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蛋白芯片-斑点免疫印迹法I20G9临床应用嘉嘉兴艾艾锐生物科技有限公司生物科技有限公司二、临床意义二、临床意义三、临床使用三、临床使用四、临床使用四、临床使用http:/www.ppthi- 内内容容介介绍第一部分：第一部分：自身免疫性疾病的自身免疫性疾病的简介介第第二二部分：部分：G9及及I20的的临床意床意义第第三三部分部分:G9及及I20的的临床使用床使用 第一部分：第一部分：自身免疫性疾病的自身免疫性疾病的简介介一、自身免疫性疾病一、自身免疫性疾病http:/www.ppthi-指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。损害所引起的疾病。临床上有些疾病可明确诊断（如肺炎、肝炎、结临床上有些疾病可明确诊断（如肺炎、肝炎、结核病、艾滋病、高血压），还有许多疾病难以诊核病、艾滋病、高血压），还有许多疾病难以诊断或治疗效果差，常常让临床医生感到棘手和困断或治疗效果差，常常让临床医生感到棘手和困惑，这就是惑，这就是自身免疫性疾病自身免疫性疾病。自身免疫性疾病自身免疫性疾病早发现、早诊断、早治疗早发现、早诊断、早治疗AID危害：危害：自身免疫性疾病大多是表现为全身多器官受损、病程迁延、病情稳定与复发交替，或出现关节畸形、器官功能障碍，需要长期治疗，给病人带来很重的心理负担或经济负担。SLE：是以全身多脏器损害全身多脏器损害 为表现的全身自身免疫性疾病病情轻微的患者仅有皮肤症状，有面部红斑或光过敏，也可伴有关节疼痛，会有胸腔积液或心包积液，轻度白细胞减少或轻度血白细胞减少或轻度血小板减少小板减少；中度患者可有血液系统以及更多脏器损害；重症者有重要脏器损害，如大多患者出现肾脏损害，可有蛋白尿；危重患者出现中枢神经损害，严重血液系统损害，胃肠血管炎，狼疮肺炎等危及生命的临床表现。系统性红斑狼疮是慢性病，甚至需要终身服药系统性红斑狼疮是慢性病，甚至需要终身服药江苏省人民医院风湿免疫科主任张缪佳一、自身免疫性疾病一、自身免疫性疾病http:/www.ppthi-自身免疫性疾病的特征1.1.血液中可测到高滴度的血液中可测到高滴度的自身抗体自身抗体和和/或与自身成分起或与自身成分起反应的致敏淋巴细胞，自身抗体在不同的自身免疫病反应的致敏淋巴细胞，自身抗体在不同的自身免疫病中有中有交叉重叠现象交叉重叠现象。2.患者组织器官的病理特征为患者组织器官的病理特征为免疫炎症免疫炎症，并且损伤范，并且损伤范围与自身抗体或致敏淋巴细胞所针对的抗原分布相对围与自身抗体或致敏淋巴细胞所针对的抗原分布相对应。应。3.应用免疫学方法可复制出与该自身免疫病的临床症应用免疫学方法可复制出与该自身免疫病的临床症状和病理改变相似的动物模型，包括主动免疫、被动状和病理改变相似的动物模型，包括主动免疫、被动转移。转移。一、自身免疫性一、自身免疫性疾病疾病http:/www.ppthi-自身免疫性疾病的其它特征n病因不明，多为自发性或特发性。病因不明，多为自发性或特发性。n病程一般较长，多为发作与缓解反复交替出现。病程一般较长，多为发作与缓解反复交替出现。n有遗传倾向，但多非单一基因作用的结果。有遗传倾向，但多非单一基因作用的结果。n女性多于男性，老年多于青少年。女性多于男性，老年多于青少年。n多数患者血清中可查到抗核抗体或其它自身抗体。多数患者血清中可查到抗核抗体或其它自身抗体。n易伴发免疫缺陷或恶性肿瘤。易伴发免疫缺陷或恶性肿瘤。http:/www.ppthi-标志抗体 相关疾病dsDNA、Sm、核小体系统性红斑狼疮SLESSB干燥综合症SS着丝点抗体进行性系统硬化症PSS（局限型）Scl-70抗体进行性系统硬化症PSS（弥漫型）AKA、抗CCP抗体类风湿性关节炎RAJo-1抗体Mi-2多发性肌炎、皮肌炎PM/DM高滴度RNP抗体混合结缔组织病MCTD肝肾微粒体抗体（LKM-1）型自身免疫性肝炎平滑肌抗体（SMA）型自身免疫性肝炎AMA（M2）原发性胆汁性肝硬化PBC常见自身免疫性疾病的标志抗体一、自身免疫性疾病一、自身免疫性疾病http:/www.ppthi-自身抗体的特性1、自身免疫性疾病的重要标志重要标志2、高滴度高滴度存在于自身免疫性疾病患者3、与疾病的活动性相关活动性相关4、参与参与免疫病理性损伤5、多数抗体阳性检测率不高，特异性差别大。多数抗体阳性检测率不高，特异性差别大。解决方案:多指标蛋白芯片国内外产品的情况综述国内外产品的情况综述http:/www.ppthi-2020世纪世纪8080年代之后年代之后，在蛋白纯化技术的改进基础上，人工人工纯化抗原纯化抗原开始应用于自身抗体检测，主要采用免疫双扩散法(doubleimmunodiffusion，DID)、免疫印迹法(immunoblottingtest，IBT)检测，如抗核可提取抗原(extractablenuclearantigen，ENA)抗体，抗线粒体抗体亚型等的检测。2O2O世纪世纪9O9O年代以来年代以来，随着分子生物技术、基因重组技术、生物信息学应用于自身抗体靶抗原的研究和靶抗原蛋白纯化技术的进步，以及重组抗原和合成肽抗原的应用，更多新的针对特异性靶抗原的自身抗体被发现，经大量临床验证，并被陆续用于临床AID诊断。http:/www.ppthi-NOWNOW 总抗体检测 (过去的)针对抗原蛋白分子针对抗原蛋白分子表位靶位点的特异表位靶位点的特异性抗体检测性抗体检测不同不同的自的自身抗身抗体谱体谱敏敏感感度度特特异异性性国内外产品的情况综述国内外产品的情况综述http:/www.ppthi-流式细胞术和流式细胞术和微阵列技术微阵列技术的出现，为自身抗体的检测提供新的出现，为自身抗体的检测提供新的发展空间的发展空间IIF法法ELISA法法wB法法酶免免疫条疫条带法法DB法法MIA法法流式流式细胞胞法法微微阵列技列技术自身抗体自身抗体检测检测常用常用常用常用国内外产品的情况综述国内外产品的情况综述常用常用二、临床意义二、临床意义第二部分：第二部分：临床意床意义 I20：抗：抗ENA/ANA抗体抗体lgG定性定性检测试剂盒盒 （蛋白芯片（蛋白芯片-斑点免疫印迹法）斑点免疫印迹法）G9：自身免疫性肝病抗体：自身免疫性肝病抗体谱定性定性检测试剂盒盒（蛋白芯片（蛋白芯片-斑点免疫印迹法）斑点免疫印迹法）I20 用途与相关指用途与相关指标SLE：ANA dsDNA NuclesomeHistonSmDPCNARib-pSSASSBU1-snRNPKU干燥综合征:ANA SSA SSBKU混合性结缔组织:ANA U1-snRNPKU硬皮病:ANAPM-sclCENP-BScl-70KUAMA-M2多肌炎/皮肌炎:ANAPM-sclMi-2 Jo-1KU原发性胆汁性肝硬化:ANACENP-BMi-2 AMA-M2自身免疫性肝炎:ANARib-pRo/SS-A52KDhttp:/www.ppthi-No.项项 目目1AMA M2AMA M2原发性胆汁性肝硬化PBC2M2-3E(BPO)M2-3E(BPO)原发性胆汁性肝硬化PBC3抗肝肾微粒体抗肝肾微粒体I I型抗体（抗型抗体（抗LKM-1LKM-1）自身免疫性肝炎AIH4抗肝特异性细胞质抗肝特异性细胞质I I型抗原抗体（抗型抗原抗体（抗LC-1LC-1）自身免疫性肝炎AIH5抗可溶性肝抗可溶性肝/胰抗原抗体（抗胰抗原抗体（抗SLA/LPSLA/LP）自身免疫性肝炎AIH6Sp100Sp100原发性胆汁性肝硬化PBC7PMLPML-PMLPML-抗原（抗原（MND-ANAMND-ANA）原发性胆汁性肝硬化PBC8gp210gp210原发性胆汁性肝硬化PBC9Ro-52Ro-52自身免疫性肝炎AIH,风湿病G9用途与相关指用途与相关指标系统性红斑狼疮SLE抗抗dsDNA抗体抗体:用于监视监视SLE病情变化、病情变化、SLE活动期判断活动期判断、药物治疗效果观察等。在活动期的SLE病人血清中常可以检测到。美国风湿病学研究院把它作为SLE分类标准的指标之一。对SLE诊断特异性90%，灵敏度70%。在免疫治疗过程中，dsDNA抗体的滴度水平可大大降低，相反，病情恶化则伴随着dsDNA抗体的增加。因此检测检测dsDNA抗体浓度对于预测和治疗抗体浓度对于预测和治疗SLE有辅助作用有辅助作用。u抗抗Nucleosomes（核小体）抗体（核小体）抗体:核小体是细胞染色质中的一种成分，它是由DNA和组蛋白以特殊的方式相连而组成，在，在SLESLE的诱导和致病中起重要作用的诱导和致病中起重要作用u对对SLESLE的早期诊断有重要意义的早期诊断有重要意义l比抗ds-DNA、抗组蛋白抗体更早出现l阳性率：50%90%l特异性98%对SLE的肾性病变有指导意义的肾性病变有指导意义在在SLE的活性期，此抗体的检出率几乎为的活性期，此抗体的检出率几乎为100%，在非活动期的，在非活动期的SLE中为中为62%（相应的dsDNA抗体检出率仅为3.3%）。I20 临床意临床意义义抗组蛋白抗体（抗组蛋白抗体（Histones,AHA）:抗组蛋白抗体主要出现于95%的药物性狼疮患者中的药物性狼疮患者中。抗组蛋白抗体对于药物诱导的和自发性狼疮的诊断极为重要。抗组蛋白抗体在20-50%的SLE病人中检测到。风湿性关节炎大约为15-20%，少儿风湿性关节炎大约为20%，少数其它胶原病人，原发性胆汁性肝硬化大约为60%，此外在大约10%的恶性疾病中，也可见此抗体。抗抗SmDSmD抗体抗体:抗Sm抗体是SLE的特异性标志之一，但阳性率偏低，约为3040；SmD1抗原取代传统的Sm抗原混合物，在保证高特异性的前提下，灵敏度由灵敏度由原来的原来的30%提高到目前的提高到目前的70%；若将抗dsDNA和抗Sm抗体同时检测，可提高SLE的诊断率。在肾炎病人和某些中枢神经严重损伤的病人也可检测到。抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA):抗核糖体P抗体:I20 临床意临床意义义抗核糖体抗核糖体P抗体抗体:（核糖体抗体rRNP，rib-P抗体）传统的检测率只有10%左右；改用重组的改用重组的P0蛋白作为抗原检测核糖体抗体，蛋白作为抗原检测核糖体抗体，可以将检出率提高到约可以将检出率提高到约40%。亚洲病人的检出率比黑人和白种人的高。SLE患者出现rRNP抗体与中枢神经系统、肝脏或肾脏受累相关；具有脑炎和精神病症状的SLE患者，抗rRNP抗体的敏感性为56-90%。抗核糖体P抗体主要在活动期的SLE病人中查到。最重要的是最重要的是此此抗体和抗体和SLE，特别是患严重的低血压、肾炎和肝炎的，特别是患严重的低血压、肾炎和肝炎的SLE病人，之间存在相关性病人，之间存在相关性。u抗Rib胞浆抗原核糖体位于胞浆内 抗Rib阳性+其它自身抗体阴性=ANA阴性 临床意义 是SLE的又一特异性抗体，阳性率10-20%多见于SLE活动期,与抗ds-DNA抗体的消长相平行 但不会随病情缓解立即消失,可持续1-2年后才转阴干燥综合征（SS）u抗抗SS-A/Ro抗体抗体：SS-A/Ro抗体见于85%-95%的干燥综合征病人因为此抗体尤其见于没完全表现出干燥综合症病症的病人中，抗SSA/Ro抗体可作为干燥综合症的早期诊断标记，以及预测疾病的发展早期诊断标记，以及预测疾病的发展。尤其是60KDRo蛋白（Ro60）和52KDRo蛋白（Ro52）的免疫反应，分别用于辨别SLE和原发性干燥综合症。抗SSA/Ro抗体也见于系统性红斑狼疮病人（45%-60%）。此类病人比其它的SLE病人更易于并发肾炎。SSA/Ro抗体在新生儿红斑狼疮中的检出率几乎为新生儿红斑狼疮中的检出率几乎为100%。此抗体阳性与先天。此抗体阳性与先天性心脏传导阻滞有极大的相关性。性心脏传导阻滞有极大的相关性。抗SS-A/Ro抗体在亚急性皮肤型狼疮（SCLE）患者中的阳性率可达60%。此抗体的出现预示着SCLE的发生。这部分患者中往往存在补体C3（75%）和C4(50%)的缺乏。抗SS-A/Ro抗体可见于风湿性关节炎、进行性系统性硬化症、多发性肌炎（5%-7%）、原发性胆汁性肝硬化（4%），盘状LE（3%）的病人，及0.1%的正常人群中。常与SSB同时出现。干燥综合征（SS）u抗抗SS-A/Ro52抗体抗体：抗Ro52抗体与抗Ro60抗体相比，对原发性干燥综合症具有更高的特异性在超过60%的原发性干燥综合症病人中可单独检测到Ro52自身抗体，而只有5%的SLE病人可单独检测到此抗体。u抗抗SS-A/Ro60抗体抗体：抗SS-A/60kd抗体对SLE的临床意义较大，尤对新生儿系统性尤对新生儿系统性红斑狼疮（红斑狼疮（NSE）诊断率为）诊断率为100。I20 覆盖的覆盖的疾病疾病干燥综合征（SS）u抗抗SS-B（La）抗体）抗体：3085%的SS1020%及的SLE患者有抗SS-B抗体。SS患者常常抗SSA/52kd抗体与抗SS-B抗体同时出现，且抗SSA/52kd抗体比抗SS-A/60kd抗体对SS更为特异。若病人血清中可检测到可检测到SS-A抗体而不伴有抗体而不伴有SS-B抗体的出现，此病人继发肾抗体的出现，此病人继发肾炎的风险较大炎的风险较大。抗SSA抗体阳性率70%96%抗SSB抗体阳性率50%87%3、混合性结缔组织病（MCTD也称Sharp综合症）uANAANA阳性uENA抗抗U1-SnRNP抗体：抗体：U1-SnRNP 68，U1-SnRNP A，U1-SnRNP CuSm抗体阴性抗体阴性抗U1-RNP自身抗体在其它风湿病中也可检测到（SLE：40%；Sklerodermie：0-31%；干燥综合症：3-15%；皮肌炎：5-14%；慢性多发性关节炎：10%）。但与MCTD中抗nRNP抗体的高滴度相比，以上风湿性疾病中此抗体活性/滴度通常较低。4、系统性硬化病（pSS）uANA阳性率阳性率50%70%uENA抗抗PM/Scl抗体抗体，抗抗-着丝点抗体着丝点抗体，抗抗Scl-70抗体抗体。70%左右的患者抗核抗体阳性。其中抗Scl-70抗体见于5060%的弥漫型系统性硬化病患者，具有很强的特异性，而ACA（抗着丝点抗体）常见于（4070%）局限型系统性硬化病。二者均可出现抗核仁抗体阳性，可以有抗RNP、抗PM-1抗体、抗SSA抗体也可以出现，但抗双链DNA抗体罕见。抗SSA和抗SSB抗体的出现常提示有合并干燥综合征的可能有合并干燥综合征的可能。I20 覆盖的覆盖的疾病疾病4、系统性硬化病（pSS）抗抗PM/Scl抗体抗体：抗PM/Scl抗体常见于多肌炎与硬化症的重叠症状中，在重叠症状中的阳性率为50%；也可以仅出现于多肌炎患者中，阳性率为8%,弥散性硬化症中的阳性率为2%-5%.抗PM/Scl抗体出现在多发性肌炎患者，硬皮病患者或者多发性肌炎和硬皮病重叠综合症患者的体内。对多发性肌炎和硬皮病重叠综合症患者来说，检测到抗PM/Scl抗体相对来说是一个好的预后诊断信号好的预后诊断信号，不像检测到其他肌炎或系统性硬化症特异性的自身抗体时代代表预后不良。表预后不良。4、系统性硬化病（pSS）抗抗-着丝点抗体着丝点抗体（CENP-B，ACA）ACA阳性往往是患者预后较好的一个指标；ACA很少与Scl-70抗体同时出现。49-96%的CREST综合症病人可检出抗-着丝点抗体(Anti-Centromere)，并伴有雷诺现象(Raynaudsphenomenon)。临床报告病例中硬皮病伴胆汁性肝硬化病人此抗体也可呈阳性。抗ACA（抗着丝点抗体）主要出现于一定形式的进行性系统性硬化症（主要出现于一定形式的进行性系统性硬化症（PSS）中）中，尤其是CREST综合征（皮内钙质沉着，Raynaud现象，食管运动功能混乱，指端硬化，远距离血管扩张），其检出率为50-70%。ACAs对PSS的预后较佳，出现此抗体时，在CREST综合症病人中极少观测到心肺肾的病变。抗ACA抗体可在25%的表现出Raynaud现象的患者中检测到。由于它与胶原病的发生有关，ACAs的测定对此病的预测极为重要。抗ACA（抗着丝点抗体）也可见于原发性胆汁性肝硬化（10%-20）。但在单独的肺动脉高压症，SLE和原发性干燥综合征患者中，此抗体极少出现。与局限型进行性系统性硬化症（CREST综合征：钙质沉着、Raynauds病、食管功能障碍、指硬皮病、远端血管扩张）有关，阳性率为70-90%。在原发性胆汁性肝原发性胆汁性肝硬化患者中也可检测到该抗体（阳性率硬化患者中也可检测到该抗体（阳性率10-30%）。还可出现于雷诺氏综合征中）。还可出现于雷诺氏综合征中。I20 覆盖的覆盖的疾病疾病4、系统性硬化病（pSS）抗抗Scl-70Scl-70抗体：抗体：是系统性硬化（SSc）的血清学特异性标记抗体特异性标记抗体。特异性几乎特异性几乎100%。Scl-70抗体阳性与弥漫性皮肤病变、肺间质纤维化、心脏受累、肾脏受累弥漫性皮肤病变、肺间质纤维化、心脏受累、肾脏受累等相关。预后不良。40%的硬皮病和20-30%的全身性硬皮病患者中可检测到此抗体，很少在其它自身风湿性疾病中出现。抗Scl-70抗体出现于70%的系统性硬化症患者中，被认为是系统性硬化症的标记性被认为是系统性硬化症的标记性抗体。抗体。但由于难以区分局部和系统性硬化症，只能将检测到的抗体和临床发现结合起来。5、皮肌炎/多发性肌炎（PM/DM）u炎症性的肌病以骨骼肌炎症浸润为特征。这些原发性的肌病包含一系列的共有的和非共有的并发症。共同的亚类包含成人多发性肌炎（PM）和皮肌炎（DM），连同包含体肌炎，儿童肌病，恶性肿瘤相关的肌病和肌病重叠其他的自身免疫结缔组织病。lANA：约2030%的本病患者抗核抗体阳性lENA抗抗Mi2抗体抗体，抗抗Jo-1抗体抗体，抗抗Ku抗体抗体。其它其它：U1-SnRNP 68，U1-SnRNP A，U1-SnRNP CI20 覆盖的覆盖的疾病疾病5、皮肌炎/多发性肌炎（PM/DM）抗抗Mi2抗体抗体：Mi-2自身抗体是皮肌炎的特异性血清学标志物自身抗体是皮肌炎的特异性血清学标志物。在大约20%的肌炎患者血清中检测到，所以它可作为皮肌炎急性发作，预后预后良好和良好的治疗反应的标记物良好和良好的治疗反应的标记物。靶向Mi-2核抗原的自身抗体是自发性肌炎（IIM）存在的一个血清学特性。98-100%的特异性为特征。抗Mi-2抗体是唯一确认的直接指向核靶点的肌炎特异性自身抗体。Mi-2抗体另外一个较为罕见特性就是在儿童中出现的频率儿童中出现的频率与在成人中出现的频率相当。I20 覆盖的覆盖的疾病疾病5、皮肌炎/多发性肌炎（PM/DM）抗抗Jo-1抗体抗体：20-30%的多发性肌炎/皮肌炎(Polymyositis/Dermatomyositis)，30-40%的多发性肌炎患者和高达60%的多发性肌炎伴有间质性肺疾病患者血清中可检测到抗-Jo-1抗体。其它胶原性疾病中很少检出此抗体。由于抗Jo-1抗体的相应抗原只位于胞浆，此抗体在ANA抗体中较为独特。Jo-1自身抗原为组氨酰tRNA合成酶。此抗体尤见于自发性炎症性肌炎。它的检出率在原发性多肌炎为33%，原发性皮肌炎为25%。超过70%抗Jo-1抗体阳性的患者出现纤维化肺泡炎，部分出现多关节炎。因此，抗Jo-1抗体被认为是肺病相关肌炎的标记性抗体。I20 覆盖的覆盖的疾病疾病5、皮肌炎/多发性肌炎（PM/DM）u抗抗Ku抗体抗体。以日本病人的名字命名。Ku是与DNA直接结合的70KD和80KD的蛋白二聚体。免疫双扩散检测PM/SD重叠综合征的病人其阳性率为3%。ELISA测得该抗体在SLE中为39%，MCTD中为55%，40%的SD病人有低滴度的抗Ku抗体。抗Ku抗体最初被报道在20%硬皮病多发性肌炎重叠综合症患者存在，但也存在于20%的原发性肺动脉高压症患者，5-10%的系统性红斑狼疮患者和混合性结缔组织病患者,及高达20%的干燥综合症患者中抗Ku抗体可见于1-7%的肌炎患者。许多自身免疫疾病发现有Ku抗体，包括多发性肌炎、狼疮及硬皮病。抗抗Ku抗体检测阳抗体检测阳性可以提示有发展肌炎的高度危险。性可以提示有发展肌炎的高度危险。http:/www.ppthi-uANA：抗核抗体(ANA)80%的患者体内有此抗体，其滴度和血清7一球蛋白水平相一致。uSS-A/Ro52:u抗核糖体抗核糖体P抗体抗体:6、自身免疫性肝炎（、自身免疫性肝炎（AIH）http:/www.ppthi-uANA：抗核抗体(ANA)在许多研究中已证明ANA是诊断PBC的重要标志，大约50PBC患者有ANA，尤其是在AMA呈阴性时可作为其诊断的另一重要标志。u抗抗AMA-M2抗体抗体:高滴度的抗线粒体2型抗体是原发性胆汁性肝硬化的标志，阳性率为85-95%，另外，在其它慢性肝脏疾病（30%）和进行性系统性硬化症（7-25%）中也可检出抗M2抗体，但滴度较低。u抗抗-着丝点抗体（着丝点抗体（CENP-B，ACA）：原发性胆汁性肝硬化（10%-30）7、原发性胆汁性肝硬化、原发性胆汁性肝硬化http:/www.ppthi-I20产品指标的优势抗抗ANA抗体抗体 抗原：抗原：Hep2 Whole Cell Lysate：一般市售自免产品中很少引进ANA这个指标。引入这个指标，主要基于以下两方面的好处：(1)ANA检测在临床上是一个极重要的筛选试验，ANA阳性（高滴度）标志了自身免疫疾病的可能性.(2)可以配合产品中某些指标的检测情况，结合ANA的检出情况，可以进行疾病辅助甄别。二、自身免疫性疾病二、自身免疫性疾病http:/www.ppthi-I20产品指标 SmDSmD 抗原取代了传统的抗原取代了传统的SmSm抗原抗原抗Sm抗体是SLE的特异性标志之一，但阳性率偏低，约为3040；SmDSmD抗原取代传统的抗原取代传统的SmSm抗原混合物，在保证高特异性的前提下，灵敏抗原混合物，在保证高特异性的前提下，灵敏度由原来的度由原来的30%30%提高到目前的提高到目前的70%70%；原因原因:sm抗原是剪接复合物的一部分，并催化核前体mRNA的剪接。每个剪接体snRNP包含snRNAs(U1,U2,U4/U6和U5)和一个独特的连接蛋白组，以及一个由7个不同的Sm组成的共享蛋白(SmB/SmB,SmD1,SmD2,SmD3,SmE,SmF和SmG)，分子量分别是9到29,5kDa之间。SmB和SmD多肽是最常见的抗Sm特异性自身免疫应答标靶，其中SmD作为是主要的Sm抗原。这样可以充分的暴露特异性结合充分的暴露特异性结合点位点位，更为灵敏的扑捉到该抗体更为灵敏的扑捉到该抗体。二、自身免疫性疾病二、自身免疫性疾病http:/www.ppthi- U1-snRNPU1-snRNP分型分型抗原取代了传统的抗原取代了传统的SnRNP-SmSnRNP-Sm复核物作抗原复核物作抗原RNPA、RNPC、RNP68/70：胞核中大多数RNP颗粒是U1-snRNP，它是由一个富含尿苷酸的小片段RNA（U1-RNA）和几种蛋白质组成的复合物。U1-snRNP 68/70、U1-snRNP A和U1-snRNP C这三个多肽仅出现在U1-snRNP颗粒中。由于很难从自然界纯化出这些小核核糖核蛋白复合物的亚颗粒蛋白，这就给临床诊断结果的特异性和准确性带来影响。使用单一的重组蛋白作为抗原标靶，严格意义上讲，这是唯一一种不受sm抗原影响的RNP自身抗体的检测方法。并且与应用U1-snRNP-Sm复合物做抗原相比，在检验中使用单一的U1蛋白能够检测出更多的自身抗体，因为U1-snRNP-Sm复合物的形成掩盖了很多自身抗体的识别位点复合物的形成掩盖了很多自身抗体的识别位点。因此，采用这三个主要抗原保证了非常高的灵敏性和特异性。抗U1-SnRNP抗体：U1RNPU1RNP抗原取代了传统的抗原取代了传统的SnRNP/SmSnRNP/Sm抗原抗原，100%特异性针对MCTD；MCTD血清学上区别与其他结缔组织病(CTDs)主要在于:高滴度的ANA阳性;抗U1RNP抗体阳性;Sm抗体阴性并且补体水平正常.(SmSm阳性作为排除阳性作为排除MCTDMCTD)对于MCTD诊断国际标准(Sharp美国标准1986)而言,U1RNP抗体阳性是诊断MCTD的最重要的指标.I20产品指标http:/www.ppthi-核糖核蛋白(RNP)自身抗体 小核核糖核蛋白A，C 和蛋白68/70 kDaU1-U1-snsnRNP Protein A,Protein C&68/70 RNP Protein A,Protein C&68/70 kDa ProteinkDa Protein混合性结缔组织病混合性结缔组织病/系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮U1-snRNP自身抗体存在于95的混合性结缔组织病（MCTD）和30的系统性红斑狼疮（SLE）患者中。抗68/70kDa蛋白抗体在混合性结缔组织病患者的临床诊断中有着很重要的意义。人类U1-snRNP复合物的结构图http:/www.ppthi-I20产品指标采用基因重采用基因重组组蛋白蛋白P0作作为为抗原抗原检测检测核糖体抗体，可以将使用核糖体抗体，可以将使用传统传统抗抗原的原的检测检测率率10%，提高到，提高到约约40%。抗核糖体抗核糖体P蛋白抗体蛋白抗体（P0）：（核糖体抗体 rRNP，rib-P抗体）抗PNP抗体多见于混合性结缔组织病。Anti-rRNP是是SLE的高特异性抗的高特异性抗体，但阳性率较低，只有体，但阳性率较低，只有10%左右左右。P0是是rRNP的主要核心靶抗原，的主要核心靶抗原，采用基因重组蛋白采用基因重组蛋白P0作为抗原检测核糖体抗体，可以将检出率提作为抗原检测核糖体抗体，可以将检出率提高到约高到约40%。P0阳性预示SLE患者中枢神经系统、肝、肾受累。SLE患者出现rRNP抗体与中枢神经系统、肝脏或肾脏受累相关；具有脑炎和精神病症状的SLE患者，抗rRNP抗体的敏感性为56-90%。G9 临床意义临床意义http:/www.ppthi-自身免疫性肝炎（自身免疫性肝炎（AIH）原发性胆汁性肝硬化（原发性胆汁性肝硬化（PBC）原发性硬化性胆管炎（原发性硬化性胆管炎（PSC）重叠综合症重叠综合症G9G9http:/www.ppthi-自身免疫性肝炎是近年来新确定的疾病之一，该病在欧美国家有较高的发病率，如美国该病占慢性肝病的1015，在我国约占慢性肝病的20%自身免疫性肝炎是由于自身免疫所引起的一组慢性肝炎综合征，由于其表现与病毒性肝炎极为相似，常与病毒性肝炎混淆，但两者的治疗迥然不同。http:/www.ppthi-自免肝疾病：主要自免肝疾病：主要为原因不明的肝病原因不明的肝病，近年来有逐，近年来有逐渐上升的上升的趋势，尤其如尤其如药物引起的自免性肝病增多。物引起的自免性肝病增多。采用免疫印迹技采用免疫印迹技术，一次，一次实验可同可同时检测自免肝相关的九自免肝相关的九项指指标：AMA-M2、M2-3E、LKM-1、LC-1、SLA/LP、Sp100、gp210、PML、Ro-52、能区分能区分AIH、PBC类型的自身免疫肝病型的自身免疫肝病自身抗体的检测对临床肝脏病学具有很重要的意义：自身抗体的检测对临床肝脏病学具有很重要的意义：用干扰素错误治疗用干扰素错误治疗AIHAIH的结果和用免疫抑制剂治疗病毒的结果和用免疫抑制剂治疗病毒感染一样，都会导致病人死亡。感染一样，都会导致病人死亡。G9http:/www.ppthi-PBC：M2,M2-3E,Sp100,PML,gp210原发性胆汁性肝硬化AIH：LKM-1,SLA/LP,LC-1自身免疫性肝炎Ro-52自身免疫性肝炎，风湿病G9http:/www.ppthi-自身免疫性肝病（自身免疫性肝病（AIH）的临床意义）的临床意义首先是 SLA/LP抗体 在所有的AIH相关抗体中具有最高的诊断价值，其可以单独出现，也可以与其他抗体一起出现。其阳性率为30%，但其阳性预测率预测率几乎为100%如果说存在相应的临床症状，仅SLA/LP抗体阳性就基本上可确认为AIH。所有病毒性肝炎SLA/LP为阴性。三分之一的AIH患者血清中可检测到抗SLA/LP，从而可以正确地排除病毒性肝炎相关抗体：ANA LKM-1 LC-1 RO-52如果病人对免疫抑制剂治疗敏感，就证实了诊断的正确性。对临床肝病学具有很重要的意义：用干扰素错误治疗AIH的结果和免疫抑制剂治疗病毒感染一样，都会导致病人死亡。原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种免疫介导的慢性炎症性胆汁淤积肝脏疾病。危害！1、特点：患者多为女性（90%），多发生在40-60Y2、症状如：搔痒、疲劳、右上腹疼痛等，然后出现阻塞性黄疸3、血脂升高是PBC的一个重要指标。4、是区别诊断：PBC、慢性病毒性肝炎、AIH、原发性硬化性胆管炎检测指标AMA-M2M2-3E（BPO）AMA-M2是PBC最为灵敏和最为特异的诊断标志。M2-3E（BPO）灵敏度更高Sp100gp210是AMA-M2阴性时的阳性标志。第三部分：第三部分：G9 I20 的的临床使用床使用I20 G9临床运用原则抗核抗体谱联合检测意义，是早期诊断和抗核抗体谱联合检测意义，是早期诊断和鉴别（如狼疮性肾炎）的标准之一鉴别（如狼疮性肾炎）的标准之一动态随访抗核抗体谱的变化动态随访抗核抗体谱的变化 I20 联合合检测常用的自身抗体常用的自身抗体组合合SLE：ANAdsDNANuclesomeHistonSmDPCNARib-pSSASSBU1-snRNPKU干燥综合征:ANASSASSBKU混合性结缔组织:ANAU1-snRNPKU硬皮病:ANAPM-sclCENP-BScl-70KUAMA-M2多肌炎/皮肌炎:ANAPM-sclMi-2Jo-1KU原发性胆汁性肝硬化:ANACENP-BMi-2AMA-M2自身免疫性肝炎:ANARib-pRo/SS-A52KDhttp:/www.ppthi-No.项目目1自身免疫性肝炎AIH抗肝抗肝肾微粒体微粒体I型抗体（抗型抗体（抗LKM-1）、）、抗肝特异性抗肝特异性细胞胞质I型抗原抗体（抗型抗原抗体（抗LC-1）、抗可溶性肝）、抗可溶性肝/胰抗原抗体（抗胰抗原抗体（抗SLA/LP）2原发性胆汁性肝硬化PBCAMA M2、M2-3E、Sp100、PML、gp2103风湿病Ro-52G9联合检测常用的自身抗体组合联合检测常用的自身抗体组合妊娠生育曾被列为SLE的禁忌症。目前，无脏器损害；细胞毒免疫抑制剂停药半年，激素仅用小剂量维持时，方可怀孕。出现病情活动时，需加大激素剂量，但地塞米松和倍他米松可以胎盘屏障，影响胎儿。妊娠前3个月至妊娠期应用环磷酰胺、甲氨蝶呤等免疫抑制剂，可影响胎儿生长发育，导致畸胎。妊娠期合并SLE，存在流产、早产、死胎和诱发母体病情恶化的危险。故应避孕。母亲经胎盘过继给胎儿。临床上患儿母亲多患有SLE、SS或其他风湿性疾病。新生儿红斑狼疮（NE）表现为不可逆的、完全性房室传导阻滞。新生儿红斑狼疮（NE）患者的母亲二胎该病的发生率为15%-SLE诊断及治疗指南儿童SLE伴严重肾损害较多，在SLE发病二年内即可出现肾衰竭，可高达67-82%。就诊时已有肾脏受累。儿童混合性结缔组织病，临床表现多样，症状不典型，极易误诊。熟悉儿童红斑狼疮临床的特点：1）以发热、淋巴结肿大发热、淋巴结肿大起病的SLE患儿，常被考虑为霍奇金病或淋巴结结核2）以反复发作的荨麻疹起病可被误诊慢性荨麻疹3）以关节炎起病者关节炎起病者，特别是类风湿因子阳性的患儿，可被误诊为类风湿性关节炎4）以发热、浆膜炎发热、浆膜炎起病者，可被误诊为结核性胸膜炎、结核性腹膜炎。5）以溶血性贫血贫血起病者，可被误诊为原发性溶血性贫血6）以血小板减少性紫癜血小板减少性紫癜起病者，可被误诊为原发性血小板减少性紫癜。7）以肾病综合征肾病综合征起病者，可被误诊为肾病综合征。8）中枢神经系统损害如颅内高压、精神症状颅内高压、精神症状9）消化系统症状消化系统症状也很常见这样的误诊在日常工作中常见常见，误诊的原因是对SLE不熟悉和缺乏警觉而不熟悉和缺乏警觉而没有做相关的检查没有做相关的检查 （简言之想到才能做到）（简言之想到才能做到）广州儿童医院过敏免疫风湿科曾华松肾病妊娠影响胎盘功能、发育迟缓、流产或死胎。狼疮性肾炎患者初期症状表现不明显，常常被误诊为肾炎、肾病综合征或慢性肾炎，以至错过最佳治疗时机。狼疮性肾炎早期无特殊症状和体征，给早期诊断带来一定的困难，容易造成误诊。应用解热、镇痛药物后，患者在短期内临床症状得到改善，则满足于以往的诊断。基层医院误诊率高的原因，缺乏免疫学检查手段。多指标联合检测提高检测率。美国风湿病 狼疮性肾炎筛查、治疗及管理：自身抗体检查。以SLE为例，加深理解一、常见的SLE临床症状：疲惫；头疼或其他不确定疼痛；低热；精神不振、抑郁，记忆力减退；胸痛；非特异性红斑。二、发热待查的实验室诊断非感染性病：结缔组织病、药物热（包括RASLE硬皮病肝病）发热持续，体温多次超过38.3度，经过至少一周细致检查，仍不能确认的一组疾病。有没有想过测定自身免疫性抗体？88%的SLE在确诊几年前就出现相关抗体阳性。抗ANA和抗RO在疾病确诊9-10年前就可检测到抗ds-DNA在确诊前2.5年可检测到。抗Sm和抗RNP在确诊前1年可以检测到。孕妇中的自身抗体阳性+相比正常人3.8%的阳性率，孕妇人群偏高。实践证明，孕妇检测自身抗体阳性，预示孕妇本人和子代较高的AID发病率。1.8亿丙肝患者每年100万死亡。1、丙肝增长速度非常快，是所有肝炎中最快隐性传播，可肝硬化前无症状。易感人群基数大。2、认知度低；易延误病情。无疫苗。3、脂肪肝患者可能是丙肝患者（丙肝可导致脂肪肝）最佳治疗：咖啡伴侣（干扰素+利巴韦林）检查：至少每年检查一次。合并排除AIH。上海瑞金医院传染科主任谢青肿瘤与AID二者相互关系：1、在肿瘤患者中发现自身免疫现象：血清中自身抗体2、自身免疫性疾病患者中，肿瘤发生率较高。恶性肿瘤体内自身抗体：ANAdsDNA组蛋白RNPSmRoLa等肿瘤与自身免疫长征仲人前http:/www.ppthi- 产品介绍产品介绍采用自主压电式微量点样（非接触式）压电式微量点样（非接触式）技术的生物芯片点样仪，其适用于DNA，Protein等多种样品，监测系统监控样品喷出情形，计算各个喷点的形状和大小以及喷射角度，结合超微量、超精确的超精确的0.070.07纳升纳升点样针确保了Array的各个点样本量均一（点样量精度值值2%2%），完全可以作到数据定量分析，是生物芯片研发和生产的关键设备。确确保保抗原包被均一性I20产品、抗原包被更均一http:/www.ppthi-http:/www.ppthi-生物芯片阅读仪生物芯片阅读仪光信号CMOS图像传感器电荷电荷等等级级结结果果-阴性（）可疑+弱阳性+阳性+强阳性半定量http:/www.ppthi-产品技术平台：专利号为：2011102240631，“一种高灵敏度免疫芯片检测系统及其使用方法”专利号：201320337438.X，“一种二维图像采集装置”专利号：201330248259.4，“生物芯片阅读仪”病毒性肝炎中的异常自身免疫病毒性肝炎中的异常自身免疫据国内文献报道，乙肝与丙肝中自身抗体的阳性率大约为30-40%，其中以ANAI20，以及，以及G9的的Ro-52;gp210,Nup62(M-ANA核膜型核膜型);sp100,PML-抗原抗原(MND-ANA多核点型多核点型)最为多见，其次为AMA和ASMA。虽然不存在感染性肝炎是AIH的一个诊断标准，但自身抗体的出现，可能提示体内出现了由病毒由病毒诱发的自身免疫或重叠有自身免疫病（如AIH），这时如再给病人进行干干扰素素治疗，将加剧这种自身免疫反应，使病情恶化。因此，对病毒性肝炎，在干扰素治疗之前或治疗过程对病毒性肝炎，在干扰素治疗之前或治疗过程中，应定期检测自身抗体中，应定期检测自身抗体，排除自身免疫性肝病，指导临床治疗。丙肝的治疗，需要自身抗体的来监控疗效，尤其是LKM-1。G9G9 病毒性肝炎中的异常自身免疫病毒性肝炎中的异常自身免疫小小结：鉴于HBV和HCV的高发病率和诱发自身免疫疾病的