生活饮用水标准检测方法.doc

生活饮用水标准检测方法
微生物指标
1 菌落总数
1.1 平皿计数法
1.1.1 范围
本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数。
本法适用于生活饮用水及其水源水中菌落总数的测定。
1.1.2 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
1.1.2.1
菌落总数 standard plate-count bacteria
水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1ml水样所含菌落总数。
1.1.3 培养基与试剂
1.1.3.1 营养琼脂
1.1.3.1.1 成分
A 蛋白胨 10g
B 牛肉膏 3g
C 氯化钠 5g
D 琼脂 10g~20g
E 蒸馏水 1000ml
1.1.3.1.2 制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43Kpa（121℃，15lb） 灭菌20min，储存于冷暗处备用。
1.1.4 仪器
1.1.4.1 高压蒸汽灭菌器。
1.1.4.2 干热灭菌箱。
1.1.4.3 培养箱36℃±1℃。
1.1.4.4 电炉。
1.1.4.5 天平。
1.1.4.6 冰箱。
1.1.4.7 放大镜或菌落计数器。
1.1.4.8 pH计或精密pH试纸。
1.1.4.9 灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等。
1.1.5 检验步骤
1.1.5.1 生活饮用水
1.1.5.1.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。
1.1.5.1.2 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36℃±1℃培养箱内培养48h，进行菌落计数，即为水样1ml中菌落总数。
1.1.5.2 水源水
1.1.5.2.1 以无菌操作方法吸取1ml充分混匀的水样，注入盛有9ml灭菌生理盐水的试管中，混匀成1：10稀释液。
1.1.5.2.2 吸取1：10的稀释液1ml注入盛有9ml灭菌生理盐水的试管中，混匀成1：100稀释液。按 同法依次稀释成1：1000，1：10000稀释液备用。如此递增稀释一次，必须更换一支1ml灭菌吸管。
1.1.5.2.3 用灭菌吸管取未稀释的水样和2个～3个适宜稀释度的水样1ml，分别注入灭菌平皿内。以下操作同生活饮用水的检验步骤。
1.1.6 菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼镜直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌苔生长时，则不宜采用，
而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余的一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。
1.1.7 不同稀释度的选择及报告方法
1.1.7.1 首先选择平均菌落数在30～300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该菌落数乘以稀释倍数报告之(如表1中实例1)。
1.1.7.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数（如表1中实例2）。若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数（如表1中实例3）。若等于2则报告其中稀释度较小的菌落总数（如表1中实例4）。
1.1.7.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（如表1中实例5）。
1.1.7.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（如表1中实例6）。
1.1.7.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（如表1中实例7）。
1.1.7.6 若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之。
1.1.7.7 如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其中2个平板1cm2中的菌落数，除2求出每平方厘米内平均菌落数，乘以皿底面积63.6 cm2，再乘其稀释度报告之。
1.1.7.8 菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示（见表1“报告方式”栏）。
表1 稀释度选择及菌落总数报告方式
实例
不同稀释度的平均菌落数
两个稀释度菌落数之比
菌落总数/(CFU/ml)
报告方式/(CFU/ml)
10-1-
10-2-
10-3-
1
1365
164
20
－
16400
16000或1.6×104
2
2760
295
46
1.6
37750
38000或3.8×104
3
2890
271
60
2.2
27100
27000或2.7×104
4
150
30
8
2
1500
1500或1.5×103
5
多不可计
1650
513
－
513000
510000或5.1×105
6
27
11
5
－
270
270或2.7×102
7
多不可计
305
12
－
30500
31000或3.1×104