中国中医急症 2023年10月第32卷第10期JETCM.Oct.2023，Vol.32，No.103结语本文从多方面介绍了茵陈蒿汤的临床应用经验。茵陈蒿汤是治疗阳黄、谷疸的代表方，其病机为湿、热、瘀蕴积体内，使肝胆功能受损，胆汁外溢而发黄。在临床应用中应注意茵陈的用量必须大于大黄、栀子的用量，同时不得低于30 g，茵陈 大黄比例为3 1，大黄常用量为628 g，栀子常用量为1216 g。遵循仲景原方的煎煮方法、煎煮顺序、服药方法，先下茵陈，后下大黄、栀子。临床上可以让患者取茵陈3050 g代茶饮，配合茵陈蒿汤使用，可使清热化湿祛瘀力更强。注重经方叠用，以扩大诊治范围，增强药物疗效。同时应注意病后调护，食饮有节，起居有常，达到清热除湿散瘀目的。疾病好转后，酌情依据病情变化辨证调治，从而除邪务尽。参考文献1 汤婷，张喆，郑宇明，等.经方茵陈蒿汤的临床应用总结 J.中西医结合研究，2019，11（2）：104-106.2 唐蓉川.伤寒论浅注补正 M.北京：学苑出版社，2012：180.3 王永炎，李飞.方剂学 M.北京：人民卫生出版社，2017：291-292.4 明鸣.古本康平伤寒论 与现行宋本 伤寒论 版本可信度之研究 J.国医论坛，1990，5（6）：7-9.5 张景岳.张景岳医学全书 M.北京：中国中医药出版社，1999：1271.6 方有执.伤寒论条辨 M.北京：上海人民出版社，2005：110.7 张志聪.张志聪医学全书 M.北京：中国中医药出版社，1999：999.8 高学山.高注金匮要略 M.北京：中国中医药出版社，2015：187-188.9 傅延龄，宋佳，张林.论张仲景对方药的计量只能用东汉官制 J.北京中医药大学学报，2013，36（6）：365-369.10徐凤凯，吴汇天，曹灵勇.伤寒杂病论 特殊计量药物换算考证 J.中华中医药杂志，2017，32（9）：4159-4162.11仝小林，穆兰澄，吴义春，等.伤寒论 方剂中非计量单位药物重量的现代实测研究 J.中医杂志，2009，50（S1）：1-2.12国家药典委员会.中华人民共和国药典 M.北京：中国医药科技出版社，2015：24，250.13李时珍.本草纲目 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