影响连城白鸭产蛋的重要病毒病调查与分析.pdf

福建畜牧兽医第 45 卷第 4 期2023 年性传染源袁防止外来感染遥 渊4冤可以采取药物预防遥渊5冤猪场发生疫情时要及时就诊袁且须隔离治疗袁确诊的患猪以及携带衣原体的猪都不能留作种用袁也不可出售或上市流通袁不能存在侥幸心理袁必须全部淘汰处理袁确保控制疫情遥4结论本次调查证实了猪衣原体病在猪的不同阶段都有感染袁尤其是母猪的感染率更高袁说明德化县猪场猪衣原体病呈流行趋势遥参考文献院1 赵德明,张仲秋,沈建忠,等.猪病学M.9 版.北京:中国农业大学出版社,2008.2 赵书景,贺绍君,李文华,等.猪衣原体病的诊断与防治J.中国猪业,2010,5(4):56.3 Kauffold J,Melzer F,Henning K,et a1.Prevalence of chlamy鄄diae in boars and Semen used for artificial inseminationJ.Theriogenology,2006,65(9):1750-1758.4 姜天童,杨宜生,孟庆友,等.猪衣原体病血清学调查J.中国兽医科技 1985(10):23-25.5 胡海志.规模养猪场猪衣原体病的血清学调查J.现代畜牧兽医,2004(11):26.6 胡龙阳.规模化猪场猪衣原体病的诊断与防治J.福建畜牧兽医,2002,24(6):46-47.7 蒋成武,肖克宇,向秀成,等.湖南省牛和猪衣原体病感染的血清学调查J.湖南农学院学报,1989,15(1):97-101.8 王琼秋,刘伯庶,李永斌,等.云南省红河州猪衣原体性流产的病原分离鉴定J.中国兽医科技,2001,31(1):19-20.9 罗公平,胡天阳,张云贵,等.牡丹江地区猪衣原体病的调查J.黑龙江畜牧兽医,1998(6):23.10 高生智,魏润生,史永年,等.甘肃省猪衣原体病的血清学调查J.动物科学与动物医学,2001,18(1):42.11 邱昌庆,周继章,高双娣,等.湖北等六省(区)规模化猪场猪衣原体病的检测J.中国兽医科技,1998,28(10):3-5.12 李海念,赵心力,菊花,等.内蒙古地区猪衣原体病的血清学调查J.当代畜禽养殖业,1999(4):20-21.13 索绪峰,王大林,张嗣华,等.海南省规模化猪场衣原体病血清流行病调查J.养猪,2005(3):31-32.14 易奇珍,陈泽祥,郑列丰,等.广西猪衣原体病血清学调查J.中国兽医杂志,1994,20(6):20.15 邱昌庆,程淑敏,周继章,等.规模化猪场猪衣原体病的检测J.中国兽医杂志,2000,26(3):23-24.16 储玉双,陶保华.猪衣原体病的研究进展J.江西畜牧兽医杂志,2009(5):2-5.17 李红林.猪衣原体病诊治J.畜牧兽医科技信息,2014(3):29-31.18 林颖,曹庆焱,孟祥勇.禽衣原体病综述J.辽宁畜牧兽医,2004(5):40-42.影响连城白鸭产蛋的重要病毒病调查与分析邹书余连城县农业农村局福建连城366200摘要为了解影响连城白鸭产蛋的重要病毒病感染情况袁应用(RT-)PCR 技术对 2022 年 3 月至 2022 年 12 月采集的产蛋期连城白鸭口腔/泄殖腔棉拭子及患鸭组织等样品开展禽流感尧鸭坦布苏病毒病尧禽 1 型副黏病毒病尧鸭星状病毒病尧产蛋下降综合征及鸭瘟等重要病毒病的检测遥 对所采集的 856 份样品检测结果表明袁产蛋期连城白鸭的重要病毒病感染呈现多样性袁以低致病性 H9 亚型禽流感较常见遥 调查结果可为产蛋期连城白鸭的疫病防控提供参考遥关键词连城白鸭产蛋期病毒病流行病学调查文献标识码院A文章编号院1003-4331渊2023冤04-0040-03Investigation and analysis of major viral diseases in laying Liancheng white duckZou Shuyu(Liancheng County Agricultural and Rural Bureau,Fujian Liancheng 366200)Abstract In order to investigate the prevail of viral disease in laying Liancheng white duck,856 samples of oropharyngeal and cloacalswabs from apparently healthy duck,as well as tissue samples from sick ones,were collected from March 2022 to December 2022.These samples were detected for viruses such as avian influenza virus,duck tembusu virus,avian paramyxovirus type 1,duck astro鄄virus,egg drop syndrome virus,and duck plague virus by(RT-)PCR methods.The results showed that the infection of viral diseases inthe laying Liancheng white duck exhibited diversity,among which low pathogenic H9 subtype avian influenza were the main epidemicdiseases.The epidemiological investigation will help for the prevention and control of viral diseases of laying Liancheng white duck.Key words Liancheng white duck Laying duck Viral disease Epidemiological investigation连城白鸭是福建省优良地方水禽品种袁 属中国麻鸭中独具特色的白色变种袁 是我国唯一具有药用功能的地方蛋鸭品种袁 主要产于福建省西部的连城县袁分布于长汀尧上杭尧永安和清流等县1-2遥 目前连40福建畜牧兽医第 45 卷第 4 期2023 年城白鸭大部分养殖户饲养方式一直停留在传统的模式上袁多利用河流尧水塘等地方进行放牧饲养尧开放式饲养或水陆相结合的水面养殖为主袁 鸭舍的养殖设施条件简陋袁 生产环境变化幅度大尧 产蛋率波动大尧生物安全水平低尧疫病濒发3遥当前连城白鸭种鸭和蛋鸭养殖规模较大袁 据统计袁2022 年连城白鸭种鸭和蛋鸭存栏总量已超过60 万羽袁因鸭坦布苏病毒病尧鸭星状病毒病等新发疫病以及鸭瘟尧产蛋下降综合征等野老病冶的影响袁出现不同程度的产蛋率尧产蛋异常等袁甚至出现种蛋鸭死亡3遥 目前对于影响连城白鸭产蛋的病毒病种类和流行情况还不清楚袁 本研究对采集连城白鸭种鸭和蛋鸭的口腔/泄殖腔棉拭子及患鸭组织开展重要病毒病的感染情况调查与分析袁 为连城白鸭种蛋鸭健康养殖提供技术支撑遥1材料与方法1.1样品采集与处理2022 年 3 月至 2022 年12 月袁以福建省连城县规模化养殖场尧合作社及散养户等饲养的种鸭和蛋鸭作为检测对象袁 共采集样品 856 份遥 其中包括棉拭子样品 720 份 渊每月采集60 份冤及收集的临床样品 136 份遥临床无症状或貌似健康连城白鸭采集棉拭子袁采集咽喉和泄殖腔分泌物合并进行检测遥 以无菌棉拭子在咽喉或泄殖腔内来回刮取 3 次后袁 合并放置于 2 mL 含抗生素的磷酸盐缓冲液中袁用于 DNA 抽提袁或置-20 益冻存备用遥 无菌采集患鸭的肝脏尧脾脏及肾脏等器官袁 剪碎后与磷酸盐缓冲液按体积比1:3 的比例 制成组织匀浆液袁 反复冻融 3 次 袁8 000 r/min 离心 30 min袁取上清袁用于 DNA 抽提袁或置-20 益条件下冻存备用遥1.2试剂病毒基因组 DNA/RNA 纯化试剂盒尧AMV 反转录试剂盒购自北京全式金生物技术股份有限公司曰PCR Master Mix(2X)购自北京纽普生物科技有限公司曰DNA Marker 等购自宝生物工程(大连)有限公司遥1.3样品病毒检测1.3.1样品病毒 DNA/RNA 的提取应用北京全式金生物技术股份有限公司的核酸纯化试剂盒提取采集的连城白鸭棉拭子样品和组织样品病毒核酸袁提取步骤参照试剂盒使用说明进行袁简要叙述如下院先以 20 滋L Proteinase K 与 200 滋L 样本上清涡旋混合15 s 后袁 于 56 益孵育 15 min遥 孵育结束后加入250 uL 无水乙醇袁涡旋混合后放置 5 min遥 随后将溶液与沉淀一起加入离心柱中袁12 000 g 离心 1 min袁弃掉流出液遥 清洗 2 次后袁 用 50 uL RNase-freeWater 洗脱获得 DNA/RNA袁将 DNA 置于-20 益保存或将 RNA 置于-70 益保存遥1.3.2病毒核酸的 渊RT-冤PCR 扩增用 DNA/RNA提取试剂盒提取含毒胚液中的核酸袁分成两份后袁取一份作为检测 DNA 病毒的核酸模板袁 另一份按照AMV 反转录酶说明书进行反转录合成 cDNA袁反转录条件为院42 益 60 min袁80 益 5 min袁 获得的 cDNA作为检测 RNA 病毒的模板袁反转录方法参照文献进行4遥参照已报道的鸭主要病毒如禽流感病毒5尧鸭坦布苏病毒4尧禽 1 型副黏病毒6尧鸭星状病毒7尧产蛋下降综合征病毒8及鸭瘟病毒9等多种病原检测方法对样品进行检测遥 反应体系院PCR Master Mix渊2X冤12.5 滋L尧引物各 0.5 滋L尧模板 2 滋L袁用水补充体积至 25 滋L曰 反应条件院95 益预变性 5 min袁 按 95 益30 s尧5263 益 30 s尧72 益 1 min 进行 35 个循环,72 益延伸 10 min 后结束反应,取产物 5 滋L 经 1.0%琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果遥2结果2.1产蛋期连城白鸭样品病毒检测结果应用(RT-)PCR 技术对采集的 856 份样品进行病毒检测表明袁禽流感病毒阳性样品 87 份袁阳性率为 10.2%袁其中 H9 亚型阳性样品 69 份袁未知亚型感染 18 份袁未检测到 H5 或 H7 亚型高致病性禽流感病毒曰鸭坦布苏病毒阳性样品 57 份袁阳性率为 6.7%曰鸭星状病毒阳性样品 33 份袁阳性率为 3.9%曰禽 1 型副黏病毒阳性样品 16 份曰 产蛋下降综合征病毒阳性样品14 份和鸭瘟病毒阳性样品 6 份渊见表 1冤遥2.2不同样品类型病毒检测情况对不同棉拭子样品和临床病例样品的病毒检测结果统计分析表明袁种蛋鸭棉拭子样品检测出的 5 种病毒袁其中低致表 1不同样品类型病毒检测情况样品类型采样数渊份冤阳性数渊份冤禽流感病毒鸭坦布苏病毒鸭星状病毒禽 1 型副黏病毒产蛋下降综合征病毒鸭瘟病毒棉拭子组织样品总计720136856632412711465792433412163111406641福建畜牧兽医第 45 卷第 4 期2023 年病性禽流感病毒阳性率为 8.8%渊63/720冤袁鸭坦布苏病毒阳性率为 1.5%渊11/720冤袁鸭星状病毒阳性率为1.3%渊9/720冤袁 禽 1 型副黏病毒阳性率为 0.6%渊4/720冤袁产蛋下降综合征病毒阳性率为 0.4%渊3/720冤曰临床病例样品中 6 种病毒均有不同程度检出袁 其中低致病性禽流感病毒阳性率为 17.6%渊24/136冤袁鸭坦布苏病毒阳性率为 33.8%渊46/136冤袁 鸭星状病毒阳性率为 17.6%渊24/136冤袁 禽 1 型副黏病毒阳性率为 8.8%渊12/136冤袁 产蛋下降综合征病毒阳性率为8.1%渊11/136冤袁 所有的 6 份鸭瘟病毒阳性样品均来源于临床病例遥3讨论蛋鸭养殖是福建省传统优势产业袁据统计袁福建省 2021 年蛋鸭存栏数超过 1 200 万羽袁 年产蛋量23 万 t 以上袁蛋鸭总产值约 14 亿元遥 随着我国饲料禁抗政策的落实尧蛋鸭饲养模式的变化尧养殖规模尧饲养密度的提高及各种贸易活动日益频繁袁 蛋鸭养殖的疫病防控形势更为严峻遥 随着设施化养殖模式在蛋鸭中的推广应用尧疫苗防控的实施尧生物安全管理措施的强化袁鸭瘟尧高致病性禽流感等一些野老病冶总体上得到有效控制袁 而鸭坦布苏病毒病尧 鸭星状病毒病等新发疫病已成为危害蛋鸭养殖的重要传染病3遥本次检测的影响连城白鸭产蛋的 6 种重要病毒中袁以低致病性禽流感病毒尧鸭坦布苏病毒和鸭星状病毒为主要病毒袁合计 177 份袁占疫病调查阳性样品的 83%渊177/213冤遥 不同来源样品中的病毒存在差异袁棉拭子样品中以低致病性禽流感为主袁占 70%渊63/90冤曰 临床病例样品中以鸭坦布苏病毒最高袁占37.4%渊46/123冤袁其次是低致病性禽流感病毒和鸭星状病毒袁均占 19.5%渊24/123冤遥所有病毒阳性样品中袁 禽流感病毒占所有检出病毒的 50.2%渊127/253冤袁 且是以低致病性的 H9 亚型禽流感病毒为主袁未检测到 H5 或 H7 亚型禽流感病毒遥 我国对高致病性禽流感采取的是强制免疫政策袁对规模饲养的蛋禽尧种禽尧水禽等一年免疫三次曰应免商品肉禽每批免疫一次曰 对散养禽实行全面的集中免疫袁每年春尧秋季各进行一次遥此外袁活禽交易市场积极推行野1110冶联防联控措施袁即野一日一清洁消毒尧一周一大扫除尧一月一休市尧活禽零售市场当日活禽零存栏冶遥这些措施有效防控了高致病性禽流感在家禽中的发生与流行遥 尽管目前家禽中高致病性禽流感得到了有效控制袁 仍不可忽视低致病性禽流感的危害遥 大量研究表明袁H9 及 H6 等低致病性禽流感通过病毒之间的遗传物质交换袁 参与了新型高致病性禽流感的暴发和流行遥因此袁进一步加强对禽流感的日常监测袁 及时掌握禽流感病毒的变异情况袁是防控禽流感的强有力措施遥除了禽流感外袁 鸭坦布苏病毒病和鸭星状病毒病在连城白鸭种蛋鸭群中流行也较为严重遥 鸭坦布苏病毒病最初于 2010 年初在我国福建尧江苏尧浙江等地流行袁随后迅速扩散到我国主要的鸭养殖地区曰该病临床表现以高热尧采食量骤降尧产蛋率骤降和种渊蛋冤禽卵巢渊卵泡冤严重出血或渊和冤卵黄液化为特征曰该病在我国不同地区尧不同品种鸭群发病率高低不一袁群内发病率几乎为 100%袁病死率为 0%12%遥鸭星状病毒是引起鸭病毒性肝炎的重要病原之一袁不同品种尧日龄的鸭均有感染袁成年鸭是带毒者袁可通过消化道途径向外排毒袁 粪样中病毒核酸阳性率在 30%83.9%曰在孵化过程中死亡的胚蛋及新生雏鸭也检测到不同程度的星状病毒感染袁 提示该病毒可能经卵垂直传播袁是引起鸭胚死亡的原因之一遥这两种疫病的防控以预防病毒的传入最为关键袁 鸭场应采取相应的生物安全措施防止病毒传播袁 发生过疫病的鸭场应采取全进全出饲养方式袁 清群后彻底清洗消毒并延长空舍时间遥参考文献院1 伍永寿.连城白鸭养殖效益分析及产业发展新思路J.特种经济动植物,2020,23(12):11-12,15.2 陈宽维,江宵兵,章双杰,等.连城白鸭资源特性,保护及开发方向J.中国家禽,2003,25(9):46-47.3 黄瑜,万春和,江斌,等.蛋鸭主要病毒病感染检测与分析J.福建农业学报,2016,31(9):908-911.4 万春和,施少华,程龙飞,等.一种引起种(蛋)鸭产蛋骤降新病毒的分离与初步鉴定J.福建农业学报,2010,25(6):663-666.5 赵国,刘晓文,钱忠明,等.2002-2009 年中国华东地区家禽低致病性禽流感的病原学检测与分析J.中国农业科学,2011(1):153-159.6 傅光华,林建生,傅秋玲,等.蛋鸭感染禽 1 型副黏病毒的调查及致病性测定与分析J.福建农业学报,2016,31(5):445-448.7 傅秋玲,张蕊,傅光华,等.鸭星状病毒 3 型 SYBR Green玉实时荧光定量 PCR 检测方法的建立J.农业生物技术学报,2022,30(4):817-824.8 傅光华,施少华,程龙飞,等.种番鸭产蛋下降综合征病毒的分离及其 PCR 鉴定J.福建农业学报,2007,22(1):43-45.9 郭霄峰,廖明,严英华,等.利用 PCR 检测鸭瘟病毒J.中国兽医科技,2002,32(4):13-16.42