心肌酶的检测方法.docx

心肌酶谱的检测方法
1 检验目的
规范检测“肌酸激酶（CK）”的过程。
2 适用范围
适用于正常人和病人血清“肌酸激酶（CK）”的测定。
3 职责
3.1 责任人：生化室当班工作人员。
3.2 质量要求：按照《临床化检验室内质量控制作业指导书》进行室内质控，合格后可发报告。
3.3 完成时间：门诊检验结果当天下午2:30发报告；病房检验结果当天下午4:00发报告。
4 检验原理：酶偶联法
CK
磷酸肌酸＋ADP－→葡萄糖－6－磷酸＋ADP
G6PDH
葡萄糖－6－磷酸＋NADP－→6－磷酸－葡萄糖酸＋NADPH＋H＋，NADPH的生成。引起在340nm吸光度上升，上升的速率与CK的活力成正比，可以用（340nm和405nm）速率法测量 。
5 样本要求：
5.1 样本类型\样本量:空腹取静脉血3ml(血清或肝素抗凝血浆),按顺序将申请单和样本一一对应编号。认真检查检验材料、检验目的、病人姓名、性别、科室、床号、血液量等。
5.2 容器和抗凝剂种类: 黄色胶头试管，含促凝剂；红色胶头普通生化管；肝素钠、肝素锂抗凝试管。
5.3 样本处理方法将已编号的样本放入37℃的水温箱中，待血液自动凝固后，取出配平离心，3000r/min×5min。将血清分离放入DADE BEHRING RXL专用样本杯后，仔细观察是否符合要求，否则申请重新采集样本; 上雅培AEROSET全自动生化分析仪直接将试管放入样本架上。
5.4 样本的稳定性:血清、血浆肌酸激酶（CK在20-25℃放置可保存1天，2-8℃贮存最多7天；冷冻保存可超过1个月。已检测标本2—8℃保存3天。
6 仪器：杜邦RXL全自动生化分析仪 雅培AEROSET全自动生化分析仪
7 试剂:
7.1 杜邦RXL全自动生化分析仪配套试剂；雅培AEROSET全自动生化分析仪配套试剂。
7.2 杜邦RXL全自动生化分析仪配套试剂准备:将肌酸激酶（CK）试剂船按仪器操作说明书加入仪器试剂仓内。避光，2-8℃保存24hr，15-25℃保存5hr。
7.3 雅培AEROSET全自动生化分析仪配套试剂准备: 按仪器作业指导书准备试剂,未开封试剂在贮存于15－30℃下时，稳定性可保持到有效期截止时为止,开封后试剂上机的稳定期为42天。
8 校准
8.1 来源：杜邦RXL、雅培AEROSET配套校准液。
8.2 贮存条件：原校准物在0～4℃以下可保存至有效期
8.3 准备：直接用注射器抽取原液0.3ml备用。
8.4 校准条件：A：质控失控；B：定期校准；C：试剂更换批号。
8.5 校准后的稳定期可保持约41天（984小时），每次更换批次时都应进行校准。按照您的实验室所建立的质控要求，使用至少1个水平的质控品进行校准曲线验证。如果质控结果不在可接受范围值内，则需要进行重新校准。
9 程序步骤
9.1 样本编号→样本分离→检验仪器准备、试剂准备→室内质控测定、样本测定、资料录入→分析室内质控、分析测定结果→打印报告单→结果审核签发
9.2 上机操作：见仪器作业指导书.
10 质量控制
10.1 来源：朗道质控物。
10.2 1个数：1个水平
10.3 贮存条件：质控物存放于2-8℃可保存至有效期，溶解后25℃可保存12小时，4℃可保存5天，分装存放于-20℃，可稳定一个月。
10.4 准备：每瓶加3.00ml相配稀释液充分溶解后分装。溶解质控血清时间为30分钟,分装存放于-20℃。
10.5 程序：
10.5.1 每隔24小时运行至少1个质控水平（正常值）。
10.5.2 如果质控结果不在实验室所规定的可接受范围值内，则患者值可疑。需使用新鲜质控品重复质控。
10.5.3 如果质控结果仍不在可接受标准范围内，则需重新校准。
10.5.4 每次更换试剂批次后，都要检查质控结果和可接受标准。
10.5.5 操作:详见质量控制作业指导书
10.6分析参数
10.6.1 杜邦RXL全自动生化分析仪分析参数
样本量(μl)：14
试剂量(μl)：R1：95 R2:255 稀释液量：
方法：RATE　　　预设系数：C0：－8.85　C1：8.044
主波长（nm）：340
次波长（nm）：405
温度(℃)：37
反应时间（min）：3
反应方向：正反应（+）
线性范围：0－800U/L
10.6.2 雅培AEROSET全自动生化分析仪分析参数
Reaction mode: rate up
Read time 24-33
Blank read time:14-16
Flex :22-25
样本量(μl)：8
试剂量(μl)：R1：160 R2:40
主波长（nm）：340
次波长（nm）：412
温度(℃)：37
Calibration mode factor 4127
线性范围：0－800U/L
11 结果计算
以复合校准品校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。
12 生物参考区间：24～170U/L
13 可报告区间: 20-1600U/L
14 危急值：暂无规定
15 性能参数
15.1 本法线性范围为20-1600U/L，不准确度允许范围 ±30%，不精密度CV=1.4%。
15.2 实验的干扰因素: 胆红素达到40mg/dL时影响小于4%；溶血时血红蛋白达到350mg/dL时影响小于10%；抗坏血酸（Vc）含量达到20mg/dL时影响小于1%。
16 注意事项：
16.1 不能使用钙螯合物作抗凝剂，如草酸、枸椽酸和EDTA。
16.2 红细胞及所有组织中含有腺苷酸激酶（AK），反应产生的ATP导致表观CK活力增加。
16.3 为了缩短预温时间或者当冷冻空间有限时，未开封的试剂盒在2～8℃下也可以冷藏4周。
16.4 如果是脂血标本或肌酸激酶的活性超出系统的测定线性范围，用7%BSA（小牛血清）进行稀释，重新测试，测试结果乘以稀释倍数就得到原始样品中肌酸激酶的活性。
16.3 安全注意
16.3.1 此试剂为体外诊断用，不要吞服。
16.3.2 避免与皮肤粘膜接触。接触到眼睛或吞服，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，并立即寻找医疗保护。
17 临床意义
17.1 CK主要存在骨骼肌和心肌,在脑组织中也有。各种类型进行性肌萎缩时，血清CK活性均可增高。神经因素引起的肌萎缩如脊髓灰白质炎时活力正常，皮肌炎时CK活性可有轻度或中度增高。急性心肌梗塞后2～4H就开始增高，可高达正常上限的10～12倍。CK对诊断心肌梗塞较AST、LDH的特异性高，但此酶增高持续时间短，2～4天就恢复正常。病毒性心肌炎时也明显升高，对诊断及预后有参考价值。
17.2 CK增高还见于脑血管意外、脑膜炎、甲状腺机能低下等患者。还应注意到一些非疾病因素如剧烈运动、各种插管及手术、肌肉注射冬眠灵和抗生素等也可能引起CK活性增高。
18 引用文件
18.1 美国雅培制药有限公司试剂说明书
18.2 杜邦RXL全自动生化分析仪配套试剂说明书
18.3 全国临床检验操作规程 第三版
18.4 杜邦RXL全自动生化分析仪操作作业指导书
18.5 雅培AEROSET全自动生化分析仪操作作业指导书
18.6 临床化学检验室内质量控制作业指导书