HPLC-PDA法同时测定糖止丸中6种成分.pdf

法同时测定糖止丸中 种成分李喜香，王雪梅，邱连利，史晓伟，李 翔（甘肃省中医院，甘肃 兰州）收稿日期：基金项目：甘肃省中医药管理局 年中医药防治重大疾病科研项目（）作者简介：李喜香（），女，硕士，主任中药师，从事中药新制剂研究与开发工作。：，：摘要：目的 建立 法同时测定糖止丸中绿原酸、芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷的含量。方法 该药物甲醇提取液的分析采用 色谱柱（，）；流动相甲醇水（含 磷酸），梯度洗脱；体积流量 ；柱温 ；检测波长、。结果 种成分在各自范围内线性关系良好（），平均加样回收率 ，。结论该方法准确、可靠、灵敏，重复性好，可用于糖止丸的质量控制。关键词：糖止丸；绿原酸；芍药苷；盐酸黄连碱；盐酸小檗碱；巴马汀；橙皮苷；中图分类号：文献标志码：文章编号：（）：，（，）：，（，），（），（），：；糖止丸为甘肃省中医院院内制剂（甘药制备字），是以仝小林教授经验方糖止方为基础研制而成的浓缩丸，由桑叶、茵陈、茯苓、党参等 味中药组成，主要用于治疗糖尿病前期，可预防本病发生。现代药理研究表明，茵陈中绿原酸具有抑制葡萄糖磷酸酶、抗氧化、抗脂质过氧化、抗糖尿病活性及减缓 型糖尿病形成作用；赤芍中芍药苷类成分是抑制 负调控、改善胰岛素抵抗的物质基础；黄连总生物碱对糖尿病肾病大鼠的肾功能有保护作用，能延缓肾功能衰竭过程，其中巴马汀、药根碱、表小檗碱、黄连碱及其他含量较低的甲基黄连碱、木兰碱等成分对糖尿病防治具有很好的促进作用；陈皮 中 橙 皮 苷、川 陈 皮 素 均 有 降 糖、降 脂 作用。为了保证糖止丸安全性、有效性、均一性，本实验参照 年版 中国药典，采用 法同时测定绿原酸、芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷的含量，以期为该制 年 月第 卷 第 期中 成 药 剂质量控制提供科学依据。材料 仪器 型高效液相色谱仪，配置 检测器、四元泵、工作站等（美国 公司）；型调温电热套（北京科伟永兴仪器有限公司）；型真空恒温干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；型、型电子天平（德国 公司）；型电热恒温水浴锅（郑州长城科工贸有限公司）；型实验室纯化水机（上海威立雅水务设备安装工程有限公司）；型超声波清洗器（宁波新芝生物科技有限公司）。试剂与药物绿原酸（批号，纯度 ）、芍药苷（批号，纯度 ）、橙皮苷（批号，纯度 ）、盐酸黄连碱（批号，纯度 ）、盐酸小檗碱（批号，纯度 ）、巴马汀（批号，纯度 ）对照品及各对照药材均购自中国食品药品检定研究院。糖止丸（瓶，批号、）由甘肃省中医院制剂中心制备。色谱纯甲醇（天津市大茂化学试剂厂）；分析纯磷酸、甲醇（国药集团化学试剂有限公司）；水为超纯水（由 型实验室纯化水机制备）。方法与结果 色谱条件 参照文献 报道，色谱柱（，）；流动相甲醇（）水（含 磷酸）（），梯度洗脱（，；，；，；，；，）；体积流量 ；柱温 ；检测波长 （，绿原酸）、（，芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷）；进样量 。对照品溶液制备 精密称取绿原酸、芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷对照品适量，制成每 分别含 、上述成分的贮备液，分别精密吸取适量，置于 量瓶中，甲醇定容至刻度，即得（每 分别含 、上 述成分）。供试品溶液制备精密称取本品粉末 ，置于具塞锥形瓶中，加 甲醇超声（、）处理 ，滤过，滤液蒸干，甲醇溶解并定容至 量瓶中，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。阴性样品溶液制备按处方工艺，分别制得缺茵陈、缺赤芍、缺黄连、缺陈皮的阴性样品，按“”项下方法制备，即得。系统适用性考察取对照品、供试品、阴性样品溶液适量，在“”项色谱条件下进样测定，结果见图。由此可知，各成分均达到基线分离，理论塔板数均大于 ，阴性无干扰。线性关系考察精密吸取“”项下对照 绿原酸 芍药苷 盐酸黄连碱 盐酸小檗碱 巴马汀 橙皮苷 图 各成分 色谱图 年 月第 卷 第 期中 成 药 品溶液适量，置于 量瓶中，甲醇定容并制成系列质量浓度，在“”项色谱条件下进样测定。以对照品质量浓度为横坐标（），峰面积为纵坐标（）进行回归，结果见表，可知各成分在各自范围内线性关系良好。表 各成分线性关系 成分回归方程线性范围（）绿原酸 芍药苷 盐酸黄连碱 盐酸小檗碱 巴马汀 橙皮苷 精密度试验分别取绿原酸、芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷低质量浓度（、）、中质量浓度（、）、高质量浓度（、）对照品溶液适量，在“”项色谱条件下各进样测定 次，测得各成分在低质量浓度下峰面积 分别为 、，中 质量浓度下分别为 、，高 质 量 浓 度 下 分 别 为 、，表明仪器精密度良好。重复性试验取本品（批号）适量，按“”项下方法平行制备 份供试品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，测得绿原酸、芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷峰面 积 分 别 为 、，表明该方法重复性良好。稳定性试验取本品（批号）适量，按“”项下方法制备供试品溶液，于、在“”项色谱条件下各进样 测定，测得绿原酸、芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷峰面积 分别为 、，表明溶液在 内稳定性良好。加样回收率试验 取各成分含量已知的本品（批号）适量，研细，精密称取 ，置于具塞锥形瓶中，共 份，按 水平分别精密加入 绿原酸对照品溶液、芍药苷对照品溶液、盐酸黄连碱对照品溶液、盐酸小檗碱对照品溶液、巴马汀对照品溶液、橙皮苷对照品溶液适量，按“”项下方法制备供试品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，绿原酸、芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、巴马汀、橙皮苷平均加样回收率分别为、，分 别 为 、。样品含量测定取 批样品，每批 份，按“”项下方法制备供试品溶液，在“”项色谱条件下进样测定，计算含量，结果见表。表 各成分含量测定结果（，）（，）批号绿原酸芍药苷盐酸黄连碱盐酸小檗碱巴马汀橙皮苷 注：表示本品中每 生药所含各成分量。年 月第 卷 第 期中 成 药 讨论 提取溶剂选择本实验分别考察了乙醇、甲醇及不同比例甲醇水，发现甲醇提取时杂质峰较少，易于分离，故选择其作为提取溶剂。取样量、提取时间选择本实验以各成分含量、杂质含量、色谱峰干扰情况为指标，分别考察了取样量 、，发现取样 时色谱峰分离效果较好，干扰较少，故选择其作为取样量。在同一色谱条件下，本实验还分别考察了提取时间、，发现两者差异不大，考虑到效率，选择前者作为提取时间。检测波长选择本实验在 波长处进行扫描，发现绿原酸最大吸收波长为 ，而芍药苷、盐酸黄连碱、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、橙皮苷在 、最大吸收波长处的峰面积相差 以内，为了便于测定，选择 作为检测波长，并采用波长切换方式，可实现对所有成分含量的同时测定，降低杂质对其色谱峰的干扰。参考文献：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，：，（）：卜 璟 赤芍降血糖有效部位化学成分研究 北京：中国中医科学院，孟广杰，刘 静，朴成玉，等 赤芍相关药对配伍比例与药理作用研 究进展 中 医药学 报，（）：汤喜兰，唐剑彬，张启云，等 黄连总生物碱对糖尿病大鼠降血糖作用研究 中国临床药理学与治疗学，（）：王新征，李 燕 黄连降糖作用机制的研究进展 中医临床研究，（）：刘沁如，向 茗，瞿昊宇，等 陈皮黑茶颗粒提取工艺条件对降糖降脂活性成分的影响 亚太传统医药，（）：谭乾开，李裕琳，唐小文 陈皮提取物对 葡萄糖苷酶的抑制作用研究 云南化工，（）：国家药典委员会 中华人民共和国药典：年版四部 北京：中国医药科技出版社，周 军，张 蕾，张 茉，等 法同时测定香连化滞丸中 种 成 分 的 含 量 中 国 药 房，（）：赵 旭，汪 坤 同时测定栀黄止痛贴中栀子苷、大黄酸、芍药苷、盐酸小檗碱含量 中国中医药现代远程教育，（）：李广生，李玥瑛，张清波，等 法测定天芪降糖胶囊中盐酸黄连碱和盐酸小檗碱的含量 中医药信息，（）：朱泓霖 多波长 法同时测定盆炎净胶囊中绿原酸和芍药 苷的 含量 中国 药品标 准，（）：年 月第 卷 第 期中 成 药