希尔反应观察及反应速率测定.doc

实 验 名 称： 希尔反应的观察和反应速率的测定
中文摘要：
以菠菜叶为原料，提取叶绿体，制备叶绿体悬浮液。再向其中加入2,6 -二氯酚靛酚发生希尔反应，观察和记录实验现象。
英文摘要：
Used spinach leaves as raw material to extract chloroplast ,then prepared of chloroplast suspension. And then added 2, 6-dichlorphenolindophenol,it would occur Hill reaction, observed and recorded experimental phenomena.
实验原理：
希尔发现，离体叶绿体悬浮液在光下能还原某些氧化剂（如2,6 -二氯酚靛酚、高铁氰化钾、苯醌、NADP+、草酸等）
2H2O+2A 2AH2+O2
希尔反应的测定的方法是（1）放氧速率；（2）氧化剂被还原的速率。 本实验中2,6 -二氯酚靛酚还原后，溶液由蓝色变为无色。
实验目的：
观察和测定希尔反应，了解叶绿体在光合放氧中的作用。
实验器材和试剂：
实验材料：菠菜
实验器材：离心机、分光光度计、天平、研钵、漏斗、容量瓶、量筒、烧杯、纱布、移液管、台灯等
实验试剂：（1）提取液（0.067M 磷酸缓冲液，pH 6.5 + 0.3M 蔗糖 + 0.01M KCl）；（2） 0.1% 2,6 -二氯酚靛酚（溶于0.067M 磷酸缓冲液+0.01%KCl）
实验步骤：
1.离体叶绿体悬浮液的制备
a) 称取8克叶片,加10ml预冷提取液研磨,在研钵中捣碎30秒钟后,继续加入15ml冷提取液;经过二层纱布过滤,去残渣,挤出滤液,置于离心管中。
b) 以1000转/分离心3分钟;弃去沉淀。
c) 以3000转/分离心上层液,8分钟,弃去上清液,沉淀为破碎的叶绿体。
d) 用20ml提取液悬浮沉淀,置于冰浴备用。
2.离体叶绿体对2,6 -二氯酚靛酚的还原作用
取2支试管，分别加入5ml叶绿体悬浮液和5ml 0.1%的2,6 -二氯酚靛酚。一试管照光，另一试管置于黑暗。5-10min后观察溶液颜色的变化。

实验结果与讨论：
在实验中，最后提取的叶绿体悬浮液分成了两份，加入2，6—二氯酚靛酚后，一份在光照条件下，一份在黑暗条件下。在黑暗条件下的叶绿体悬浮液一直是蓝绿色的，而在光照条件下的叶绿体悬浮液在加入2，6—二氯酚靛酚后为蓝色，而放在光下一段时间之后叶绿体悬浮液又慢慢变成原来的颜色，绿色。
这是由于叶绿素在光照条件下被激活，而释放出电子，从而还原某些氧化剂，本实验是2，6—二氯酚靛酚。2，6—二氯酚靛酚本来是蓝色的，加入后使得提取液也显蓝色，而2，6—二氯酚靛酚被还原后变为无色，这时溶液又恢复原本的颜色。在进行了几次之后，提取液不再变色，一直显示为蓝色，估计原因可能是提取液中的某些参加反应的物质被消耗殆尽或者是长时间光照使得叶绿体受到破坏，叶绿素分解。

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