LncRNA LINC00525调控miR-338-3p_RUNX2轴对子宫颈癌细胞生物学行为的影响.pdf

实用妇产科杂志2 0 2 3年8 月第39卷第8 期Journal of Practical Obstetrics and Gynecology2023Aug.Vol.39,No.8文章编号：10 0 3-6 946(2 0 2 3)0 8-0 6 0 9-0 7LncRNA LINC0052551调控 miR-338-3p/RUNX2 轴对子宫颈癌细胞生物学行为的影响王玉宁,宋聚星2 a,田志刚2 b,郝国荣,申浩1（1.石家庄市第四医院妇科，河北石家庄0 50 0 35;2.保定市第二中心医院：a.病理科、b.检验科，河北保定0 7 2 7 50）【摘要】目的：探讨长链非编码RNA长基因非蛋白质编码RNA525（Ln c RNA LINC0 0 52 5）调控miR-338-3p/核心结合因子（RUNX2）轴对子宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法：样本选自2 0 18 年10月至2 0 2 0 年10 月期间石家庄市第四医院的52 例子宫颈癌组织和52 例癌旁组织，以及子宫颈癌细胞HeLa、C33A、Si H a 和人正常子宫颈上皮细胞Ectl/E6E7。采用实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测LINC00525、mi R-338-3p、RU NX2 mRNA 的表达；通过细胞计数试剂8（CCK8）、T r a n s w e l l、蛋白印迹（Western blot)实验检测HeLa 细胞的增殖、迁移与侵袭、RUNX2蛋白的表达；采用双荧光素酶报告基因、RNA下拉实验验证LINC00525与miR-338-3p、m i R-338-3p 与RUNX2的关系。结果：与癌旁组织比较，子宫颈癌组织中LINC00525、RU NX2 mRNA 表达水平显著升高（P0.05），mi R-338-3p表达水平显著降低（P0.05）；与人正常子宫颈上皮细胞Ectl/E6E7比较，子宫颈癌HeLa、C33A、Si-Ha细胞中LINC00525、RU NX2 mRNA 表达水平显著升高（P0.05）,mi R-338-3p 表达水平显著降低（P 0.0 5）,且HeLa 细胞变化最显著。下调LINC00525抑制HeLa 细胞增殖、迁移与侵袭。LINC00525靶向负调控miR-338-3p的表达；miR-338-3p靶向下调RUNX2的表达；下调miR-338-3p表达减弱了下调 LINC00525对HeLa 细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用,过表达 RUNX2减弱了下调LINC00525或过表达miR-338-3p对HeLa细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。结论：下调LINC00525可能通过调控miR-338-3p/RUNX2轴抑制子宫颈癌细胞增殖、迁移与侵袭。【关键词】长链非编码RNA长基因非蛋白质编码RNA525;miR-338-3p;核心结合因子；子宫颈癌；细胞增殖；细胞侵袭中图分类号：R737.33Effects of LncRNA LINC00525 on the Biological Behavior of Cervical CancerCells by RegulatingMiR-338-3p/RUNX2AxisWANG Yuning,SONG Juxing 2a,TIAN Zhigang2”,et al(1.Department of Gynecology,Shijiazhuang Fourth Hospital,Shijiazhuang Hebei 050035,China;2.a.Department of Pathology,b.Department of Laboratory Medicine,Second Central Hospital of Baoding,Baoding Hebei 072750,China)【A b s t r a c t O b j e c t i v e:T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t o f l o n g n o n-c o d i n g RNA,l o n g i n t e r g e n i c n o n-p r o t e i n c o d i n gRNA 525(LncRNA LINC00525)on the biological behavior of cervical cancer cells by regulating miR-338-3p/corebinding factor-(RUNX2)axis.Methods:We included samples from 52 cases of cervical cancer tissue and 52 ca-ses of paracarcinoma tissue from October 2018 to October 2020 in Shijiazhuang Fourth Hospital,and cell ines in-cluding cervical cancer cells HeLa,C33A,SiHa and human normal cervical epithelial cells Ect1/E6E7.Expressionsof LINC00525,miR-338-3p and RUNX2 mRNA were detected by qRT-PCR.The proliferation,migration,invasionand the RUNX2 protein expression of HeLa cells were detected by CCK8,Transwell and Western blot,respective-ly.Dual luciferase reporter assay and RNA pull down were used to verify the relationship between miR-338-3p andLINC00525,RUNX2.Results:Compared with paracancer tissues,cervical cancer tissues showed significantlyhigher expression levels of LINC00525 and RUNX2 mRNA(P0.05)and lower expression level of miR-338-3p(P0.05).Compared with Ect1/E6E7 in human normal cervical epithelial cells,expression levels of LINC00525and RUNX2 mRNA in HeLa,C33A and SiHa cells were significantly increased(P0.05),while the expressionlevel of miR-338-3p was significantly decreased(P0.05).HeLa cells showed the most significant changes.基金项目：石家庄市科学技术研究与发展计划（编号：1912 0 12 33）609文献标志码：A实用妇产科杂志2 0 2 3年8 月第39卷第8 期Journal of Practical Obstetrics and Gynecology 2023 Aug.Vol.39,No.8610Silencing LINC00525 inhibited the proliferation,migration and invasion of HeLa cell.LINC0 0 52 5 n e g a t i v e l yregulates the expression of miR-338-3p which down regulates the expression of RUNX2.Down-regulating ofmiR-338-3p expression weakened the inhibitory effect of silenced LINC00525 on the proliferation,migration andinvasion of HeLa cells,while overexpression of RUNX2 attenuates the inhibitory effects of silenced LINC00525 oroverexpressed miR-338-3p on the proliferation,migration,and invasion of HeLa cells.Conclusions:SilencingLINCo00525 may inhibit the proliferation,migration and invasion of cervical cancer cells by regulating the miR-338-3p/RUNX2 axis.Key words Long non-coding RNA long intergenic non-protein coding RNA 525;miR-338-3p;Core bindingfactor;Cervical cancer;Cell proliferation;Cell invasion子宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发病率仅次于乳腺癌、结直肠癌和肺癌 。据统计，子宫颈癌每年造成约30 万人死亡，其中8 5%发生在发展中国家,严重影响女性的生活质量 2 。因此,了解子宫颈癌的发病机制，寻找潜在的预后和靶向治疗的分子标志物,对于提高子宫颈癌患者的生存率具有重要意义。长链非编码 RNA（l o n g n o n-c o d i n g RNA，Ln-cRNA）是不具有蛋白质编码能力的长度大于2 0 0 个核苷酸的RNA3。大量研究报道LncRNA参与调节肿瘤的生物学行为,包括增殖、凋亡和转移 4,长基因非蛋白质编码RNA525（l o n g i n t e r g e n i c n o n-p r o t e i ncoding RNA 525,LINC00525）是一种 LncRNA,已有研究表明其在胃癌中高表达,沉默LINC00525可抑制胃癌细胞的增殖、迁移与侵袭 5,但LINC00525对子宫颈癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响尚不可知。通过生物信息学预测发现LINC00525可能调控miR-338-3p/核心结合因子（core bindingfactor-，RU NX2）轴，并推测LINC00525可能通过调控miR-338-3p/RUNX2轴影响子宫颈癌细胞的生物学行为。因此,本研究主要探讨LINC00525对子宫颈癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响，以及其作用的分子机制。1材料与方法1.1临床样本及细胞来源52 例子宫颈癌组织及52例癌旁组织(距离癌组织2 cm处的子宫颈组织)收集2 0 18 年10 月至2 0 2 0 年10 月在石家庄市第四医院治疗的子宫颈癌患者,所有患者在术前均未接受任何治疗。本研究得到本院伦理委员会的批准（编号：20180761），所有患者均提供了知情同意书。人正常子宫颈上皮细胞Ectl/E6E7及子宫颈癌HeLa、C33A、SiHa细胞均购自中国科学院上海细胞库。1.2主要试剂及仪器miR-338-3p模拟物（miR-338-3pmimic）及对应的阴性对照（miR-NC）、m iR-338-3p抑制剂及对应的阴性对照（抑制剂-NC）、s iR-NA LINC00525（s i-LI NC0 0 52 5）及其阴性对照（si-NC）、p c D NA 3.1载体均购自南通百奥迈科生物技术有限公司；pcDNA3.1-LINC00525、p c D NA 3.1-RU NX2由武汉金开瑞生物工程有限公司合成;细胞计数试剂8（C C K 8)试剂盒购自北京赛因百奥生物技术有限公司;总RNA提取试剂（Trizol）、增强型化学发光（ECL)试剂盒、荧光定量试剂盒、miRNA荧光定量检测试剂盒均购自北京天根生化科技公司；兔源一抗RUNX2、GAPDH及辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔二抗均购自美国Abcam公司;Herocell 240 CO,培养箱购自上海润度生物公司。1.3细胞培养与转染将Ectl/E6E7、H e La、C33A、SiHa细胞在含有10%胎牛血清(FBS)的改良Eagle培养基(DMEM)中培养。将 HeLa细胞分组为：空白组（H e La 细胞未转染）、si-NC组、si-LINC00525组、pcD-NA3.1 组、pcDNA3.1-LINC00525 组、si-LINC00525+抑制剂-NC 组、si-LINC00525+miR-338-3p抑制剂组、miR-NC组、miR-338-3p组(HeLa 细胞转染miR-338-3pmimic)、s i-LI NC0 0 52 5+p c D NA 3.1 组、si-LINC00525+pcDNA3.1-RUNX2 组、miR-338-3p+pcDNA3.1 组、miR-338-3p+pcDNA3.1-RUNX2 组。1.4实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC00525、miR-338-3p、RU NX2 m RNA 的表达水平利用Trizol试剂提取子宫颈癌组织和细胞中的RNA,LINC00525、RUNX2使用通用引物逆转录、并通过荧光定量试剂盒进行PCR扩增,miR-338-3p使用特异茎环引物逆转录、并利用miRNA荧光定量检测试剂盒进行PCR扩增,LINC00525、RU NX2 以-actin 为内参,miR-338-3p以 U6 为内参,根据2-ACi公式计算基因的相对表达量。引物序列为：LINC00525上游引物：5-CACAC-CCCAAGCAACAATCG-3，下游引物：5-GAGTGTTG-GTGCAGTCCTCA-3;RUNX2 上游引物:5-GTCTTAC-TACTACTGTGGAA-3，下游引物:5-TTCTGGAACTCT-GATATGG-3;-actin 上游引物:5-AGGGAGAACCGT-GAGAAG-3，下游引物：5-CTGGTCCGACAGG-TAGAA-3;miR-338-3p 上游引物:5-TGCGGTCCAG-CATCAGTGAT-3，下游引物：5-CCAGTGCAGGGTC-CGAGGT-3;U6 上游引物:5-CTCGCTTCGCCAGCA-CA-3,下游引物:5-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3。1.5CCK8检测细胞增殖将各组的HeLa 细胞按1104个/孔接种于96 孔板中,分别在细胞培养的0、实用妇产科杂志2 0 2 3年8 月第39卷第8 期Journal of Practical Obstetrics and Gynecology2023Aug.Vol.39,No.824、48 小时向每孔添加10 l CCK8试剂。孵育2 小时后利用酶标仪检测450 nm处的光密度(OD)值。1.6Transwell 检测细胞迁移与侵袭对于迁移实验,将各组的HeLa细胞,转染48 小时后,胰酶消化收集细胞并计数,将510 4个细胞用10 0 l无FBS的DMEM中重悬,然后加入到 Transwell 上室中。将 50 0 l含有10%FBS的DMEM加入到Transwell下室，在培养箱中孵育48 小时，然后用4%多聚甲醛固定、0.1%结晶紫染色细胞,利用光学显微镜观察并计数迁移细胞数。对于侵袭实验,将各组的 HeLa 细胞转染 48 小时后，再将Matrigel加入Transwell 小室并在37 下固化3小时，然后将510 4个细胞用10 0 l无胎牛血清的DMEM中重悬后加入到Transwell上室中。将50 0 ul含有10%FBS的DMEM培养基加入到Transwell下室,剩余步骤同细胞迁移。1.7双荧光素酶报告基因实验利用Starbase数据库、Targetscan 网站分别预测LINC00525与miR-338-3p、m i R-338-3p 与RUNX23UTR的结合位点。分别构建LINC00525、RU NX2 3 U T R的野生型和突变型质粒，并命名为WT-LINC00525、M U T-LI NC0 0 52 5、WT-RUNX2、M U T-RU NX2。将 WT-LINC00525、M U T-LINC00525分别与miR-NC或miR-338-3p mimic 共转染 HeLa 细胞，WT-RUNX2、M U T-RU NX2 分别与miR-NC 或miR-338-3p mimic 共转染HeLa 细胞,转染48小时后，命名为miR-NC+WT-RUNX23UTR共转染组、miR-338-3pmimic+WT-RUNX23UTR共转染组、miR-NC+MUT-RUNX2 3UTR 共转染组、miR-338-3pmimic+MUT-RUNX23UTR共转染组，利用双荧光素酶报告基因检测系统观察荧光素酶活性变化。1.8RNA下拉实验检测将生物素化的 bio-NC和bio-miR-338-3p转染到HeLa细胞中转染48 小时后，并分别命名为bio-NC组、bio-miR-338-3p组。将bio-NC组、bio-miR-338-3p组细胞裂解液分别与磁珠混合形成蛋白质生物化RNA磁珠复合物，利用高盐洗脱除去磁珠，得到蛋白质生物化RNA复合物。最后利用蛋白印迹（Westernblot）测量RUNX2蛋白在蛋白质生物化RNA混合物中的表达量。1.9Westernblot检测RUNX2蛋白表达收集各组的 HeLa 细胞,使用 RIPA 裂解缓冲液提取细胞总蛋白，将蛋白质进行定量、电泳分离、转膜、封闭后，加入一抗RUNX2(1：10 0 0）、G A PD H(1：10 0 0)在4下过夜孵育。随后,将膜用含有 Tween 的 Tris-HCl 缓冲盐溶液(TBST)洗涤3次,并与HRP偶联的二抗(1：1000)在室温下孵育2 小时。通过增强型化学发光（EC L)检测试剂盒检查印迹,ImageJ软件分析蛋白的 611 灰度值。1.10统计学分析采用SPSS21.0软件对实验数据进行统计学分析，数据以s表示。t检验用于比较两组计量资料之间的差异，多组间的差异比较采用单因素方差分析,进一步两组间的差异比较用 SNK-q 检验,P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1 LINC00525、mi R-338-3p、RU NX2 mRNA 在子宫颈癌组织和细胞中的表达qRT-PCR 检测结果示,与癌旁组织比较，子宫颈癌组织中LINC00525、RU NX2mRNA表达水平显著升高（P0.05），mi R-338-3p 表达水平显著降低（P0.05）,见表1。与人正常子宫颈上皮细胞Ectl/E6E7比较,子宫颈癌HeLa、C33A、SiHa细胞中LINC00525、RU NX2 m RNA 表达水平显著升高,miR-338-3p表达水平显著降低,差异均有统计学意义（P0.05），且 LINC00525、RU NX2 mRNA 表达水平在HeLa 细胞中最高,miR-338-3p表达水平在HeLa 细胞中最低,因此,选用 HeLa 细胞进行后续实验研究,见表2。表 1LINC00525,miR-338-3p、RU NX2 m RNA在子宫颈癌组织中的表达(n=52)Tab 1Expression of LINC00525,miR-338-3p,RUNX2mRNA in cervical cancer tissues(n=52)LINC00525癌旁组织1.01 0.08子宫颈癌组织2.12 0.2332.870P0.000表 2 LINC00525,miR-338-3pRUNX2 mRNA在子宫颈癌细胞中的表达(n=6)Tab 2Expression of LINC00525,miR-338-3p,RUNX2mRNA in cervical cancer cells(n=6)LINC00525Ectl/E6E71.01 0.12HeLa3.25 0.360C33A2.53 0.22 0SiHa2.14 0.160与 Ect1/E6E7 细胞比较,P0.052.2下调LINC00525对HeLa细胞增殖、迁移与侵袭的影响向qRT-PCR、CCK 8、T r a n s w e l l 检测结果示,与空白组及 si-NC 组比较,si-LINC00525组HeLa 细胞中LINC00525表达水平、OD450值（2 4、48 小时）、迁移细胞数目及侵袭细胞数目显著降低（P0.05）,提示下miR-338-3p1.03 0.110.43 0.0337.9470.000miR-338-3p1.04 0.130.32 0.02 00.39 0.02 00.43 0.04 0RUNX2 mRNA1.02 0.091.72 0.1528.8560.000RUNX2mRNA1.05 0.142.890.2502.180.1702.33 0.190实用妇产科杂志2 0 2 3年8 月第39卷第8 期Journal of Practical Obstetrics and Gynecology2023Aug.Vol.39,No.8612调LINC00525 抑制 HeLa 细胞增殖、迁移与侵袭,见表3。表 3下调 LINC00525 对 HeLa 细胞增殖、迁移与侵袭的影响(n=6)Tab 3Effects of silencing LINC00525 on the proliferation,migration and invasion of HeLa cells(n=6)LINC005251.04 0.09OD450值0小时24小时48小时迁移细胞数（个）2215.36 11.26218.56 13.22侵袭细胞数（个）123.56 7.33126.68 7.52 42.39 3.66 0与空白组比较,P0.05;与si-NC组比较,P0.052.3LINC00525与miR-338-3p的关系验证Starbase数据库预测LINC00525与miR-338-3p的结合位点,见图1。双荧光素酶报告基因实验检测结果示，与miR-NC+WT-LINC00525共转染组(1.12 0.14)比较，miR-338-3pmimic+WT-LINC00525共转染组（0.330.0 2）细胞荧光素酶活性显著降低（P=0.000);与 miR-NC+MUT-LINC00525 共转染组(1.0 80.11)比较,miR-338-3p mimic+MUT-LINC00525共转染组（1.150.13）细胞荧光素酶活性差异无统计学意义（P=0.338）。q RT-PCR检测结果表明，与空白组(1.0 2 0.0 8）、si-NC 组(1.0 4 0.0 7)比较,si-LINC00525组(2.2 5 0.13)HeLa 细胞中miR-338-3p表达水平显著升高（P=0.000;P=0.000)；与空白组(0.99 0.07)、p c D NA 3.1 组(1.0 2 0.0 9)相比,pcD-NA3.1-LINC00525组(0.2 7 0.0 1)miR-338-3p表达水平降低（P=0.000;P=0.000）。提示LINC00525可靶向负调控miR-338-3p的表达。WT-LINC00525miR-338-3pMUT-LINC00525图1 Starbase数据库预测 LINC00525与miR-338-3p的结合位点Fig 1 The binding site of LINC00525 and miR-338-3ppredicted by Starbase database2.4下调miR-338-3p 表达对下调 LINC00525 后 HeLa细胞增殖、迁移与侵袭的影响qRT-PCR、CCK 8、T r a n-swell 检测结果示,与 si-LINC00525组、si-LINC00525+抑制剂-NC组比较，si-LINC00525+miR-338-3p抑制剂组HeLa细胞中miR-338-3p表达水平显著降低，OD450值（2 4、48 小时）、迁移细胞数目及侵袭细胞数目显著升高,差异均有统计学意义（P0.05）,提示下调miR-338-3p表达减弱了下调LINC00525对HeLa细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用,见表4。表 4下调miR-338-3p表达对下调 LINC00525后 HeLa空白组si-NC组1.05 0.120.24 0.020.21 0.010.63 0.040.65 0.051.14 0.191.17 0.185CCCCAGTTTCATGGATGCTGGC33GTTGTTTTAGTGACTACGACCT5CCCCAGTTTCATGGAACGAGGC3si-LINC00525 组0.27 0.01 000.23 0.030.320.02020.56 0.040089.95 6.82.005细胞增殖、迁移与侵袭的影响(n=6)Tab 4Effects of down-regulating miR-338-3p expression onproliferation,migration and invasion of HeLa cells afterdown-regulating LINC00525(n=6)si-LINC00525 组miR-338-3p1.05 0.11OD450值0小时24小时48小时迁移细胞数（个）92.39 7.26侵袭细胞数（个）43.36 3.54与si-LINC00525组比较，P0.05；与si-LINC00525+抑制剂-NC 组比较,P0.052.5miR-338-3p与RUNX2的关系验证getscan网站预测发现:miR-338-3p与RUNX23UTR存在结合位点,见图2。双荧光素酶报告基因实验检测结果示，与miR-NC+WT-RUNX23UTR共转染组(1.08 0.11)相比,miR-338-3p mimic+WT-RUNX23UTR共转染组（0.36 0.0 1）细胞的荧光素酶活性降低(P=0.000);与 miR-NC+MUT-RUNX2 3UTR 共转染组（1.0 7 0.12）相比，miR-338-3pmimic+MUT-RUNX23UTR共转染组(1.0 30.0 9)细胞的荧光素酶活性差异无统计学意义（P=0.528）。W e s t e r nblot检测结果示，与空白组（0.8 6 0.0 6）miR-NC组(0.890.05)相比,miR-338-3p 组(0.34 0.0 1)He-La细胞中RUNX2蛋白表达水平显著降低（P=0.000；P=0.0 0 0），见图3。RNA下拉实验表明miR-338-3p可与RUNX2结合，见图4。提示RUNX2为miR-338-3p的靶基因，miR-338-3p可靶向负调控RUNX2 的表达。WT-RUNX23UTRmiR-338-3pMUT-RUNX23UTR图2 Targetscan网站预测miR-338-3p与RUNX23UTR的结合位点Fig 2The binding site of miR-338-3p andRUNX2 3UTR predicted by Targetscan websitesi-LINC00525+si-LINC00525+miR-抑制剂-NC组338-3p抑制剂组1.03 0.120.52 0.04000.22 0.040.25 0.030.34 0.010.36 0.030.57 0.030.55 0.0490.27 6.8845.76 3.395CUUUAUCAGCAUGAAAUGCUGGA33GUUGUUUUAGUGACUACGACCU5CUUUAUCAGCAUGAAAUCGACGA0.24 0.010.64 0.05 000.97 0.06 00138.65 8.63 076.28 4.82 00E利用 Tar-53实用妇产科杂志2 0 2 3年8 月第39卷第8 期Journal ofPractical Obstetricsand Gynecology2023Aug.Vol.39,No.8RUNX2GAPDH空白组miR-NC组miR-338-3p组图3Westernblot检测RUNX2蛋白表达Fig3Western blot detect RUNX2 protein expressionRUNX2GAPDH阳性对照组bio-NC组图4RNA下拉实验验证miR-338-3p与RUNX2结合Fig 4RNA pull-down experiment verifies thecombination of miR-338-3p and RUNX2 613 2.6下调LINC00525的同时再过表达RUNX2或同时上调miR-338-3p和RUNX2对HeLa细胞增殖、迁移与侵袭的影响可Western blot、CCK 8、T r a n s w e l l 检测结果示，与 si-LINC00525组及si-LINC00525+pcD-NA3.1组比较,si-LINC00525+pcDNA3.1-RUNX2组RUNX2蛋白、OD450值（2 4、48 小时）、迁移细胞数目及侵袭细胞数目显著升高（P0.05），见图5和表5。与miR-338-3p组、miR-338-3p+pcDNA3.1组比较,miR-338-3p+pcDNA3.1-RUNX2组RUNX2蛋白、OD45o值（2 4、48 小时）、迁移细胞数目及侵袭细胞数目bio-miR-338-3p组显著升高（P0.05），见图6 和表6。提示过表达RUNX2减弱了下调 LINC00525 或过表达 miR-338-3p对 HeLa 细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。迁移侵袭si-LINC00525组图5Transwell 检测下调 LINC00525 的同时再过表达 RUNX2对 HeLa 细胞迁移与侵袭的影响Fig 5 Transwell detects the effect of down-regulation of LINC00525 and overexpression of RUNX2 on migration and invasion of HeLa cell表 5下调 LINC00525的同时再过表达 RUNX2 对 HeLa细胞中RUNX2蛋白、细胞增殖、迁移与侵袭的影响(n=6)Tab 5Effects of down-regulation of LINC00525 and overexpressionof RUNX2 on RUNX2 protein experession,proliferation,migration andsi-LINC00525+pcsi-LINCO0525组pcDNA3.1 组RUNX2/GAPDH0.25 0.02OD450值0小时24小时48小时迁移细胞数（个）93.85 8.12侵袭细胞数（个）41.8 7 3.6 9与 si-LINC00525 组比较,P0.05;与 si-LINC00525+pcD-NA3.1组比较,P0.05si-LINC00525+pcDNA3.1组 si-LINC00525+pcDNA3.1-RUNX2组invasion of HeLa cells(n=6)si-LINC00525+0.27 0.010.21 0.020.24 0.030.33 0.020.35 0.010.59 0.040.57 0.0595.66 9.2544.61 3.25表6 同时上调miR-338-3p和RUNX2对HeLa细胞中RUNX2蛋白、细胞增殖、迁移与侵袭的影响(n=6)Tab 6 Effects of simultaneous up-regulation of miR-338-3p andRUNX2 on RUNX2 protein expression,cell proliferation,migrationmiR-338-3p+pcmiR-338-3p组pcDNA3.1组DNA3.1-RUNX2 组0.68 0.05 000.26 0.020.72 0.04.001.18 0.0700143.35 11.270273.62 5.08 02and invasion in HeLa cells(n=6)RUNX2/GAPDH0.35 0.02OD450值0小时24小时48小时迁移细胞数（个）10 5.559.2 6侵袭细胞数（个）56.2 44.2 7与miR-338-3p组比较,P0.05;与miR-338-3p+pcDNA3.1组比较,P0.05miR-338-3p+0.37 0.030.22 0.010.23 0.020.41 0.030.44 0.020.72 0.060.76 0.08108.31 9.5458.33 4.39DNA3.1-RUNX2组0.85 0.07 00.25 0.020.96 0.04 001.490.1202167.62 12.85 0285.39 6.22 0实用妇产科杂志2 0 2 3年8 月第39卷第8 期Journal of Practical Obstetrics and Gynecology2023Aug.Vol.39,No.8 614迁移侵袭miR-338-3p组图6 Transwell检测同时上调miR-338-3p和RUNX2对HeLa细胞迁移与侵袭的影响Fig 6 Transwell detects the effect of simultaneous up-regulation of miR-338-3p and RUNX2 on migration and invasion of HeLa cells3 讨 论越来越多的证据表明,LncRNA在包括子宫颈癌在内的多种恶性肿瘤的发病机制中具有重要的作用 6 。LncRNALINC00525在多种肿瘤中异常表达，其与癌症进展有关 7 ,Wan等 8 发现,LINC00525在胶质瘤细胞中高表达,沉默LINC00525可抑制胶质瘤细胞增殖、迁移与侵袭;Peng等 9 报道,LINC00525在大肠癌组织和细胞中表达上调,LINC00525 的过表达与临床分期和肿瘤大小呈正相关,敲低LINC00525可以抑制大肠癌细胞增殖并诱导细胞凋亡;Fang 等 L10i证明,LINC00525 在肺腺癌细胞和组织中高表达，LINC00525的上调与肺腺癌患者的不良预后相关,在体外水平上沉默LINC00525可抑制肺腺癌细胞增殖。本研究结果显示,LINC00525在子宫颈癌组织和细胞中上调表达，下调LINC00525可抑制子宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移与侵袭，提示LINC00525在子宫颈癌中发挥着癌基因的作用,LINC00525可能成为子宫颈癌的潜在分子标志物。miR-338-3p是位于染色体17 q25.3上的miRNA，其在结直肠癌中低表达,过表达miR-338-3p可抑制结直肠癌细胞的增殖与迁移;miR-338-3p 在子宫颈癌组织中低表达，上调其表达可抑制子宫颈癌细胞增殖并诱导细胞凋亡 12 ;miR-338-3p通过下调AKT/-catenin信号通路抑制肺癌细胞侵袭和增殖 13。LncRNA和miRNA之间的相互作用已被证实是Ln-cRNA 介导肿瘤细胞恶性表型的关键机制 14。本研究结果显示,miR-338-3p在子宫颈癌组织和细胞中低表达，LINC00525可靶向负调控miR-338-3p的表达，表明下调LINC00525可能