微小RNA Let-7g-3p在直肠癌中的表达水平及临床意义.pdf

:1602 proach according to the degree of pulmonary fissure completeness J.JThoracic Dis,2018,10(Suppl 26):S3092-S3094.8 Xu H,Zhang L.The bronchus first and vessels simultaneously stapledtechnique:a safe and simple method for video-assisted right upper lobelobectomyJ.Thorac Cardiovasc Surg,2019,67(2):131-136.9Lin JB,Qiu ML,Lin CJ,et al.Simplified synchronous disconnection ofpulmonary arteries and veins for right upper lobectomy J.Surg En-dosc,2019,33(6):2015-2023.10 Zhang L,Xu H.Video-assisted thoracic surgical right upper lobecto-my with bronchus-first and simultaneous vessel stapling techniqueJ.Thorac Cardiovasc Surg,2018,66(2):177-179.11 Xia J,Zheng Q,Zhong W.P041 Diferent Recurrence Models in LungCancer Patients Between“aBVA method”and“VAB method”During RightJournal of Clinical and Experimental Medicine Vol.22,No.15Aug.2023Upper LobectomyJ.J Thoracic Oncol,2018,13(12):639-647.12 Hennon MW,DeGraaff LH,Groman A,et al.The association of nodalupstaging with surgical approach and its impact on long-term survivalafter resection of non-small-cell lung cancerJ.Eur J CardiothoracSurg,2020,57(5):196204.13 Xia J,Tang W,Nie Q,et al.P2.16-47 Improved aBVA Method and Anterior VAB Method Result in Analogous Survival Benefits DuringRight Upper LobectomyJ.J Thoracic Oncol,2018,13(10):S850.14牛磊，霍承瑜，刘宗志，等.两种人路单孔胸腔镜下肺叶切除术对非小细胞肺癌病人术后康复进程、肺功能及内环境指标的影响J临床外科杂志，2 0 2 2，30（8）：7 2 2-7 2 6.(收稿日期:2 0 2 3-0 1-2 6)D0I:10.3969/j.issn.1671-4695.2023.15.009微小RNA Let-7g-3p在直肠癌中的表达水平及临床意义罗庆元闫军?*周高晋”子孙国徽3代琴祺4（新疆医科大学第七附属医院1内镜诊治科；2 普外科；3肿瘤科；4消化科新疆乌鲁木齐8 30 0 2 8)【摘要】目的评估微小RNA Let-7g-3p在直肠癌中的表达水平及临床意义。方法回顾性收取新疆医科大学第七附属医院34例直肠癌患者的肿瘤及邻近非癌组织样本,通过RT-qPCR检测组织中Let-7g-3p的表达水平。再从癌症基因图谱（TCGA)数据库中检索直肠癌患者的注册数据，收集人口统计信息，例如年龄、性别和癌症特征。用Kaplan-Meier法分析总生存率，用Cox比例风险回归模型分析独立预后。结果Let-7g-3p在直肠癌组织中表达降低,且与患者的临床病理学特征相关联。此外,低 Let-7g-3p表达与不良预后和直肠癌的侵袭性进展有关。单因素分析结果显示,Let-7g-3p表达水平是直肠癌患者总生存率的重要预后标志物:Let-7g-3p(HR=1.782;95%CI:1.173 2.707;P=0.007);TNM 分期(HR=0.305;95%CI:0.200 0.465;P 0.001);转移(HR=0.093;95%CI:0.048 0.180;P0.001)。多变量分析表明，低表达Let-7g-3p是直肠癌中重要的独立预后标志物：Let-7g-3p(HR=0.518；95%CI:0.339 0.792;P=0.012);TNM 分期(HR=2.199;95%CI:1.3233.656;P=0.002),转移(HR=2.886;95%CI:1.7394.790；P 0.0 0 1)。结论下调Let-7g-3p表达与直肠癌的进展有关，可能作为直肠癌的独立预后标志物。【关键词】直肠癌微小RNALet-7g-3p预后Expression level and clinical significance of microRNA Let-7g-3p in rectal cancer.LUO Qing-yuan,YAN Jun?,ZHOU Gao-jin3,etal.1 Department of Endoscopic Diagnosis and Treatment,2 Department of General Surgery,3 Department of Oncology,The Seventh Afiliated Hospi-tal of Xinjiang Medical University,Urumqi Xinjiang 830028,China.Abstract Objective To evaluate the expression level and clinical significance of micrornas Let-7g-3p in rectal cancer.MethodsThe expression level of Let-7g-3p was detected by RT-qPCR from 34 rectal cancer patients and adjacent non-cancer tissue samples collectedretrospectively from the Seventh Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University.Registry data of rectal Cancer patients were retrieved from TheCancer Genome Atlas(TCGA)database,and demographic information,such as age,sex and cancer characteristics was collected.Overall survivalwas analyzed by Kaplan-Meier method and independent prognosis was analyzed by Cox proportional hazard regression model.ResultsThe ex-pression of Let-7g-3p was decreased in rectal cancer tissues and correlated with the clinicopathological features of patients.In addition,low Let-7g-3p expression was associated with poor prognosis and aggressive progression of rectal cancer.The results of univariate analysis showed thatthe expression level of Let-7g-3p was an important prognostic marker for overall survival in rectal cancer patients:Let-7g-3p(HR=1.782;95%CI:1.173-2.707;P=0.007);TNM staging(HR=0.305;95%CI:0.200-0.465;P 0.001);transfer(HR=0.093;95%CI:0.048-0.180;P 0.001).Multivariate analysis showed that low expression of Let-7g-3p was an important independent prognostic marker inrectal cancer:Let-7g-3p(HR=0.518;95%CI:0.339-0.792;P=0.012);TNM staging(HR=2.199;95%CI:1.323-3.656;P=0.002),metastasis(HR=2.886;95%CI:1.739-4.790;P 0.001).Conclusion Down-regulated Let-7g-3p expression is associ-ated with the progression of rectal cancer and may be an independent prognostic marker for rectal cancer.Key words Rectal cancer;MicroRNAs;Let-7g-3p;Prognosis结直肠癌是全球第三大最常诊断的癌症,也是导致全球男性和女性癌症相关死亡的第四大原因 。直肠基金项目：新疆维吾尔自治区自然基金（编号：2 0 2 2 D01A137）*通讯作者：闫军,E-mail:文章编号：16 7 1-46 9 5(2 0 2 3)15-16 0 2-0 4癌约占结直肠癌的30%，并且与较差的临床结局相关2 。局部晚期直肠癌的标准治疗是新辅助放化疗，然后进行全直肠系膜切除术，以提高可切除性和保留肛门括约肌。大多数在直肠癌早期诊断的患者可以仅通过手术进行治疗。然而,该病的发作是隐匿的,并且失去临床和实验医学杂志2 0 2 3年8 月第2 2 卷第15期了最佳治疗时间3。患者对放化疗的反应差异很大，从完全反应到完全抵抗，并且会忍受辐射暴露的副作用，包括肛门直肠和泌尿生殖系统功能障碍的风险增加,这会对他们的生活质量产生负面影响4。因此,有必要进一步了解控制直肠癌进展的分子机制，以便在无应答病例中制定替代治疗策略。MicroRNAs（m iRNA s）是长度为2 0 2 5个核苷酸的内源性非编码单链RNA,可调节靶基因的转录后沉默。单个miRNA可以靶向数百个mRNA,并影响许多参与功能性相互作用途径的基因的表达5。先前的研究表明,miRNA在包括细胞分化、增殖、代谢、分化和凋亡在内的各种基本生物学过程中发挥着重要作用6 。有充分证据表明，一些miRNA作为肿瘤抑制因子或癌基因，在恶性肿瘤中经常被下调/上调7 。由于它们的非侵入性以及独特的表达模式,miRNA被认为是人类癌症研究中良好的诊断或预后生物标志物。Let-7g-3p是Let-7家族的一员，在各种病理中调节神经炎症，包括脊髓损伤、多发性硬化症、缺血性脑卒中和阿尔茨海默病8 ,还与乳腺癌、前列腺癌、霍奇金淋巴瘤和星形细胞瘤的发展有关。然而,Let-7g-3p在直肠癌中的诊断和预后作用仍然很大程度上未知。本研究观察Let-7g-3p在直肠癌患者的表达水平及其与临床特征（包括生存率)的关联。现将结果报道如下。1资料与方法1.1一般资料和遗传信息34例直肠癌患者的肿瘤及邻近非癌组织样本于2 0 2 0 年1月至2 0 2 1年12 月取自新疆医科大学第七附属医院。所有患者样本均在知情同意的情况下获得，该项目得到了参与机构临床研究伦理委员会的批准。同时从癌症基因图谱（The CancerGenome Atlas，T CG A）数据库（https:/cancergenome.nih.gov/)检索出413例直肠癌患者的登记数据。人口信息统计，例如年龄和性别，癌症特征例如癌症位置和分期被收集,在数据注册表中未描述TNM分期和年龄的患者被排除在分析之外。1.2患者组织样本中分离RNA34例直肠癌患者均于术中留取肿瘤及邻近非癌组织样本,后根据试剂盒厂商的说明，使用miRNeasyMiniKit（德国Qiagen公司）对34例患者样品进行RNA分离，包括微小RNA。RNA 提取后,将总RNA样品储存在-8 0 冰箱。使用Nano-Drop分光光度计测量RNA浓度和纯度。1.3实实时定量PCR分析使用SynergyBrands（SYBR）染料法进行实时定量PCR（RT-q PC R）。共测试了6 8个样本用于miRNA的分析。用于检测基因表达的引物(Let-7g-3p）购自 Quanti Tect Primer Collection（德国Qiagen公司）。qPCR的反应条件设置为:95预变性5min，然后进行39 个循环的9 5下变性30 s,60下退火30 s,72下延伸6 0 s。采用相对表达量2-AAC的方法处理数据。16031.4丝统计学处理采用SPSS20.0软件对本研究的数据进行统计分析,计量资料以均数标准差（xs）表示,组间比较采用t检验；计数资料以例或百分率（%）表示,组间比较采用检验;Kaplan-Meier法用于分析总生存率,对数秩检验用于评估生存率差异；Cox比例风险模型用于分析从 TCGA获得的数据,并确定Let-7g-3p是否可用作直肠癌患者存活率的独立预后标志物；P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1 Let-7g-3p 在肿瘤组织和相邻非癌组织之间表达水平比较Let-7g-3p在直肠癌组织中的表达水平为0.540.14，显著低于相邻非癌组织（1.0 50.0 3），差异有统计学意义（t=7.451，P60性别女性男性种族白种人非洲人亚洲人TNM分期I IIIIV转移MOM1Let-7g-3p低表达Let-7g-3p高表达Log-rankP=0.007X?值P值高表达0.0870.76811958(48.74)294148(50.34)19593(47.69)218113(49.56)20291(45.05)111(54.95)5720(35.09)119(81.82)229104(45.41)184102(55.43)352168(47.73)6138(62.30)61(51.26)146(49.66)102(52.31)105(50.44)37(64.91)2(18.18)125(54.59)82(44.57)184(52.27)23(37.70)0.7070.4008.2740.0164.0970.0434.4130.036:1604 2.4低 Let-7g-3p表达与直肠癌患者的不良预后有关KaplanM e i e r 方法评估结果显示，分期越高的直肠癌患者,Let-7g-3p低表达代表着更短的生存时间。尤其是 IV期患者,Let-7g-3p低表达显著降低了患者生存时间。见图2。AStage I(Rectal cancer)100（%）盘500+10002003000时间（d）CStageI(Rectal cancer)10080604020010002000300040005000时间（d）图2不同分期、不同 Let-7g-3p表达水平直肠癌患者的总生存率注:A:I期;B:II期;C:II期;D:IV期2.5Let-7g-3p作为直肠癌患者生存的独立预后标志物单因素分析结果显示,Let-7g-3p表达水平是直肠癌患者总生存率的重要预后标志物:Let-7g-3p（P=0.007)、T NM 分期（P0.001）、转移（P0.001)。多变量分析表明,低表达Let-7g-3p是直肠癌中重要的独立预后标志物:Let-7g-3p（P=0.0 12）、T NM 分期（P=0.002),转移（P0.001)。见表2。表2 TCGA数据库中直肠癌预后相关临床特征单因素分析临床病理特征P值HR(95%CI)年龄0.3540.806(0.511 1.272)性别0.5750.889(0.588 1.343)种族0.6710.911(0.592 1.403)TNM分期0.0010.305(0.200 0.465)转移0.0010.093(0.048 0.180)Let-7g-3p 表达0.0071.782(1.173 2.707)注：因单因素分析中年龄、性别、种族差异无统计学意义，因此未纳人多因素分析当中；“一”表示不存在此项数据。3讨论随着生活水平的提高和生活环境的改变，直肠癌的发病率显著提高10 。癌症中miRNA表达的改变以及miRNA表达谱与临床病理特征之间的相关性可用于不同类型恶性肿瘤的诊断和治疗1。在本研究中,笔者通过RT-qPCR检测了直肠癌中Let-7g-3p的表达,并与邻近非癌组织进行了比较，再通过TCGA数据库进行验证,发现Let-7g-3p在直肠癌组织中低表达并与患者不良预后相关,表明Let-7g-3p可以用作直肠癌的诊断和预后标志物。MiRNA通过碱基配对直接与特定mRNA相互作用,然后通过各种分子机制抑制靶基因的表达，在包括Journal of Clinical and Experimental Medicine Vol.22,No.15Aug.2023BStagell(Rectal cancer)Le-7g-3-p(low)100Le-7g-3(high)60存：40Log-rank P=0.32520400010002000300040005000时间（d）DStage Iv(Recalcancer)100+Let-7g-3p(low)Let-7g-3p(high)Log-rank.P=0.250癌症在内的许多生物过程中发挥关键作用。基于 miR-NA测序数据,许多miRNA在直肠癌细胞中受到差异调节,并且与癌细胞的表型密切相关12 。Let-7 是一个重要的miRNA家族,参与多种细胞和生物学功能,由位于人类癌症中经常缺失的基因组位置的12 个成员组成13。据报道,Let-7a限制了胶质瘤中PKM2 介导的有氧糖酵解和细胞生长14,并且在乳腺癌中也观察到Let-7g-3p(low)-Let-7g-3p(high)Log-rank.P=0.042-Let-7g-3p(low)80-Let-7g-3p(nigh)40200+0了类似的现象15。在肺癌中,Let-7 靶向 IGF-1R诱导自噬，阻断BCL2L1/BCL2/PI3K复合物的功能，诱导细胞凋亡并抑制细胞迁移16 。此外,有研究发现 Let-7在顺铂耐药的肺癌细胞中表达降低,并且 Let-7过表达可以抑制NFk B1的表达,提高肺癌放疗的效率。本研究结果表明,Let-7g-3p在直肠癌组织中的表达水平显著低于邻近非癌组织,并且与TNM分期和转移Log-rankP=0.050有关。肿瘤中 Let-7g-3p表达降低会影响肿瘤的侵10002000时间（d）多因素分析P值HR(95%CI)一一一0.0022.199(1.323 3.656)0.001 2.886(1.739 4.790)0.0120.518(0.339 0.792)300袭性和预后,本研究观察到 Let-7g-3p低表达患者的存活率显著降低,并且可能根据诊断时的癌症分期而具有不同的表达水平。此外，Cox多元回归分析显示，TNM分期、转移以及 Let-7g-3p 的表达是直肠癌预后不良和侵袭性进展的独立危险因素。Let-7g-3p 的表达与疾病进展风险和恶性程度呈正相关,与患者的生存时间呈负相关。由此可见,Let-7g-3p在直肠癌中的表达是判断患者预后的重要指标。Let-7g-3p表达结合免疫组织化学病理检查可提高直肠癌的诊断和预后，值得临床应用进一步探索。本研究结果表明Let-7g-3p的表达水平与直肠癌患者的临床病理特征和预后相关。但在解释这些结果时，需要考虑以下几个方面：第一，这项研究采集的样本数量很少,可能存在较大误差；第二,对癌症患者进行随访时遇到的困难，因为这种随访很重要，可能会影响总体生存率；第三,使用了公共数据库,因此笔者的分析存在一些限制。这些因素可能限制了对 Let-7g-3p与直肠癌预后之间关系的理解。4结论本研究结果表明下调的Let-7g-3p表达与直肠癌的进展有关,Let-7g-3p 可能作为直肠癌患者诊断和预后的生物标志物。然而,需要进一步的体内和体外实验研究Let-7g-3p调控直肠癌发生、发展的潜在分子机制。参考文献1 Keum N,Giovannucci E.Global burden of colorectal cancer:emergingtrends,risk factors and prevention strategiesJ.Nat Rev GastroenterolHepatol,2019,16(12):713-732.2Lee YC,Lee YL,Chuang JP,et al.Differences in survival between co-lon and rectal cancer from SEER dataJ.PLoS One,2013,8(11):e78709.3 1Mu JF,Wang XD,Sun PD.Expression of miR-31 in rectal cancer pa-tients and its effect on proliferation ability of rectal cancer cells SW837临床和实验医学杂志2 0 2 3年8 月第2 2 卷第15期J.Eur Rev Med Pharmacol Sci,2018,22(24):8675-8681.4Dekker E,Tanis PJ,Vleugels JLA,et al.Colorectal cancer 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92）【摘要】目的分析不同TNM分期老年胃癌患者临床特征及术后并发肠漏的影响因素。方法回顾性分析2 0 19年3月至2 0 2 2 年3月上海交通大学医学院附属新华医院收治的2 0 0 例老年胃癌患者的临床资料，根据TNM分期将其分为I/I组（n=68）、/V 组（n=132）,比较两组临床特征性别、年龄、分化程度、浸润深度、有无转移、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原199（CA199）磷酸化蛋白激酶B(PKB/AKT）、脾酪氨酸蛋白激酶（Syk）蛋白表达情况】。另根据术后是否并发肠漏将其分为并发组（n=114）、非并发组（n=86）。对两组一般资料（包括性别、年龄、肿瘤直径、TNM分期、手术方式、是否合并脏器切除、术中出血量、术前血红蛋白、白蛋白进行比较,将其中有明显差异的变量纳入多因素Logistic回归分析,筛选出影响老年胃癌患者术后并发肠漏的独立危险因素。结果/I V组低分化程度、黏膜层以下、淋巴结转移、远处转移、PKB/AKT阳性表达占比及CEA、CA 199水平分别为55.30%、6 6.6 7%、7 4.2 4%、43.18%、7 9.55%、(22.411.36）n g/m L、(37.551.8 9）U/m L,均高于I/I组14.7 1%、6.6 2%、17.6 5%、2.9 4%、57.35%、（7.150.62）n g/m L、（2 0.0 51.2 7）U/m L,Sy k 阳性表达占比为12.8 8%，低于I/I组（39.7 1%），差异均有统计学意义（P0.05）。经Pearson检验发现，TNM分期与浸润深度、有淋巴结转移、有远处转移、CEA高表达、CA199高表达、PKB/AKT阳性表达均呈正相关（r=0.8170.820、0.8 14、0.8 55、0.8 2 6.0.8 34，P 0.0 5），与分化程度、Syk阳性表达均呈负相关（r=-0.802、-0.8 11，P 0.0 5）。并发组肿瘤直径为（5.48 1.45)cm，长于非并发组（3.140.8 3)cm,胸腹联合手术、合并脏器切除占比及术中出血量分别为35.0 9%、2 9.8 2%、（331.7 0 2 7.46)mL，均高于非并发组4.6 5%、16.28%、（2 0 4.6 514.2 0)m L)，术前血红蛋白、术前白蛋白水平分别为（115.12 10.8 5）、（34.57 4.8 9）g/L，均低于非并发组（134.3111.8 7）、（42.50 5.8 5）g/L，差异均有统计学意义（P0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径4cm以上、胸腹联合手术、合并脏器切除、术中出血量2 7 0 mL以上、术前血红蛋白12 5g/L以下、术前白蛋白38.5g/L以下均为老年胃癌患者术后并发肠漏的独立危险因素（0 R=4.536、5.0 7 3、4.47 3、4.7 7 3、4.18 7、4.90 9，P0.05）。结论不同TNM分期老年胃癌患者的临床特征存在一定差异,TNM分期与分化程度、浸润深度、有无转移、肿瘤标志物水平、基因蛋白表达相关；肿瘤直径、手术方式、合并脏器切除、术中出血量、术前营养指标均为老年胃癌患者术后并发肠漏的危险因素，临床应采取相应措施予以改善。【关键词】TNM分期胃癌临床特征肠漏影响因素基金项目：国家自然科学基金资助项目（编号：8 2 17 30 8 1）*通讯作者：赵黎,E-mail:文章编号：16 7 1-46 9 5(2 0 2 3)15-16 0 5-0 4