lncRNA KCNQ1OT1通过miR-499a-5p_TXNIP调控缺氧心肌细胞活性和凋亡的机制.pdf

lncRNA KCNQ1OT1 通过 miR鄄499a鄄5p/TXNIP 调控缺氧心肌细胞活性和凋亡的机制樊娜摇 刘鑫摇 廖若含(四川省医学科学院四川省人民医院心血管超声及心功能科,四川摇 成都摇 610000)摇 摇 也摘摇 要页摇 目的摇 探讨长链非编 RNA(lncRNA)、KCNQ1 重叠转录物(KCNQ1OT)1 对缺氧心肌细胞活性和凋亡的影响及分子机制。方法摇 将心肌细胞随机分为对照(NC)组、缺氧预处理(HPC)组、si鄄NC+HPC 组、si鄄lncRNA KCNQ1OT1+HPC 组、miR鄄NC+HPC 组、miR鄄499a鄄5p+HPC 组、si鄄硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)+HPC 组、pcDNA鄄NC+si鄄lncRNA KCNQ1OT1+HPC 组、pcDNA鄄TXNIP+si鄄lncRNA KCNQ1OT1+HPC 组;用实时荧光定量聚合酶链反应(RT鄄qPCR)检测 lncRNA KCNQ1OT1、miR鄄499a鄄5p 和 TXNIP mRNA 的表达水平;Western 印迹法检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒分别检测 MDA 含量和细胞 SOD 活性;双荧光素酶报告实验检测 lncRNA KCNQ1OT1、miR鄄499a鄄5p、TXNIP 之间的靶向关系。结果摇 心肌梗死患者血清及缺氧诱导的心肌细胞中 ln鄄cRNA KCNQ1OT1 表达水平显著升高(P0郾 05)。下调 lncRNA KCNQ1OT1、下调 TXNIP 或上调 miR鄄499a鄄5p 后,心肌细胞H9C2 中 CyclinD1 表达、细胞活性、SOD 活性显著升高,Cleaved鄄caspase鄄3 表达、细胞凋亡率、MDA 含量显著降低(P0郾 05)。ln鄄cRNA KCNQ1OT1 通过靶向 miR鄄499a鄄5p 调控 TXNIP 表达。过表达 TXNIP 可以逆转 lncRNA KCNQ1OT1 下调对缺氧诱导的心肌细胞 H9C2 的影响。结论摇 下调 lncRNA KCNQ1OT1 可能通过 miR鄄499a鄄5p/TXNIP 轴抑制缺氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激,促进细胞存活。也关键词页摇 lncRNA KCNQ1OT1;miR鄄499a鄄5p;硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP);心肌细胞;凋亡也中图分类号页摇 R54摇 也文献标识码页摇 A摇 也文章编号页摇 1005鄄9202(2023)17鄄4327鄄06;doi:10郾 3969/j郾 issn郾 1005鄄9202郾 2023郾 17郾 060通信作者:廖若含(1992鄄),女,硕士,住院医师,主要从事心肌缺血、心肌细胞活性研究。第一作者:樊娜(1988鄄),女,硕士,住院医师,主要从事心肌缺血、心肌细胞活性研究。摇 摇 心血管疾病是威胁人类生命健康的主要杀手之一,心肌梗死、缺血性心肌病、心力衰竭及动脉粥样硬化等均属于心血管相关疾病,且均与心肌细胞损伤有关,其中心肌细胞氧化应激及细胞凋亡是其损伤的重要原因,抑制心肌细胞损伤是治疗心血管疾病的重要途径也1 3页。研究发现长链非编码 NRA(ln鄄cRNA)可通过氧化应激等信号通路及细胞凋亡调控缺血性心肌病的发生和发展,具有作为心血管疾病治 疗 靶 点 的 潜 力也4页。KCNQ1重 叠 转 录 物(KCNQ1OT)1 过表达促进了阿霉素刺激的心肌细胞系 HL鄄1 的凋亡也5页。敲低 KCNQ1OT1 可以通过调节 miR鄄2054/蛋白激酶 B(AKT)3 轴来减轻心脏肥大也6页。急性心肌梗死中,抑制 KCNQ1OT1 保护了心肌细胞免受缺氧触发的细胞凋亡也7页,说明 KC鄄NQ1OT1 与心血管疾病的进展密切相关。研究报道大鼠梗死心肌中 miR鄄499鄄5p 表达量下降,miR鄄499鄄5p 高表达可靶向 Sox6 抑制心肌梗死后心肌细胞凋亡并 改 善 心 功 能也8页。miR鄄499a鄄5p 可 通 过 靶 向CD38 减轻缺氧/复氧引起的心肌细胞损伤也9页。据报道,硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)与细胞氧化应激、细胞凋亡和炎症密切相关,心肌缺血/再灌损伤时 TXNIP 表达水平升高并增加心肌自噬也10页。厚朴酚通过抑制 TXNIP 介导的 NOD 样受体热蛋白结构域相关蛋白(NLRP)3 炎性体活化来拮抗阿霉素诱导的心肌细胞衰老也11页。本实验通过在线软件预测发现 KCNQ1OT1 与 miR鄄499鄄5p 有结合位点,miR鄄499鄄5p 与 TXNIP 有 结 合 位 点。然 而 KC鄄NQ1OT1、miR鄄499鄄5p 与 TXNIP 之间的关系及 ln鄄cRNA KCNQ1OT1 是否通过 miR鄄499a鄄5p/TXNIP 调控缺氧心肌细胞损伤还尚未可知。因此,本实验旨在研究 lncRNA KCNQ1OT1 是否通过 miR鄄499a鄄5p/TXNIP 调控缺氧心肌细胞损伤。1摇 材料与方法1郾 1摇 主要试剂材料摇 RNA 提取试剂盒、实验所用抗体购自上海圻明生物;心肌细胞 H9C2 购自美国ATCC;PhyScriptTM2伊SYBR Green PCR Mastermix、蛋白提取试剂盒、MTT 试剂购自飞净科研公司;DMEM 培养基、Trizol 试剂购自上海酶研生物;凋亡检测试剂、超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂购自上海翌圣科技;丙二醛(MDA)测定试剂购自美国 Abcam 公司。1郾 2摇细胞处理与分组摇心肌细胞 H9C2 用 DMEM7234樊娜等摇 lncRNA KCNQ1OT1 通过 miR鄄499a鄄5p/TXNIP 调控缺氧心肌细胞活性和凋亡的机制摇 第 17 期培养基培养,分为心肌细胞缺氧预处理组(HPC)、对照(NC)组;HPC 组心 肌 细 胞 先 接 种 于 低 糖(5 mmol/L)且无血清 DMEM 培养基,置于缺氧(95%N2+5%CO2)环境的培养箱中缺氧处理12 h,随后更换含 10%胎牛血清的高糖(25 mmol/L)DMEM 培养液,于 5%CO2、95%O2环境的培养箱中处理24 h;对照组细胞在含 10%胎牛血清的高糖DMEM 培养液中正常培养。将 si鄄NC、si鄄lncRNAKCNQ1OT1、miR鄄NC、miR鄄499a鄄5p、si鄄TXNIP 转染至H9C2 细胞后进行缺氧处理,记为 si鄄NC+HPC 组、si鄄lncRNA KCNQ1OT1+HPC 组、miR鄄NC+HPC 组、miR鄄499a鄄5p+HPC 组、si鄄TXNIP+HPC 组;将 pcDNA鄄NC、pcDNA鄄TXNIP 分别与 si鄄lncRNA KCNQ1OT1 共转染至 H9C2 细胞后进行缺氧处理,记为 pcDNA鄄NC+si鄄lncRNA KCNQ1OT1+HPC 组、pcDNA鄄TXNIP+si鄄ln鄄cRNA KCNQ1OT1+HPC 组。1郾 3摇 实时荧光定量聚合酶链反应(RT鄄qPCR)检测lncRNA KCNQ1OT1、miR鄄499a鄄5p 和 TXNIP mRNA的表达水平摇用 Trizol 试剂提取各组细胞的总RNA;反转录成 cDNA,按照试剂盒说明进行 PCR,相对表达量用 2-吟吟Ct法计算。以 GAPDH 和 U6 为内参,引物由上海生工生物工程公司合成,引物序列(5忆鄄3忆):lncRNA KCNQ1OT1 上游:ACTCACTCACT鄄CACTCACT,下游 CTGGCTCCTTCTATCACATT;miR鄄499a鄄5p 上 游 GCCCTGTCCCCTGTGTGCCTT,下 游AAACATCACTGCAAGTCTT;TXNIP 上游 AGTGATT鄄GGCAGCAGGTC,下游 GGTGTCTGGGATGTTTAGG;GAPDH 上 游 ACTCCACTCACGGCAAATTC,下 游TCTCCATGGTGGTGAAGACA;U6 上游 CGCTTCGGCAGCACATATACTA,下 游 CGCTTCACGAATTTGC鄄GTGTCA。1郾 4摇 Western 印迹摇 提取各组细胞总蛋白,取 60 滋g蛋白进行十二烷基硫酸钠鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS鄄PAGE),经电转将蛋白转移至聚偏氟乙烯(PVDF)上;用 5%脱脂牛奶室温封闭 2 h,分别加入TXNIP、细胞周期素(Cyclin)D1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved鄄caspase)鄄3 相应的一抗,4 益孵育过夜,再加入二抗室温孵育 2 h,曝光显影,定影,用 Quantity One 分析蛋白条带的灰度值,以目的条带和 GAPDH 条带的比值作为蛋白表达水平。1郾 5摇 MTT摇 各组细胞培养 48 h 后每孔加入 20 滋l的 MTT 溶液,孵育4 h,再加入150 滋l 的二甲基亚砜(DMSO),振荡反应10 min,用酶标仪于波长490 nm处检测吸光度(A)值。1郾 6摇 流式细胞术摇 收集各组细胞,用预冷的磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗2 次,加入500 滋l 的结合缓冲液,先加入 10 滋l 的膜联蛋白(Annexin)V鄄异硫氰酸荧光素(FITC),再加入 5 滋l 的碘化丙啶(PI),混匀后避光孵育 10 min;用流式细胞仪检测细胞凋亡率。1郾 7摇 MDA 含量和 SOD 活性分析摇细胞培养 48 h后收集各组细胞,按试剂盒说明书进行操作。1郾 8摇 双荧光素酶报告实验摇 构建含有 miR鄄499a鄄5p结合位点的 lncRNA KCNQ1OT1 和 TXNIP 的野生型和突变型荧光素酶载体,将其分别与 miR鄄NC 和miR鄄499a鄄5p 共转染至心肌细胞中,按照试剂盒说明检测荧光素酶活性。将 pcDNA鄄NC、pcDNA鄄lncRNA KCNQ1OT1 分别转染至心肌细胞中,pcDNA鄄lncRNA KCNQ1OT1 分别与 miR鄄NC、miR鄄499a鄄5p 共转染至心肌细胞中,RT鄄qPCR 检测 lncRNA KCNQ1OT1 和 miR鄄499a鄄5p表达水平,Western 印迹检测 TXNIP 蛋白表达水平。1郾 9摇 统计学分析 摇采用 SPSS20郾 0 软件进行 t 检验、单因素方差分析、LSD鄄t 检验。2摇 结摇 果2郾 1摇两组心肌细胞 H9C2 中 lncRNA KCNQ1OT1、miR鄄499a鄄5p、TXNIP 表达摇与 NC 组比较,HPC 组心肌细胞 H9C2 中 lncRNA KCNQ1OT1 表达水平显著升高,miR鄄499a鄄5p 表达水平显著降低,TXNIPmRNA 和蛋白表达水平显著升高(P0郾 05)。见图1、表 1。1 6:NC 组、HPC 组、pcDNA鄄NC 组、pcDNA鄄lncRNA KC鄄NQ1OT1 组、pcDNA鄄lncRNA KCNQ1OT1+miR鄄NC 组、pcD鄄NA鄄lncRNA KCNQ1OT1+miR鄄499a鄄5p 组图 1摇 Western 印迹检测各组 TXNIP 的相对表达表 1摇 两组心肌细胞 H9C2 中 lncRNA KCNQ1OT1、miR鄄499a鄄5p、TNXIP 表达(x依s,n=9)组别lncRNAKCNQ1OT1miR鄄499a鄄5pTXNIPmRNATXNIP蛋白NC 组1郾 00依0郾 101郾 00依0郾 081郾 00依0郾 070郾 42依0郾 04HPC 组2郾 43依0郾 170郾 42依0郾 032郾 88依0郾 150郾 83依0郾 06t 值21郾 75120郾 36534郾 07217郾 057P 值0郾 0000郾 0000郾 0000郾 0008234中国老年学杂志 2023 年 9 月第 43 卷2郾 2摇下调 lncRNA KCNQ1OT1 抑制 HPC 组心肌细胞 H9C2 凋亡、增加细胞活性、抑制氧化应激摇与NC 组比较,HPC 组心肌细胞 H9C2 中 CyclinD1 表达水平、细胞活性降低,Cleaved鄄caspase鄄3 表达水平、细胞凋亡率、MDA 含量升高,SOD 活性降低,差异有统计学意义(P0郾 05);与 si鄄NC+HPC 组比较,si鄄lncRNA KCNQ1OT1+HPC 组心肌细胞 H9C2 中CyclinD1 表达、细胞活性升高,Cleaved鄄caspase鄄3 表达水平、细胞凋亡率、MDA 含量降低,SOD 活性升高,差异有统计学意义(P0郾 05)。见图 2、表 2、图 3。2郾 3摇miR鄄499a鄄5p 抑制 HPC 组心肌细胞 H9C2 凋亡,增加细胞活性,抑制氧化应激摇 与 miR鄄NC+HPC组比 较,miR鄄499a鄄5p+HPC 组 miR鄄499a鄄5p、Cy鄄clinD1 表达水平、细胞活性、SOD 活性均显著升高(P0郾 05),Cleaved鄄caspase鄄3 表达水平、细胞凋亡率、MDA 含量均显著降低(P0郾 05)。见图 2、图 3、表 3。图 2摇 流式细胞仪检测各组细胞凋亡表 2摇 下调 lncRNA KCNQ1OT1 抑制 HPC 组心肌细胞 H9C2 凋亡、增加细胞活性、抑制氧化应激(x依s,n=9)组别lncRNA KCNQ1OT1CyclinD1Cleaved鄄caspase鄄3A 值细胞凋亡率(%)MDA(滋mol/g 蛋白)SOD(103U/g 蛋白)NC 组1郾 00依0郾 090郾 83依0郾 080郾 46依0郾 041郾 073依0郾 079郾 13依0郾 6216郾 93依0郾 94188郾 14依11郾 02HPC 组2郾 38依0郾 161)0郾 37依0郾 031)0郾 93依0郾 071)0郾 603依0郾 041)25郾 38依1郾 251)31郾 22依1郾 551)124郾 43依7郾 161)si鄄NC+HPC 组2郾 44依0郾 130郾 35依0郾 020郾 92依0郾 080郾 610依0郾 0524郾 94依1郾 3832郾 04依1郾 61121郾 10依8郾 61si鄄lncRNA KCNQ1OT1+HPC 组1郾 23依0郾 102)0郾 81依0郾 072)0郾 45依0郾 032)0郾 924依0郾 072)11郾 08依0郾 712)17郾 19依1郾 182)169郾 03依12郾 542)F 值337郾 678503郾 905192郾 174142郾 264629郾 980350郾 98398郾 117P 值0郾 0000郾 0000郾 0000郾 0000郾 0000郾 0000郾 000摇 与 NC 组比较:1)P0郾 05;与 si鄄NC+HPC 组比较:2)P0郾 051 6:NC 组,HPC 组,si鄄NC+HPC 组、si鄄lncRNA KCNQ1OT1+HPC 组、miR鄄NC+HPC 组、miR鄄499a鄄5p+HPC 组图 3摇 Western 印迹检测 CyclinD1、Cleaved鄄caspase鄄3 表达2郾 4摇下调 TXNIP 抑制 HPC 组心肌细胞 H9C2凋亡,增加细胞活性,抑制氧化应激摇与 si鄄NC+HPC 组比较,si鄄TXNIP+HPC 组 TXNIP、Cleavedcaspase鄄3 表达水平、细胞凋亡率、MDA 含量均显著降低,CyclinD1 表达水平、细胞活性、SOD活性 均 显 著 升 高(P 0郾 05)。见 图 2、图 4、表 4。9234樊娜等摇 lncRNA KCNQ1OT1 通过 miR鄄499a鄄5p/TXNIP 调控缺氧心肌细胞活性和凋亡的机制摇 第 17 期表 3摇 miR鄄499a鄄5p 抑制 HPC 组心肌细胞 H9C2 凋亡,增加细胞活性,抑制氧化应激(x依s,n=9)组别miR鄄499a鄄5pCyclinD1Cleaved鄄caspase鄄3A 值细胞凋亡率(%)MDA(滋mol/g 蛋白)SOD(103U/g 蛋白)miR鄄NC+HPC 组1郾 00依0郾 090郾 37依0郾 020郾 94依0郾 080郾 613依0郾 0524郾 81依1郾 5131郾 57依1郾 63121郾 71依8郾 12miR鄄499a鄄5p+HPC 组2郾 07依0郾 120郾 78依0郾 060郾 40依0郾 031郾 012依0郾 0810郾 04依0郾 8118郾 02依0郾 74171郾 03依10郾 04t 值21郾 40019郾 44818郾 96112郾 68825郾 85922郾 70811郾 459P 值0郾 0000郾 0000郾 0000郾 0000郾 0000郾 0000郾 0002郾 5摇 lncRNA KCNQ1OT1 通过靶向 miR鄄499a鄄5p 调控 TXNIP 表达摇Starbase 在线软件预测显示,ln鄄cRNA KCNQ1OT1 和 miR鄄499a鄄5p 及 miR鄄499a鄄5p和 TXNIP 有结合位点(图 5)。双荧光素酶报告实验结果显示,lncRNA KCNQ1OT1鄄WT 及 TXNIP鄄WT与 miR鄄499a鄄5p 共转染的细胞荧光素酶活性低于lncRNA KCNQ1OT1鄄WT 及 TXNIP鄄WT 与 miR鄄NC 共转染的细胞(P0郾 05)。见表5。与 pcDNA鄄NC 组 比 较,pcDNA鄄lncRNAKC鄄NQ1OT1 组 lncRNA KCNQ1OT1 和 TXNIP 表达水平显著升高,miR鄄499a鄄5p 表达水平显著降低(P 0郾 05);与 pcDNA鄄lncRNA KCNQ1OT1+miR鄄NC 组比较,pcDNA鄄lncRNA KCNQ1OT1+miR鄄499a鄄5p 组 ln鄄cRNA KCNQ1OT1 和 TXNIP 表达水平显著降低,miR鄄499a鄄5p 表达水平显著升高(P0郾 05)。见图1、表 6。1 4:si鄄NC+HPC 组、si鄄TNXIP+HPC 组、pcDNA鄄NC鄄si鄄lncRNAKCNQ1OTHHPC 组、pcDNA鄄TXNIP+si鄄lncRNA KCNQ1OT1+HPC 组图 4摇 Western 印迹检测 TXNIP、CyclinD1、Cleaved鄄caspase鄄3 表达表 4摇 下调 TXNIP 抑制 HPC 组心肌细胞 H9C2 凋亡,增加细胞活性,抑制氧化应激(x依s,n=9)组别TXNIPCyclinD1Cleaved鄄caspase鄄3A 值细胞凋亡率(%)MDA(滋mol/g 蛋白)SOD(103U/g 蛋白)si鄄NC+HPC 组0郾 75依0郾 060郾 36依0郾 020郾 91依0郾 080郾 607依0郾 0524郾 71依1郾 0832郾 04依1郾 74119郾 35依9郾 02si鄄TXNIP+HPC 组0郾 32依0郾 030郾 85依0郾 070郾 48依0郾 030郾 994依0郾 089郾 13依0郾 6317郾 43依0郾 85168郾 49依11郾 51F 值19郾 23020郾 19215郾 09812郾 30737郾 38222郾 63310郾 081P 值0郾 0000郾 0000郾 0000郾 0000郾 0000郾 0000郾 000(A)miR鄄499a鄄5p 和 TXNIP(B)结合进行预测图 5摇 lncRNA KCNQ1OT1 通过靶向miR鄄499a鄄5p 调控 TXNIP 表达2郾 6摇TXNIP 可以逆转 lncRNA KCNQ1OT1 下调对HPC 组心肌细胞 H9C2 凋亡,细胞活性和氧化应激的影响摇 与 pcDNA鄄NC+si鄄lncRNA KCNQ1OT1+HPC组比较,pcDNA鄄TXNIP+si鄄lncRNA KCNQ1OT1+HPC组 TXNIP、Cleaved鄄caspase鄄3 表达水平、细胞凋亡率、MDA 含量均显著升高,CyclinD1 表达水平、细胞活性、SOD 活性均显著降低(P0郾 05)。见图 2、图 4、表 7。表 5摇 荧光素酶活性分析(x依s,n=9)组别lncRNAKCNQ1OT1鄄WTlncRNAKCNQ1OT1鄄MUTTXNIP鄄WTTXNIP鄄MUTmiR鄄NC 组1郾 00依0郾 091郾 00依0郾 071郾 00依0郾 101郾 00依0郾 10miR鄄499a鄄5p 组 0郾 44依0郾 031)1郾 02依0郾 100郾 37依0郾 020郾 98依0郾 08t 值17郾 7090郾 49218郾 5330郾 469P 值0郾 0000郾 6300郾 0000郾 6460334中国老年学杂志 2023 年 9 月第 43 卷表 6摇 各组 lncRNA KCNQ1OT1、miR鄄499a鄄5p 和 TXNIP 的相对表达(x依s,n=9)组别lncRNA KCNQ1OT1miR鄄499a鄄5pTXNIPpcDNA鄄NC 组1郾 00依0郾 101郾 00依0郾 080郾 35依0郾 02pcDNA鄄lncRNA KCNQ1OT1 组2郾 51依0郾 161)0郾 45依0郾 031)0郾 85依0郾 071)pcDNA鄄lncRNA KCNQ1OT1+miR鄄NC 组2郾 46依0郾 130郾 44依0郾 040郾 83依0郾 08pcDNA鄄lncRNA KCNQ1OT1+miR鄄499a鄄5p 组1郾 29依0郾 102)0郾 87依0郾 072)0郾 42依0郾 032)F/P 值353郾 069/0郾 000216郾 174/0郾 000199郾 690/0郾 000摇 与 pcDNA鄄NC 组比较:1)P0郾 05;与 pcDNA鄄lncRNA KCNQ1OT1+miR鄄NC 组比较:2)P0郾 05表 7摇 TXNIP 可以逆转 lncRNA KCNQ1OT1 下调对 HPC 组心肌细胞 H9C2 凋亡,细胞活性和氧化应激的影响(x依s,n=9)组别TXNIPCyclinD1Cleaved鄄caspase鄄3A 值细胞凋亡率(%)MDA(滋mol/g 蛋白)SOD(103U/g 蛋白)pcDNA鄄NC+si鄄lncRNA KCNQ1OT1+HPC 组0郾 40依0郾 040郾 84依0郾 070郾 44依0郾 030郾 931依0郾 0811郾 12依0郾 9417郾 39依1郾 03173郾 64依11郾 24pcDNA鄄TXNIP+si鄄lncRNA KCNQ1OT1+HPC 组0郾 81依0郾 080郾 37依0郾 030郾 91依0郾 080郾 638依0郾 0520郾 16依1郾 4332郾 96依1郾 54108郾 31依8郾 27t/P 值13郾 752/0郾 00018郾 514/0郾 00016郾 503/0郾 0009郾 317/0郾 00015郾 848/0郾 00025郾 212/0郾 00014郾 045/0郾 0003摇 讨摇 论摇 摇本实验结果显示,缺氧诱导的心肌细胞中 ln鄄cRNA KCNQ1OT1 表达水平升高,与相关研究也12页结果相似,KCNQ1OT1 在心血管相关疾病及细胞模型中高表达。KCNQ1OT1 可以通过与 miR鄄204鄄5p 结合来促进 LGALS3 表达,从而加剧小鼠心肌缺血/再灌注损伤也13页。KCNQ1OT1 敲低显著改善了氧葡萄糖剥夺和再灌注诱导的 PC12 细胞炎症,氧化应激和细胞凋亡也14页,说明 KCNQ1OT1 不仅影响细胞凋亡,还与氧化应激反应相关。氧化应激指氧化剂产生与抗氧化防御之间的失衡,其发生与氧自由基异常积累有关,内源性和外源性因素都可以诱导氧化应激也15页。MDA 是脂质过氧化的产物,其含量高低可反映氧自由基对组织细胞膜结构的损害程度;SOD 是抗氧化酶,可清除体内多余的氧自由基,抑制氧化应激的发生也16,17页。本实验结果说明,缺氧诱导了心肌细胞氧化损伤,下调 KCNQ1OT1 可抑制氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激。研究报道 mR鄄499 可抑制心肌细胞凋亡及损伤也18,19页。miR鄄499a鄄5p 过表达促进了人骨髓来源的间充质干细胞向心肌细胞分化也20页。本实验结果显示,缺氧诱导的心肌细胞中 miR鄄499a鄄5p 表达水平降低;上调 miR鄄499a鄄5p 可降低缺氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激;miR鄄499a鄄5p 具有抗心肌细胞损伤的作用,且其可受KCNQ1OT1 调控。七氟烷预处理可通过调节 TXNIP 抑制氧鄄葡萄糖剥夺诱导的心肌细胞氧化损伤也21页。miR鄄148a 通过抑制 TXNIP 和 Toll 样受体(TLR)4/NF鄄资B/NL鄄RP3 炎性体信号通路来减轻心肌缺血/再灌注损伤也22页。本实验结果显示,缺氧诱导的心肌细胞中TXNIP mRNA 和蛋白表达水平升高;下调 TXNIP 可降低缺氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激,下调TXNIP 可抑制心肌细胞损伤;miR鄄499a鄄5p 调控 TX鄄NIP 表达,且 KCNQ1OT1 靶向调控 miR鄄499a鄄5p;过表达 KCNQ1OT1 后,miR鄄499a鄄5p 表达水平降低,TXNIP 表达水平升高;过表达 TXNIP 可以逆转 ln鄄cRNA KCNQ1OT1 下调对缺氧诱导的心肌细胞H9C2 的影响,提示 KCNQ1OT1 可能通过 miR鄄499a鄄5p 调控 TXNIP 的表达。综上,下调 lncRNA KCNQ1OT1 可能通过 miR鄄499a鄄5p/TXNIP 轴抑制缺氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激,促进细胞存活。4摇 参考文献1摇 李素军 郾 心血管疾病危险因素及其诱发机制的研究进展也J页.现代诊断与治疗,2019;30(7):1041鄄2,1075.2摇 郑君毅,郭绪昆 郾 氧化应激与自噬在心脏疾病中的相互作用与分子机制也J页.中华老年心脑血管病杂志,2019;21(8):885鄄6.3摇 Chistiakov DA,Shkurat TP,Melnichenko AA,et al.The role of mito鄄chondrial dysfunction in cardiovascular disease:a brief review也J页.Ann Med,2018;50(2):121鄄7.4摇 林浩,崔金帅,李勇男,等 郾 长链非编码 RNA 与心血管疾病关系的研究进展也J页.山东医药,2019;59(5):93鄄6.5摇Lai L,Xu Y,Kang L,et al.LncRNA KCNQ1OT1 contributes to car鄄diomyocyte apoptosis by targeting FUS in heart failure也J页.Exp MolPathol,2020;115:104480.6摇 Chen Y,Zhang Z,Zhu D,et al.Knockdown of KCNQ1OT1 attenuatescardiac hypertrophy through modulation of the miR鄄2054/AKT3 axis也J页.J Thoracic Dis,2020;12(9):4771鄄80.7摇 Liao B,Dong S,Xu Z,et al.LncRNA Kcnq1ot1 renders cardiomyo鄄cytes apoptosis in acute myocardial infarction model by up鄄regulatingTead1也J页.Life Sci,2020;256:117811.8摇 吴丽梦 郾 miR鄄499鄄5p 通过靶调节 Sox6 抑制大鼠心梗后心肌细胞1334樊娜等摇 lncRNA KCNQ1OT1 通过 miR鄄499a鄄5p/TXNIP 调控缺氧心肌细胞活性和凋亡的机制摇 第 17 期凋亡也D页.郑州:郑州大学,2018.9摇 Zhao L,Wang BH,Zhang WJ,et al.Effect of miR鄄499a鄄5p on damageof cardiomyocyte induced by hypoxia鄄reoxygenation via downregulatingCD38 protein也J页.J Cell Biochem,2020;121(2):996鄄1004.10摇 戴一,褚超,高超 郾 心肌缺血/再灌损伤时 TXNIP 表达水平升高并增加心肌自噬也J页.心脏杂志,2018;30(5):7鄄12.11摇Huang PP,Fu J,Liu LH,et al.Honokiol antagonizes doxorubicin鄄in鄄duced cardiomyocyte senescence by inhibiting TXNIP鄄mediated NLRP3inflammasome activation也J页.Int J Mol Med,2020;45(1):186鄄94.12摇 Yang F,Qin Y,Wang Y,et al.LncRNA KCNQ1OT1 mediates pyrop鄄tosis in diabetic cardiomyopathy也J页.Cell Physiol Biochem,2018;50(4):1230鄄44.13摇 Rong J,Pan H,He J,et al.Long non鄄coding RNA KCNQ1OT1/mi鄄croRNA鄄204鄄5p/LGALS3 axis regulates myocardial ischemia/reper鄄fusion injury in mice也J页.Cell Signal,2020;66:109441.14摇 Yi M,Li Y,Wang D,et al.KCNQ1OT1 exacerbates ischemia鄄reper鄄fusion injury through targeted inhibition of miR鄄140鄄3p也J页.Inflam鄄mation,2020;43(5):1832鄄45.15摇 Forman HJ,Zhang H郾 Targeting oxidative stress in disease:promiseand limitations of antioxidant therapy也J页.Nat Rev Drug Discov,2021;20(9):689鄄709.16摇 王佳南,林建安,杜苗苗 郾 丹参酮域A 对急性心肌梗死大鼠心脏功能和心肌线粒体自噬的影响也J页.中国免疫学杂志,2019;35(4):40鄄5.17摇 楚冬海,张振秋 郾 瓜蒌皮提取物对缺氧/复氧损伤 H9c2 心肌细胞的保护作用及其机制研究也J页.中国药房,2019;30(8):1072鄄8.18摇 李倩晓,于勤,那荣妹,等 郾 miR鄄1 与 miR鄄499 调控心肌细胞增殖与凋亡机制研究也J页.中国实用医药,2020;15(12):192鄄4.19摇 郑重洲 郾 miR鄄499 在 H9C2 心肌细胞缺氧复氧损伤中的表达变化及调控机制研究也D页.湛江:广东医学院,2016.20摇 Neshati V,Mollazadeh S,Fazly Bazzaz BS,et al.MicroRNA鄄499a鄄5ppromotes differentiation of human bone marrow鄄derived mesenchymalstem cells to cardiomyocytes也J页.Appl Biochem Biotechnol,2018;186(1):245鄄55.21摇 Ma M,Li R,Sun W,et al.Sevoflurane preconditioning inhibits car鄄diomyocyte injury induced by oxygen鄄glucose deprivation by modula鄄ting TXNIP也J页.Int J Mol Med,2020;46(2):889鄄97.22摇 Dai Y,Wang S,Chang S,et al.M2 macrophage鄄derived exosomes carrymicroRNA鄄148a to alleviate myocardial ischemia/reperfusion injuryvia inhibiting TXNIP and the TLR4/NF鄄资B/NLRP3 inflammasomesignaling pathway也J页.J Mol Cell Cardiol,2020;142:65鄄79.也2022鄄03鄄07 修回页(编辑摇 王一涵)调查研究贵州部分地区苗族和侗族 65 岁以上老年人肥胖与五种慢性病的关系张青云1摇 陈小芸2摇 王松艳2摇 蒋丹2摇 龙洪菊2摇 唐正飞2(1 黔东南州中医医院肾内科,贵州摇 凯里摇 556000;2 凯里市第一人民医院血透中心)摇 摇 也摘摇 要页摇 目的摇 探讨贵州省部分地区苗族和侗族 65 岁以上老年人群中肥胖现患状况、分布特点及与糖尿病、高血压、心肌梗死、慢性肾脏病、脑卒中 5 种常见慢性病的关系。方法摇应用多级多层整体抽样方法,以村为单位,调查黔东南地区17 个村中年龄逸65 岁以上的苗族、侗族常住居民共 1 260 例进行问卷调查、体格检查、实验室检查。结果摇 贵州苗、侗两民族中 65 岁以上的老年人全身性肥胖率 6郾 1%,中心性肥胖率 42郾 6%,苗族和侗族肥胖的检出率差异有统计学意义(P0郾 05)。高血压、脑卒中患病率均随着体质量指数(BMI)和(WC)的增加而上升;中心性及全身性肥胖对糖尿病、高血压、脑卒中、慢性肾脏病的患病率产生影响,存在显著差异(P0郾 05)。对侗族全身性肥胖者应用多因素 Logistic 回归分析结果表明较非全身性肥胖者相比,患糖尿病、高血压、脑卒中的概率分别为 2郾 939、1郾 946、3郾 400 倍;苗族全身性肥胖患脑卒中的风险分别为非全身性肥胖者的 2郾 877 倍。相比侗族非中心性肥胖者,中心性肥胖患心肌梗死、脑卒中、糖尿病的概率分别为 2郾 347、2郾 528、2郾 876倍;苗族中心性肥胖患脑卒中为非中心性肥胖者 2郾 527 倍。结论摇 贵州地区苗、侗族全身性肥胖和中心性肥胖低于全国水平。总体显示中心性肥胖及全身性肥胖会使患糖尿病、高血压、脑卒中、慢性肾脏病概率增加、不同民族间存在差异。苗、侗族老年人全身性肥胖、中心性肥胖与心肌梗死的患病率无关;另外侗族老年人中心性肥胖与慢性肾脏病存在密切关联。也关键词页摇 苗族;侗族;肥胖;慢性病也中图分类号页摇 R592摇 也文献标识码页摇 A摇 也文章编号页摇 1005鄄9202(2023)17鄄4332鄄04;doi:10郾 3969/j郾 issn郾 1005鄄9202郾 2023郾 17郾 061基金项目:贵州省卫生健康科学技术基金项目(gzwjkj2019鄄1鄄072)通信作者:陈小芸(1988鄄),女,主管护师,主要从事肾脏疾病及高血压、糖尿病、内分泌研究。第一作者:张青云(1983鄄),男,主任医师,主要从事肾脏病及血液净化研究。摇 摇 肥胖体现在机体脂肪组织比例较多,是常见的一种营养代谢性疾病,其病因复杂,是环境因素和遗传因素综合作用的结果也1页。属于现代“文明病冶“富贵病冶,目前已成为影响人类健康的重大公共卫生问题,中国是全世界肥胖升高速度最快的国家之一,2334中国老年学杂志 2023 年 9 月第 43 卷