HIF-1α及Pendrin在慢性鼻-鼻窦炎患者鼻甲黏膜组织中的表达及其关联性.pdf

论著H I F-1 及P e n d r i n在慢性鼻-鼻窦炎患者鼻甲黏膜组织中的表达及其关联性于博李世超任颖川杨屈扬作者 简 介:于 博,男,4 4岁,汉 族,硕 士,高 级 职称。主 要 研 究 成 果:获发明专 利1项,发 表 专业论 文5篇。研 究 方向:中西 医 结 合 治 疗 耳鼻咽喉常见疾病。【摘要】目的探讨慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉组织中缺氧诱导因子-1(H I F-1)、P e n d r i n的表达及其相互关联性。方法将1 6 2例慢性鼻-鼻窦炎患者按照是否伴鼻息肉分为伴鼻息肉组(8 4例)和不伴鼻息肉组(7 8例),另将鼻粘膜组织正常的健康志愿者设为对照组(6 0例),采用免疫组织化学法、逆转录聚合酶链反应检测H I F-1、P e n d r i n表达情况,并采用秩相关分析法分析二者的相关性。结果三组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i n表达阳性率比较差异有统计学意义(P0.0 5),但均高于对照组,差异有统计学意义(P0.0 1)。三组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i nmR NA相对表达强度比较差异有统计学意义(P0.0 5),但均高于对照组,差异有统计学意义(P0.0 1)。S p e a r m a n秩相关分析结果显示,1 6 2例慢性鼻-鼻窦炎鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i n表达呈显著正相关(r=0.5 9 3,P0.0 1)。结论慢性鼻-鼻窦炎患者鼻甲黏膜组织中H I F-1、P e n d r i n表达增强,与是否伴有鼻息肉不相关,可能与H I F-1、P e n d r i n表达具有一定的相关性。【关键词】慢性鼻-鼻窦炎;鼻甲黏膜组织;缺氧诱导因子-1;潘蛋白;相关性d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-1 8 7 X.2 0 2 3.0 5.0 0 5【中图分类号】R7 6 5.4 1【文献标识码】AE x p r e s s i o no fH I F-1 a n dP e n d r i ni nt u r b i n a t em u c o s ao fp a t i e n t sw i t hc h r o n i cr h i n o s i n u s i t i sa n dt h e i r c o r r e l a t i o nY uB o,L iS h i c h a o,R e nY i n g c h u a n,Y a n gQ u y a n g(F i r s t-a u t h o r sa d d r e s s:P i n g d i n g s h a n M a t e r n a la n dC h i l d H e a l t h H o s p i t a l,P i n g d i n g s h a n4 6 7 0 0 0,H e n a n,C h i n a)C o r r e s p o n d i n ga u t h o r:L iS h i c h a o(E m a i l:1 8 6 3 7 1 3 6 5 4 21 6 3.c o m)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T oe x p l o r et h ee x p r e s s i o no fh y p o x i a-i n d u c i b l ef a c t o r-1(H I F-1)a n dP e n d r i ni nt u r b i n a t em u c o s ao fp a t i e n t sc h r o n i c r h i n o s i n u s i t i s(C R S)a n dt h e i rc o r r e l a t i o n.M e t h o d s At o t a lo f1 6 2C R Sp a t i e n t sw e r ea s s i g n e dt oC R S wN P(n=8 4)a n dC R S s N P(n=7 8)g r o u pa c c o r d i n gt ow h e t h e r t h e yw e r ec o m p l i c a t e db yn a s a l p o l y p s(N P),6 0h e a l t h yv o l u n t e e r sw i t hn o r m a l n a s a lm u c o s a t o c o n t r o l g r o u p,H I F-1 a n dP e n d r i ne x p r e s s i o nd e t e c t e du s i n g i mm u n o h i s t o c h e m i c a lm e t h o da n dr e v e r s e t r a n s c r i p t i o n-p o l-y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n(R T-P C R),a n dt h e i rc o r r e l a t i o n sa n a l y z e du s i n gr a n kc o r r e l a t i o na n a l y s i s.R e s u l t s D i f f e r e n c e s i nt h ep o s i t i v er a t e so fH I F-1 a n dP e n d r i ne x p r e s s i o na m o n gt h r e eg r o u p sw e r es t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t(P0.0 5),b u tt h o s eo fb o t hC R S wN Pa n dC R S s N Pg r o u pw e r e32临床心身疾病杂志2 0 2 3年9月第2 9卷第5期JC l i nP s y c h o s o mD i s,S e p.2 0 2 3,V o l2 9,N o.5h i g h e rc o m p a r e dw i t hc o n t r o l g r o u p(P0.0 1).D i f f e r e n c e s i nt h er e l a t i v ee x p r e s s i o ni n t e n s i t i e so fH I F-1 a n dP e n d r i nmR NAa m o n gt h r e eg r o u p sw e r es t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t(P0.0 5),b u t t h o s eo fb o t hC R S w-N Pa n dC R S s N Pg r o u pw e r eh i g h e rc o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p(P0.0 1).S p e a r m a nr a n kc o r r e l a t i o ns h o w e dt h a t t h e r ew a sas i g n i f i c a n tp o s i t i v ec o r r e l a t i o nb e t w e e nH I F-1 a n dP e n d r i ne x p r e s s i o ni nt u r b i-n a t em u c o s ao f 1 6 2C R Sp a t i e n t s(r=0.5 9 3,P0.0 5)。本研究经平顶山市妇幼保健院医学伦理委员会审核批准。1.2方法1.2.1标本采集及检测方法取入组被试下鼻甲粘膜病变组织,置于4%多聚甲醛中固定。采用免疫组织化学法检测H I F-1、P e n d r i n表达8,采用反转录聚合酶链反应(r e v e r s et r a n s c r i p t i o n-p o l y m e r a s ec h a i n r e a c t i o n,R T-P C R)检测H I F-1、P e n d r i nmR-NA表达情况。1.2.2免疫组织化学法检测制作石蜡切片,进行常规脱蜡,水洗,磷酸盐缓冲溶液(p h o s p h a t eb u f f e rs a l i n e,P B S)清洗3次,修复抗原,并将切片先放在柠檬酸盐缓冲液中,然后再放 入9 5 水浴锅中0.5h,加入3%的H2O2溶液孵育2 0m i n,分别滴加一抗(H I F-1 或P e n d r i n工作浓度约为11 0 0,由美国S a n t aC r u z公司生产);每片3 0L,4 孵育过夜。滴加E n v i s i o n,每片3 0L,室温0.5h。用D A B显色5m i n1 5m i n,随后用苏木精复染,用1%的盐酸乙醇分化,再进行梯度脱水,最后用中性树胶封片,在显微镜下观察。H I F-1、P e n d r i n主要表达在鼻粘膜组织细胞的细胞质,在显微镜下显现出淡黄色、棕黄色及褐色,则为阳性表达9。(1)依据H I F-1、P e n d r i n阳性染色强度计分:无色计0分,淡黄色计1分,棕黄色计2分,褐色计3分;(2)H I F-1、P e n d r i n阳性表达细胞占视野下所有细胞比例计分:7 5%为4分。42临床心身疾病杂志2 0 2 3年9月第2 9卷第5期JC l i nP s y c h o s o mD i s,S e p.2 0 2 3,V o l2 9,N o.5总分=染色强度得分阳性染色细胞占比得分,总分3分为阴性,3分为阳性。1.2.3R T-P C R法将采集到的组织浸于1 m LT r i o l试剂中,用匀浆器制成匀浆,静置1 0m i n后离心,保存血清,再用7 5%的乙醇洗涤,在紫外分光光度仪检测的R NA纯度在1.82.0之间即符合检测标准。将上述制得的样本进行逆转录,按照试剂盒说明操作。选择GA P DH作为内参,使用I n v i t r o g e n公 司 合 成 的 引 物。按 以 下 反 应 体 系 进 行:E v a G r e e n q P C R M a s t e rM i x1 2.5L,上下游引物各1L(1 0p m o lL-1),模板3L,用无菌去离子水补足体系至2 5L。反应条件:9 5 1 5m i n,然后9 51 5s,6 01m i n,共4 0个循环。所用到的仪器是A B I 7 3 0 0荧光定量P C R仪,完成扩增后,制得扩增曲线,得到循环阈值(C T)。将测得的目的基因量用内参进行校正。目的mR NA=C T(目的基因)-C T(GA P DH)。1.2.4统计学方法所有数据应用S P S S2 1.0统计软件处理,计量资料以均数标准差(xs)表示,采用t检验;计数资料以百分率(%)表示,采用2检验;指标的相关性采用S p e a r m a n秩相关分析法。以P0.0 5为差异有统计学意义。2结果2.1三组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i n表达阳性率比较伴鼻息肉组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n-d r i n表达阳性率分别为6 7.8 6%、7 1.4 3%,不伴鼻息肉组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i n表达阳性率分别为6 0.2 6%、6 1.5 4%,对 照 组 鼻 甲 黏 膜 组 织H I F-1、P e n d r i n表 达 阳 性 率 分 别 为2 1.6 7%、2 6.6 7%。三组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i n表达阳性率比较差异有统计学意义(P0.0 5),但均高于对照组,差异有统计学意义(P0.0 1)。见表1、表2。表1三组鼻甲黏膜组织H I F-1 表达阳性率比较n(%)组别例数-+表达阳性伴鼻息肉组8 42 7(3 2.1 4)2 4(2 8.5 7)2 4(2 8.5 7)9(1 0.7 1)5 7(6 7.8 6)不伴鼻息肉组7 83 1(3 9.7 4)2 2(2 8.2 1)2 0(2 5.6 4)5(6.4 1)4 7(6 0.2 6)对照组6 04 7(7 8.3 3)1 3(2 1.6 7)001 3(2 1.6 7)23 2.7 1 0P0.0 0 0注:与对照组比较P0.0 5)。表2三组鼻甲黏膜组织P e n d r i n表达阳性率比较n(%)组别例数-+表达阳性伴鼻息肉组8 42 4(2 8.5 7)2 3(2 7.3 8)2 6(3 0.9 5)1 1(1 3.1 0)6 0(7 1.4 3)不伴鼻息肉组7 83 0(3 8.4 6)2 0(2 5.6 4)2 2(2 8.2 1)6(7.6 9)4 8(6 1.5 4)对照组6 04 4(7 3.3 3)1 6(2 6.6 7)001 6(2 6.6 7)23 0.0 1 6P0.0 0 0注:与对照组比较P0.0 5)。2.2三组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i nmR NA相对表达比较三组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i nmR NA相对表达强度比较差异有统计学意义(P0.0 5),但均高于对照 组,差 异 有 统 计 学 意 义(P0.0 1)。见表3。表3三组鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i nmR NA相对表达比较(xs)组别例数H I F-1 P e n d r i n 伴鼻息肉组8 41.3 30.3 11.5 00.4 8不伴鼻息肉组7 81.2 80.3 81.4 40.5 1对照组6 00.4 70.1 60.5 20.1 8F2 6.7 4 82 2.9 1 9P0.0 0 00.0 0 0注:与对照组比较P0.0 5)。52临床心身疾病杂志2 0 2 3年9月第2 9卷第5期JC l i nP s y c h o s o mD i s,S e p.2 0 2 3,V o l2 9,N o.52.3C R S患者鼻甲黏膜组织H I F-1 表达与P e n-d r i n表达的相关性1 6 2例C R S患者鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i n表 达 情 况 见 表4,对 其 进 行S p e a r m a n秩相关分析发现,二者呈显著正相关(r=0.5 9 3,P0.0 1)。表4C R S患者鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i n表达情况(n)H I F-1 P e n d r i n-+合计-4 41 2205 8+72 51 224 6+333 174 4+03381 4合计5 44 34 81 71 6 23讨论C R S是一种病因不明的鼻腔慢性炎症,致病机制比较复杂多样,药物和手术治疗后多数患者病情可以得到控制或治愈,少数患者伴有过敏、哮喘、阿司匹林不耐受等情况,C R S易反复发作1 0。C R S有时会伴随息肉的产生,以鼻腔上部病变较为常见,有些甚至并发多发性息肉。P e n d r i n是一种上皮阴离子转运蛋白,在哮喘和慢性阻塞性肺病中表达增加。C R S发生后气道粘膜嗜酸粒细胞增多,炎症过度反应,导致黏液过度产生,从而导致气道结构发生重塑变化,包括上皮细胞受损、杯状细胞化生、上皮下纤维化和平滑肌增生及肥大。P e n d r i n是一种重要的阴离子转运蛋白,在黏液生成中起重要作用,黏液过量产生是C R S的一个突出特征和发病率的主要决定因素1 1。H I F-1是一种在缺氧条件下广泛存在于哺乳动物体内的转录因子,它有H I F-1 和H I F-1两个亚基结构,H I F-1的活性主要由H I F-1 决定1 2,H I F-1 与炎症相互影响。H I F-1 作为调控黏蛋白表达的转录因子,在下呼吸道疾病(哮喘、慢性阻塞性肺疾病)中都有报道,同时与杯状细胞增生密切相关。有研究提出,H I F-1 的增多与气道上皮杯状细胞的增生有着较强的关系1 3。本研究发现,伴或不伴鼻息肉C R S患者鼻甲黏膜组织H I F-1 表达升高,伴随着相关黏蛋白表达的增加,同时在细胞核内H I F-1 的表达也随之升高,并甚少在健康个体中表达。提示H I F-1 与C R S有明显相关性,在以后的研究中,我们还需更加深入细致地进行H I F-1 的研究。C R S表现为粘膜纤毛清除失调或粘液产量增加,P e n d r i n在鼻甲黏膜组织过表达导致粘液产生增加,可能增加复发性鼻窦感染易患性。以往有研究报道,P e n d r i n参与了支气管哮喘和慢性阻塞性肺疾病的发生,气道上皮细胞内P e n d r i n的表达与黏液的生成过程及炎症反应联系密切1 4。P e n d r i n通过间接作用募集炎症细胞,特别是中性粒细胞,P e n d r i n作为细胞外基质的一部分,可由一些炎性因子诱导气道上皮组织产生炎症反应1 5。伴或不伴鼻息肉C R S患者鼻甲黏膜病变组织中含有更多中性粒细胞,中性粒细胞会通过相应的信号途径,例如肿瘤坏死因子-转化酶、转化生长因子等来促进疾病的发生发展1 6-1 7。有研究表明,缺氧诱导上皮-间质转化由H I F-1 介 导,可 能 对C R S的 发 生 发 展 至 关 重 要1 8。H I F-1 和P e n d r i n在C R S鼻甲黏膜组织的表达明显上调,并且二者表达呈正相关1 9,本研究显示,伴鼻息肉组和不伴鼻息肉组H I F-1、P e n d r i n表达阳性率均高于对照组,差异有统计学意义(P0.0 5);1 6 2例C R S患者鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i n表达进行S p e a r m a n秩相关分析,结果显示二者呈显著正相关(P0.0 5),提示H I F-1 和P e n d r i n表达情况与是否伴有鼻息肉不相关。综上所述,C R S鼻甲黏膜组织H I F-1、P e n d r i n表达增强,与伴有鼻 息肉关系不 相关,H I F-1 与P e n d r i n表达具有一定的相关性。C R S的发病机制繁杂2 0-2 1,与之相关的炎症因子和黏蛋白等也很多2 2-2 3。对于各种粘蛋白的表达特点仍需要进行更全面的探讨,以期为C R S的治疗找寻新的思路。参考文献1刘喜亮.内镜手术联合综合物治疗慢性鼻-鼻窦炎的效果观察J.湖南师范大学学报(医学版),2 0 1 8,1 5(1):1 7 8-1 8 0.2N o c e r aA L,M i y a k e MM,S e i f e r tP,e ta l.E x o s o m e s62临床心身疾病杂志2 0 2 3年9月第2 9卷第5期JC l i nP s y c h o s o mD i s,S e p.2 0 2 3,V o l2 9,N o.5m e d i a t ei n t e r e p i t h e l i a lt r a n s f e ro ff u n c t i o n a lP-g l y c o p r o t e i ni nc h r o n i cr h i n o s i n u s i t i s w i t hn a s a lp o l y p sJ.L a r y n g o-s c o p e,2 0 1 7,1 2 7(9):2 9 5-2 9 8.3B o h m a nA,J u o d a k i sJ,O s c a r s s o nM,e ta l.Af a m i l y-b a s e dg e n o m e-w i d ea s s o c i a t i o ns t u d yo fc h r o n i cr h i n o s i n u s-i t i sw i t hn a s a lp o l y p s i m p l i c a t e ss e v e r a lg e n e s i nt h ed i s e a s ep a t h o g e n e s i sJ.P l o sO n e,2 0 1 7,1 2(1 2):1-4.4N o u t s i o sG T,W i l l i sA L,L e d f o r dJ G,e t a l.N o v e l r o l eo fs u r f a c t a n tp r o t e i n Ai nb a c t e r i a ls i n u s i t i s:n o v e lr o l eo fS P-Ai nb a c t e r i a ls i n u s i t i sJ.I n tF o r u m A l l e r g yR h i n o l,2 0 1 7,7(9):8 9 7-9 0 3.5X i uQ,K o n gC,G a oY,e ta l.H y p o x i ar e g u l a t e sI L-1 7 As e c r e t i o nf r o m n a s a lp o l y pe p i t h e l i a lc e l l sJ.O n c o-T a r g e t,2 0 1 7,8(6 0):1 0 20 9 7-1 0 21 0 9.6杨欣,苏慧霞,牛锦龙,等.m i c r o R NA-3 3 a靶向p e n d r i n调控支气管哮喘气道黏液高分泌J.现代 医 学,2 0 1 7,4 5(3):1 1 0-1 1 6.7薛世钦,代向党,张亮,等.变应性真菌性鼻窦炎C T影像及病理特征分析J.临床心身疾病杂志,2 0 2 0,2 6(4):1 5 5-1 5 7.8吴敏曼,孙虹,王正强,等.慢性鼻窦炎鼻息肉预后判断的客观指标的研究J.中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志,2 0 1 7,2 5(6):4 2 9-4 3 2,4 1 5.9陆春艳.功能性鼻内窥镜手术治疗慢性鼻窦炎鼻息肉的临床效果观察J.临床医药文献电子杂志,2 0 1 8,5(9 0):9 5-9 6.1 0尹文华,刘素琴,陈志凌,等.缺氧诱导因子1 与黏蛋白5在慢性鼻-鼻窦炎组织中的表达与意义J.中国耳鼻咽喉头颈外科,2 0 1 6,2 3(1 1):6 3 2-6 3 6.1 1孙雪芳,夏立军.B A F F在嗜酸粒细胞及中性粒细胞为主型的伴有鼻息肉的慢性鼻窦炎中发病机制的相关研究J.临床耳鼻咽喉头颈外科杂志,2 0 1 9,3 3(2):1 8 3-1 8 6.1 2杨红丽,闫娟,薛媛,等.慢性鼻-鼻窦炎患者潘蛋白和黏蛋白5A C的表达特点J.河北医药,2 0 1 6,3 8(1 7):26 3 9-26 4 1.1 3杨琳红,王维峰,魏晓丽,等.核转录因子-B信号途径对鼻息肉细胞中缺氧诱导因子-1 和血管内皮生长因子表达的影响J.新乡医学院学报,2 0 1 7,3 4(1 1):9 6 0-9 6 4.1 4贺旭东,李振国.H I F-1 与MU C 5 A C、MU C 5 BmR NA在慢性鼻-鼻窦炎中的表达水平与其相关性J.国际检验医学杂志,2 0 1 7,3 8(7):9 2 7-9 2 9.1 5S c a n t a m b u r l oG,V a n o n i S,D o s s e n aS,e t a l.I n t e r l e u-k i n-4i n d u c e sC p Gs i t e-s p e c i f i cd e m e t h y l a t i o no f t h ep e n d r i np r o m o t e ri np r i m a r yh u m a nb r o n c h i a le p i t h e l i a lc e l l sJ.C e l lP h y s i o lB i o c h e m,2 0 1 7,4 1(4):14 9 1-15 0 2.1 6黄小燕,冯琨,刘丹,等.P e n d r i n在慢性鼻-鼻窦炎黏膜中的表达及其与黏蛋白5 A C表达的相关性J.中华医学杂志,2 0 1 5,9 5(1 4):10 7 8-10 8 2.1 7S e s h a d r i S,L uX,P u r k e yM,e t a l.R e g u l a t i o no fe x-p r e s s i o no fp e n d r i np r o t e i ni nC R Sw i t hn a s a lp o l y p sa n di na i r w a ye p i t h e l i a l c e l l sJ.JA l l e r g yC l i nI mm u n o l,2 0 1 4,1 3 3(2):1 6 9-1 6 9.1 8S e s h a d r iS,L uX,P u r k e y MR,e ta l.I n c r e a s e de x-p r e s s i o no f t h e e p i t h e l i a l a n i o n t r a n s p o r t e rp e n d r i n/S L C 2 6 A 4i nn a s a lp o l y p so fp a t i e n t sw i t hc h r o n i cr h i n o s i n u s i t i sJ.JA l l e r g yC l i nI mm u n o l,2 0 1 5,1 3 6(6):15 4 8-15 5 8.1 9霍小东,张洪典,马钊,等.缺氧诱导因子-1 在食管鳞癌上皮-间质转化中的作用及机制J.中华消化外科杂志,2 0 1 7,1 6(1):8 3-8 9.2 0S u s a n M W a l l,J i l lW V e r l a n d e 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