5个不同品系迷迭香精油对金线莲尖孢镰刀菌的抑菌活性及GC-MS成分分析.pdf

39(4)950-960 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2023 年 8 月 收稿日期：2022-11-11 基金项目：福建省属公益类科研院所基本科研专项（2023R1028001，2020R1030004，2021R1030003）；福建省农业科学院对外合作项目（DWHZ-2022-15）；福建省农业科学院创新团队项目（CXTD2021001-2）作者简介：李珊珊，女，助理研究员，E-mail：；*通信作者，高级农艺师，E-mail：。DOI:10.16409/ki.2095-039x.2023.02.041 5个不同品系迷迭香精油对金线莲尖孢镰刀菌的抑菌活性 及GC-MS成分分析 李珊珊，邹 晖，杨 敏，林江波，戴艺民，吴维坚*（福建省农业科学院亚热带农业研究所，漳州 363005）摘要：为探索迷迭香精油对金线莲尖孢镰刀菌的抑菌活性，通过水蒸汽蒸馏法提取 5 个不同品系迷迭香叶精油，菌丝生长抑制法测定精油对尖孢镰刀菌的抑菌活性。结果表明：5 个品系的迷迭香精油均有一定的抑菌活性，其中匍匐迷迭香和粉花迷迭香精油的活性最强，在体积浓度分别为 0.15%和 0.25%时对金线莲尖孢镰刀菌的抑菌率在 50%以上。通过气相色谱-质谱联用（Gas chromatograph-mass spectrometer，GC-MS）技术对 5 个品系迷迭香精油挥发性成分进行分析和比对，发现其中的樟脑、桉叶油醇和-蒎烯在匍匐迷迭香和粉花迷迭香中的含量相对较高。关 键 词：精油；尖孢镰刀菌；迷迭香；抑菌活性 中图分类号：S432 文献识别码：A 文章编号：1005-9261(2023)04-0950-11 Antifungal Activity and Chemical Composition of Five Rosmarinus Essential Oils Controlling Fusarium oxysporum,the Causal Agent of Anoectochilus roxburghii Stem Rot LI Shanshan,ZOU Hui,YANG Min,LINn Jiangbo,DAI Yimin,WU Weijian*(Institute of Subtropical Agriculture,Fujian Academy of Agricultural Sciences,Zhangzhou 363005,China)Abstract:The present study aims to evaluate the antifungal activitity of 5 Rosmarinus essential oils(EOs)against Fusarium oxysporum,the causal agent of Anoectochilus roxburghii Stem Rot.The phytochemicals of 5 EOs were also determined and qualified by GC-MS methods.Based on the results,The R.officinalis L.Severn sea EO and R.officinalis L.Majorca Pink EO had the strongest activity,the inhibitory rates against F.oxysporum with an EC50 value of 0.15%and 0.25%,more potent than nystatin(0.005%),as a standard antifungal agent.Camphor,eucalyptol and-pinene were identified as major components in both Rosmarinus officinalis L.Severn sea EO and R.officinalis L.Majorca Pink EO.Key words:essential oil;Fusarium oxysporum;rosemary;antibacterial activity 金线莲 Anoectochilus roxburghii（Wall.）Lindl.1学名金线兰，又称花叶开唇兰，兰科开唇兰属 A.Blume植物；产于浙江、江西、福建、等省，日本、泰国、老挝、越南等多个国家也有分布，本变种全草民间可作药用2。作为闽台特色中草药，金线莲的民间临床应用广泛，素有“药王”“神药”“鸟人参”之称3。其味甘，性平4、凉；归肺、肝、肾、膀胱经；有清热凉血、除湿解毒的功效，主肺热咳血、肺结核咯血、尿血、小儿惊风、破伤风、肾炎水肿、风湿痹痛和跌打损伤5。因过度开采，加之自然竞争力差，造成野生金线莲资源稀缺，国家重点保护野生植物名录（第二批）已将野生金线莲列为二级保护植物，目前市场上流通的金线莲以人工培养无性繁殖苗为主6，随着金线莲栽培面积不断扩大，茎腐病不断蔓延扩散，第 4 期 李珊珊等：5 个不同品系迷迭香精油对金线莲尖孢镰刀菌的抑菌活性及 GC-MS 成分分析 951 已成为福建省金线莲的重要病害之一，严重威胁金线莲产业的发展7。已知金线莲茎腐病的致病菌为尖孢镰刀菌 Fusarium oxysporum8。尖孢镰刀菌是常见的植物病原真菌，被列为世界第三大土传病原真菌，可诱发 100 种以上植物的枯萎病9，会导致多种经济作物的根腐、茎腐和维管束枯萎病等10。目前能防治尖孢镰刀菌的化学药剂对周围环境、微生物甚至人体都存在安全隐患11，有效且安全的环境友好型杀菌剂尚待研究12。植物精油是一类从植物中提取的次生代谢产物13，可通过水蒸汽蒸馏等方法从植物的花、叶、茎、根等部位获取14，因其抗菌、杀菌活性15被做为合成农药的安全替代品而受到越来越广泛的关注16。有研究证实，香青兰 Dracocephalum moldavica L.17、留兰香 Mentha spicata L.、欧薄荷 M.longifolia(L.)Hudson18、牛至 Origanum vulgare L.19、滨香草 Thymbra Spicata L.和迷迭香 Rosmarinus officinalis L.20等多种唇形科Lamiaceae Martinov 植物精油对尖孢镰刀菌具有抑制活性。虽然迷迭香精油已被证实对尖孢镰刀菌具有抑制活性，但现有研究使用的均为迷迭香原生种，且并未明确其中起主要抑制作用的具体成分。本研究通过水蒸汽蒸馏法提取漳州产 5 个不同品系迷迭香的精油，以分离自发病金线莲的尖孢镰刀菌为供试菌种，评价迷迭香精油对该病原菌的抑菌活性，为植物源杀菌剂的开发利用提供理论基础。1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 植物材料 迷迭香和匍匐迷迭香均引自中国台湾，伍德迷迭香、阔叶迷迭香和粉花迷迭香引自浙江宁波，均保育于福建省农业科学院亚热带农业研究所芳香植物资源圃，为露地栽培 2 年以上品种。供试植物信息详见表 1。表 1 供试植物信息 Table 1 Directory of tested plants 种类 Species 拉丁名 Scientific name 科名 Family 地点 Location 采集部位 Source 迷迭香 R.officinalis L.唇形科 福建漳州 叶片 匍匐迷迭香 R.officinalis L.“Severn sea”唇形科 福建漳州 叶片 伍德迷迭香 R.officinalis L.“Wood”唇形科 福建漳州 叶片 阔叶迷迭香 R.officinalis L.“Rex”唇形科 福建漳州 叶片 粉花迷迭香 R.officinalis L.“Majorca Pink”唇形科 福建漳州 叶片 1.1.2 供试病原菌 尖孢镰刀菌分离自金线莲茎腐病发病株，保存于福建省农业科学院亚热带农业研究所植物病理学实验室（基因 GenBank 登录号：OQ244517.1），根据 Koch 氏法则将爬满菌丝的接种针回接金线莲无菌苗茎基部，以无菌水浸泡的接种针做为空白对照，确定供试病原菌具有显著致病性21。1.1.3 供试培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯 200 g，葡萄糖 20 g，琼脂 20 g，超纯水1000 mL。1.1.4 实验仪器及化学试剂 挥发油测定器（密度1.0）、球形冷凝管、圆底烧瓶及其他玻璃器皿，漳州市腾信化玻仪器有限公司；XB.K.25 血球计数板，上海市求精生化试剂仪器有限公司；电热套，巩义市予华仪器有限责任公司；Basic-Q15-IT 纯水机，上海和泰仪器有限公司；GF54DA 立式自动压力蒸汽灭菌器，致微（厦门）仪器有限公司；MJ-250 恒温光照培养箱，上海一恒科学仪器有限公司；SW-CJ-1F 洁净工作台，苏净集团苏州安泰空气技术有限公司；Trace 1300/TSQ9000 气相色谱-质谱联用仪，美国 Thermo Fisher Scientific 公司；皇家园艺学会（Royal Horticultural Society，RHS）植物比色卡（2015），英国皇家园艺学会；制霉菌素（nystatin）、正己烷标准溶液n-Hexane，99%（GC），上海麦克林生化科技股份有限公司；二甲基亚砜（DMSO）分子生物学级，生工生物工程（上海）股份有限公司。1.2 方法 1.2.1 迷迭香精油提取及含量测定 挥发油测定法22提取并测定不同品系迷迭香鲜叶的精油含量，略有改 952 中 国 生 物 防 治 学 报 第 39 卷 动。供试样品统一选择栽培 2 年以上植株，于晴天的早上 9 点之前，采用五点式采样法收集嫩梢距顶端 15 cm之内干净无露水无浇灌水的新鲜叶片置于 1000 mL 硬质圆底烧瓶内，每瓶 200 g，加水 300 mL，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加蒸馏水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。烧瓶置电热套中缓慢加热至瓶内液面沸腾，保持微沸 5 h，停止加热 1 h 后读取精油容积，RHS 植物比色卡比对油色，计算供试品的精油含量并收集于棕色试剂瓶内 26 以下密封保存备用，精油含量（%）精油容积（mL）/样品鲜重（g）100。1.2.2 抑菌活性筛选及 EC50值测定 菌丝生长抑制法17进行 4 个迷迭香栽培变种精油的抑菌活性筛选，略有改动。试验分为 2 个阶段：第 1 阶段设计 1 个空白对照和 3 个浓度梯度，以迷迭香精油为阳性对照。在无菌条件下，分别向三角瓶中加入 40、20 和 10 L 供试精油，用灭菌 PDA 培养基分别定容至 40 mL，配置成浓度为 1.00、0.50、0.25 L/mL 的含药培养基，倒入直径 90 mm 的无菌培养皿，制成相应浓度的含药平板。设不加精油的 PDA 培养基为空白对照。第 2 阶段根据第 1 阶段的试验结果，利用 SPSS 软件对实验数据进行分析筛选出抑菌活性最佳的 2 种精油，根据抑菌率制定回归方程 y=b+ax，预测其可抑制尖孢镰刀菌的半数有效浓度（EC50）；以此浓度为参考，同样采用上述方法设计 3 个浓度梯进行抑菌活性筛选，设含 10 L/mL DMSO 的 PDA 培养基为空白对照，以相同浓度的 DMSO 为不同处理中精油的溶剂，将 2 mg 制霉菌素溶解于 DMSO 中并定容至 400 L，再用灭菌 PDA 定容至 40 mL，制得 0.005%含药平板，以此为阳性对照18。菌饼制备：在无菌条件下取直径 6 mm 的滤纸浸泡于浓度为 106107 CFU/mL 的菌悬液中备用。接种：在无菌条件下取菌饼分别置于含药平板及空白对照平板中心，将培养基置于恒温培养箱（28）中，正置暗培养 24 h，倒置暗培养 69 d。活性测定方法23：待对照组菌丝接近培养皿边缘时，采用十字交叉法测量菌落直径（cm），重复 3次，取平均值，计算抑制率，抑制率（%）（对照菌落直径处理菌落直径）/（对照菌落直径菌饼直径）100。利用 Microsoft Excel 计算相对抑制率，利用 SPSS V13.0 软件进行单因素方差分析及毒力回归方程计算。1.2.3 气相色谱-质谱联用仪（Gas chromatograph-mass spectrometer，GC-MS）测定精油化学成分 每种精油均以正己烷稀释为 5 L/mL 的混合溶液，以正己烷标准品做为进样针清洗剂，分别进行 GC-MS 成分分析。气相色谱条件：Thermo TG-5SilMS GC 极性柱（长度 30 m，内径 0.25 mm，膜厚 0.25 m）；进样口温度：250；进样量：0.4 L，分流比 1:50，载气：氦气。升温程序：起始温度 50，停留 5 min，以 5/min 的速度升至 160，再以 10/min 升温至 250，保持 5 min。质谱条件：EI 电离方式，EI 离子源温度：210；传输线温度：250，电子倍增电压：1847 V；电离电压：70 eV；离子源温度：300；扫描质量范围（m/z）：30550，通过谱库检索和资料分析，结合文献进行人工谱图解析确定各化学成分，依据总离子流各色谱峰平均峰面积，运用峰面积归一化法求得各成分的相对含量，小数点后保留二位有效数字。1.2.4 目标核心成分筛选 结合抑菌活性测试及精油成分分析结果，利用 Simca 14.1 对供试的 5 种精油进行主成分分析（Principal Component Analysis，PCA），从中筛选可能存在抑菌活性的目标功能成分。2 结果与分析 2.1 迷迭香鲜叶精油含量及油色 水蒸汽蒸馏法回流提取收集的 5 个品系迷迭香精油含量及油色如表 2 所示。粉花迷迭香鲜叶的含油量与阳性对照接近，无显著差异；伍德迷迭香含油量显著低于粉花迷迭香及阳性对照，与匍匐迷迭香含油量接近；阔叶迷迭香叶的含油量最低，与其他品系之间存在极显著差异。从油色上看，虽然不同迷迭香精油的颜色存在少许差异，但总体来说阔叶迷迭香精油的颜色与阳性对照较为接近，匍匐迷迭香与伍德迷迭香精油的颜色较为接近，粉花迷迭香油的颜色最淡，与其他四者差异较大。2.2 不同迷迭香精油的抑菌活性筛选及 EC50测定 2.2.1 抑菌活性筛选 5 个品系迷迭香精油对尖孢镰刀菌的抑菌活性如表 3 所示，采用 SPSS 对同一浓度 第 4 期 李珊珊等：5 个不同品系迷迭香精油对金线莲尖孢镰刀菌的抑菌活性及 GC-MS 成分分析 953 表 2 5 种迷迭香叶精油含量及油色对比 Table 2 Comparison of essential oil content and oil colour from leaves of 5 rosemary varieties 精油含量 Essential oil content(%)品种 Varieties 重复一 Repetitions 1 重复二 Repetitions 2 重复三 Repetitions 3 平均含油量 Relative oil content(%)(MeanSE)色号 Colour number颜色 Colour 迷迭香（+）1.13 1.06 1.17 1.120.05 Aa#5D 浅绿黄色 Light Greenish Yellow 匍匐迷迭香 1.00 0.93 0.89 0.940.05 B#150D 浅黄绿色 Light Yellow Green 伍德迷迭香 0.90 1.10 0.93 0.980.09 ABb#154D 浅黄绿色 Light Yellow Green 阔叶迷迭香 0.67 0.67 0.60 0.650.03 C#4B 浅绿黄色 Light Greenish Yellow 粉花迷迭香 1.13 1.12 1.09 1.110.02 Aa#196B 淡黄绿色 Pale Yellow Green 注：相对含油量数据后的不同大写字母表示在 Excel 方差分析中差异极显著（P0.01），数据后的不同小写字母表示在 Excel 方差分析中差异显著（P0.05）。Notes:The different capital letters after the relative oil content data showed significant difference in Excel ANOVA(P0.01),different lower-case letters after the relative oil content data showed significant differences in Excel ANOVA(P0.05).表 3 迷迭香精油对尖孢镰刀菌的抑菌活性 Table 3 Fungicial activity of rosemary essential oils against F.oxysporum 抑菌率 Inhibition rate(%)品种 Varieties 1.00 L/mL 0.50 L/mL 0.25 L/mL 迷迭香（+）10.130.63 A 5.490.73 A 0.00 Aa 匍匐迷迭香 27.130.65 B 19.920.95 B 1.050.97 AbBc 伍德迷迭香 12.870.97 C 12.240.73 C 0.00 Aa 阔叶迷迭香 8.440.44 D 4.510.65 A 2.360.65 Bd 粉花迷迭香 20.130.22 E 5.400.95 A 0.00 Aa 注：相对含油量数据后的不同大写字母表示在 Excel 方差分析中差异极显著（P0.01），数据后的不同小写字母表示在 Excel 方差分析中差异显著（P0.05）。Notes:The different capital letters after the relative oil content data showed significant difference in Excel ANOVA(P0.01),different lower-case letters after the relative oil content data showed significant differences in Excel ANOVA(P0.05).下不同精油的抑菌率进行单因素方差分析可知，在精油体积浓度为 1.00 L/mL 时不同品系迷迭香精油的抑菌率均表现出极显著差异，其中匍匐迷迭香油的抑菌率最高，达 27.13%，阔叶迷迭香的抑菌率最低，仅8.44%；除阔叶迷迭香外，其余品系精油的抑菌率均极显著优于阳性对照。当精油体积浓度为 0.50 L/mL时，匍匐迷迭香及伍德迷迭香精油的抑菌率极显著优于其他品系及阳性对照，仍以匍匐迷迭香精油的抑菌率最高，达 19.92%。当精油体积浓度为 0.25 L/mL 时，阔叶迷迭香油的抑菌率最高，达 2.36%，显著优于匍匐迷迭香，极显著优于其他品系；其中，阳性对照、伍德迷迭香和粉花迷迭香在该浓度下无抑菌活性。从方差分析的整体结果来看，5 种精油的抑菌活性与添加浓度均为正相关，当浓度达到 1.00 L/mL 时出现极显著差异，其中匍匐迷迭香及粉花迷迭香的抑菌表现最为突出。2.2.2 匍匐迷迭香及粉花迷迭香精油EC50值测定 利用SPSS计算匍匐迷迭香及粉花迷迭香油对尖孢镰刀菌的 EC50值结果如表 4。匍匐迷迭香油对尖孢镰刀菌的 EC50值约为 1.719 L/mL。粉花迷迭香油对尖孢镰刀菌的 EC50值约为 1.856 L/mL。表 4 2 种迷迭香精油对尖孢镰刀菌的 EC50值和 EC95值 Table 4 EC50 and EC95 value of the essential oil from leaves of 2 rosemary varieties 品种 Varieties 毒力回归方程 Regression equation卡方分布 C2 半数效应浓度 EC50(L/mL)匍匐迷迭香 y=-0.49422+2.10038x 7.157 1.719 粉花迷迭香 y=-0.81145+3.02056x 0.776 1.856 注：EC50为半数有效浓度。Notes:EC50,Half effective concentration.954 中 国 生 物 防 治 学 报 第 39 卷 以预测的浓度为参考值设置浓度梯度，将匍匐迷迭香精油和粉花迷迭香精油分别配置成浓度为 0.25%、0.20%和 0.15%的含药平板。抑菌效果如图 1 及表 5 所示。从结果可知，在同等浓度情况下匍匐迷迭香精油对尖孢镰刀菌的抑制效果极显著优于阳性对照和粉花迷迭香。当匍匐迷迭香精油的添加浓度高于 0.15%时抑菌率高于 50%；粉花迷迭香精油的添加浓度需达到 0.25%时抑菌率高于 50%。以此初步确定匍匐迷迭香和粉花迷迭香对尖孢镰刀菌的 EC50分别为 0.15%和 0.25%。图 1 28 培养 7 d 后 2 种迷迭香精油不同浓度下对尖孢镰刀菌菌丝生长抑制效果 Fig.1 Effects of the two studied EOs at different concentrations on mycelial growth reduction results of F.oxysporum after 7 days of incubation at 28 表 5 2 种迷迭香精油对尖孢镰刀菌的抑菌效果 Table 5 Bacteriostatic effect of the essential oil from leaves of 2 rosemary varieties 抑菌率 Inhibition rate(%)品种 Varieties 0.25%0.20%0.15%匍匐迷迭香 79.320.73 A 66.880.97 A 56.750.97 A 粉花迷迭香 64.140.73 B 46.410.73 B 33.120.97 B 0.005%制霉菌素(+)52.740.73 C 注：相对含油量数据后的不同大写字母表示在 Excel 方差分析中差异极显著（P0.01），数据后的不同小写字母表示在 Excel 方差分析中差异显著（P0.05）。Notes:The different capital letters after the relative oil content data showed significant difference in Excel ANOVA(P0.01),different lower-case letters after the relative oil content data showed significant differences in Excel ANOVA(P0.05).2.3 GC-MS 分析迷迭香叶精油的挥发性成分 经 GC-MS 检测鉴定，发现不同栽培变种的迷迭香精油，其成分含量略有差异。从图 2-6 可以看出，迷迭香和伍德迷迭香的精油成分较为接近，含量最高的成分均为-蒎烯；匍匐迷迭香和阔叶迷迭香的精油成分较为接近，含量最高的成分均为桉叶油醇和樟脑；粉花迷迭香与其余 4 个品种迷迭香的精油成分差异较大，含量最高的成分为-蒎烯。第 4 期 李珊珊等：5 个不同品系迷迭香精油对金线莲尖孢镰刀菌的抑菌活性及 GC-MS 成分分析 955 图 2 迷迭香精油色谱图 Fig.2 Chromatogram of essential oil from Rosmarinus officinalis L.图 3 匍匐迷迭香精油色谱图 Fig.3 Chromatogram of essential oil from Rosmarinus officinalis L.Severn sea 956 中 国 生 物 防 治 学 报 第 39 卷 图 4 伍德迷迭香精油色谱图 Fig.4 Chromatogram of essential oil from Rosmarinus officinalis L.Wood 图 5 阔叶迷迭香精油色谱图 Fig.5 Chromatogram of essential oil from Rosmarinus officinalis L.Rex 第 4 期 李珊珊等：5 个不同品系迷迭香精油对金线莲尖孢镰刀菌的抑菌活性及 GC-MS 成分分析 957 图 6 粉花迷迭香精油色谱图 Fig.6 Chromatogram of essential oil from Rosmarinus officinalis L.Majorca Pink 由表 6 的质谱分析结果可知，迷迭香叶中含量最高的 3 种成分依次是：-蒎烯（29.58%）、桉叶油醇（20.69%）和马鞭草酮（14.87%）。匍匐迷迭香叶中含量最高的 3 种成分依次是：桉叶油醇（19.32%）、樟脑（19.06%）和-蒎烯（13.44%）。伍德迷迭香叶中含量最高的 3 种成分依次是：-蒎烯（36.09%）、桉叶油醇（10.20%）和马鞭草酮（8.08%）。阔叶迷迭香叶中含量最高的 3 种成分依次是：樟脑（16.92%）、桉叶油醇（14.59%）和乙酸龙脑酯（8.79%）。粉花迷迭香叶中含量最高的 3 种成分依次是：-蒎烯（28.79%）、樟脑（15.20%）和-蒎烯（13.83%）。可以看出，5 种迷迭香精油的成分中含量最高的均为单萜类化合物。2.4 目标成分筛选 利用 Simca 14.1 对供试精油进行主成分分析（PCA）结果见图 7。在所有供试成分中，与尖孢镰刀菌的抑制率呈正相关的成分为樟脑、桉叶油醇、-蒎烯、内-龙脑、乙酸龙脑酯、d-柠檬烯、莰烯、-松油醇和十二烷；其中樟脑、桉叶油醇和-蒎烯的贡献率最大。3 讨论 目前国内外对于植物精油及其中单萜类化合物对真菌具有抑制活性的研究屡见报道24-27。其中迷迭香（原生种）精油被发现对黄瓜尖孢镰刀菌及甜瓜尖孢镰刀菌均具有抑菌活性20。迷迭香做为唇形科常绿灌木，原产欧洲及北非地中海沿岸，曹魏时引入我国28，经多年栽培已出现多份栽培变种，但对其相关研究多集中于种植技术、精油成分及抗氧化活性等方面，对同一地区产不同栽培变种迷迭香的出油率及抑菌活性方面的比较仍较罕见29。经顶空固相微萃取法测试不同变种迷迭香鲜叶中的挥发性成分可知，其所含成分之间存在差异30,31。其中或存在对尖孢镰刀菌的抑菌活性优于原生种的更佳选择。从本文可知，无论从直观的油色判断，还是通过 GC-MS 成分分析，迷迭香不同变种的叶片中提取的精油所含成分确实存在差异，其中匍匐迷迭香和粉花迷迭香精油对目标菌种的抑菌活性均极显著高于迷迭香原生种，这一结论为进一步筛选植物源抑菌剂的原材料方面开拓了新的思路。958 中 国 生 物 防 治 学 报 第 39 卷 表 6 5 种迷迭香精油化学成分分析 Table 6 Chemical constituents of essential oil from 5 species of rosemaries 峰面积百分含量 Percentage of peak area(%)化合物 Compound 迷迭香 Rosmarinus officinalis L.匍匐迷迭香 Rosmarinus officinalis L.Severn sea 伍德迷迭香 Rosmarinus officinalis L.Wood阔叶迷迭香 Rosmarinus officinalis L.Rex 粉花迷迭香 Rosmarinus officinalis L.Majorca Pink 辛烷 octane 1.78 0.92 1.51 0.72 1.83 癸烷 decane 0.29 0.17 0.26 0.10 0.33 三环烯 tricyclene 0.13 -侧柏烯-thujene 0.07 -蒎烯-pinene 29.58 13.44 36.09 6.91 13.83 莰烯 camphene 2.85 5.21 4.85 3.47 2.51 2,4-侧柏二烯 2,4-thujadiene 0.43 0.11 0.30 0.18 0.25-蒎烯-pinene 1.68 5.48 3.18 0.94 28.79 1-辛烯-3-醇 1-octen-3-ol 0.36 0.69 3-辛酮 3-octanone 0.26 0.48 -水芹烯-phellandrene 1.09 0.16 0.60 1.08 邻伞花烃 o-cymene 0.98 1.95 0.24 0.70 0.78 d-柠檬烯 d-limonene 2.77 4.91 3.28 2.13 4.98 桉叶油醇 eucalyptol 20.69 19.32 10.20 14.59 9.84-罗勒烯-ocimene 0.10 3-蒈烯 3-carene 0.87 1.12 -松油烯-terpinene 0.93 1.39 0.68 1.11 异松油烯 terpinolene 1.07 2.07 1.72 0.46 1.56 乙酸芳樟酯 linalyl acetate 1.73 0.89 1.24 1.74 2.09 外-香芹醇 exo-carveol 0.43 菊酮 chrysanthenone 0.19 0.31 0.17 0.51 樟脑 camphor 3.20 19.06 4.97 16.92 15.20 马鞭草酮 verbenone 14.87 0.91 8.08 7.80 6.23 异松樟酮 isopinocamphone 0.24 0.40 松香芹酮 pinocarvone 0.29 内-龙脑 endo-borneol 3.75 7.48 1.73 6.45 1.50 松樟酮 pinocamphone 0.54 1.21 0.59 2.33 0.28 4-侧柏醇 4-thujanol 1.02 1.26 0.87 1.48 0.81-松油醇-terpineol 2.60 1.96 1.96 3.34 1.71 十二烷 dodecane 2.76 1.55 2.35 3.16 2.38(-)-二氢乙酸香芹酯(-)-dihydrocarvyl acetate 0.16 0.31 0.19 紫苏叶醇 shisool 0.28 (-)-香芹酮(-)-carvone 0.09 9,12,15-十八碳三烯醛 9,12,15-octadecatrienal 0.15 0.27 反式-紫苏叶醇 trans-shisool 0.18 0.40 橙花醇 nerol 2.89 乙酸龙脑酯 bornyl acetate 2.28 6.36 5.13 8.79 甲基丁香酚 methyleugenol 0.31 二苯醚 diphenyl ether 0.33 0.15 0.15 0.34 石竹烯 caryophyllene 0.64 0.86 0.76 0.45 0.56-长叶蒎烯-longipinene 0.87 葎草烯 humulene 0.11 0.50(+)-杜松烯(+)-cadinene 0.13 氧化石竹烯 caryophyllene oxide 0.10 0.08 注：“”表示未检出。Notes:“”means not detected.第 4 期 李珊珊等：5 个不同品系迷迭香精油对金线莲尖孢镰刀菌的抑菌活性及 GC-MS 成分分析 959 图 7 与抑菌率呈正相关的成分得分图 Fig.7 Composition score chart with positive correlation with bacteriostatic rate 普遍认为抑菌活性或与精油中含量较高的成分呈正相关，经研究发现，虽然 5 种迷迭香精油在适当的浓度下均存在抑菌活性，但其中诸如-蒎烯和马鞭草酮这一类高含量物质对尖孢镰刀菌的抑制率并未呈现正相关，而内-龙脑、乙酸龙脑酯及 d-柠檬烯这些易被忽略的微量成分反而对迷迭香精油的抑制活性表现出正向贡献值。本研究也进一步明确了可抑制尖孢镰刀菌的主要目标活性成分樟脑、桉叶油醇和-蒎烯。有研究发现樟脑虽然无法破坏大肠杆菌的菌体结构，但可以抑制其代谢、趋化性和某些抗性反应，对大肠杆菌具有强烈的抑制效果32；桉叶油醇可破坏兰州百合病原细菌 B-6 的菌体结构并使菌丝表现出大量褶皱、断裂和扭曲33；-蒎烯可有效抑制意大利青霉菌孢子的萌发与芽管伸长，进而损伤青霉菌的细胞壁结构34。以上发现或与迷迭香精油对尖孢镰刀菌具有抑菌活性有关，但确切的抑菌作用机制尚未明确，值得进一步研究，为新型植物源杀菌剂主要活性成分的合成提供依据。参 考 文 献 1 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