细胞凋亡的检测方法.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,细胞凋亡的检测方法,报告人：王英,时间：,2015 11 27,细胞凋亡的形态特征,细胞核缩小，染色质边缘化，出现凋亡小体。,细胞凋亡和坏死的区别,-,细胞凋亡是一种主动的，程序性的死亡过,-,不造成炎症和自体损伤,-,-,细胞坏死指细胞在各种致损伤因素作用下无序死亡的过程,-,形态特征为细胞胀大，胞膜破裂，胞浆内容物外泄,-,局部导致炎症反应,综述目的,近年来有不少综述著作分别介绍了植物发育过程中的细胞凋亡，环境胁迫下诱导的细胞凋亡、植物细胞凋亡的机理以及发育调控、在植物发育中的细胞凋亡作用、植物细胞凋亡与活性氧及抗氧化代谢的关系等，但对细胞凋亡的检测方法则很少报道。本文主要从以下几方面对检测细胞凋亡的技术加以阐述。,细胞凋亡的体内检测,体内检测,体内检测,-,试剂盒,细胞凋亡检测方法,体外检测,形态学检测,DNA ladder,TUNEL,法,ELISA,法,细胞凋亡的,DNA,片段化检测,DNA ladder,：,优点,:,经典的检测细胞凋亡的指标,缺点：,DNA,凝胶电泳特异性高但灵敏度低，不适于检测凋亡初期,DNA,轻微损伤的检测,TUNEL,法,优点：敏感、快速。特异性强,缺点：局限性，如：组织固定、处理的过程本身会改变实验结果。对细胞凋亡不是特异的，坏死细胞也会被标记。,ELISA,检测法,优点：此法既可定性，又可定量。且适合检测大量样本，且灵敏度高。,线粒体膜电位的检测,流式细胞术检测,优点：分析精确，重复性好，费用低廉，分析速度快，检测的细胞数量大，可定量分析群体细胞的凋亡及同时进行其他相关的分析,缺点：不能检测出细胞群体异质性,钙离子浓度变化检测,凋亡的调控由十分复杂的信号网络系统控制，目前已知有三条主要信号通路：线粒体通路，内质网通路，死亡受体通路。这些信号通路大部分与钙离子有关，最终都能激活凋亡执行者,Caspases3,水解各种细胞成分而使细胞凋亡。在钙离子信号与肿瘤细胞形成的三条通路中，存在相互促进，互为因果的促凋亡蛋白酶，加速了肿瘤细胞的凋亡。虽有关钙离子信号调控细胞凋亡的证据越来越多，但是钙离子如何激活这些凋亡调节因子的分子机制现在仍不清楚。一旦完全认识了,Ca,与细胞凋亡的关系，必将为凋亡研究带来突破性进展，为疾病特别是肿瘤细胞的治疗提供新的思路和手段。,优点：由于流式细胞术不能检测出群体细胞的异质性，但钙离子浓度变化检测能对多项生化指标进测定，固该法由较高的优越性。,细胞凋亡意义,细胞凋亡在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演者重要角色。,其一，有利于清除有害细胞，在研究自身免疫性疾病，病毒感染和肿瘤的机制中发现自身反应性,T,B,淋巴细胞，某些病毒感染细胞可通过细胞凋亡方式被清除。推测机体利用细胞凋亡作为一种保护机制。,其二，有利于清除完成正常使命的衰老细胞。人红细胞分化成熟后是无核有功能细胞，可存活,120d,然后自然死亡。,其三，维持器官，组织，细胞数目相对平衡细胞凋亡是同细胞增殖相反的过程，两者既对立又统一，相互协调。,细胞凋亡检测技术的展望,谢谢观赏,