ICP-MS法测定富马酸替诺福韦二吡呋酯中元素杂质含量.pdf

第 卷第 期 年 月生 物 加 工 过 程 ：收稿日期：修回日期：作者简介：高 盼（），女，宁夏银川人，硕士研究生，研究方向：药物质量；邹巧根（联系人），教授，：引文格式：高盼，邹巧根 法测定富马酸替诺福韦二吡呋酯中元素杂质含量生物加工过程，（）：，（）：法测定富马酸替诺福韦二吡呋酯中元素杂质含量高 盼，邹巧根（南京工业大学 生物与制药工程学院，江苏 南京；南京工业大学 药学院，江苏 南京）摘 要：建立了电感耦合等离子体质谱法（）测定富马酸替诺福韦二吡呋酯颗粒中镉（）、铅（）、砷（）、汞（）、钴（）、钒（）、镍（）和钛（）种元素杂质含量的方法。用湿法消解前处理样品，采用 以钪（）、锗（）、铑（）、铋（）元素为内标进行测定，测定模式为 模式，载气为，采样深度 ，射频功率 ，雾化气流量 ，蠕动泵速 ，采集重复次数 次。结果表明：种元素杂质线性良好，相关系数（）；平均加样回收率为 ，相对标准偏差（）；精密度（重复性、中间精密度）的 。批次样品中元素杂质含量均在允许限度范围内。表明该方法专属性好、准确度及灵敏度高，可用于富马酸替诺福韦二吡呋酯颗粒中元素杂质含量的测定。关键词：富马酸替诺福韦二吡呋酯；湿法消解；元素杂质；电感耦合等离子体质谱中图分类号：文章编号：（），（，；，）：（）（，），（）（）（，），：；（）乙型肝炎病毒（）是一个世界性的公众健康难题，据统计，全世界至少有数亿人曾感染过。每年有 亿多人为 慢性感染者，我国是 感染的高流行区。慢性乙型肝炎（）感染者前期大多无明显症状，直到发病后期才会出现。临床治疗 目前以采取干扰素、核苷酸类似物为主。富马酸替诺福韦二吡呋酯作为一种新型的核苷酸逆转录酶抑制剂，由美国 公司开发，可有效对抗多种病毒，被用于治疗病毒感染疾病，也是治疗 的首选药物之一。元素杂质可能存在于原料、辅料或制剂中。主要来源于药物合成中催化剂的残留；或是由药品生产制备过程中引入；或辅料中存在的，由生产设备、或是由容器密闭系统引入。某些元素杂质不仅会对药品的稳定性、保质期产生不利影响，还可能因为潜在的毒性，从而引发副反应。根据文献的规定：口服给药途径的风险应评估 类元素杂质砷（）、镉（）、铅（）、汞（）和 类元素杂质钒（）、钴（）和镍（）在药品中的可能性。富马酸替诺福韦二吡呋酯颗粒在制剂生产过程中，使用了加工助剂聚乙烯，而钛（）系催化剂，作为目前应用最广泛的聚烯烃催化剂，在反应过程中易存在残留的风险。电感耦合等离子体质谱（）对比电感耦合等离子体发射光谱仪（）具有灵敏度高、检出限低及分析速度快等优点。参照中、美药典中相关要求和准则，笔者建立了湿法消解，即 法测定富马酸替诺福韦二吡呋酯中元素杂质含量的方法，以期为产品质量的控制提供参考依据。仪器与试剂 仪器 电感耦合等离子体质谱仪，美国安捷伦公司；电热消解仪，北京市莱伯泰科公司；纯水仪，美国密理博公司；十万分之一电子分析天平，美国梅特勒公司。试剂（批 号：，级），德 国 公司；试验用水均为超纯水；富马酸替诺福韦二吡呋酯颗粒（批号：、和），南京市海纳医药科技股份有限公司；容量瓶均为聚 甲基 戊烯（）材质。、和 单元素标准溶液各 ，单元素标准溶液 ，国家有色金属及电子材料分析测试中心；锂（）、钪（）、锗（）、铑（）、铟（）、铽（）、镥（）和铋（）多元素内标溶液各 ，美国安捷伦科技有限公司。方法 仪器的工作条件射频功率（），等 离 子 体 流 量 ，采样深度 ，雾化室温度 ，蠕动泵速 ，载气流量 ，碰撞模式，流量 ，测量方式为跳峰采样模式，每峰采样点为，重复次数 次，采集质量数为、和，积分时间为 。内标溶液的配制精密量取内标溶液 ，置于 容量瓶中，用 与水混合溶液（体积比为 ）稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为 的内标储备液。标准曲线溶液的配制分别精密量取、和 单元素标准溶液 、和 ，置于 量瓶中，用 与水混合溶液（体积比为 ）稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为 、和 的混合元素储备液。分别 精 密 量 取 、和 上述混合元素储备液，置于 量瓶中，用 与水混合溶液（体积比为）稀释至刻度，摇匀，作为、第 期高 盼等：法测定富马酸替诺福韦二吡呋酯中元素杂质含量、及 标准曲线溶液。以同样方法制备空白试剂。供试品溶液的配制取富马酸替诺福韦二吡呋酯颗粒 ，精密称定后，置于聚四氟乙烯消解罐中，移入浓 ，混匀，置于电热消解仪上，消解 ，消解后，于 赶酸 ，取出放冷，将消解液全部转至 量瓶中，用纯水洗涤消解罐 次，洗液并入量瓶中，用纯水定容至刻度，摇匀后即得。以同样方法制备空白试剂。结果与讨论 线性实验的测定结果取空白试剂及标准曲线溶液，依次进样测定，以待测元素强度与内标强度比（）为纵坐标，质量浓度（）为横坐标，进行线性回归，得到线性回归方程及相关系数，结果见表。由表 可知：种元素杂质线性关系良好，相关系数（）。表 线性实验结果 元素 线性范围（）线性方程检测限（）（）定量限（）（）、的实验测定结果连续进样 次，以空白试剂响应值的 倍标准差对应的浓度作为，以空白试剂响应值的 倍标准差对应的浓度作为。根据式（）和（）计算 和。（）（）式中：为连续测定空白样品中各元素杂质的每秒计数（）比率的标准偏差；为标准曲线的斜率。专属性实验的测定结果按 及 节方法，分别制备空白试剂、空白样品、混合元素对照品（限度浓度水平）及样品对照品（限度浓度水平），测定各元素的 与内标元素的 的比（以下简称 比率），结果见表 和图。由表 和图 可知：溶剂和样品经稀释后，均不干扰各元素的检测，表明该方法的专属性良好。表 专属性实验测定结果（比率）（）溶剂 比率空白试剂 空白样品 混合元素对照品 样品对照品 空白试剂混合元素对照品 空白样品与样品对照品 重复性实验的测定结果取 份富马酸替诺福韦二吡呋酯颗粒适量，精密称定后，准确加入混合元素对照品 ，按 节方法制备样品，按 节仪器参数测定样品，生 物 加 工 过 程 第 卷图 空白试剂的专属性测定结果 图 对照品的专属性测定结果 要求每个元素浓度的相对标准偏差（）不超过。结果发现：、和 元素的 分别为 、和 ，结果均不高于 ，表明该方法的重复性良好。中间精密度实验的测定结果由不同分析员在不同时间，按 节方法制备 份样品，上机检测后，考察随机变动因素对实验数据的影响，要求每个元素浓度的 均不超过。结果发现：、和 元素的 分别为 、和，结果均不高于，表明该方法的中间精密度良好。图 空白样品的专属性测定结果 图 样品对照品的专属性测定结果 准确度实验的测定结果取 份富马酸替诺福韦二吡呋酯颗粒适量，精密称定后，分为 组，每组分别准确加入 、和 混合元素的对照品，作为低、中和高浓度水平样品，按 节方法制备样品，按 节仪器参数测定样品，要求每个元素的平均回收率均在 ，每个元素浓度的 不超过，结果见表。由表 可知：个元素 个水平的平均回收率均在 ，均不高于，表明该方法的准确度良好。表 加样回收率实验测定结果（）（）元素加标质量浓度（）测定质量浓度（）平均回收率 平均回收率 第 期高 盼等：法测定富马酸替诺福韦二吡呋酯中元素杂质含量续表元素加标质量浓度（）测定质量浓度（）平均回收率 平均回收率 生 物 加 工 过 程 第 卷续表元素加标质量浓度（）测定质量浓度（）平均回收率 平均回收率 耐用性实验的测定结果按 节仪器工作参数进样，测定 限度浓度水平的供试品，要求每个元素浓度 应不高于。结果发现：、和 元素的 分 别 为 、和 ，表明该方法的耐用性良好。稳定性实验的测定结果按 节仪器工作参数进样，测定限度浓度水平的加标供试品溶液，于室温条件下分别在、和 时间点进样测定，要求各元素 比率 应不高于。结果发现：、和 各元素 比率的 分别为、和，表明供试品在室温 下基本稳定。样品的测定结果按 节方法制备供试品，按 节仪器参数检测 批次样品中 种元素的杂质含量，结果见表。由表 可知：各批次样品元素杂质含量均低于样品限度。表 样品测定结果 样品批号杂质含量（）样品限度 元素杂质限度的测定结果富马酸替诺福韦二吡呋酯颗粒每日最大摄入量为 ，类元素杂质（、和）和 类元素杂质（、和）参考文献中元素限度 第 期高 盼等：法测定富马酸替诺福韦二吡呋酯中元素杂质含量要求，药品的每日摄入量不超过 的以 计。按文献中的分类，并没有将 元素归类，因此，将其归为第三类金属，每日允许最大暴露量（）按 计，按式（）计算各元素杂质限度浓度。限度浓度 药品日摄入量（）表 元素 和 的转换 元素分类（）限度浓度（）（）注：表示无分类，为限度浓度经样品前处理稀释后换算得到的浓度，即 限度浓度称样量（）定容体积（）。内标元素的选择结果内标是添加到空白样品和未知样品中的一种或几种元素，必须是一类容易测量的独特元素，正确使用内标可以校正信号的干扰。内标元素的选择通常有 种标准：通过质量（最接近分析物的质量）；基于元素电离势能（）的匹配。本实验结合上述 种标准，选择 作为、和 的内标，作为 的内标，作为 的内标，作为、的内标，使用 型混合三通在线引入内标。前处理条件的选择结果对于非难溶样品消解可以选择湿法消解，而富马酸替诺福韦二吡呋酯颗粒在水中呈微溶状态，因此，选择湿法消解并采用环绕加热方式，在常压状态下可达到快速、稳定的样品处理效果。对 的用量、消解温度和消解时长等条件进行考察，在考察每个单一条件时，固定其他条件不变。用量选择、和 ，消解温度选择、和 ，消解时长选择、和 。结果表明：在使用 为 ，消解温度为 ，消解时长为 时，样品能够完全消解，溶液呈现完全澄清状态。结论建立了一种 法测定富马酸替诺福韦二吡呋酯颗粒中 种元素杂质的检测方法，该方法简单快速、灵敏度高且专属性好，具有良好的准确度，可用于对其进行质量控制。该方法实验结果均远低于杂质限度，满足相关的限度要求，对药品的质量控制具有重要意义。参考文献：，：，（）：，（）：高峰，李建红，荀健，等替诺福韦酯和阿德福韦酯治疗乙型肝炎 抗原阳性慢性乙型肝炎的疗效比较中国药物与临床，（）：，（）：，（）：朱俐，赵瑜，姚尚辰，等药物中元素杂质检测技术研究最新进展分析测试学报，（）：（）：，：，（）：肖武华，陈福林，廖正福橡胶加工助剂的应用研究进展世界橡胶工业，（）：国家药典委员会中华人民共和国药典（四部）北京：中国医药科技出版社，：，（）：符传武，韦瑶瑶，洪薇，等 测定明胶空心胶囊中的二氧化钛药物分析杂志，（）：（责任编辑 周晓薇）生 物 加 工 过 程 第 卷