DB13_T1638-2012马铃薯抗晚疫病室内鉴定技术规范.docx

ICS 65.020.20B 05DB13河北省地方标准DB 13/T 16382012马铃薯抗晚疫病室内鉴定技术规范2012 - 10 - 29 发布2012 - 11 - 15 实施河北省质量技术监督局发 布DB13/T 16382012前言本标准按GB/T 1.12009规定起草。本标准由保定市质量技术监督局提出。本标准起草单位：河北农业大学。本标准主要起草人：朱杰华、杨志辉、陶晡、张维宏、杨毅清、张宏磊。IDB13/T 16382012马铃薯抗晚疫病室内鉴定技术规范1 范围本标准规定了马铃薯品种（系）和种质资源对晚疫病抗性的室内鉴定技术规程，包括马铃薯抗性室内鉴定方法、马铃薯品种（系）和种质资源对晚疫病的抗病性分级标准及评价。本标准适用于马铃薯品种（系）和种质资源对晚疫病抗性室内鉴定。2 规范性引用文件下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。NY/T 496 肥料合理使用准则 通则NY/T 5222 无公害食品 马铃薯生产技术规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准3.1接种体 Inoculum指用于人工接种而引起马铃薯晚疫病的病原体，在本标准中指用于接种的游动孢子悬浮液。3.2室内抗性鉴定 Resistance identification in lab利用接种体对被鉴定材料叶片进行人工接种，创造病原菌侵染和发病所需的最佳温、湿度以及光照条件，通过对接种叶片的发病程度的科学界定来对其品种对晚疫病的抗性进行分级和评价。3.3对照品种 Control variety用于室内鉴定试验中的马铃薯感病品种和抗病品种。3.4脱毒马铃薯种薯 Virus-free seed potato除去马铃薯X病毒（PVX）、马铃薯S病毒（PVS）、马铃薯Y病毒（PVY）、马铃薯A病毒（PVA）和马铃薯卷叶病毒（PLRV）等主要病毒的马铃薯种薯。3.5病斑特征 Lesion fecture指接种叶片发病后病斑的特征，具有下列五种特征状态：（1）有坏死斑、无褪绿晕圈、无霉层；（2）病斑边缘无褪绿晕圈，病斑上无霉层或边缘产生极少霉层；（3）病斑水浸状，边缘有褪绿晕圈，14 室内抗性鉴定方法4.1 对照品种的选择选择适合在河北省栽培、抗性程度不同的脱毒马铃薯品种作为马铃薯品种（系）、种质资源室内抗性鉴定的对照品种。4.2 栽培及管理被测马铃薯品种（系）、种质资源按NY/T 5222 要求进行种植；施肥按照NY/T 496要求进行。4.3 叶片采集时间及要求待马铃薯植株长到710个复叶时，每株采摘中部第46个复叶的12个小叶，进行抗性鉴定。所采集小叶必须保持大小一致，其宽度不小于3cm，且不带虫眼，也无病斑。4.4 接种前器皿及叶片的准备在无色透明的灭菌塑料盒（50cm30cm5cm）内平铺2层灭菌滤纸，加水使其完全湿润，将被测叶 片背面向上整齐排放在滤纸上，以备接种。4.5 菌株的选择原则选择3年内从单病斑上分离的毒力程度不同10株菌株；菌株采集地要与被测品种适合栽培区域一致。4.6 接种体的制备按照4.5所述的原则选取接种菌株，将选定的菌株活化后接种到黑麦培养基上，18黑暗培养10d 14d后，用10mL灭菌水将孢子囊冲洗，用滤网除去菌丝及杂质，收集孢子囊悬浮液，置于4冰箱放置2h， 促使游动孢子释放，以制备游动孢子悬浮液。用无菌水稀释游动孢子悬浮液，利用血球计数板在显微镜下计数游动孢子个数，将10个不同菌株的游动孢子悬浮液浓度均调至5104个/mL，分别取等体积的游动孢子悬浮液均匀混合，制备成混合游动孢子悬浮液以备接种。悬浮液应现配现用。4.7 接种方法采用微量移液器或分液器准确量取4.6所制备的混合菌株游动孢子悬浮液25L，接种到被测叶片背 面中部的主脉附近。每个品种（系）或种质资源重复接种10个叶片。4.8 接种叶片培养叶片接种后先置于18黑暗条件下培养24h，以利于病原菌的侵入。然后，将接种叶片放置在人工气候室或光照培养箱中，每天16h光照、8h黑暗，18培养4d。4.9 调查方法和数据处理接种后第5d进行发病程度调查，注意当天必须调查完毕。采用十字交叉法测量接种发病叶片病斑的长度和宽度，单位为毫米（mm），不保留小数点，将测量结果记入附录B表B.1。仔细观察接种叶片有无发病及发病叶片的病斑特征，按照术语规定的病斑特征状态计入附录B表B.1。5 抗病性标准及评价25.1 抗性标准根据多年来国家马铃薯品种区试试验抗晚疫病鉴定数据，结合国内外相关文献，依据接种叶片上病斑有无、病斑大小及其特征，制订了马铃薯品种（系）和种质资源抗晚疫病室内鉴定标准，详见表1。表1 马铃薯抗晚疫病室内鉴定标准抗性类型发病级别发病程度描述免疫0无症状或仅在接种点出现坏死斑；坏死斑上无霉层。高抗1病斑直径（d）:d5mm；病斑边缘无褪绿晕圈；病斑上无霉层或边缘产生极少霉层。抗病2病斑直径:5mmd10mm；病斑水浸状，边缘有褪绿晕圈；病斑上产生均匀霉层，但霉层稀疏。感病3病斑直径:10 mmd20mm；病斑水浸状，边缘有褪绿晕圈；病斑上产生均匀霉层，但霉层较厚。高感4病斑直径: d20mm；病斑上产生均匀浓密的霉层。注：病斑直径（mm）=1/2（长度+宽度）5.2 鉴定有效性判别只有当感病对照品种充分发病，与预期发病级别一致，且每个处理8个叶片以上均匀发病时，才视该批鉴定材料试验数据有效。5.3 抗性评价结果根据鉴定试验材料叶片的病斑特征，按表1判定马铃薯品种（系）或种质资源对晚疫病的抗性水平， 对被测样品的抗病性进行综合评价。6 评价报告根据抗性评价结果，参照附录C出具材料抗性评价报告。3DB13/T 16382012附 录 A（规范性附录） 鉴定接种方法A.1 培养基的制备黑麦培养基：黑麦60g，琼脂粉12g，蔗糖20g，补充蒸馏水至1000mL。A.2 鉴定接种方法鉴定接种方法见表A.1。表A.1 马铃薯晚疫病抗性室内鉴定接种方法项 目室内离体叶片接种法方法描述马铃薯品种（系）或种质资源种植于试验地，植株叶片达到 7-10 个复叶时即可采摘生育期一致叶片对各个马铃薯品种（系）和种质资源发病程度在室内进行接种鉴定，经分析结果确定各个马铃薯品种（系）或种质资源的抗性水平。接种菌株不同毒力马铃薯晚疫病菌组成的混合菌株。接种体菌液浓度(个/mL)5104接种叶片数量（片）10接种操作将混合菌株游动孢子悬浮液接种到被测叶片背面中部的主脉附近，接种量为 25L，采用微量移液器或分液器准确量取孢子悬浮液，接种在每个品种（系）或种质资源的叶片上，重复接种 10 个叶片。培养湿度接种叶片放置于铺有 2 层完全湿润滤纸的无色透明塑料盒。培养温度（）18培养时间（天）5光照第一天黑暗培养 24h，之后每天 16h 光照、8h 黑暗。4附 录 B（规范性附录）接种叶片发病情况调查表B.1 接种叶片发病情况调查表见表B.1。表B.1 马铃薯品种（系）和种质资源抗性评价叶片病斑大小及特征调查表样品叶片编号长度（mm）宽度（mm）病斑特征12345678910平均12345678910平均12345678910平均5附 录 C（资料性附录） 鉴定评价报告C.1 鉴定评价报告表见表C.1。表C.1 鉴定评价报告表样品名称样品编号样品数量收获时间评价时间评价内容评价方法备 注鉴定结果概述试验人（签字）：审核（签字）：年月日年月日6