DB15∕T 2077-2021 动物垫料中志贺氏菌检测.pdf

ICS 07.100.99 CCS B 41 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 20772021 动物垫料中志贺氏菌检测 Detection of Shigella in animal bedding 2021-01-25 发布 2021-02-25 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 20772021 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 本文件由中华人民共和国呼和浩特海关提出并归口。 本文件起草单位：中华人民共和国呼和浩特海关、内蒙古自治区农牧业科学院。 本文件主要起草人：赵治国、延涵、盛万里、王海艳、陈林军、崔强、敖威华、李军燕、罗晓平、韩祎陟、靳木子。 DB15/T 20772021 1 动物垫料中志贺氏菌检测 1 范围 本文件规定了动物垫料中志贺氏菌的分离鉴定定性检测方法。 本文件适用于动物垫料中志贺氏菌定性检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 GB/T 33682 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴别微生物方法通则 SN/T 1538.1 培养基制备指南 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则 SN/T 1538.2 培养基制备指南 第2部分：培养基性能测试实用指南 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 动物垫料 animal bedding 用于吸收动物排泄物，使动物保持舒适生活环境的铺垫物。 注： 包括动物笼内非直接与动物机体接触的铺垫物。 4 设备和材料 4.1 冰箱：2 5 。 4.2 恒温培养箱：36 1 。 4.3 厌氧培养装置 41.5 1 。 4.4 均质器。 4.5 漩涡振荡器。 4.6 电子天平：感量 0.1 g，0.0001 g。 4.7 光学显微镜。 4.8 全自动微生物生化鉴定系统。 4.9 飞行时间质谱仪。 4.10 二级生物安全柜。 4.11 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度） 、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 DB15/T 20772021 2 4.12 无菌滤膜均质袋。 4.13 pH 计。 4.14 无菌培养皿：15 mm90 mm。 4.15 无菌试管：18 mm180 mm。 4.16 无菌镊子。 4.17 无菌剪刀。 4.18 无菌勺。 4.19 无菌玻片。 4.20 无菌棉签。 5 培养基和试剂 志贺氏菌常用培养基与试剂灭菌后保存期限参见附录C。 5.1 实验用水：符合 GB/T 6682 的要求。 5.2 志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素：见附录 A 中 A.2。 5.3 麦康凯（MAC）琼脂：见附录 A 中 A.3。 5.4 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD）琼脂：见附录 A 中 A.4。 5.5 志贺氏菌显色培养基。 5.6 三糖铁（TSI）琼脂：见附录 A 中 A.5。 5.7 营养琼脂：见附录 A 中 A.6。 5.8 半固体琼脂：见附录 A 中 A.7。 5.9 葡萄糖胺培养基：见附录 A 中 A.8。 5.10 尿素琼脂：见附录 A 中 A.9。 5.11 -半乳糖苷酶培养基：见附录 A 中 A.10。 5.12 氨基酸脱羧酶试验培养基：见附录 A 中 A.11。 5.13 糖发酵管：见附录 A 中 A.12。 5.14 西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录 A 中 A.13。 5.15 粘液酸盐培养基：见附录 A 中 A.14。 5.16 蛋白胨水、靛基质试剂：见附录 A 中 A.15。 5.17 志贺氏菌生化鉴定试剂盒。 5.18 革兰氏阴性菌生化鉴定卡。 5.19 飞行质谱仪靶板。 5.20 志贺氏菌属诊断血清。 6 检验程序 志贺氏菌检验程序见图1。 DB15/T 20772021 3 41.5 1 ，16 h20 h 厌氧培养 36 1 ，20 h48 h 图1 志贺氏菌检验程序 7 操作步骤 7.1 取样 7.1.1 取样原则 应遵循随机性、代表性的原则。取样过程遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染。 7.1.2 样品处理 7.1.2.1 颗粒状或粉末样品 对送检样品包装内不同部位样品进行随机多点取样至少250 g，充分混匀后称取25 g颗粒状或粉末状垫料样品，加入225 mL志贺氏菌增菌肉汤，充分振摇或均质1 min2 min，于41.5 1 ，厌氧培养16 h20 h。 7.1.2.2 平面样品 无菌操作将灭菌规格板（5 cm5 cm）放在平面垫料表面，用浸有无菌稀释液（磷酸缓冲液或生理盐水）的棉拭子，在规格板内来回均匀涂抹整个方格 3 次，并随之转动棉拭子，然后用灭菌剪刀剪去棉拭子与手接触的部分，将棉拭子头置入装有 25 mL无菌稀释液的无菌锥形瓶中，根据样品面积大小重复取样14个规格板面积，相应地将棉拭子头置入25 mL100 mL的无菌稀释液中，充分振摇制成样品生化鉴定和/或全自动检测设备鉴定 TSI，半固体，营养琼脂斜面 报告 挑取可疑菌落 MAC 或志贺氏菌显色培养基 XLD 检样 25 g 或 25 cm2 样液+志贺氏菌增菌肉汤 225 mL 样品制备 DB15/T 20772021 4 原液（1 mL原液对应的样品面积为1 cm2），取样量见表1。取25 mL样品原液加入225 mL 志贺氏菌增菌肉汤，充分振摇或均质1 min2 min。于41.51，厌氧培养16 h20 h。 表1 不同面积平面类垫料样品取样量 样品面积 m2 取样量 cm2 规格板数 小于0.25（含） 25 1 0.250.5（含） 50 2 0.50.75（含） 75 3 大于0.75 100 4 7.2 分离 取增菌后的志贺氏菌增菌肉汤分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或志贺氏菌显色培养基平板上，于36 1 培养20 h24 h，观察各个平板上生长的菌落形态。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48 h再观察。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表2。 表2 志贺氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性琼脂平板 志贺氏菌菌落形态 MAC琼脂 无色至浅粉红色，半透明，光滑，湿润，圆形，边缘整齐或不齐。 XLD琼脂 粉红色至无色，半透明，光滑，湿润，圆形，边缘整齐或不齐。 志贺氏显色培养基 按照显色培养基的说明进行判断。 7.3 初步生化试验 7.3.1 自选择性琼脂平板上分别挑取 2 个以上典型菌落或可疑菌落，分别接种 TSI、半固体、营养琼脂斜面各一管，至 36 1 培养 20 h24 h，观察结果。 7.3.2 凡是三铁塘琼脂斜面产碱、底层产酸、不产气（福氏志贺氏菌 6 型可产生少量气体） 、不产硫化氢，半固体管中无动力的菌株，挑取 7.3.1 中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验。 7.4 鉴定 7.4.1 生化鉴定 挑7.3.1培养的菌落进行志贺氏菌生化鉴定，具体操作依据志贺氏菌生化鉴定试剂说明书或附录B。 7.4.2 辅助鉴定 可根据实验室情况， 选用全自动微生物生化鉴定系统或飞行时间质谱仪等对典型菌落或可疑菌落进行鉴定，具体操作依据标准GB/T 33682和设备操作规范进行。 7.4.3 血清学鉴定 7.4.3.1 抗原的准备 DB15/T 20772021 5 志贺氏菌无鞭毛抗原，有菌体（O）抗原。菌体（O）抗原分为型和群的特异性抗原。 一般采用1.2 %1.5 %琼脂培养物作为玻片凝集试验用的抗原。 注1：一些志贺氏菌如果因为K抗原存在而不出现凝集反应时，可挑取菌苔于1 mL生理盐水做成浓菌液，100 煮沸15 min60 min去除K抗原后再检查。 注2：D群志贺氏菌既可能是光滑型菌株也可能是粗糙型菌株，与其他志贺氏菌抗原无交叉反应。宋内氏志贺氏菌粗糙型菌株不一定会自凝，无K抗原。 7.4.3.2 凝集反应 在载玻片上划出两个约1 cm2 cm的区域，挑取一环待测菌，各放1/2环于载玻片上的每一区域上部， 在其中一个区域下部加1滴抗血清， 在另一区域下部加1滴生理盐水， 作为对照。 用无菌接种环 （针）分别将两个区域的菌落研成乳状液。将载玻片倾斜摇动混匀1 min，并对着黑色背景进行观察，如果抗血清中出现凝集成块的颗粒，而且生理盐水中没有出现自凝现象，那么凝集反应为阳性。如果生理盐水中出现凝集，视为自凝，应挑取同一培养基上不同菌落继续进行试验。 若待测菌的生化特征符合志贺氏菌属生化特征， 而其血清学试验为阴性， 则按7.4.3.1注1进行试验。 8 结果报告 综合生化鉴定结果、辅助鉴定结果和血清学试验结果，报告25 g（cm2）动物垫料样品中检出或未检出志贺氏菌。 9 生物安全措施 为了保护实验人员安全，应由具备资格的工作人员检测致病菌，所有培养物应小心处置，应按照GB 19489 的有关规定执行。 10 废弃物处理和防治污染的措施 检测过程中的废弃物需经121 高压灭菌处理至少30 min后再弃置。 DB15/T 20772021 6 附录A （规范性） 培养基和试剂 A.1 培养基制备及质量保证 按照SN/T 1538.1和SN/T 1538.2执行，并对制备好的培养基进行性能测试，如使用等效的脱水合成培养基，使用前对其进行验收并按其说明书使用。 A.2 志贺氏增菌肉汤-新生霉素 A.2.1 志贺氏菌增菌肉 A.2.1.1 成分 胰蛋白胨 20.0 g 葡萄糖 1.0 g 磷酸氢二钾 2.0 g 磷酸二氢钾 2.0 g 氯化钠 5.0 g 吐温-80 1.5 mL 蒸馏水 1 000 mL A.2.1.2 制法 将以上各成分混合加热溶解，冷却25 左右调节pH 至7.00.2，高压灭菌121 ，15 min。冷却至50 55 ，计入除菌过滤的新生霉素溶液（0.5 g/mL），分装备用。 A.2.2 新生霉素溶液 A.2.2.1 成分 新生霉素 25.0 mg 蒸馏水 1000 mL A.2.2.2 制法 将新生霉素溶解于蒸馏水中，用0.22 m过滤膜除菌。 A.3 麦康凯（MAC）琼脂 A.3.1 成分 蛋白胨 20.0 g 乳糖 10.0 g 3号胆盐 1.5 g 氯化钠 5.0 g 中性红 0.03 g 结晶紫 0.001 g 琼脂 15.0 g 蒸馏水 1000 mL DB15/T 20772021 7 A.3.2 制法 将以上各成分混合加热溶解，冷却25 左右调节pH 至7.20.2，高压灭菌121 ，15 min。冷却至45 50 ，倾注平板。 A.4 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂 A.4.1 成分 酵母膏 3.0 g L-赖氨酸 5.0 g 木糖 3.75 g 乳糖 7.5 g 蔗糖 7.5 g 脱氧胆酸钠 1.0 g 氯化钠 5.0 g 硫代硫酸钠 6.8 g 柠檬酸铁铵 0.8 g 酚红 0.08 g 琼脂 15.0 g 蒸馏水 1000 mL A.4.2 制法 除酚红和琼脂外，将其他成分加入400 mL蒸馏水中，煮沸至溶解，调节pH至7.40.2。另将琼脂加入到600 mL蒸馏水中，煮沸溶解。 将上述两溶液混合均匀后，再加入指示剂，冷却至冷却至50 55 ，倾注平板。 注： 本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于室温暗处。本培养基宜于当天制备，第二天使用。使用前必须除去平板表面的水珠，在37 55 温度下，琼脂面向下、平盖亦向下烘干。 A.5 三糖铁（TSI）琼脂 A.5.1 成分 蛋白胨 20.0 g 牛肉浸膏 5.0 g 乳糖 10.0 g 蔗糖 10.0 g 葡萄糖 1.0 g 硫酸亚铁铵(NH4)2Fe(SO4)26H2O 0.2 g 氯化钠 5.0 g 硫代硫酸钠 0.2 g 酚红 0.025 g 琼脂 12.0 g 蒸馏水 1000 mL A.5.2 制法 DB15/T 20772021 8 除酚红和琼脂外，将其他成分加入400 mL蒸馏水中，搅拌均匀，静置10 min，加热使完全溶化，冷却至25 左右，调节pH至7.40.2。另将琼脂加入到600 mL蒸馏水中，静置10 min，加热使完全溶化。将两溶液混合均匀， 加入5 %酚红水溶液5 mL，混匀， 分装小号试管， 每管约3 mL，于121 灭菌15 min，制成斜面，冷却后呈桔红色。 A.6 营养琼脂斜面 A.6.1 成分 蛋白胨 10.0 g 牛肉膏 3.0 g 氯化钠 5.0 g 琼脂 15.0 g 蒸馏水 1000 mL A.6.2 制法 将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水中，加入15 %氢氧化钠溶液约2 mL，冷却至25 左右，调节pH至7.00.2，加入琼脂，加热煮沸，使琼脂融化，分装小号试管，每管约3 mL，于121 灭菌15 min，制成斜面。 A.7 半固体琼脂 A.7.1 成分 蛋白胨 1.0 g 牛肉膏 0.3 g 氯化钠 0.5 g 琼脂 0.3 g0.7 g 蒸馏水 100 mL A.7.2 制法 按以上成分配好，加热溶解，并调节pH至7.40.2，分装小试管，121 灭菌15 min，直立凝固备用。 A.8 葡萄糖胺培养基 A.8.1 成分 氯化钠 5.0 g 硫酸镁（MgSO47H2O） 0.2 g 磷酸二氢铵 1.0 g 磷酸氢二钾 1.0 g 葡萄糖 2.0 g 琼脂 20.0 g 0.2 %溴麝香草酚蓝水溶液 40 mL 蒸馏水 1000 mL A.8.2 制法 DB15/T 20772021 9 先将盐类和糖类溶解于水内，调节pH至6.80.2，再加琼脂加热融化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121 高压灭菌15 min，制成斜面备用。 A.8.3 试验方法 用接种针轻轻触及培养物的表面，在盐水管中做成极稀悬液，肉眼观察不到混浊，以每一接种环内含菌20100之间为宜，将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普通斜面作为对照。36 1 培养24 h。阳性者葡萄糖胺斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者不生长，但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖胺斜面上生长极微小的菌落可视为结果阴性。 注： 容器使用前应用清洁液浸泡，再用清水、蒸馏水冲洗干净，并用新棉花制成棉塞，干热灭菌后使用。如操作时不注意，有杂质污染，易造成假阳性结果。 A.9 尿素琼脂 A.9.1 成分 蛋白胨 1.0 g 氯化钠 5.0 g 葡萄糖 1.0 g 磷酸二氢钾 2.0 g 0.4 %酚红溶液 3.0 mL 琼脂 20.0 g 20 %尿素溶液 100 mL 蒸馏水 900 mL A.9.2 制法 除酚红和尿素外的其他成分加热溶解，冷却至25 左右，调节pH至7.20.2，加入酚红指示剂，混匀， 于121 高压灭菌15 min， 冷却至55 ， 加入用0.22 m过滤膜除菌后的20 %尿素水溶液100 mL，混匀，无菌操作分装到灭菌试管，每管3 mL4 mL，制成斜面后冷藏备用。 A.9.3 试验方法 挑取琼脂培养物接种至尿素琼脂培养基，36 1 培养24 h，观察结果。若培养基变为红色，则判为尿素酶阳性。 A.10 -半乳糖苷酶培养基 A.10.1 液体法（ONPG法） A.10.1.1 成分 邻苯硝基-D-半乳糖苷 60.0 mg 0.01 mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.50.2） 10 mL 1 %蛋白胨水（pH7.50.2） 30 mL A.10.1.2 制法 将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，过滤除菌，分装于10 mm75 mm试管内，每管0.5 mL，用橡皮塞塞紧。 DB15/T 20772021 10 A.10.1.3 试验方法 自琼脂斜面挑取培养物一满环接种，于36 培养1 h3 h和24 h观察结果。若培养基于1 h3 h内变为黄色，判为有-半乳糖苷酶产生；若24 h内不变色，则判为无-半乳糖苷酶产生。 A.10.2 平板法（X-Gal法） A.10.2.1 成分 蛋白胨 20.0 g 氯化钠 3.0 g 5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷(X-Gal) 200.0 mg 琼脂 15.0 g 蒸馏水 1000 mL A.10.2.2 制法 将各成分（A.10.2.1）加入1000 mL蒸馏水中，加热煮沸溶解，冷却至25 ，调节pH至7.20.2，115 高压灭菌10 min，倾注平板，避光冷藏备用。 A.10.2.3 试验方法 挑取琼脂斜面培养物接种于平板，划线和点种均可，于36 1 培养18 h24 h观察结果。若平板上的培养物变为蓝色，判为有-D-半乳糖苷酶产生；若培养物为无色或不透明色，或培养48 h72 h后有部分转为淡粉红色，则判为无-D-半乳糖苷酶产生。 A.11 氨基酸脱羧酶试验培养基 A.11.1 成分 蛋白胨 5.0 g 酵母浸膏 3.0 g 葡萄糖 1.0 g 1.6%溴甲酚紫-乙醇溶液 1.0 mL L型或DL型赖氨酸和鸟氨酸 0.5 g/100 mL或1.0 g/100 mL 蒸馏水 1000 mL A.11.2 制法 除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装至每瓶100 mL，分别加入赖氨酸和鸟氨酸，L-氨基酸按0.5 %加入，DL-氨基酸按1 %加入，再调节pH至6.80.2，对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌小试管内，每管0.5 mL，上面再滴加一层石蜡油，115 高压灭菌10 min。 A.11.3 试验方法 从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36 1 培养18 h24 h，观察结果。培养基呈紫色，判为氨基酸脱羧酶阳性；若培养基变为黄色，则判为阴性。阴性对照管应为黄色，阳性对照管应为紫色。 A.12 糖发酵管 A.12.1 成分 DB15/T 20772021 11 牛肉膏 5.0 g 蛋白胨 10.0 g 氯化钠 3.0 g 磷酸氢二钠(NaHPO412H2O) 2.0 g 0.2 %溴麝香草酚蓝溶液 12.0 mL 蒸馏水 1000 mL A.12.2 制法 A.12.2.1 葡萄糖发酵管按上述成分配好后，调节 pH 至 7.40.2。按 0.5 %加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121 高压灭菌 15 min。 A.12.2.2 其他各种糖发酵管按上述成分配好后，分装每瓶 100 mL，121 高压灭菌 15 min。另将各种糖类分别配好 10 %溶液，同时高压灭菌。将 5 mL 糖溶液加入于 100 mL 培养基内，以无菌操作分装小试管。 注： 蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。 A.12.3 试验方法 从琼脂斜面上挑取少量培养物接种于糖发酵管，于36 1 培养2 d3 d。迟缓反应需观察14 d30 d。 A.13 西蒙氏柠檬酸盐培养基 A.13.1 成分 氯化钠 5.0 g 硫酸镁(MgSO47H2O) 0.2 g 磷酸二氢铵 1.0 g 磷酸氢二钾 1.0 g 柠檬酸钠 5.0 g 琼脂 20.0 g 0.2 %溴麝香草酚蓝溶液 40 mL 蒸馏水 1000 mL A.13.2 制法 先将盐类溶解于水内，调节pH至6.80.2，加入琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121 灭菌15 min，制成斜面备用。 A.13.3 试验方法 挑取少量琼脂培养物接种西蒙氏柠檬酸盐培养基，于36 1 培养4 d，每天观察结果。若培养基从绿色转为蓝色，则判为阳性。 A.14 粘液酸盐培养基 A.14.1 测试肉汤 A.14.1.1 成分 酪蛋白胨 10.0 g DB15/T 20772021 12 溴麝香草酚蓝溶液 0.024 g 蒸馏水 1000 mL 粘液酸 10.0 g A.14.1.2 制法 慢慢加入5 mol/L氢氧化钠以溶解粘液酸，混匀。 其余成分加热溶解，加入上述粘液酸，冷却至25 左右，调节pH至7.40.2，分装试管，每管约5 mL，于121 高压灭菌10 min。 A.14.2 质控肉汤 A.14.2.1 成分 酪蛋白胨 10.0 g 溴麝香草酚蓝溶液 0.024 g 蒸馏水 1000 mL A.14.2.2 制法 所有成分加热溶解，冷却至25 左右，调节pH至7.40.2，分装试管，每管约5 mL，于121 高压灭菌10 min。 A.14.3 试验方法 将待测新鲜培养物接种测试肉汤（A.14.1）和质控肉汤（A.14.2），于36 1 培养48 h观察结果，肉汤颜色不变为阴性结果，黄色或稻草黄色为阴性。 A.15 蛋白胨水、靛基质试剂 A.15.1 成分 蛋白胨（或胰蛋白胨） 20.0 g 氯化钠 5.0 g 蒸馏水 1000 mL A.15.2 制法 所有成分加热溶解，冷却至25 左右，调节pH至7.4，分装小试管，121 高压灭菌15 min。 A.15.3 靛基质试剂 A.15.3.1 柯凡克试剂：将 5 g 对二氨基苯甲醛溶解于 75 mL 戊醇中，然后缓慢加入浓盐酸 25 mL。 A.15.3.2 欧-波试剂：将 1 g 对二氨基苯甲醛溶解于 95 %乙醇内，然后缓慢加入浓盐酸 20 mL。 A.15.4 试验方法 挑取少量培养物接种，在36 1 培养1 d2 d，必要时可培养4 d5 d。加入柯凡克试剂0.5 mL，轻摇试管，若试剂层呈深红色，判为阳性；或加入欧-波试剂0.5 mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，若液面接触处呈玫瑰红色，也判为阳性。 DB15/T 20772021 13 附录B （规范性） 生化试验 B.1 生化试验 用7.3.1已培养的营养琼脂斜面上的菌苔，进行生化试验，即-半乳糖苷酶、尿素、赖氨酸脱羧酶鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷分解试验。志贺氏菌属生化特性见表B.1。 表B.1 志贺氏菌属四个群的生化特性 生化反应 A群：痢疾志贺氏菌 B群：福氏志贺氏菌 C群：鲍氏志贺氏菌 D群：宋内氏志贺氏菌 -半乳糖苷酶 -a - -a + 尿素 - - - - 赖氨酸脱羧酶 - - - - 鸟氨酸脱羧酶 - - -b + 水杨苷 - - - - 七叶苷 - - - - 靛基质 -/+ (+) -/+ - 甘露醇 - +c + + 棉子糖 - + - + 甘油 (+) - (+) d 注：+表示阳性；-表示阴性；-/+表示多数阴性；+/-表示多数阳性； （+）表示迟缓阳性；d表示有不同生化型。 a 痢疾志贺1型和鲍氏13型为阳性。 b 鲍氏13型为鸟氨酸阳性。 c 福氏4型和6型常见甘露醇阴性变种。 B.2 附加生化试验 由于某些不活泼的大肠埃希氏菌（anaerogenic E.coli）、A-D（Alkalescens-Disparbiotypes,碱性-异型）菌的部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与部分志贺氏菌分型血清发生凝集；因此前面生化试验符合志贺氏菌生化特性的培养物还需另加葡萄糖胺、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验（36 培养24 h48 h）。志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别见表B.2。 表B.2 志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D 菌的生化特性区别 生化反应 A群：痢疾志贺氏菌 B群： 福氏志贺氏菌 C群：鲍氏志贺氏菌 D群：宋内氏志贺氏菌 大肠埃希氏菌 A-D菌 葡萄糖胺 - - - - + + 西蒙氏柠檬酸盐 - - - - d d 粘液酸盐 - - - d + d 注1：+表示阳性；-表示阴性；d表示有不同生化型。 注2：在葡萄酸铵、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐三项反应中志贺氏菌一般为阴性，而不活泼的大肠埃希氏菌、A-D（碱性-异型）菌至少有一项反应为阳性。 DB15/T 20772021 14 附录C （资料性） 志贺氏菌常用培养基与试剂灭菌后保存期限 志贺氏菌常用培养基与试剂灭菌后保存期限见表C.1。 表C.1 志贺氏菌常用培养基与试剂灭菌后保存期限 名 称 保存期限 保存条件 志贺氏增菌肉汤-新生霉素 1个月 2 8 麦康凯（MAC）琼脂 1个月 2 8 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂 2周 2 8 三糖铁（TSI）琼脂 2周 2 8 营养琼脂斜面 1个月 2 8 半固体琼脂 1个月 2 8 葡萄糖胺培养基 1个月 2 8 尿素琼脂 1个月 2 8 -半乳糖苷酶培养基 1个月 2 8 氨基酸脱羧酶试验培养基 1个月 2 8 糖发酵管 1个月 2 8 西蒙氏柠檬酸盐培养基 1个月 2 8 粘液酸盐培养基 1个月 2 8 蛋白胨水、靛基质试剂 1个月 2 8