1株藏猪源Moraxella pluranimalium的分离鉴定及生物学特性分析.pdf

中国畜牧兽医 ,():C h i n aA n i m a lH u s b a n d r y&V e t e r i n a r yM e d i c i n e株藏猪源M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m的分离鉴定及生物学特性分析马静,杨丹娇,韦龙拼,甘代冰,龙芷欣,何宇琪,卿霆,范燕迪,周泷(西南民族大学畜牧兽医学院,成都 ;四川省甘孜藏族自治州畜牧业科学研究所,康定 )摘要:【目的】确定四川省甘孜藏族自治州发病藏猪的病原菌,探究各菌株之间的亲缘关系及耐药性,为对其进行有效防控提供科学依据.【方法】从病死猪肺脏中分离出株可疑病原菌,通过细菌分离培养、Sr R NAP C R扩增测序、遗传演化分析、药敏试验、耐药基因与 Sr R NA突变位点检测、生物被膜试验、小鼠致病试验对分离菌株进行鉴定和分析.【结果】经 Sr R NAP C R扩增与遗传进化分析显示,该菌与西班牙菌株C R 、L G g、A R A、GM 的核苷酸序列相似性均为 ,并与猪源莫拉菌聚为一个遗传分支,表明该病原菌为M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m,命名为K D .形态学观察显示该菌为双肾型革兰阴性双球菌.生物被膜试验测定显示,该菌可形成生物被膜,使动物病变痊愈后仍有细菌定植在体内,长期成为该病原菌的宿主.药敏试验结果显示,该菌对抗菌药物复达欣、磺胺异噁唑高度敏感;对盐酸大观霉素、美罗培南中度敏感;对氨苄青霉素、庆大霉素、阿莫西林、头孢噻呋钠、氟苯尼考、四环素、恩诺沙星耐药.其中,复达欣、磺胺异噁唑、盐酸大观霉素和美罗培南对该菌的最小抑菌浓度(M I C)分别为、和g/m L.耐药基因检测结果显示,e r m F、e r m B、t e t B、t e t D、b l aT EM、b l aC T X M基因均未检出.Sr R NA序列分析显示,存在A T、C T等 个突变位点,推测与分离菌株出现多重耐药有关.小鼠致病性试验结果显示,该菌可引起小鼠肺脏出现少量出血点,脾脏明显肿大,但不致死,耐过后可恢复健康.【结论】本研究为国内首次报道藏猪源M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m,药敏试验结果可为该菌引起的疾病防治与流行病学调查提供参考依据.关键词:藏猪;M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m;分离鉴定;药敏试验;致病性中图分类号:S 文献标识码:AD o i:/j c n k i 开放科学(资源服务)标识码(O S I D):修回日期:基金项目:西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金(Z YN );四川省自然科学基金(N S F S C )联系方式:马静,E m a i l:q q c o m;杨丹娇,E m a i l:q q c o m.马静和杨丹娇对本文具有同等贡献,并列为第一作者.通信作者周泷,E m a i l:z h o u l o n g s c u c o mI s o l a t i o n,I d e n t i f i c a t i o na n dB i o l o g i c a lC h a r a c t e r i s t i c sA n a l y s i so faM o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u mS t r a i nf r o mT i b e t a nP i g sMAJ i n g,YANGD a n j i a o,WE IL o n g p i n,GAND a i b i n g,L ONGZ h i x i n,HEY u q i,Q I NGT i n g,F ANY a n d i,Z HOUL o n g(S c h o o l o fA n i m a lH u s b a n d r ya n dV e t e r i n a r yM e d i c i n e,S o u t h w e s tM i n z uU n i v e r s i t y,C h e n g d u ,C h i n a;I n s t i t u t e o fA n i m a lH u s b a n d r yS c i e n c e,G a n z iT i b e t a nA u t o n o m o u sP r e f e c t u r e,S i c h u a nP r o v i n c e,K a n g d i n g ,C h i n a)A b s t r a c t:【O b j e c t i v e】T h i ss t u d yw a sa i m e dt od e t e r m i n e t h ep a t h o g e n i cb a c t e r i ao fT i b e t a np i g si nG a n z iT i b e t a nA u t o n o m o u sP r e f e c t u r eo fS i c h u a np r o v i n c e,e x p l o r e t h eg e n e t i c r e l a t i o n s h i pa n dd r u gr e s i s t a n c e a m o n g t h e s t r a i n s,a n dp r o v i d e s c i e n t i f i cb a s i s f o r e f f e c t i v ep r e v e n t i o na n dc o n t r o l【M e t h o d】As u s p i c i o u sp a t h o g e n i cb a c t e r i aw a si s o l a t e df r o ml u n go fd e a dp i g T h ei s o l a t e ds t r a i n s w e r ei d e n t i f i e d a n d a n a l y z e d b y b a c t e r i a li s o l a t i o n a n d c u l t u r e,S r R NA P C R中国畜牧兽医 卷a m p l i f i c a t i o na n ds e q u e n c i n g,g e n e t i c e v o l u t i o na n a l y s i s,d r u gs e n s i t i v i t y t e s t,d r u gr e s i s t a n c eg e n ea n d Sr R NA m u t a t i o ns i t ed e t e c t i o n,b i o f i l mt e s ta n dp a t h o g e n i c i t yt e s to fm i c e,r e s p e c t i v e l y【R e s u l t】T h er e s u l t so f Sr R NAP C Ra m p l i f i c a t i o na n dg e n e t i ce v o l u t i o na n a l y s i ss h o w e dt h a tt h en u c l e o t i d es e q u e n c es i m i l a r i t yb e t w e e nt h i ss t r a i na n dS p a n i s hs t r a i nC R ,L G g,A R Aa n dGM w a s ,r e s p e c t i v e l y,a n di tw a sc l u s t e r e di n t oag e n e t i cb r a n c hw i t hM o r a x e l l as u i s,i n d i c a t i n gt h a tt h i sp a t h o g e nw a sM o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m,n a m e dK D M o r p h o l o g i c a lo b s e r v a t i o nr e s u l t s h o w e dt h a tt h i ss t r a i nw a saG r a mn e g a t i v ed i p l o c o c c u so fk i d n e yt y p e T h eb i o f i l mt e s td e t e r m i n e dt h a t t h eb a c t e r i ac o u l df o r mb i o f i l m,s ot h a t t h eb a c t e r i as t i l l c o l o n i z e d i nt h eb o d ya f t e r t h e a n i m a l d i s e a s eh e a l e d,a n db e c a m e t h eh o s t o f t h ep a t h o g e n f o r a l o n g t i m e T h er e s u l t so fd r u gs e n s i t i v i t yt e s ts h o w e dt h a tt h i ss t r a i n w a sh i g h l ys e n s i t i v et ot h ea n t i b i o t i c sF u d a x i na n ds u l f a i s o x a z o l e;M o d e r a t e l ys e n s i t i v e t os p e c t i n o m y c i nh y d r o c h l o r i d ea n dm e r o p e n e m;R e s i s t a n tt oa m p i c i l l i n,g e n t a m i c i n,a m o x i c i l l i n,c e f o t a x i f u rs o d i u m,f l o r f e n i c o l,t e t r a c y c l i n ea n de n r o f l o x a c i n Am o n g t h e m,t h e m i n i m u m i n h i b i t o r y c o n c e n t r a t i o n(M I C)o f F u d a x i n,s u l f a i s o x a z o l e,s p e c t i n o m y c i nh y d r o c h l o r i d e a n dm e r o p e n e ma g a i n s t t h i sb a c t e r i u mw e r e,a n dg/m L,r e s p e c t i v e l y T h er e s u l t so fd r u gr e s i s t a n c eg e n ed e t e c t i o ns h o w e dt h a te r m F,e r m B,t e t B,t e t D,b l aT EMa n db l aC T X Mg e n e sw e r en o td e t e c t e d Sr R NAs e q u e n c ea n a l y s i s r e s u l t ss h o w e dt h a t t h e r ew e r e m u t a t i o ns i t e s s u c ha sA Ta n dC T,w h i c hm i g h tb e r e l a t e d t ot h em u l t i p l ed r u gr e s i s t a n c eo f t h e i s o l a t e ds t r a i n T h ep a t h o g e n i c i t yt e s to fm i c es h o w e dt h a t t h eb a c t e r i ac o u l dc a u s eas m a l la m o u n to fb l e e d i n gs p o t si nl u n go f m i c e,a n dt h es p l e e n w a so b v i o u s l ys w o l l e n,b u t i tw a sn o t f a t a l,a n di tc o u l dr e c o v e rh e a l t ha f t e rt o l e r a n c e【C o n c l u s i o n】T h i ss t u d yw a s t h e f i r s t r e p o r to fM o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u mf r o mT i b e t a np i g s i nC h i n a,a n dt h er e s u l t so f d r u g s e n s i t i v i t y t e s t c o u l d p r o v i d e r e f e r e n c e b a s i sf o r d i s e a s e p r e v e n t i o n a n de p i d e m i o l o g i c a l i n v e s t i g a t i o nc a u s e db yt h i sb a c t e r i u mK e y w o r d s:T i b e t a n p i g s;M o r a x e l l a p l u r a n i m a l i u m;i s o l a t i o n a n d i d e n t i f i c a t i o n;d r u gs u s c e p t i b i l i t yt e s t;p a t h o g e n i c i t y 莫 拉 菌(M o r a x e l l a)属 于 假 单 胞 菌 目(P s e u d o m o n a d a l e s)莫拉菌科(M o r a x e l l a c e a e)莫拉菌属(M o r a x e l l a)的成员,为革兰阴性球菌,通常呈双球状,偶成单个存在,无鞭毛,无芽孢,一般无荚膜.营养要求不高,普通培养基上即可生长,需氧,最适生长温度为 .形态光滑,灰白,不透明.较长时间培养后,菌落可呈粗糙颗粒状,黏附于培养基的表面,为非乳糖发酵菌落,无溶血现象.莫拉菌属早期被认为是对人体无致病性的上呼吸道正常寄居菌,但近几年研究发现,该菌可引起儿童和成人上呼吸道感染,也可引起成人下呼吸道感染,患有慢性阻塞性肺病的成人尤其明显,在免疫缺陷患者中,卡他莫拉菌(M o r a x e l l ac a t a r r h a l i s)可导致肺炎、感染性心内膜炎及脑膜炎等疾病.有数据显示,该莫拉菌属能产生生物被膜,并使其对生物机体具有一定的抵抗力和耐药性 .既往卡他莫拉菌对内酰胺类、四环素类、大环内酯类药物具有良好的敏感性,然而近年来随着内酰胺酶阳性率逐渐升高,该菌对氨苄青霉素和内酰胺类抗菌药的耐药性逐渐升高.世纪 年代以来,随着卡他莫拉菌的分离率不断上升,世界各地也相继出现产内酰胺酶的耐药菌株.W a l k e r等对 年间同一医院分离到的 株卡他莫拉菌进行耐药趋势研究发现,产酶耐药株比例由 上升到.研究发现,免疫力正常的儿童因感染奥斯陆莫拉菌(M o r a x e l l ao s l o e n s i s)导致脓毒症而长期低血压;健康年轻成年人也出现由奥斯陆莫拉菌引起的股骨骨髓炎.在动物中,牛传染性 结 膜 炎 的 病 原 体 为 牛 莫 拉 菌(M o r a x e l l ab o v i s);E m b e r s等 从猕猴鼻咽中分离出株能致鼻出血的林肯莫拉菌(M o r a x e l l a l i n c o l n i i);余桃樱等 于 年首次从猪淋巴结分离到的卡他莫拉菌是致猪高热、呼吸窘迫、猝死的主要致病菌,表明莫拉菌也可引起不同动物发生呼吸系统、结膜炎等疾病.在猪中,近年来从患有脑膜炎、心内膜炎的病猪期马静等:株藏猪源M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m的分离鉴定及生物学特性分析中分离出的莫拉菌呈现上升趋势 .学者分别从西班牙病猪脑膜中分离出猪莫拉菌 和从腹腔中分离出M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m.本研究从国内藏 猪 肺 脏 中 分 离 鉴 定 到株 疑 似M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m,并对其开展生物被膜形成、耐药性和小鼠致病性分析,以期为研究该病原菌的生物学特性及防治提供参考.材料与方法 病料采集临床样品于 年月采自四川康定某藏猪养殖场,将发病死亡猪解剖后取肺脏,置于 保存,送至实验室进行病原菌分离.主要试剂及仪器细菌基因组D NA提取试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司;T a qP C R M a s t e r M i x购自北京博凌科生物有限公司;革兰染色液购自北京索莱宝科技有限公司;种抗菌药物(氨苄青霉素、复达欣、庆大霉素、阿莫西林、头孢噻呋钠、氟苯尼考、磺胺异噁唑、硫酸安普霉素、美罗培南、恩诺沙星、乙酰甲喹、四环素、盐酸大观霉素)购自上海源叶生物科技有限公司.P C R扩增仪(B YQ )购自杭州博 日 科 技 与 限 公 司;光 学 显 微 镜(X X,A L C )购自中国北京赛多利斯仪器系统有限公司;电热恒温培养箱(DH P )购自上海齐欣科学仪器有限公司;紫外线可见光光度计(TU )购自北京普析通用仪器有限责任公司.细菌分离与纯化在无菌条件下从病猪肺脏内部组织中蘸取细菌,连续划线接种于T S A固体培养基与绵羊血琼脂平板上,恒温培养 h,挑取单个菌落进行纯化后,革兰染色镜检观察分离菌株的形态特征;无菌挑取单菌落接种于T S B液体培养基中,恒温摇床中培养 h,加入灭菌甘油,保存备用.Sr R N A扩增与测序将纯化的菌落接种于T S B液体培养基中制成菌悬液,利用细菌基因组D N A提取试剂盒提取分离菌株D N A作为P C R模板.参照朱飞舟等 合成细菌 Sr R N A通用引物,引物序列为:F:A G A G T T T G A T C C T G G C T C A G ;R:G G T T A C C T T G T T A C G A C T T ,目的片段长约 b p.引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成.P C R反应体系 L:T a qP C RM a s t e r M i x L,上、下游引物各L,模板D NAL,d d HO L.P C R反 应 条 件:预 变 性m i n;变性 s,退火 s,延伸m i n,共 个循环;延伸 m i n.P C R产物进行 琼脂糖凝胶电泳鉴定后送生工生物工程(上海)股份有限公司测序.相似性比对及系统进化树构建对测序所获序列在N C B I中进行B L A S T比对,确定种属范围.选取不同动物源的莫拉菌部分菌株序列(表),利用D NA S t a r软件进行相似性比对,并用M e g a 软件构建系统进化树.表莫拉菌属参考菌株信息T a b l eR e f e r e n c e s t r a i ni n f o r m a t i o no fM o r a x e l l a菌株S t r a i n s种S p e c i e sG e n B a n k登录号G e n B a n ka c c e s s i o nN o 来源S o u r c e地区A r e a sE J AM o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u mMT 猪瑞典V L M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u mMT 猪西班牙C R M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u mMT 猪西班牙L G gM o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u mMT 猪西班牙L L M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u mMT 猪西班牙A R AM o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u mMT 猪西班牙GM M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u mMT 猪西班牙UK M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u mMT 猪西班牙V L M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u mMT 猪西班牙C R M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u mMT 猪西班牙C D C A M o r a x e l l as p E F 猪西班牙 M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u mN R_ 猪西班牙S N MM o r a x e l l as p GU 猪西班牙E J M o r a x e l l ap o r c iMT 猪西班牙中国畜牧兽医 卷续表菌株S t r a i n s种S p e c i e sG e n B a n k登录号G e n B a n ka c c e s s i o nN o 来源S o u r c e地区A r e a s M o r a x e l l ap o r c iL T 猪西班牙S N M o r a x e l l ap o r c iN R_ 猪西班牙MO R M o r a x e l l as p FM 骆驼比利时MO R M o r a x e l l as p FM 骆驼比利时C C UG TM o r a x e l l a c u n i c u l lA F 兔瑞典C C UG M o r a x e l l a c u n i c u l lN R_ 兔瑞典S J BM o r a x e l l a b o v i sJ N 牛乌拉圭S p M o r a x e l l a b o v i sJ N 牛乌拉圭F s M o r a x e l l a b o v i sJ N 牛乌拉圭A T C C TM o r a x e l l a o v i sA F 羊瑞典A T C C M o r a x e l l a c a t a r r h a l i sN R_ 羊瑞典 /M o r a x e l l a o v i sN R_ 羊瑞典 生物被膜试验挑取单个菌落于m L离心管中 孵育 h,将细菌加入 孔板中,第列加入菌液作阳性对照,第列加入T S B作阴性对照,L/孔,静置培养 h;用无菌生理盐水缓慢清除浮游菌,结晶紫染色 m i n,酒精脱色m i n;用无菌生理盐水洗去未与细菌细胞壁结合的结晶紫,酒精脱色m i n洗脱结晶紫,用普通光学显微镜观察染色情况.药敏试验在个 孔板中各加 L的T S B肉汤培养液(列),在第列加入 种不同的抗菌药物,取 L于第列依次进行梯度稀释至第 列(从 列中取出 L弃去),加入菌液至第 列.板第 列加入菌液作阳性对照,板第 列加入等量T S B作阴性对照,恒温培养 h,测定分离菌株对不同药物的最小抑菌浓度(M I C),参照E U C A S T欧盟药敏试验标准判定其耐药情况.耐药基因与 Sr R N A突变位点检测参考文献 设计分离菌大环内酯类耐药基因e r m F、e r m B,四环素类耐药基因t e t D、t e t B,内酰胺类耐药基因b l aT EM、b l aC T X M及 Sr R NA引物(表).引物均由北京擎科生物科技有限公司合成.P C R反应体系及程序同.选取P C R扩增阳性产物送北京擎科生物科技有限公司进行测序,所获序列在N C B I数据库中以 Sr R NA(登录号:F J )为标准序列进行B L A S T比对.表耐药基因及 Sr R N A扩增引物序列T a b l eP r i m e r s e q u e n c e so fd r u gr e s i s t a n c eg e n ea n d Sr R N Aa m p l i f i c a t i o n基因G e n e s引物序列P r i m e r s e q u e n c e s()片段长度F r a g m e n ts i z e/b p退火温度A n n e a l i n gt e m p e r a t u r e/参考文献R e f e r e n c e se r m FF:A GAAA T T G C C C G T T C G T T T T A C G G L u o等 R:A T T T T T C A G G G A C AA C T T C C A G C A T T Te r m BF:G T T C AAG AA C AA T C AA T A C A GA G 李晨等 R:C A T T T TA C AG G AAAA G GA C TA G Gt e t BF:AA T A G C C A C TAAA T G G G G C G 张波等 R:A TAA C A C C G G T T G C A T T G G Tt e t DF:A T G T G C T G T G G A T G T T G T A T 王学君等 R:C C T G T AG T T T T C C C T GA T T Tb l aT EMF:A TAAAA T T C T T G AAG A C G AAA 许淑芸等 R:G A C A G T T A C C AA T G C T T AA T Cb l aC T X MF:AAG T GAAA G C GAA C C G AA T C T 曹正花等 R:A T T G C C C G A G G T GAA G T G Sr R NAF:C A G G C T G C T G C AA C T G T T TA 陈霞等 R:C AA C C GAAA C A C C A G AG G T T期马静等:株藏猪源M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m的分离鉴定及生物学特性分析 小鼠致病试验将纯化后的细菌混悬于T S B液体培养基中,经菌落数测定后稀释为 C F U/m L.选取 只 gS P F昆明小鼠(购自成都达硕实验动物有限公司),随机分为组:试验组和对照组,每组 只.试验组小鼠每只腹腔注射 m L菌液;对照组注射等量的无菌生理盐水.接种后观察、记录小鼠的临床表现,h试验组与对照组各选取只精神不振的小鼠处死并解剖,观察病理变化,并无菌采集与回收分离病原菌;剩余小鼠连续观察临床表现至 h.结果 分离菌株菌落形态与革兰染色观察从病料中接种细菌于绵羊血琼脂培养基上,置于 培养 h观察菌落呈圆润,光滑,微隆起,不溶血的乳白色较小菌落(图 A).革兰染色镜检可观察到该菌为革兰阴性菌,多呈双肾形,有的呈单存在,无鞭毛和芽孢(图 B).图M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m的菌落形态(A)与革兰染色结果(B,)F i g C o l o n ym o r p h o l o g y(A)a n dG r a ms t a i n i n gr e s u l t s(B,)o fM o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m 分离菌株 Sr R N A鉴定以提取的细菌D NA作为模板进行 Sr R NA基因P C R扩增,P C R产物进行 琼脂糖凝胶电泳检测,结果显示,检测样品出现单一条带,片段大小约为 b p(图),与预期目的片段大小相符.分离菌株相似性比对及系统进化树构建对测序所获基因序列经D NA S t a r软件进行相似性比对,结果显示,本试验分离菌株(命名为K D)与西班牙猪源M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m菌株C R 、L G g、A R A、GM 的 Sr R NA序列相似性高达 (图),证实分离菌为M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m.以N C B I中下载的国外 例莫拉菌属菌株为参考菌株,与分离菌株构建系统进化树(图),结 果 显 示,分 离 菌 株K D 与 猪 源M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m分支(C l u s t e r)的遗传关系更为接近(遗传距离为 ),与分支(C l u s t e r)的猪源莫拉菌遗传关系相对较远(遗传距离为 ).M,D L D NA M a r k e r;,Sr R NA基因P C R扩增产物;,阴性对照M,D L D NA M a r k e r;,P C Ra m p l i f i c a t i o np r o d u c to f Sr R NAg e n e;,N e g a t i v ec o n t r o l图M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m Sr R N A基因P C R扩增结果F i g P C R a m p l i f i c a t i o n r e s u l to f S r R N A g e n e o fM o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m中国畜牧兽医 卷,本研究分离株.下同,I s o l a t e i nt h i ss t u d y T h es a m ea sb e l o w图 Sr R N A基因序列相似性比对F i g S i m i l a r i t ya l i g n m e n t o f Sr R N Ag e n e s e q u e n c e图 Sr R N A基因系统进化树F i g P h y l o g e n e t i c t r e eo f Sr R N Ag e n e 细菌生物被膜试验将试验组培养 h后的细菌用结晶紫染色,在普通显微镜下观察细菌生物被膜,可见细菌产生的生物被膜被染为蓝紫色,且被膜上生长有密集细菌(图 A);空白对照组染色后无明显显色现象(图 B).期马静等:株藏猪源M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m的分离鉴定及生物学特性分析A,试验组;B,对照组A,E x p e r i m e n tg r o u p;B,C o n t r o l g r o u p图M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m生物被膜试验分析()F i g B i o f i l mt e s t a n a l y s i so fM o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m()药敏试验药敏试验结果显示,分离菌株对复达欣、磺胺异噁唑高度敏感;对盐酸大观霉素、美罗培南中度敏感;对氨苄青霉素、庆大霉素、阿莫西林、头孢噻呋钠、氟苯尼考、四环素和恩诺沙星种抗菌药物耐药(表).其中,复达欣、磺胺异噁唑、盐酸大观霉素、美罗培南对分离菌的M I C分别为、和g/m L,表明分离菌株对不同的抗菌药物敏感性不同.表M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m药敏试验结果T a b l eD r u g s e n s i t i v i t y t e s t r e s u l t so fM o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m药物D r u g s最小抑菌浓度M I C/(g/m L)敏感性S e n s i t i v i t y标准C r i t e r i o n/(g/m L)SIR氨苄青霉素Am p i c i l l i nR 复达欣F u d a x i nS庆大霉素G e n t a m i c i nR 阿莫西林Am o x i c i l l i n R头孢噻呋钠C e f t i o f u rs o d i u mR氟苯尼考F l o r f e n i c o l R 磺胺异噁唑S u l f i s o x a z o l e S 硫酸安普霉素A p r a m y c i ns u l f a t e 美罗培南M e r o p e n e mI恩诺沙星E n r o f l o x a c i nR 乙酰甲喹M e t h a q u i n e 四环素C y c l o m y c i n R 盐酸大观霉素S p e c t i n o m y c i nh y d r o c h l o r i d e I S,敏感;I,中敏;R,耐药S,S e n s i t i v e;I,I n t e r m e d i a r y;R,R e s i s t a n c e 耐药基因检测与 Sr R N A突变位点分析对M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m的大环内酯类耐药基因e r m F、e r m B,四环素类耐药基因t e t D、t e t B,内酰胺类耐药基因b l aT EM、b l aC T X M进行分析,结果表 明 分 离 菌 株 中 均 未 检 测 到 目 的 基 因.以 Sr R NA(登 录 号:F J )为 标 准 序 列 对 Sr R NA突变位点序列进行比对,可检测到分离菌株 中 存 在 个 突 变 位 点,分 别 为:A T、G A、A G、T C、A G、T C、A T、G A、A T、T A、C T、A G、A T、T A、C T(图).中国畜牧兽医 卷图M o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m的 Sr R N A基因突变位点检测F i g M u t a t i o ns i t ed e t e c t i o no f Sr R N Ag e n eo fM o r a x e l l ap l u r a n i m a l i u m 小鼠致病试验小鼠注射菌液后 h,(/)小鼠表现出精神状态低下,行动迟缓,采食和饮水减弱.选取精神不振的小鼠进行剖检,可见试验组小鼠肺脏出现少量出血点(图 A);脾脏相比对照组明显肿大(图 C、D),但肺脏与脾脏组织病理学未观察到明显病理损伤(图 E H).取肺脏出血部位接种于T S A培养