胰腺癌组织中METTL14和GFPT1的水平表达与临床预后价值研究.pdf

99现代检验医学杂志第 38 卷第 5 期2023 年 9 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.5,Sept.2023胰腺癌组织中 METTL14 和 GFPT1 的水平表达与 临床预后价值研究檀占海，陈建荣，张吉发，周联明，单远洲(上海交通大学附属第六人民医院南院普外科，上海 201499)摘要：目的研究胰腺癌组织中甲基转移酶 14（methyltransferase 14，METTL14）及谷氨酰胺-果糖-6-磷酸转氨酶 1（glutamine-fructose-6-phosphate transaminase 1，GFPT1）的表达及其临床意义。方法选取 2017 年 4 月 2019年 4 月上海交通大学附属第六人民医院诊治的 86 例胰腺癌患者为研究对象。利用实时定量 PCR 检测癌和癌旁组织中METTL14 和 GFPT1 mRNA 水平表达。利用免疫组织化学检测癌和癌旁组织中 METTL14 和 GFPT1 蛋白表达。相关性分析采用 Pearson 相关分析及 Spearman 秩相关分析。比较不同胰腺癌患者 METTL14 和 GFPT1 蛋白表达与临床病理参数的关系。Kaplan-Meier 生存分析胰腺癌组织中 METTL14 和 GFPT1 蛋白表达与患者生存预后的关系。单因素及多因素 COX 模型评价影响胰腺癌预后的因素。结果胰腺癌组织中 METTL14 mRNA（5.4420.437），GFPT1 mRNA（6.5210.516）表达高于癌旁组织（0.9920.203，0.8950.212），差异具有统计学意义（t=85.644，93.525，均P0.05）。胰腺癌组织中 METTL14（73.26%），GFPT1（69.77%）蛋白表达阳性率高于癌旁组织（8.14%，9.30%），差异具有统计学意义（2=75.545，65.765，均 P 0.05）。胰腺癌组织中 METTL14 mRNA 与 GFPT1 mRNA 的表达呈明显正相关性（r=0.569，P0.05）；METTL14蛋白与GFPT1 蛋白表达呈明显正相关性（r=0.664，P0.05）。低分化程度（92.31%，88.46%）、AJCC 分期期（89.13%，86.96%）及有淋巴结转移（95.12%，92.68%）胰腺癌组织中 METTL14，GFPT1 蛋白表达阳性率分别高于高中分化程度（65.00%，61.67%）、AJCC 分期期（55.00%，50.00%）及无淋巴结转移（53.33%，48.89%），差异具有统计学意义（2=6.174 19.507，均 P0.05）。METTL14 阳性表达组和 GFPT1阳性表达组患者三年累积生存率分别低于METTL14阴性表达组，GFPT1阴性表达组（2=15.232，18.054，均P0.05）。肿瘤 AJCC 分期期（OR=2.552,95%CI=1.420 4.455）、伴淋巴结转移（OR=1.754,95%CI=1.125 2.534）、METTL14 阳性（OR=2.797,95%CI=1.233 5.876）、GFPT1 阳性（OR=1.635,95%CI=1.030 2.506）是影响胰腺癌预后的独立危险因素。结论胰腺癌组织中 METTL14，GFPT1 表达升高，两者与肿瘤 AJCC 分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移有关，可用于评价胰腺癌患者生存预后。关键词：胰腺癌；甲基转移酶 14；谷氨酰胺-果糖-6-磷酸转氨酶中图分类号：R735.9；R730.43文献标识码：A文章编号：1671-7414（2023）05-099-06doi:10.3969/j.issn.1671-7414.2023.05.019Expression of METTL14 and GFPT1 in Pancreatic Cancer and Their Clinical Prognostic ValueTAN Zhanhai,CHEN Jianrong,ZHANG Jifa,ZHOU Lianming,SHAN Yuanzhou（Department of General Surgery,South Hospital of the Sixth Peoples Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University,Shanghai 201499,China）Abstract:ObjectiveTo study the expression and clinical significance of methyltransferase 14(METTL14)and glutamine fructose-6-phosphate aminotransferase 1(GFPT1)in pancreatic cancer.Methods86 patients with pancreatic cancer diagnosed and treated in South Hospital of the Sixth Peoples Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University from April 2017 to April 2019 were selected as the study subjects.METTL14 and GFPT1 mRNA expression in cancer and adjacent tissues were detected by real-time quantitative PCR.Immunohistochemistry was used to detect METTL14 and GFPT1 protein expression in cancer and adjacent tissues.Pearson correlation analysis and Spearman rank correlation analysis were used for correlation analysis.The relationship between the expression of METTL14,GFPT1 and clinicopathological parameters in different pancreatic cancer patients was compared.Kaplan Meier survival was used to analyze the relationship between the expression of METTL14 and GFPT1 in pancreatic cancer and the survival prognosis of patients.Univariate and multivariate COX models were used to evaluate the prognostic factors of pancreatic cancer.ResultsThe expression of METTL14 mRNA(5.442 0.437)and GFPT1 mRNA(6.521 0.516)in pancreatic cancer tissue was significantly higher than that in paracancerous 基金项目：上海市科研计划项目（N0:1644901000）：胰腺癌组织中 METTL14，GFPT1 的表达及临床预后的关系研究。作者简介：檀占海（1979-），男，硕士，副主任医师，研究方向：肝胆胰疾病，E-mail：。通讯作者：单远洲（1964-），男，本科，主任医师，研究方向：肝胆胰、乳腺疾病，E-mail：。100现代检验医学杂志第 38 卷第 5 期2023 年 9 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.5,Spet.2023tissue（0.9920.203，0.8950.212），and the differences were statistically significant(t=85.644，93.525，all P0.05).The positive rate of METTL14(73.26%)and GFPT1(69.77%)protein expression in pancreatic cancer tissues was higher than that in paracancerous tissues（8.14%，9.30%）,and the differences were statistically significant（2=75.545，65.765，all P0.05).The expression of METTL14 and GFPT1 mRNA in pancreatic cancer tissue was positively correlated(r=0.569,P0.05).There was a significant positive correlation between METTL14 and GFPT1 protein expression(r=0.664,P=0.000).The positive rate of METTL14 and GFPT1 protein expression in pancreatic cancer tissues with poor differentiation（92.31%，86.96%）,AJCC stage （89.13%，86.96%）and lymph node metastasis（95.12%，92.68%）was higher than that in high differentiation（65.00%，61.67%）,AJCC stage（55.00%，50.00%）and no lymph node metastasis（53.33%，48.89%）,respectively,with statistical significance（2=6.174 19.507，all P0.05).The 3-year cumulative survival rates of patients in the METTL14 positive expression group and GFPT1 positive expression group were lower than those in the METTL14 negative expression group and GFPT1 negative expression group,respectively（2=15.232,18.054,all P0.05).Tumor AJCC stage(OR=2.552,95%CI=1.420 4.455),with lymph node metastasis(OR=1.754,95%CI=1.125 2.534),METTL14 positive expression(OR=2.797,95%CI=1.233 5.876),GFPT1 positive expression(OR=1.635,95%CI=1.030 2.506)were independent risk factors affecting the prognosis of pancreatic cancer.ConclusionThe increased expression of METTL14 and GFPT1 in pancreatic cancer were related to tumor AJCC stage,tumor differentiation and lymphocyte metastasis,which can be used to evaluate the survival prognosis of pancreatic cancer patients.Keywords：pancreatic cancer；methyltransferase 14；glutamine fructose-6-phosphate transaminase 1胰腺癌恶性程度极高，预计到 2030 年将成为癌症相关死亡的第二大原因1。胰腺癌位置隐匿，发现时已为晚期，丧失最佳手术时机，五年生存率只有 8%2-3。探究胰腺癌的机制，对寻找早期诊断和治疗靶点具有重要的价值。甲基转移酶 14（methyltransferase 14，METTL14）是一种甲基转移酶，参与 mRNA 代谢、造血祖细胞分化等过程。近年来发现，METTL14 在结直肠癌4、胃癌5等恶性肿瘤中表达上调，能促进非编码 RNA XIST 等的 N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine，m6A）修饰，增强肿瘤细胞的增殖及转移能力。谷氨酰胺-果糖-6-磷酸转氨酶 1（glutamine-fructose-6-phosphate transaminase 1，GFPT1）是己糖胺途径的限速酶，能催化葡萄糖胺-6-磷酸的形成。研究发现，乳腺癌6、宫颈癌7等恶性肿瘤中 GFPT1 表达升高，参与促进肿瘤的恶性增殖及放化疗治疗耐药性的形成，与肿瘤患者的不良预后关系密切。目前胰腺癌中 METTL14，GFPT1 的表达及临床意义报道较少。本研究利用实时荧光定量 PCR 和免疫组织化学分别在 mRNA 水平和蛋白水平检测胰腺癌组织中METTL14，GFPT1的表达，探讨两者的临床意义。1材料与方法1.1研究对象选取 2016 年 1 月 2018 年 1 月于上海交通大学附属第六人民医院诊治的 86 例胰腺癌患者为本研究的研究对象。病例纳入标准：术前无针对肿瘤的辅助治疗，术后病理检查明确为胰腺癌；初次诊治；临床随访资料完整。排除标准：术前接受过抗肿瘤治疗；并发其它类型肿瘤；并发自身免疫系统疾病。男性 50 例，女性 36 例；年龄 42 78（62.616.32）岁；根据 2009 年美国癌症联合会第 7 版胰腺癌分期标准进行肿瘤 AJCC分期：期 40 例，期 43 例，期 3 例；肿瘤分化程度：高中分化 60 例，低分化 26 例；肿瘤直径：4 cm 者 56 例，4 cm 者 30 例；肿瘤位置：胰头61 例，胰体尾 25 例；有淋巴结转移 41 例。本研究经患者知情签字且本院伦理委员会审核批准通过。1.2仪器与试剂Narodrop1000微量分光光度计（美国Nanodrop公司）；反转录试剂盒（北京全式金公司，货 号 11141ES10）；METTL14，GFPT1 及 GAPDH引物由上海生工公司设计并合成；PCR Master Mix（日本 TAKARA 公司，货号 RR320A）；METTL14 单克隆抗体（abcam 公司，货号 ab220030）；GFPT1单克隆抗体（abcam 公司，货号 ab25069）；SP-9000免疫组织化学试剂盒（北京中杉金桥公司）；CX31显微镜（日本奥林巴斯公司）。1.3方法 1.3.1荧光定量 PCR 检测：用 Trizol 法提取癌组织及癌旁组织中 RNA，检测 RNA 的 A260nm/A280nm介于 1.8 2.0。反转录为 cDNA 后进行荧光定量聚合酶链式反应。引物序列 METTL14：上游：5-AAAAGTTGACGCCGCATTCT-3，下游5-ACACT CCAGCTGGGCGACGAAAACCCUAA-3；GFPT1：上游：5-GGAATAGCTCATACCCGTTGG-3，下游 5-TCGAAGTCATAGCCTTTGCTTT-3，以 GAPDH为内参，上游：5-CTGGGCTACACTGAGCACC-3，下 游 5-AAGTGGTCGTTGAGGGCAATG-3。反应体系共 20l，包括 cDNA 2l，上游和下游引物各 1l，SYBR Green 10l 及 DEPC 水 6l。条件为：95 5 min，95 变性 25 s，60 退火 30 s，70延伸 15 s，变性退火延伸共 35 个循环。采用101现代检验医学杂志第 38 卷第 5 期2023 年 9 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.5,Sept.20232-Ct值法表示 METTL14 mRNA，GFPT1 mRNA的相对表达量。1.3.2免疫组织化学检测：将癌和癌旁组织 10g/dl 中性甲醛固定过夜，石蜡包埋切片，按照常规免疫组织化学染色步骤染色。中性树脂封片，200 倍镜下观察 METTL14，GFPT1 蛋白染色情况并进行免疫组织化学染色评分（染色强度评分乘以染色面积）。将染色强度分为 0 分：无染色，1 分：浅黄色，2分：棕褐色；染色面积分为0分：面积25%，1分：面积 25%50%，2 分：面积 50%。免疫组织化学染色评分 2 分为阴性，2 分为阳性。1.4统计学分析用 SPSS20.0 软件进行分析。计量资料以均数 标准差（xs）表示，数据呈正态且方差齐，组间比较采用两独立样本 t 检验。计数资料用率表述，组间比较采用卡方检验。相关性分析采用 Pearson 线性相关分析及 Spearman 秩相关分析。生存分析采用Kaplan-Meier法（Log-rank检验）。单因素及多因素 COX 回归分析影响胰腺癌生存预后的因素。P 0.05 为差异有统计学意义。2结果2.1胰腺癌和癌旁组织中METTL14mRNA，GFPT1 mRNA 表 达 胰 腺 癌 组 织 中 METTL14 mRNA（5.4420.437），GFPT1 mRNA（6.5210.516）表达高于癌旁组织（0.9920.203，0.8950.212），差异具有统计学意义（t=85.644，93.525,均 P=0.000）。2.2胰腺癌和癌旁组织中 METTL14，GFPT1 蛋白表达胰腺癌组织中 METTL14 蛋白棕黄色阳性染色主要位于细胞核，GFPT1 蛋白棕黄色阳性染色主要位于细胞浆和细胞膜。胰腺癌组织中METTL14，GFPT1 蛋白表达阳性率分别为 73.26%（63/86），69.77%（60/86），显著高于癌旁组织的14%（7/86），9.30%（8/86），差异具有统计学意义（2=75.545，65.765，均 P=0.000）。见图 1。2.3 胰 腺 癌 中 METTL14 与 GFPT1 表 达 的 关系Pearson 线性相关分析结果表明，癌组织中METTL14 mRNA 与 GFPT1 mRNA 的表达呈明显正相关（r=0.569，P=0.000）。Spearman 秩相关分析结果，METTL14 蛋白与 GFPT1 蛋白表达呈明显正相关性（r=0.664，P=0.000）。图 1胰腺癌和癌旁组织中 METTL14，GFPT1 蛋白表达（200）2.4METTL14，GFPT1 蛋白表达与临床病理特征的关系见表 1。低分化程度、AJCC 分期期 及 有 淋 巴 结 转 移 胰 腺 癌 组 织 中 METTL14，GFPT1 蛋白表达阳性率分别高于高中分化程度、AJCC 分期期及无淋巴结转移，差异具有统计学意义（均 P0.05）。表 1 METTL14，GFPT1 蛋白表达与临床病理特征的关系 n(%)类别nMETTL14 阳性2值P 值GFPT1 阳性2值P 值性别男5040(80.00)2.7730.09638(76.00)2.1990.138女3623(63.89)22(61.11)年龄（岁）603927(69.23)0.5900.44225(64.10)1.0860.297 604736(76.60)35(74.47)肿瘤直径（cm）45638(67.86)2.3880.12236(64.29)2.2870.130 43025(83.33)24(80.00)肿瘤位置胰头6142(68.85)2.0770.15040(65.57)1.7500.186胰体尾2521(84.00)20(80.00)肿瘤分化程度高中分化6039(65.00)6.9040.00837(61.67)6.1740.013低分化2624(92.31)23(88.46)肿瘤 AJCC 分期4022(55.00)12.7210.00020(50.00)13.8540.0004641(89.13)40(86.96)淋巴结转移有4139(95.12)19.1220.00038(92.68)19.5070.000无4524(53.33)22(48.89)102现代检验医学杂志第 38 卷第 5 期2023 年 9 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.5,Spet.20232.5METTL14，GFPT1 蛋白表达对胰腺癌患者生存预后的影响见图 2。随访 2 36 个月，无失访，死亡 61 例，三年生存率 29.1%（25/86）。METTL14 阳性、阴性表达组的三年生存率分别为 14.29%（9/63），69.57%（16/23）。METTL14阳性表达组患者三年累积生存率低于阴性表达组 患 者，差 异 具 有 统 计 学 意 义（2=15.232，P=0.000）。GFPT1 阳性、阴性表达组三年生存率分别为 13.33%（8/60），65.38%（17/26）。GFPT1阳性表达组患者三年累积生存率低于低 GFPT1 阴性表达组患者，差异具有统计学意义（2=18.054，P=0.000）。图 2Kaplan-Meier 生存分析 METTL14，GFPT1 蛋白表达对胰腺癌患者生存预后的影响2.6单因素及多因素 COX 分析影响胰腺癌患者预后的因素见表 2，3。单因素及多因素 COX 回归分析结果，METTL14 阳性，GFPT1 阳性、肿瘤AJCC 分期期及有淋巴结转移是胰腺癌患者不良预后的独立危险因素。表 2影响胰腺癌患者预后的单因素 COX 比例风险回归模型类 别赋值SEWald 2POR95%CI年龄 60 岁 vs 60 岁0.2420.1132.5020.3401.2740.944 1.719性别男 vs 女0.1680.1311.6450.4281.1830.915 1.529肿瘤直径 4 cm vs 4 cm0.1590.1401.2900.5681.1720.891 1.542肿瘤位置胰头部 vs 胰体尾部0.2650.1812.1440.3911.3030.914 1.858病理分级低分化 vs 高中分化0.3800.2522.2740.2811.4620.892 2.396淋巴结转移有 vs 无0.4760.1638.5270.0001.6101.169 2.126肿瘤 AJCC 分期期 vs 期0.5600.1829.4670.0001.7511.225 2.501METTL14阳性 vs 阴性0.6100.17412.2900.0001.8401.309 2.588GFPT1阳性 vs 阴性0.5720.16811.5920.0001.7721.275 2.463表 3 影响胰腺癌患者预后的多因素 COX 比例风险回归模型类别SEWald 2POR95%CIMETTL140.9660.4225.4580.0112.7971.233 5.876GFPT10.4850.2414.3990.0301.6351.030 2.506肿瘤 AJCC 分期0.9140.2869.6470.0012.5521.420 4.455淋巴结转移0.5640.2326.6750.0041.7541.125 2.5343讨论胰腺癌是恶性程度较高的消化系统肿瘤，起病隐匿，疾病进展迅速，预后极差，五年生存率低于10%8。胰腺癌的治疗以手术及化疗等为主，但疗效欠佳。近年来随着肿瘤分子生物学研究的进展，研发出新的治疗药物及策略如免疫检查点阻断治疗、酪氨酸激酶抑制剂药物治疗等，使肿瘤患者获得良好的临床疗效9。因此，深入探索胰腺癌的发病机制，寻找新的临床治疗靶点，具有重要意义。胰腺癌的发生发展过程与表观遗传学修饰异常有关，例如 DNA 或 RNA 甲基化修饰，乳酸化修饰等。m6A 修饰是 RNA 转录后修饰中最为普遍的103现代检验医学杂志第 38 卷第 5 期2023 年 9 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.5,Sept.2023修饰方式，由 m6A 甲基转移酶，去甲基酶和 m6A 结合蛋白共同催化完成，广泛参与细胞分化、细胞应激及凋亡等细胞活动10。METTL14 是一种新的 m6A 甲基转移酶，能够与 METTL3 结合形成异质性二聚体，参与调控 RNA 的代谢等过程11。近年来发现，METTL14 在结直肠癌等恶性肿瘤中异常表达上调或下调，其通过促进高迁移率基因群 4 mRNA 的表达，促进结直肠癌细胞生长和侵 袭5，12。本研究中，胰腺癌中 METTL14 表达显著升高，提示 METTL14 可能参与胰腺癌的肿瘤发生。既往有研究也证实，70%的胰腺癌中存在普遍的 m6A 修饰现象，METTL14 是胰腺癌中主要的甲基转移酶13。研究表明，胰腺癌中 CDC 样激酶 1/富含丝氨酸和精氨酸的剪接因子 5 信号轴通过促进METTL14 的选择性剪接,上调 METTL14 蛋白表 达14。此外，与胰腺癌中 METTL14 的表达与不良临床病理特征有关，提示 METTL14 的表达参与促进胰腺癌的恶性发展。有研究报道，胰腺癌中METTL14 通过 m6A 修饰 PMP22 相关 p53 效应子mRNA，增强胰腺癌肿瘤细胞增殖、侵袭和转移能力14。此外，METTL14 的表达升高能够促进肿瘤细胞发生上皮间质转化，间质性表型 N-钙粘素表达上调，而上皮性表型如 E-钙粘素表达下调，肿瘤细胞的侵袭及转移能力增强，促进肿瘤淋巴转移，导致肿瘤分期升高15。因此，胰腺癌中 METTL14的表达促进胰腺癌的肿瘤进展，我们对胰腺癌患者进行随访，发现 METTL14 阳性表达患者生存预后较差，并且是影响胰腺癌患者不良生存预后的独立危险因素，表明 METTL14 可能是一种新的胰腺癌预后相关肿瘤标志物。笔者分析，METTL14 阳性表达的胰腺癌肿瘤细胞的增殖及侵袭等恶性生物学行为更为显著，患者 AJCC 分期较高，容易发生淋巴结转移，导致患者不良生存预后。此外，METTL14 表达上调还能通过激活 RNA 结合蛋白24/轴发育抑制因子的表达，增强非小细胞肺癌对顺铂治疗的耐药性形成，导致患者不良预后。因此，临床医生可根据 METTL14 的表达情况，对胰腺癌患者临床预后进行评估，并积极予以诊治，以改善患者预后。己糖胺生物合成途径是糖酵解途径的一个分支，GFPT 是己糖胺生物合成途径的限速酶，可将6-磷酸果糖和谷氨酰胺催化为 6-磷酸葡萄糖胺和谷氨酸。人类 GFPT 有三种亚型：GFPT1，GFPT2和 GFPT3，其中 GFPT1 是最主要的也是表达最广泛的亚型。研究表明，GFPT1 的表达升高能促进食管癌等恶性肿瘤的肿瘤增殖及转移，与患者较差的无进展生存期和总生存期有关6。但目前 GFPT1在胰腺癌患者中的表达和预后价值尚未得到证实。本研究发现，胰腺癌中 GFPT1 表达上调，提示 GFPT1 可能参与胰腺癌的肿瘤发生。胰腺癌中GFPT1 的表达上调与转录后调控异常有关。有学者发现，GFPT1 的表达受到微小 RNA-183-3p 的调控，胰腺癌中微小 RNA-183-3p 的表达下调导致 GFPT1 mRNA 稳定性增加，促进 GFPT1 蛋白表达，诱导肿瘤增殖、转移及淋巴管生成17。我们研究还发现，GFPT1 与肿瘤 AJCC 分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移有关，提示 GFPT1 的表达升高参与促进胰腺癌的肿瘤进展。研究发现，GFPT1 的表达增加能够促进抑癌基因磷酸酶张力蛋白同系物 PTEN 蛋白的泛素化降解，进而激活下游 AKT 信号通路，导致肿瘤的增殖和侵袭能力增强7。JIA 等18研究表明，GFPT1 的表达升高能够激活-连环蛋白，在转录水平上调下游靶基因细胞周期蛋白 D1 和 MYC 的表达，促进胰腺癌细胞增殖、侵袭，抑制肿瘤细胞凋亡。本研究证实，胰腺癌中 GFPT1 阳性表达患者生存预后较差，是影响患者不良生存预后的独立危险因素。有学者报道，GFPT1 的表达升高能够促进蛋白激酶A的磷酸化激活，激活Hippo/YAP通路，促进化疗耐药相关基因的表达，降低肿瘤对化疗治疗的敏感性19。另外，GFPT1 作为己糖胺途径的限速酶，其表达上调能够促进溶酶体包裹的蛋白酶组织蛋白酶 B 的 N-乙酰氨基葡萄糖修饰，促进肿瘤转移和化疗耐药的形成，导致患者不良预后20。因此，检测胰腺癌组织中 GFPT1 的表达能够提示患者的预后，是一种新的胰腺癌预后相关肿瘤标志物。本研究中，METTL14 与 GFPT1 的表达呈显著正相关。分析其原因，METTL14 通过 m6A 修饰稳定插头框 A2 mRNA，促进插头框 A2 的表达，而插头框 A2 能够在转录水平上调 GFPT1 的表达21。因此，胰腺癌中 METTL14 与 GFPT1 可能发挥协同促癌的生物学作用，但两者的具体作用机制有待深入研究。综上所述，本研究发现，胰腺癌中 METTL14，GFPT1 表达升高，两者表达与肿瘤 AJCC 分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移有关，共同参与促进胰腺癌的肿瘤进展，是新的胰腺癌患者预后相关肿瘤标志物。但本研究纳入研究的患者例数有限，并且未对两者在胰腺癌中的具体作用机制进行深入的实验研究，有待今后进行深入探索。参考文献：1 KLEIN A P.Pancreatic cancer epidemiology:under-standing the role of lifestyle and inherited risk fac-torsJ.Nature Reviews.Gastroenterology&Hepatolo-gy,2021,18(7):493-502.104现代检验医学杂志第 38 卷第 5 期2023 年 9 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.5,Spet.20232 CAI Jie,CHEN Hongda,LU Ming,et al.Advances in the epidemiology of pancreatic cancer:Trends,risk factors,screening,and prognosisJ.Cancer Letters,2021,520:1-11.3 SPRINGFELD C,JGER D,BCHLER M W,et al.Chemotherapy for pancreatic 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