不同血清学检测方法在人布鲁氏菌病诊断中应用价值比较.pdf

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 5 不同血清学检测方法在人布鲁氏菌病诊断中应用价值比较 羊 娜 儋州市疾病预防控制中心，海南 儋州 571700 摘要：摘要：目的 探究虎红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等在人布鲁氏菌病诊断中的实际应用价值。方法 选择在 2021 年至 2022 年于某院就诊的 60 例患者为例，取患者的静脉血，通过试管凝集试验测试，得出有 22 例阳性，38 例阴性。将 SAT 作为参照，分别再使用其他血清学检测方式对其进行检测，之后对比检测方式结果、一致性等。结果 客观对比三种血清学检测结果，可靠性分析 Fleiss Kappa 值是0.932。结论 本次研究结果显示，血清学检测中，RBP 敏感度高，ELISA 敏感度高并且特异度也较强。各种试验法各有优势和不足之处，因此可有效结合使用迅速及正确的诊断人布鲁氏菌病。关键词：关键词：血清学检测方法；人布鲁氏菌病；应用价值 中图分类号：中图分类号：R51 0 引言 所谓布鲁氏菌病，指的是由布鲁氏菌所致使产生的，对人体健康、畜牧业发展等造成较严重危害的一种人畜共患传染类疾病。世界卫生组织将此疾病列入到了二类动物疫病行列中，有调查研究结果显示，每年患有这一疾病的人数已经达到了 50 万。深究导致人间布病的传染源，主要为染疫家畜，人若是接触了染病牲畜或污染物，则很大可能会感染布病。最近几年的人、畜间布病疫情出现了明显的增长趋势，但是具体的布病检出率表现出了高高低低的趋势，并且其下降趋势相对而言也不够明显。适用于布病的实验室诊断方式种类较多，例如细菌培养、PCR 检测、血清学检测。在专业的调查研究分析中可发现，前二者的耗时相对比较长，同时也对环境提出了较高的要求，因此其对于一些检测、调运检疫的检测相对而言并不适用，在此背景下，基层对布病的检测，主要是利用血清学方式实现的。布鲁氏菌若是进入到了机体，则必然会极大的刺激机体，产生抗体，基于此，必须客观诊断血液中的特异性抗体。血清学检测方法的类型大体包含如下几种：虎红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、全乳环状试验（MRT）等，而 SAT 是其中确诊布病的一种方法。上述几种方式各有优劣，并且其敏感度、特异性也有着较大差异。本文客观分析了上述几种检测方法，同时对其应用价值进行了客观对比。1 一般资料和方法 1.1 一般资料 此次课题研究的主要对象 2021 年至 2022 年在某院接受治疗的 60 例患者。其实际的纳入标准表现为：发热、多汗、咳嗽等，具有一定的流行学基础史。神志比较清醒。排除标准：合并血液系统疾病、其他传染病等。依据我国的布鲁氏菌病诊断标准，将 SAT 的最低抗体滴度设置为 1:100，在实验中增加 RBT、ELISA 等试验。1.2 方法 1.2.1 虎红平板凝集试验（RBT）在检查的当天清晨，让患者保持空腹状态，采集其5ML 的静脉血液，将其放置到包含分离胶的金黄色头盖真空采血管中，待至血液凝聚，3 000 r/min 离心 20 min，取血清做备用处理。实际的操作过程具体如下：使用蜡笔在载玻片上划分方格，并且取 30 L 血清，将其放置入方格中，同时添加等量布鲁氏杆菌病虎红平板凝集抗原，将其用木签搅拌均后之后，在室温下将其静置 5min，若是血清呈现出了凝集反应，则结果为阳性。1.2.2 试管凝集试验（SAT）第一步，血清稀释。取出 5 支试管备用，其中第一支加入 2.3ml 生理盐水，剂量为 2.3mL；第二支实验做对照管，保持空白；第三、四、五支试管中则分别加入0.5ml 生理盐水。第一支试管加入 0.2ml 待检血清样本，保证其混匀的情况下，分别在第二、三支试管中加入第一支试管中的 0.5ml 血清稀释液；而第三支试验中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 6 取出 0.5ml 混合液加入至第四支试管，之后再从第四支试管提出 0.5ml 混合液加入第五支试管中，再就第五支试管提取 0.5ml 液体丢弃。此番操作后，第二管至第五管血清稀释度分别是 1:12.5、1:25、1:50 与1:100。第二步，加入抗原。用生理盐水将抗原原液做适当稀释成抗原应用液，稀释之后的抗原应用液加到各稀释的血清管中，第一管不加，将其作为血清对照，其余每管加 0.5ml，混匀。加入抗原应用液后第二管到第五管，每管的总量保持在 1ml，血清稀释度从第二管至第五管分别是 1:25、1:50、1:100、1:200，从第一管抽出 0.5ml 丢弃，剩余 1ml。第三步，阴性血清对照与抗原对照。根据对照结果，进行判定。1.2.3 酶联免疫吸附试验（ELISA）在相应的酶标板孔中，加入加 100 L 标准品、已稀释样本，利用粘性腹膜盖住酶标板，孵育一小时。在去掉覆膜以后，去掉孔中的液体，继而使用 300 L 洗涤液，清洗三次酶标板孔，每个孔中，也需加入 100 L 酶联物。之后再次覆膜盖住酶标板 30 分钟，之后反复前一动作，每个孔中加入 100 LTMB 底物液，避温的情况下对其进行 20 分钟的培育。继而为有效合理中止底物反应，需加入 100 LTMB 终止液，轻荡酶标板，令其混合均匀。加入终止液一小时后，在 450nm 处进行 OD 值的客观测量1。2 结果 2.1 三种方法检测 100 例患者的血清结果 测量结果显示，虎红平板凝集试验（RBP）中，阳性患者有 28 例、试管凝集试验（SAT）中，阳性有 22例、酶联免疫吸附试验（ELISA），阳性有 24 例。2.2 三种方法诊断结果和效能分析 具体的研究结果如表 1、2 所示。2.3 三种方法可靠性与项间相关性分析 这几种方法一致使用 Fleiss Kappa，并且结果值为 0.932。结果如表 3 所示。3 讨论 布鲁氏菌病是非常普遍与常见的人兽共患病之一，其主要病原为布鲁氏菌。并且作为短小的球杆状菌，布鲁氏菌已经被我国列入了乙类传染病、二类动物疫苗行列，最有效的检测方式，是为布病的预防、检测、净化等给予专业的技术支持2。3.1 血清学检测方式优缺点对比 目前我国使用比较频繁的几种布鲁氏病菌的血清学检测方式如下。3.1.1 虎红平板凝集试验（RBP）这种方式是布鲁氏菌抗体检测中，使用较为普遍的方式之一，同时也是十分关键的布病检测方式，可及时与迅速的诊断布病情况。并且虎红抗原可和血清样本中的布鲁氏菌抗体融合，逐渐产生凝集反应。将血清样本、虎红抗原混匀以后，一定要仔细的观察凝集现象，同时对其进行客观判别，以此完善布病检测的相关工作。RBP 的优势较为显著，具体包含操作的步 表 1 三种方法检查结果 方法 SAT 阳性 阴性 合计 RBP 阳性 22 6 28 阴性 0 32 32 ELISA 阳性 22 2 24 阴性 0 36 36 表 2 三种方法诊断效能（%）检测方法 敏感度 特异度 阳性预测值 阴性预测值 RBP 100.00 89.34 68.73 100.00 ELISA 100.00 97.85 91.65 100.00 表 3 三种方法一致性分析 SAT RBP ELISA SAT 1.00 0.710 0.947 RBP 0.732 1.00 0.925 ELISA 0.925 0.732 1.00 中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 7 骤相对较少，操作起来也较为便捷化，因而很难在短时间内获得精确与高效化获得检测结果；在检测之时需要花费的时间相对较短；需要的检测试剂较实惠，可从整体实现对检测成本的合理节省；检测的整体敏感性比较高，检出率也相对比较高。此种检测方式的具体应用范围是大量样品布病初筛。但需注意，RBP 极易受到非特异性抗体的影响，进而出现假阳性的结果。为有效控制试验结果偏差，促使结果更加精确性，需尽可能避免出现反复冻融的情况，同时还需保证采集血清的清亮、无溶血，及时消除干净血清中的纤维蛋白原。3.1.2 试管凝集试验（SAT）作为检测血清中布鲁氏菌抗体的方式之一，SAT 的检测方式可与血清中的 IgM 抗体反应发生凝集，可基于对试管中凝集现象的肉眼观察客观进行结果判定。SAT 具有非常显著的特异性，很少会受到其他因子干扰，因此其阳性的结果也相对较为精准。但 SAT 检测方式存在的问题也不可忽视，每个血清样本都要进行 4 梯度试验，而一旦涉及到了大批量样本检测，则需要使用的试验数量也相对较多，并且试验之时还要经过 24 小时的孵育，在这一过程中，极易产生资源消耗，并且需要花费较多的时间与精力等3。不仅如此，SAT 整体的操作步骤较为复杂，在判定结果之时，主要依据人的主观判断，因此无法独立得出检测结果。3.1.3 酶联免疫吸附试验（ELISA）在布病检测过程中，ELISA 的检测方式主要包含如下两类：竞争 ELISA（cELISA）、间接 ELISA（iELISA）。其中 cELISA 涉及到的步骤比较繁琐，但其整体的数据再现值相对比较高，可将布鲁氏菌抗体中不纯净血清检测出来，其缺点是特异性、敏感性比较低。而 iELISA的检测通过酶标抗体进行，继而利用底物显色，酶标仪读值4。3.1.4 荧光偏振测定法（FPA）这是最近几年使用比较普遍化的一种布病检测方式，其所发挥出的原理表现为：溶液中分子越大的情况下，旋转的速度也更快。利用荧光分子对 FPA 抗原进行标记，在待检学情有目标抗体的情况下，则抗体会与抗原互相结合，继而形成更大的分子，之后分子的旋转速度也趋向于慢速，通过一定角度偏振光，对旋转时间进行客观测量，若是偏振值明显升高，则代表样品的血清显示阳性。但是这一检测结果对仪器的要求较高，需尽可能保证荧光偏振仪器的专业性，可迅速检测大量样本，并且整体的操作难度系数比较低，其敏感性、特异性，与 ELISA 类似，但相对需要花费的时间较少。我国的 FPA 技术发展起步的整体时间虽然相对较晚，但也形成了较成熟的配套试剂盒，这是布病防控迈出的一大步。3.1.5 全乳环状试验（MRT）对比其他血清学检测方式，MRT 检测方式具体是通过对牛奶样本中的抗体进行客观检测，以此完成布病检测，其主要应用方向是奶牛的布病检测中，但并不适用于其他品种的家畜。若是待检牛奶样本包含布鲁氏菌抗体，那么试验中的红色布鲁氏菌抗体就会逐渐发展成为复合物，这类复合物最终会发展形成紫红色乳脂环，继而现布病检测。和其他血清检测方式对比可知，MRT 的检测方式优势也比较明显，不管是单一奶牛的牛奶，还是大缸奶，都可实现布病检测，并且养殖户的整体接受度也相对更高。此方式的敏感度十分有助满足大型牛奶布病的筛查，有着较强的特异性，操作步骤较为便捷化，试剂的实际成本相对较低，结果也比较可靠，甚至可将其看做是可替代 SAT 的布病检测方式。3.2 研究结果具体分析 为有效阻断布鲁氏菌传播，需在发现可疑目标的同时，及时对其进行无害化处理或隔离观察，基于此，需采取有效的方式客观检测布鲁氏杆菌。本文所使用的检测方式为虎红平板凝集试验（RBP）、试管凝集试验（SAT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）。研究的结果显示，SAT 与 ELTSA 法是定量试验的方法，其准确度相对比较高，但也各有缺点，其中前者需要花费较长的检测时间，后者则需花费更多资金。RBP 的检测项目主要是 IgG 抗体，其不但操作简单，需要花费的成本较低，并且其敏感度也不低，出结果的实际速度也较快。而其不足之处，则为容易出现假阳性，导致经济损失，增加不必要的工作量。而在研究分析中可发现，导致假阳性结果的因素主要是抗原质量、反应温度、时间、纤维蛋白原与药物等。RBP 试验采血时，一定要用到促凝管，同时令血清样本新鲜透亮，不存在细菌感染，在规定时间、温度下完成检测工作。ELISA 的敏感度、特异度，明显高于 RBP，十分有助降低出现因为人工操作失误导致的误差问题出现的概率。但这一方式需要花费的成本较高，对于现场检查中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 8 的适用度较低。SAT 是国际通用的检测方法，几乎不受非特异度抗体影响，阴性检出率较高，并且敏感度、特异度也高，十分有助用作诊断人布鲁氏杆菌。但其也容易受到外界各类因素的干扰，需要耗费的时间也超过了二十四小时，在检测之时，需要用到的血清、布鲁氏杆菌凝集抗原数量也较大5。4 结语 综上所述，在此次调查研究的结果显示中可发现，血清学检查中，REPT 有着较高的敏感度，ELISA 则表现为较高的敏感度，较强的特异度。三种方式各有优势与不足，可互相结合达到迅速检查布鲁氏菌病的目的。参考文献 1王斌,王淑芳,白天俊,等.布鲁氏菌病不同血清学检 测 方 法 结 果 分 析 J.中 国 牛 业 科学,2021,47(06):63-65.2李娟娟.呼伦贝尔地区布鲁氏菌病流行特征和布鲁氏菌三种血清学检测方法分析D.苏州:苏州大学,2020.3刘蓉,滕文友,代国知.常用梅毒血清学检测方法的性 能 分 析 及 评 价 J.湘 南 学 院 学 报(医 学版),2020,22(02):24-27.4申珊.A 型塞内卡病毒 VP2 蛋白原核表达及血清学检测方法的建立D.保定:河北农业大学,2020.5王馥香.布鲁杆菌病常规血清学与细菌学检测方法的 临 床 应 用 比 较 J.实 验 与 检 验 医学,2018,36(1):30-32.