FOXA1蛋白和Wnt_β-catenin信号通路相关蛋白在卵巢癌组织中的表达及临床意义.pdf

全科医学临床与教育 2023年10月 第21卷第10期 Clinical Education of General Practice Oct.2023，Vol.21，No.10DOI：10.13558/ki.issn1672-3686.2023.010.006作者单位：323000浙江丽水，丽水市中心医院肿瘤内科（何灵燕、陈绍娟），肾内科（应莹）论著 FOXA1蛋白和Wnt/-catenin信号通路相关蛋白在卵巢癌组织中的表达及临床意义何灵燕陈绍娟应莹摘要目的分析上皮性卵巢癌（EOC）组织中叉头框蛋白A1（FOXA1）与Wnt/-catenin信号通路相关因子-联环素（-catenin）的表达情况，并探讨其临床意义。方法收集60 例EOC癌组织标本（EOC组），42 例上皮性卵巢良性肿瘤组织标本（良性组），以及30 例正常卵巢上皮组织标本（对照组），采用免疫组织化学法检测标本中FOXA1与-catenin蛋白表达；分析FOXA1与-catenin蛋白表达与EOC临床病理特征、预后的关系。结果EOC组患者癌组织中FOXA1阳性表达率明显高于良性组和对照组，-catenin阳性表达率低于良性组和对照组，差异均有统计学意义（2分别=19.59、21.37、11.78、25.70，P均0.05）；EOC患者癌组织FOXA1阳性表达率与FIGO分期、肿瘤大小、淋巴结转移相关（2分别=7.25、7.55、8.16，P均0.05）；-catenin阳性表达率与FIGO分期、淋巴结转移、病理分级相关（2分别=27.80、5.71、6.17，P均0.05）；FOXA1阳性组总生存率低于FOXA1阴性组，-catenin阳性组总生存率高于-catenin阴性组，差异均有统计学意义（2分别=5.98、4.75，P均0.05）；FIGO分期/期、合并淋巴结转移、病理分级G3、FOXA1阳性是EOC患者总生存率的危险因素，-catenin阳性是保护因素（HR分别=2.39、2.13、1.51、3.40、0.68，P均0.05）。结论EOC患者癌组织中FOXA1阳性表达、-catenin阴性表达可能预示着卵巢癌分期晚、存在淋巴结转移以及预后不良。关键词卵巢癌；Wnt/-catenin信号通路；叉头框蛋白A1；-联环素；预后Expression and clinical significance of FOXA1 and Wnt/-catenin signaling pathway-related proteins in ovarian cancer tissues HE Lingyan，CHEN Shaojuan，YING Ying.Department of Medical Oncology，Lishui Central Hospital，Lishui 323000，China.AbstractObjectiveTo analyze the expression of forkhead box protein A1（FOXA1）and Wnt/-catenin signalingpathway-related factor（-catenin）in epithelial ovarian cancer（EOC）tissues，and to explore their clinical significance.MethodsSixty EOC tissues（EOC group），42 epithelial ovarian benign tumor tissues（benign group）and 30 normalepithelial ovarian tissues（control group）were collected.The expression of FOXA1 and-catenin proteins in the abovetissue samples was detected by immunohistochemistry.The relationship between the expression of FOXA1 and-cateninprotein and the clinicopathological features，prognosis of EOC patients was analyzed.ResultsThe positive expressionrate of FOXA1 in EOC group was significantly higher than that in benign group and normal control group，while positiveexpression rate of-catenin was lower than that in benign group and normal control group（2=19.59，21.37，11.78，25.70，P0.05）.The positive expression rate of FOXA1 in cancer tissues of EOC patients was related with FIGO staging，tumor size and lymph node metastasis（2=7.25，7.55，8.16，P0.05）.The positive expression rate of-catenin was related with FIGO staging，lymph node metastasis and pathological grading（2=27.80，5.71，6.17，P0.05）.The overall survival（OS）status in FOXA1 positive group was lower than that in FOXA1 negative group，which was worse in-cateninpositive group than-catenin negative group（2=5.98，4.75，P0.05）.The results showed that FIGO stage/，lymphnode metastasis，pathological grading G3，positive FOXA1 were independent risk factors of OS in EOC patients，and positive-catenin was protective fartor（HR=2.39，2.13，1.51，3.40，0.68，P0.05）.ConclusionThe positive expression ofFOXA1 and negative expression of -catenin incancer tissues of EOC patients may indicate lateovarian cancer stage，lymph node metastasis and884全科医学临床与教育 2023年10月 第21卷第10期 Clinical Education of General Practice Oct.2023，Vol.21，No.10poor prognosis.Key wordsovarian cancer；Wnt/-catenin signaling pathway；forkhead box protein A1；-catenin；prognosis卵巢癌是常见的生殖系统肿瘤，具有发病隐匿、进展快等特点，其中上皮性卵巢癌（epithelialovarian cancer，EOC）约占90以上1,2。卵巢癌患者早期无明显的临床症状和体征，缺乏特异性的诊断方法，据统计约7080的卵巢癌患者发现时即为晚期阶段，5年存活率只有2030左右3。尽管近年来随着肿瘤治疗理念和策略的进一步更新和完善，EOC的短中期预后有所改善，但远期生存率仍不理想。鉴于准确的预后评估能为临床决策提供依据，研究能准确提示EOC预后的分子标志物则具有重要临床价值。研究发现，Wnt/-catenin信号通路在卵巢癌中异常激活，与卵巢癌的发生发展、侵袭、转移和耐药紧密相关4。叉头框蛋白A1（forkhead box protein A1，FOXA1）与乳腺癌、前列腺癌等多种癌症的发生、发展密切相关5,6。本次研究旨在检测EOC患者癌组织FOXA1和-catenin表达情况，并探讨其与EOC预后的关系。1资料与方法1.1一般资料收集2019年3 月至2021年3 月丽水市中心医院收治的60 例行手术治疗的EOC患者的病理组织标本（EOC组），年龄3477 岁，平均年龄（56.8410.46）岁；纳入标准包括：符合EOC诊断标准7，并经病理确诊；术前无放疗和化疗史者；接受 卵巢恶性肿瘤诊断与治疗指南 中的标准治疗方案8。并剔除：合并其他原发性肿瘤者；对标准治疗依从性不佳者；随访资料缺失者。另收集同期42 例上皮性卵巢良性肿瘤组织标本（良性组）及30 例正常卵巢上皮组织标本（对照组）。本次研究经医院伦理委员会审批通过，患者对研究知情同意。1.2方法1.2.1免 疫 组 织 化 学 法（immunohistochemistry，IHC）检测FOXA1和-catenin蛋白选取包埋的组织标本4 m切片至防脱玻片上，60 恒温箱中烤片2 h，脱蜡修复后采用免疫组化Envision法染色，免疫组化抗体包括：兔抗人FOXA1单克隆抗体（由英国abcam公司生产）、兔抗人-catenin多克隆抗体（由英国abcam公司生产）。应用DAB显色，常规脱水、封片。使用已知阳性切片为阳性对照，PBS替代FOXA1、-catenin一抗为阴性对照。高倍镜下随机取5 个切片视野判读。判定标准：FOXA1主要定位于细胞核，统计阳性细胞百分比并赋予分值，0、110、1130、3150和51100分别计为04 分；根据染色强度赋予分值，无色、浅黄色、黄色和棕色分别计03 分；当阳性细胞百分比与染色强度分值乘积3为FOXA1阴性表达，3为FOXA1阳性表达9。-catenin主要表达于细胞膜，以细胞膜棕褐色或棕黄色染色判定为-catenin阳性细胞，切片视野内大于10的阳性细胞则为-catenin阳性表达10。1.2.2随访术后随访观察3年，以电话及门诊复查方式进行，统计患者随访期内预后情况，以总生存率作为主要观察终点。1.3统计学方法采用SPSS 20.0软件进行数据统计分析。计量资料以均数标准差（xs）表示。组间计量资料比较采用t检验；计数资料比较采用2检验。生存分析采用Kaplan-Meier法；使用COX回归模型分析EOC患者总生存率的影响因素。设P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1不同组织的FOXA1和-catenin蛋白表达见封二图1、表1由封二图1可见，FOXA1蛋白在细胞核中呈阳性表达，细胞质及细胞膜均未见染色；-catenin在正常卵巢组织中定位于细胞膜，在细胞质及细胞核呈弱阳性或阴性表达。表1不同组织的FOXA1和-catenin蛋白表达/例（）组别EOC组良性组对照组n604230FOXA1阳性表达41（68.33）*#10（23.81）5（16.67）-catenin阳性表达18（30.00）*#27（64.29）26（86.67）注：*：与对照组比较，P0.05；#：与良性组比较，P0.05。由表1可见，EOC组患者癌组织中FOXA1阳性表达率明显高于良性组和对照组织标本，差异均有统计学意义（2分别=19.59、21.37，P均0.05），-catenin 阳性表达率低于良性组和对照组织标本，差异均有统计学意义（2分别=11.78、25.70，P均0.05）。2.2FOXA1和-catenin蛋白表达与EOC患者临床885全科医学临床与教育 2023年10月 第21卷第10期 Clinical Education of General Practice Oct.2023，Vol.21，No.10病理特征的关系见表2表2FOXA1和-catenin蛋白表达与EOC患者临床病理特征的关系/例项目年龄50 岁50 岁肿瘤大小5 cm5 cmFIGO分期/期/期淋巴结转移是否病理类型浆液性癌黏液性癌子宫内膜样癌病理分级G1/G2G3n1842322823372040381573228FOXA1阳性132827141130932261052120阴性5145141271181252118-catenin阳性513991622161152144阴性132923197351824271051824由表2可见，EOC患者FOXA1阳性率与年龄、病理类型、病理分级无关（2分别=0.18、0.05、0.23，P均0.05），EOC患者癌组织FOXA1阳性表达率与FIGO 分期、肿瘤大小、淋巴结转移相关（2分别=7.25、7.55、8.16，P均0.05）；-catenin阳性率与年龄、肿瘤大小、病理类型无关（2分别=0.06、0.12、0.11，P均0.05），-catenin阳性表达率与FIGO分期、淋巴结转移、病理分级相关（2分别=27.80、5.71、6.17，P均0.05）。2.3FOXA1和-catenin蛋白表达与EOC患者预后的关系观察期内，60 例EOC患者中27例死亡，33例存活。FOXA1阳性组总生存率（43.90%，18/41）低于FOXA1阴性组（78.95%，15/19），-catenin阳性组总生存率（77.78%，14/18）高于-catenin阴性组（45.24%，19/42），两组比较，差异均有统计学意义（2分别=5.98、4.75，P均0.05）。2.4EOC患者预后生存的COX回归分析见表3、表4表3影响EOC患者总生存率的COX单因素分析临床特征年龄（50 vs.50 岁）肿瘤直径（5 cm vs.5 cm）FIGO分期（/vs./）淋巴结转移（否vs.是）病理类型（非浆液性癌vs.浆液性癌）病理分级（G1/G2 vs.G3）FOXA1（阴性vs.阳性）-catenin（阴性vs.阳性）HR0.711.883.733.930.762.413.260.7095CI0.491.911.053.362.116.612.197.060.582.581.183.982.204.870.210.92P0.050.050.050.050.050.050.050.05由表3可见，肿瘤直径5 cm、FIGO分期/期、合并淋巴结转移、病理分级G3、FOXA1阳性、-catenin阳性是EOC患者的总生存率的影响因素（P均0.05）。表4影响EOC患者总生存率的COX多因素分析临床特征肿瘤直径（5 cm vs.5 cm）FIGO分期（/vs./）淋巴结转移（否vs.是）病理分级（G1/G2 vs.G3）FOXA1（阴性vs.阳性）-catenin（阴性vs.阳性）HR0.632.392.131.513.400.6895CI0.451.821.124.721.074.271.103.361.985.880.200.95P0.050.050.050.050.050.05由表4可见，FIGO分期/期、合并淋巴结转移、病理分级G3、FOXA1阳性是EOC患者总生存率的危险因素，-catenin阳性是EOC患者不良预后的保护因素（P均0.05）。3讨论FOXA1是FOX蛋白家族的关键成员，不仅与代谢调节相关，还是细胞内信号调节相关基因的启动子，参与调控细胞核类固醇受体的信号传导通路6。已有研究显示，FOXA1是乳腺癌细胞中雌激素信号转导通路中不可或缺的一员，FOXA1表达已被证实是乳腺癌患者的预后因素11,12。Wang等13研究结果显示，与配对的正常卵巢组织标本相比，EOC癌组织中FOXA1 mRNA表达明显升高。本次研究中，EOC组FOXA1阳性表达率明显高于良性组和对照组，而且随着EOC患者FIGO分期进展及出现淋巴结转移，FOXA1阳性表达率也呈现升高趋势，提示EOC癌组织中FOXA1过表达可能与EOC侵袭、转移相关。本次研究发现FOXA1阳性组总生存率较阴性更差，COX回归分析结果提示FOXA1阳性表达是886全科医学临床与教育 2023年10月 第21卷第10期 Clinical Education of General Practice Oct.2023，Vol.21，No.10EOC患者总生存率的危险因素，提示FOXA1可能是一种新的EOC生物标志物和治疗靶点。Wnt/-catenin通路是高等动物的发育过程中至关重要的一环，该通路主要与细胞的增殖、分化等生理过程密切相关，在多种癌症中可发现其不同程度的异常表达14。-catenin 是该通路传导过程中的重要调控因子，在多种肿瘤的研究中，-catenin基因的突变导致Wnt/-catenin通路异常激活15。本次研究中，-catenin在EOC癌组织中的阳性表达率显著低于良性组和对照组（P均0.05），提示-catenin表达异常改变可能在EOC的发生发展中发挥重要作用。进一步分析发现，-catenin阳性表达率与FIGO分期、淋巴结转移、病理分级相关，随着EOC患者FIGO分期进展、出现淋巴结转移以及分化程度降低，-catenin阳性表达率呈降低趋势。FIGO分期、淋巴结转移状态和病理分级是判断EOC恶性程度和预后的重要指标。研究表明，-catenin参与调节细胞介导的黏附作用，-catenin表达异常可能导致细胞间黏附作用异常，从而加剧肿瘤细胞的侵袭和转移16。可见-catenin也可用于评估EOC患者预后。本次研究生存分析提示与-catenin阴性组相比，-catenin阳性组的预后相对更好，COX回归分析结果显示，-catenin阳性是EOC 患者总生存率的保护因素，说明通过检测-catenin表达对于EOC患者预后具有提示意义。综上所述，FOXA1和-catenin蛋白在EOC癌组织中异常表达，FOXA1阳性表达、-catenin阴性表达可能预示着EOC分期晚、存在淋巴结转移以及预后不良，FOXA1和-catenin可能是新的EOC生物标志物和治疗靶点。本次研究的局限性在于随访时间有限，尚不能提示FOXA1和-catenin表达与EOC患者远期预后的联系。参考文献1Torre LA，Trabert B，DeSantis CE，et al.Ovarian cancerstatistics，2018J.CA Cancer J Clin，2018，68（4）：284-296.2Peres LC，Cushing-Haugen KL，Kbel M，et 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box protein A1 and its role in colorectal cancerJ.Mol Med Rep，2016，14（3）：2625-2631.10 Su MC，Wang CC，Chen CC，et al.Nuclear translocationof-catenin protein but absence of-catenin and apcmutation in gastrointestinal carcinoid tumorJ.Ann SurgOncol，2016，13（12）：1604-1609.11 BenAyed-Guerfali D，Dabbche-Bouricha E，Ayadi W，etal.AssociationofFOXA1andEMTmarkers（Twist1and E-cadherin）in breast cancerJ.Mol Bio Rep，2019，46（3）：3247-3255.12 Song B，Park SH，Zhao JC.Targeting FOXA1-mediated repression of TGF-signaling suppresses castration-resistant prostate cancer progressionJ.J Clin Invest，2018，129（2）：569-582.13 Wang K，Guan C，Fang C，et al.Clinical significance andprognostic value of Forkhead box A1 expression in human epithelial ovarian cancerJ.Oncol Lett，2018，15（4）：4457-4462.14 Lou Y，Jiang H，Cui Z，et al.Linc-ROR induces epithelial-to-mesenchymal transition in ovarian cancer by increasing Wnt/-catenin signalingJ.Oncotarget，2017，8（41）：69983-69994.15 Zheng CH，Wang JB，Lin Q，et al.CDK5RAP3 suppressesWnt/-catenin signaling by inhibiting AKT phosphorylation in gastric cancerJ.J Experl Clin Cancer Res，2018，37（1）：59.16 Nguyen VHL，Hough R，Bernaudo S，et al.Wnt/-cateninsignalling in ovarian cancer：Insights into its hyperactivation and function in tumorigenesisJ.J Ovar Res，2019，12（1）：122.（收稿日期2023-05-23）（本文编辑高金莲）887（见内文第939页）注：AC分别为正常卵巢上皮组织、上皮性卵巢良性肿瘤组织及EOC癌组织FOXA1染色；DF分别为正常卵巢上皮组织、上皮性卵巢良性肿瘤组织及EOC癌组织-catenin染色。图1不同组织的FOXA1和-catenin蛋白表达（200倍）图2BUB1、DPPA2、P311阳性与阴性表达生存曲线注：a为BUB1表达生存曲线；b为DPPA2表达生存曲线；c为P311表达生存曲线。（见内文第931页）图5 胰头局灶性脂肪浸润患者MRI反相位序列图6胰头局灶性脂肪浸润患者MRI增强胰腺实质期图像（见内文第939页）图7 胰头局灶性脂肪浸润患者1年后复查MRI同相位序列图8 胰头局灶性脂肪浸润患者1年后复查MRI反相位序列（见内文第939页）（见内文第939页）图3胰头局灶性脂肪浸润患者CT增强的胰腺实质期图像图4胰头局灶性脂肪浸润患者MRI同相位序列（见内文第939页）（见内文第939页）（见内文第885页）ABCDEF累积生存率/%100806040200048 12 16 20 24 28 32生存时间/月阳性阴性累积生存率/%100806040200048 12 16 20 24 28 32生存时间/月阳性阴性累积生存率/%100806040200阳性阴性048 12 16 20 24 28 32生存时间/月abc