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第二章 临床微生物检验样本采集、运送和保存,正确采集运送临床标本进行细菌学检验,对明确临床感染的病原体是最重要的步骤之一,标本的采集和运送任一环节出现问题,都会导致病原体的分离失败,因此,正确采集和运送标本是细菌学检验质量保证的前提。,而对合格的临床标本选择正确的细菌学检验方法,及时进行处理,不仅可以增加阳性率,而且还可缩短检验结果报告时间。本章主要对临床常见的各种临床标本的细菌学检验进行介绍。,*,*,第二章 临床微生物检验样本采集、运送和保存,正确采集运送临床标本进行细菌学检验,对明确临床感染的病原体是最重要的步骤之一,标本的采集和运送任一环节出现问题,都会导致病原体的分离失败,因此,正确采集和运送标本是细菌学检验质量保证的前提。,而对合格的临床标本选择正确的细菌学检验方法,及时进行处理,不仅可以增加阳性率,而且还可缩短检验结果报告时间。本章主要对临床常见的各种临床标本的细菌学检验进行介绍。,*,*,第二章 临床微生物检验样本采集、运送和保存,正确采集运送临床标本进行细菌学检验,对明确临床感染的病原体是最重要的步骤之一,标本的采集和运送任一环节出现问题,都会导致病原体的分离失败,因此,正确采集和运送标本是细菌学检验质量保证的前提。,而对合格的临床标本选择正确的细菌学检验方法,及时进行处理,不仅可以增加阳性率,而且还可缩短检验结果报告时间。本章主要对临床常见的各种临床标本的细菌学检验进行介绍。,*,*,第二章 临床微生物检验样本采集、运送和保存,正确采集运送临床标本进行细菌学检验,对明确临床感染的病原体是最重要的步骤之一,标本的采集和运送任一环节出现问题,都会导致病原体的分离失败,因此,正确采集和运送标本是细菌学检验质量保证的前提。,而对合格的临床标本选择正确的细菌学检验方法,及时进行处理,不仅可以增加阳性率,而且还可缩短检验结果报告时间。本章主要对临床常见的各种临床标本的细菌学检验进行介绍。,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,肺部感染病原体检验,肺部感染的病原体检查,第1页,试验前质量控制,一份不合格标本,可能造成全部努力功亏一篑,测量越准确,结果越错误,肺部感染的病原体检查,第2页,分析前误差占总误差百分比,肺部感染的病原体检查,第3页,标本质量是,影响微生物室检验结果最主要原因,“G,arbage in,Garbage out.”,黄文贵,前,台湾医,事检验,学会,理,监事制作,肺部感染的病原体检查,第4页,送检标本种类与临床意义,临床意义低标本,痰、咽拭子(HI,SP除外),粪便、肛拭子(ADCD除外),临床意义中等标本,尿,脓、伤口分泌物,临床有意义标本,血、脑脊液、胸腹水、无菌体液,肺部感染的病原体检查,第5页,痰标本病原学检验,肺部感染的病原体检查,第6页,2/9/2025,7,痰液,痰液由气管、支气管和肺泡所分泌,正常情况下分泌物甚少,呼吸道粘,膜受刺激时,分泌物增多,但多为清楚、水样,无临床意义。,病理情况下痰量增多,呈不透明并,有性状改变。,肺部感染的病原体检查,第7页,2/9/2025,8,标本采集方法,自然咳痰法,支气管镜采集法,防污染毛刷采集法,环甲膜穿刺经气管吸引法,经胸壁针穿刺吸引法,支气管肺泡灌洗法,肺部感染的病原体检查,第8页,痰标本正确采集,痰液标本采集以清晨为好,所以时痰量多,含菌量大,。,在医生或护士指导下取样。,嘱病人漱口三遍以除去浅表固有定植菌。,指导病人深咳以取得下呼吸道标本(而不是,唾液及鼻咽部分泌物,)置于一无菌容器,。,注意:咳痰不能做厌氧培养!,肺部感染的病原体检查,第9页,2/9/2025,10,标本运输,痰以深咳排出后,应装于有密封瓶盖无菌塑料容器中,以免感染自己或他人,标本应及时送检,室温3h,若不能及时处理,可选择运输培养基运输和保留标本,但不应48h,肺部感染的病原体检查,第10页,2/9/2025,11,痰标本要求,白细胞(WBC)25/LPF,鳞状上皮细胞(SEC)10/LPF,如不符合上述指标,应重新采样,肺部感染的病原体检查,第11页,痰涂片革兰染色,汇报?,肺部感染的病原体检查,第12页,PUMCH:痰涂片染色镜检,肺部感染的病原体检查,第13页,有意义:,合格痰标本培养优势菌中度以上生长(+);,合格痰标本少许生长,但与涂片镜检结果一致(肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌);,屡次培养到相同细菌;,肺部感染的病原体检查,第14页,无意义:,痰培养有上呼吸道正常菌群细菌(如草绿色链球菌、表皮葡萄球菌、非致病奈瑟菌、类白喉杆菌等);,痰培养为各种病原菌少许(+)生长。,肺部感染的病原体检查,第15页,对呼吸道标本临床意义判断,感染?定植(寄植)?污染?,鲍曼不动杆菌感染与定植百分比为,1:3.5-12,在ICU中院感控制意义大于治疗本身,ICU环境“无处不在,无时不有”,极少有单独ABA在HAP感染病例,有统计,ABA相关HAP与其它病原感染死亡率并无显著差异,CLINICAL MICROBIOLOGY REVIEWS,July,p.538582,肺部感染的病原体检查,第16页,鲍曼不动杆菌在人体定植率高于感染发生率,Dijkshoorn L等在Nature发表一篇综述中指出:,鲍曼不动杆菌在人体定植比感染更为常见,,在鲍曼不动杆菌易感人群也如此,Nature Publishing Group.natur e reviews.;5:939-951,肺部感染的病原体检查,第17页,PUMCH:痰涂片染色镜检,肺部感染的病原体检查,第18页,血液标本病原学检验,肺部感染的病原体检查,第19页,2/9/2025,20,血培养采血条件,体温过高(38),体温过低(36),白细胞过多(10000/l),并有,核左移现象,中性粒细胞过少(1000/l),上述4项中一项或同时发生时,,应进行血液培养。,肺部感染的病原体检查,第20页,2/9/2025,21,采血时间,普通在发烧早期和高峰期采集,对间歇性寒战或发烧应在寒战或 体温高峰到来之前0.51h 采血,最好在未应用抗生素之前采血,若已应用抗生素,应在下次应用 抗生素前采血,肺部感染的病原体检查,第21页,2/9/2025,22,0,30,60,Time(min),Chills,寒战,Blood Cultures,血培养,BACTEREMIA,LEVEL,菌血症水平,Temp,体温,肺部感染的病原体检查,第22页,2/9/2025,23,采血部位,采血部位通常为肘静脉,对疑为细菌性骨髓炎或伤寒病人,,在病灶或髂前(后)上棘处消毒后,抽取骨髓培养。,疑似细菌性心内膜炎时,以肘动脉,或股动脉采血为宜。,肺部感染的病原体检查,第23页,2/9/2025,24,血液采集,搜集血液作培养时,须尤其小心,许多微生物,尤其是葡萄球菌属。通常存在于皮肤表面或近表层处,易污染。,应作严格皮肤消毒后,采静脉血,70%酒精,擦拭静脉穿刺部位,再以,碘酊,擦拭,最终再以,70%酒精,脱碘,肺部感染的病原体检查,第24页,2/9/2025,25,采血量,自动化仪器要求通常成人810 ml/瓶,儿童15 ml/瓶,一份(一套)血培养为2瓶,即1个需氧瓶和1个厌氧瓶,采血套数及血量,1套(20ml),2套(40ml),3套(60ml),检出率,65%,80%,96%,Cockrill年汇报:163位病人,血培养,肺部感染的病原体检查,第25页,每名患者应最少采集2份血培养,最好为3份(CLSI要求采集23份血培养),在一名败血症患者早期诊疗时,,绝不能,只采集1份血培养(CLSI强调了此观点),注意:1“份”是指一次静脉穿刺,肺部感染的病原体检查,第26页,每次采集血培养间隔时间?,每份血培养间隔应不超出5分钟,因为网状内皮系统对于一过性菌血症和间歇性菌血症在1530分钟内可去除(CLSI要求每份血培养应同时取得,或尽可能短时间内),对怀疑亚急性感染性心内膜炎,间隔1小时,连续采集3份血培养,肺部感染的病原体检查,第27页,血培养排名前10位临床致病菌,细菌名称,正确,污染率,不确定,金葡,87.2,6.4,6.4,大肠埃希菌,99.3,0.0,0.7,凝固酶阴性葡萄球菌,12.4,81.9,5.8,肺克,100.0,0.0,0.0,肠球菌,69.9,16.1,14.0,绿脓,96.4,1.8,1.8,肺链,100.0,0.0,0.0,白念,90.0,0.0,10.0,草绿链,38.0,49.3,12.7,阴沟,100.0,0.0,0.0,肺部感染的病原体检查,第28页,血液分离70例凝固酶阴性葡萄球菌,瓶数,PUMCH data 王辉 等,29,肺部感染的病原体检查,第29页,微生物培养及药敏解读,肺部感染的病原体检查,第30页,1、我们想用药品在药敏试验中没有做?,可能是天然耐药,可能是药品敏感性被其它药品所预报,与临床沟通中常见问题,肺部感染的病原体检查,第31页,2.为何有菌汇报很各种药品,有仅汇报几个药品?,汇报药品种类依据细菌种类不一样而有所不一样,如铜绿假单胞菌汇报药品较多,而嗜麦芽窄食单胞菌汇报药敏较少,与临床沟通中常见问题,肺部感染的病原体检查,第32页,3、是否能将所用药都做药敏试验?,没有必要:,经过耐药机制和标志性药品能够预测其它抗菌药品敏感性,没有可能:,不是所用药品都能够做药敏试验(需要药品在体外稳定,需要有操作标准和解释标准),与临床沟通中常见问题,肺部感染的病原体检查,第33页,4、在药敏试验汇报中MIC越小抗菌药品效果越好吗?怎样依据MIC联适用药?,感染菌对同一个药品MIC越小,效果越好,不一样种抗菌药品之间MIC无可比性,当前很多仪器汇报是检测折点,而不是真正MIC,与临床沟通中常见问题,肺部感染的病原体检查,第34页,与临床沟通中常见问题,5、培养阳性细菌都需要用抗菌药品治疗吗?,不是,培养阳性,感染,可能为污染,(血培养),,可能为定植,(痰培养),任何结果必须结合临床情况进行评价,(很主要),感染部位清创、引流、换药比使用抗菌药品愈加主要,改进患者全身情况:器官功效支持,纠正酸碱平衡,电解质紊乱,低蛋白血症,高血糖等,肺部感染的病原体检查,第35页,6、选择药敏汇报敏感药品,为何临床治疗无效?,体外药敏试验只能预测体内治疗效果,并不等同;普通来说,耐药治疗无效;敏感,治疗有效。,可能不是真正致病菌(污染或定植菌),细菌本身原因(如诱导耐药,生物被膜),感染部位与药代动力学原因,细菌MIC,给药剂量和用药方式,药敏试验药品中有些药品单独使用无效,但能够与其它药品联适用药,药品剂型及生物利用度(纯品、商品),与临床沟通中常见问题,肺部感染的病原体检查,第36页,7、涂片镜检结果与培养结果不吻合?,涂片镜检是汇报全部检见细菌,而培养目标是检出致病菌。,一些苛氧菌需在特殊环境或培养基上才能生长。,与临床沟通中常见问题,肺部感染的病原体检查,第37页,8、取显著就是脓液标本,为何判定汇报为无菌生长?,我们做是有氧培养,脓液可能为厌氧菌感染。,可能细菌被大量中性粒细胞吞噬。,与临床沟通中常见问题,肺部感染的病原体检查,第38页,9、判定结果明明写着四联球菌、革兰氏阳性杆菌,为何没有药敏结果?,四联球菌为微球菌,普通不引发人体致病,为非致病菌,故考虑污染可能。,药敏结果参考CLSI标准,当前革兰氏阳性菌没有参考标准,故暂不能做药敏试验,若需治疗可参考阳性球菌用药。,与临床沟通中常见问题,肺部感染的病原体检查,第39页,与临床沟通中常见问题,10、今天培养结果怎么与前天不一样?,取材是否规范。,痰标本,有时选优势菌做,就可能造成两次不一样。,肺部感染的病原体检查,第40页,感谢聆听!,肺部感染的病原体检查,第41页,
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