小鼠烟雾吸入性损伤模型的建立与评估.pdf

小鼠烟雾吸入性损伤模型的建立与评估曲毅睿1,2，柴家科2，胡方超1,2，刘甜2，迟云飞2，孙冉21解放军总医院研究生院，北京100853；2解放军总医院第四医学中心全军烧伤研究所，北京100048摘要：背景吸入性损伤最常见为高温、有毒烟雾导致的损伤，然而关于其致病机制的研究仍不明确。目的研发一种简便易得的新型小鼠烟雾吸入性损伤模型，观察小鼠生理状态、组织病理学变化以及炎性因子改变。方法160 只C57BL/6 小鼠随机选取 20 只作为对照组，其余 140 只小鼠随机分为 4 组。采用自制烟雾致伤装置，以胶合板和松木屑作为发烟材料，实验组分别进行 10min、15min、20min、25min 烟雾吸入致伤，对照组小鼠不经烟雾吸入。观察烟雾吸入性损伤后小鼠行为状态、生理表现以及 72h 生存变化情况；各组小鼠处死后取肺组织，观察其病理改变、干湿重改变及检测组织细胞内蛋白和炎性因子含量。结果致伤 10min、15min、20min、25min 后 72h 生存率分别为 100%、83%、54%和 0，其中25min 致伤组小鼠在伤后 12h 内全部死亡。与对照组相比，各致伤组小鼠伤后出现呼吸急促、活动减少，随后部分自行恢复至正常状态，部分进食进水减少，状态萎靡；主要观察致伤 20min 组小鼠肺部病理组织，可见炎性细胞浸润，肺泡结构破坏，肺泡隔增厚；干湿重显示有肺水肿出现，伤后 12h 和 24h 小鼠肺组织匀浆炎性因子检测白细胞介素(interleukin，IL)-1、IL-6和肿瘤坏死因子-(tumornecrosisfactor-，TNF-)与对照组相比显著上升，IL-10 显著下降(P 均0.05)。结论吸入 20min由胶合板和松木混合燃烧产生的烟雾可以导致 C57BL/6 小鼠中重度吸入性损伤，伤后实验动物的生理表现和组织病理结果与临床病情相符。关键词：烧伤；烟雾吸入性损伤；C57BL/6 小鼠；肺损伤动物模型中图分类号：R-332文献标志码：A文章编号：2095-5227(2023)06-0678-07DOI：10.3969/j.issn.2095-5227.2023.06.017引用本文：曲毅睿，柴家科，胡方超，等.小鼠烟雾吸入性损伤模型的建立与评估J.解放军医学院学报，2023，44（6）：678-684.Establishment and evaluation of a novel smoke inhalation injury model in miceQUYirui1,2,CHAIJiake2,HUFangchao1,2,LIUTian2,CHIYunfei2,SUNRan21GraduateSchool,ChinesePLAGeneralHospital,Beijing100853,China;2BurnInstitute,theFourthMedicalCenter,ChinesePLAGeneralHospital,Beijing100048,ChinaCorrespondingauthor:CHAIJiake.Email:Abstract:BackgroundInhalationinjuryismostcommonlycausedbyheatandtoxicfumes,butstudiesonitspathogenicmechanismsremainelusive.ObjectiveTodevelopasimpleandeasilyavailablenewmousemodelofsmokeinhalationinjury,andobservethechangesinthephysiologicalstatus,histopathologicalandinflammatoryfactorsofmice.MethodsOfthe16057BL/6mice,20micewererandomlyselectedasthecontrolgroup,therestofthe140micewererandomlydividedinto4groups.Smokeinhalationinjurywasperformedfor10,15,20,and25minusingaself-madesmokeinjurydevicewithplywoodandpinechipsassmokematerials,respectively,thecontrolgroupreceivednospecialtreatment,andothertreatmentswerethesameasthoseineachsmoke inhalation group.The behavioral status,physiological performance,and 72-hour survival changes in mice after smokeinhalation injury were observed.Lung tissues were taken from mice in each group after sacrifice to observe the pathologicalchanges,dryandwetweightchanges,anddetectthecontentsofintracellularproteinsandinflammatoryfactorsintissuecells.ResultsThesurvivalratesat72hourspost-inhalationinjuryfortheabove10min-,15min-,20min-,and25min-smoke-inhalationinjurygroupswere100%,83%,54%,and0,respectively;andallthemiceinthe25minutes-smoke-inhalationinjurygroupdiedwithin12hoursafterinjury.Exceptforthecontrolgroup,tachypneaanddecreasedactivitywereimmediatelyobservedaftersmokeinhalation injury in the live mice of each group and these abnormal signs subsided several hours later.Some mice in theexperimentalgroupshowedlossofappetiteandmalaise.Inflammatorycellinfiltration,alveolarstructuredestruction,andalveolarseptumthickeningwereobservedinthelungpathologicaltissuesofmiceinthe20minsmoke-inhalationinjurygroup,andthedryandwetweightratioshowedtheappearanceofpulmonaryedema.Interleukin-1,6(IL-1,IL-6)andtumornecrosisfactor-(TNF-)detectedbyinflammatoryfactorsinlunghomogenatesofmiceat12hand24hafterinjuryinthe20minsmoke-inhalationinjury收稿日期：2022-12-21基金项目：军委后勤保障部重大项目(AWS15J003；ALB19J001)专利：实用新型专利 202216171842一种烟气致伤实验装置作者简介：曲毅睿，男，在读硕士，医师。研究方向：吸入性损伤相关治疗。Email:通信作者：柴家科，男，主任医师，教授，主任。Email:678解放军医学院学报Acad J Chin PLA Med Sch Jun 2023，44（6）https:/groupincreasedsignificantlycomparedwiththecontrolgroup,whileinterleukin-10(IL-10)significantlydecreased(allP0.05).ConclusionInhalationofsmokeproducedbymixedcombustionofplywoodandpinefor20mincanleadtomoderatetosevereinhalationinjuryinC57BL/6mice,andthephysiologicalmanifestationsandhistopathologicalresultsoftheexperimentalanimalsafterinjuryareconsistentwiththeclinicalcondition,andthereleaseofinflammatorymediatorsandcellularinflammatoryfactorsisalsosignificantlychangedinmiceafterinjury.Keywords：burn;smokeinhalationinjury;C57BL/6mice;animalmodeloflunginjuryCited as：QuYR,ChaiJK,HuFCH,etal.EstablishmentandevaluationofanovelsmokeinhalationinjurymodelinmiceJ.AcadJChinPLAMedSch,2023,44（6）:678-684.吸入性损伤与感染和休克并列成为烧伤的主要死亡原因，伴有吸入性损伤或吸入性肺炎的烧伤患者死亡率较单纯烧伤患者分别增加了 20%和40%1-2。火灾引起的烧伤患者中，伴有吸入性损伤的患者死亡率增加了 23 倍，被认为是增加死亡率的重要原因之一3。随着国内烧伤专科的建立，对于烧伤时皮肤损伤的治疗已经取得了显著的进步，但吸入性损伤的治疗与皮肤治疗相比，并没有取得更多的进展。火灾现场发生的吸入性损伤大多为烟雾吸入性损伤，往往是吸入伴有高温的蒸汽和有毒有害的气体以及微粒导致的呼吸系统组织损伤4。为了更好地研究烟雾吸入性损伤的病理生理学变化从而寻找潜在的治疗靶点，国内外建立各种大小动物模型，如猪、羊、大小鼠等5。C57BL/6 小鼠作为最常使用的造模动物，在吸入性损伤的造模过程中经过多年研究已经发展出多种造模方式6-9。大多数模型的建立包括烟雾制备，传导系统及烟雾吸入装置，既往多数模型的制备需要特殊定制的装置，在操作实现上较为复杂。笔者在整合参考国内外模型的基础上，运用市面上简单易得的工具和设备组合建立了一种新的小鼠烟雾吸入性损伤模型装置。材料与方法1实验动物清洁级雌性 C57BL/6 小鼠 160 只，体质量 1619g，购自斯贝福(北京)生物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2019-0010。在解放军总医院第四医学中心动物实验室恒温(253)、恒湿(505)%条件下适应性饲养 1 周，实验前禁食 12h，禁水 4h。本研究经解放军总医院实验动物伦理委员会批准。2主要实验设备及材料实验设备由本实验组自主组装制作，并已申请新型实用专利(专利号：202216171842)，其中烟雾致伤设备整体如图 1 所示，主要由烟雾发生装置、传导装置和烟雾吸入装置三部分组成。两个由耐高温高压适应材质制成的圆柱瓶分别作为烟雾生成和干燥设备，通过数控加热器加热发烟室，使发烟材料闷燃产生烟雾。在气泵的作用下由传烟管道进入烟室中，用干燥剂(二氧化硅)消除烟雾中的水蒸气，烟雾分流装置可同时作用于 3 只实验动物，烟雾报警器可对产生烟雾的温度和气体成分进行检测。整个实验过程中烟雾的温度可通过加热垫和加热带共同控制。发烟材料：干燥胶合板 50g，松木屑 10g。图 1 烟雾致伤装置示意图1：气泵；2：气流调节器；3：数显加热器；4：发烟室；5：传烟管道；6：烟室；7：干燥剂；8：加热室；9：加热带；10：烟雾检测器；11：烟雾分流装置；12：三通气管插管配件Fig.1 Diagram of smoke injury device1:Air pump;2:Damper;3:Digital heater;4:Smoke generation chambers;5:Flue passage;6:Smoke room;7:desiccant;8:Heatingchamber;9:Heated strip;10:Smoke detector;11:Smoke diverter;12:Three-way tube accessories解放军医学院学报Acad J Chin PLA Med Sch Jun 2023，44（6）https:/6793动物分组及模型制备选取 160 只 C57BL/6雌性小鼠(68 周龄)，按照随机数字表法分为对照组(n=20)和实验组，实验组各亚组按致伤时间不同分别命名为致伤 10min 组(n=30)、致伤 15min组(n=30)、致伤 20min 组(n=35)和致伤 25min组(n=45)。实验当天进行麻醉，对照组与实验组小鼠采用 0.6%的戊巴比妥以 50mg/kg 腹腔注射麻醉后，使用小动物喉镜暴露小鼠气管以 24g 套管针进行气管插管。将燃烧材料(胶合板和松木屑)置于发烟室，此时打开数控加热器至 500，使燃烧材料闷燃产生烟雾，使烟雾充满烟室，打开气阀和气流调节器使烟雾速度保持 300400mL/min的速度。当观察到烟雾分离装置出现烟雾时，将不同实验组气管插管的小鼠与之相连后分别进行5min、7min30s、10min 和 12min30s 烟雾吸入致伤后，间隔 30s 再进行同样时间的烟雾吸入，预计各组吸入 10min、15min、20min 和 25min烟雾。实验过程中烟雾始终保持在 6065。对照组小鼠在气管插管后，与发烟材料未闷燃的设备连接，进行与实验组相同的周期。造模结束后所有动物均腹部注射 0.9%氯化钠注射液(100mL/kg)进行液体复苏。将实验组和对照组小鼠放置于通风的鼠笼内，允许自由进食饮水，并与伤后 12h、24h 进行对照组和致伤 20min 实验组小鼠取样。4烟雾成分检测氧气(O2)、一氧化碳(CO)、一氧化氮(NO)和硫化氢(H2S)的浓度由气体检测仪(澳洲 AIKE，EM-4 四合一气体检测仪，中国)检测。挥发性有机物由气相色谱质谱仪(岛津，型号：GCMS-QP2020，日本)、流量烟尘(气)测试仪(明华，型号：YQ3000-D，中国)和紫外可见分光光度计(普析，型号 T6 新世纪，中国)共同进行检测。5致伤小鼠行为观察观察并对比致伤前后小鼠活动性、呼吸和饮食情况。6致伤小鼠生存评估记录伤后生存状况，致伤后不对实验动物施加任何干预措施，观察小鼠伤后 6h、12h、24h、36h、48h 和 72h 的生存情况，不同致伤组同一时间点小鼠存活数量，计算小鼠生存时间并绘制生存率曲线。7小鼠肺组织病理观察对照组及致伤 20min组伤后 12h 和 24h 小鼠处死后，暴露颈部并结扎气管后，暴露胸腔，并迅速解剖后取左下肺置于10%中性多聚甲醛中常温固定 24h，常规石蜡包埋、切片，苏木精-伊红(HE)染色后于镜下观察两组肺部变化。8干湿重(D/W)测量取右肺下叶称量肺组织获得湿重后，于 70 烘箱中干燥 72h，以获得干重，用湿重除干重得到 D/W 比值。9支气管灌洗液和肺组织匀浆检测蛋白浓度、炎性因子对照组和致伤 20min 组伤后 12h 和 24h处死小鼠，颈部逐层剥离皮肤和肌肉，暴露气管，作切口插入 24G 气管插管后，用手术线结扎固定气管插管和气管，用 1mL 注射器抽取 1mL的 PBS-EDTA 缓慢注入肺中并回抽，平均回收液体量为 0.75mL，重复抽吸 3 次，平均总回收液体量为 2mL。肺泡灌洗液收集后在 4 下 1000r/min离心 10min，收集无细胞上清液，通过 BCA 法检测蛋白浓度从而检测血管通透性的改变和肺水肿程度；酶联免疫吸附试验(ELISA，四正柏，北京)检测肺组织匀浆中白细胞介素(interleukin，IL)-1、IL-6、IL-10 和肿瘤坏死因子-(tumornecrosisfactor-，TNF-)细胞因子水平。xs10统计学方法采用 SPSS23.0 统计软件，计量资料以表示，组间比较采用单因素方差分析。计数资料以例数(百分比)表示，组间比较采用 2检验；采用 Kaplan-Meier 法绘制生存曲线,组间比较采用 log-rank 检验。P0.05 为差异有统计学意义。结果1烟雾成分对燃烧材料所产生的烟雾进行成分检测，主要包括气体成分和可挥发物质的检测。在气体检测结果中可见，在通入烟雾前，烟室内的氧气浓度为 19.76%0.14%，烟雾通入后，氧气浓度马上降至 19.23%0.55%，并随烟雾通入时间持续降低。刺激气体 CO、NO 和 H2S 在通入烟雾后均显著提升并保持在较高浓度(表 1)。同时也在温度 500、O2流量为 0.5L/min 燃烧条件下，持续收集并测量 10min 烟雾中挥发成分物质的含量(表 2)。2致伤后小鼠行为及生存状况对照组小鼠活动敏捷，呼吸正常，饮食饮水正常，致伤 10min 组和致伤 15min 小鼠伤后均出现明显的呼吸急促，呼吸频率平均为 168 次/min，气管插管末端可见黑灰色颗粒，苏醒后活动及进食进水正常，伤后 72h的生存率分别为 100%和 83%。致伤 20min 组，致伤后呼吸频率较前两组更快，平均 185 次/min，气管插管末端也可见黑灰色颗粒，苏醒后，大部分小鼠(82.9%，29/35)精神恢复，活动及进食进680解放军医学院学报Acad J Chin PLA Med Sch Jun 2023，44（6）https:/水正常，少部分小鼠(17.2%，6/35)精神状态较差，闭目不动，伤后 72h 的生存率为 54%。致伤25min 组小鼠8.89%(4/45)于致伤后立刻死亡，未死亡小鼠出现呼吸频率过快，平均为 178 次/min，气管插管末端仍可见黑灰色颗粒，部分小鼠(17.8%，8/45)口唇青紫呈发绀状；苏醒后，小部分小鼠 15.6%(7/45)状态正常，活动及进食进水正常，但75.6%(34/45)小鼠状态萎靡，活动减少，进食进水减少，抓取时明显反抗减少，此致伤组小鼠在伤后 12h 全部死亡。小鼠存活率见图 2。3致伤后小鼠肺病理表现以致伤 20min 组为主要观察对象，观察小鼠肺组织的病理变化。对照组小鼠的肺组织肺泡结构正常，大小较为均匀，无炎性细胞浸润和出血(图 3A)。烟雾吸入伤后 12h，小鼠肺组织可见正常肺泡组织破坏融合，局部肺泡壁增厚，伴有淋巴细胞和中性粒细胞的浸润，局部伴有少量出血(图 3B 箭头所示)。烟雾吸入伤后 24h，小鼠肺组织中有弥漫性出血和炎性渗出物，局部肺泡上皮脱落，肺泡间隔增厚，肺间质血管周围有大量淋巴细胞浸润(图 3C箭头所示)。4致伤后小鼠肺部 W/D 比值和支气管灌洗液中蛋白含量与对照组相比，伤后 12h 和 24h 的W/D 比值在伤后显著上升(4.140.27vs6.490.37 和 4.580.49，P0.05)，说明烟雾吸入致伤后，小鼠肺部屏障结构受损，从而导致肺水肿的发生。支气管灌洗液中的蛋白含量上升(110.9表 1 各时间点烟雾中各气体浓度Tab.1 Concentration of each gas in smoke at each time point气体类型检测环境F值P值正常环境烟雾通入5s烟雾通入1min烟雾通入5min烟雾通入10minO2/%19.760.1419.230.55a18.770.51a17.950.53a17.560.42a90.550.05CO/ppm9.860.96352.3220.25b379.1318.76b387.3416.65b386.1517.12b647.090.01NO/ppm4.260.45152.455.44b153.784.59b156.667.32b157.795.35b884.280.01H2S/ppm2.480.1273.126.44b74.575.32b75.484.48b77.257.53b241.600.01aP0.05，vs对照组；bP0.01，vs对照组。表 2 烟雾中可挥发物质检测结果Tab.2 Testing results for volatile matter in smoke物质检测时间/s含量/(mgm-3)1-丙烯1.925121丙二烯2.0490.0052-甲基丙烷2.1637.82氯甲烷2.2442.87丁烷2.3450.005亚硝酸乙酯2.8560.005甲基脲3.8710.005异丙醇4.9100.005邻苯二甲酸二异丁酯26.9630.005图 2 烟雾吸入时间对小鼠存活率的影响Fig.2 Effect of smoke inhalation time on the survival rate of themice图 3 小鼠肺组织病理形态学观察(HE 染色，200)A：对照组；B：20 min 组伤后 12 h；C：20 min 组伤后 24 hFig.3 Pathomorphological observation of lung tissue in the mice(HE staining,200)A:control group;B:12 h post-inhalation injury of 20 min injury group;C:24 h post-inhalation injury of 20 min injury group解放军医学院学报Acad J Chin PLA Med Sch Jun 2023，44（6）https:/68110.43vs421.623.77 和324.174.69，P0.05)则表明，烟雾吸入后导致肺部损伤，肺血管通透性增加导致蛋白渗漏。见图 4。5致伤后小鼠肺组织匀浆炎性因子表达与对照组相比，烟雾吸入致伤 12h 后小鼠肺组织内炎性因子 IL-6(73.347.48vs187.018.34，P0.01)、IL-1(22.003.736vs217.618.25，P0.01)和TNF-(31.43.33vs202.019.55，P0.01)均显著上升，IL-10(201.19.99vs170.78.48，P0.05)显著下降。烟雾吸入致伤 24h 后小鼠肺组织内炎性因子 IL-6(73.347.48vs119.016.95，P 0.01)和 TNF-(31.57.284 3.34 vs 57.28 6.21，P0.01)显著上升；IL-10(201.19.99vs119.914.22，P0.01)显著下降。见图 5。讨论火灾的发生往往伴随着大量烟雾的产生，在烧伤的基础上烟雾吸入导致的肺损伤大大增加中、重度患者的病死率10。但针对吸入性损伤患者的治疗很大程度上是支持性的，而不是专门针对吸入性损伤的干预措施，临床上仍然缺少规范化的治疗指南或方针4,11。因此研究致病机制及探索潜在的治疗方法至关重要。因在前期实验中发现 C57BL/6 雌鼠较雄鼠麻醉后更稳定以及在插管后反应更平稳，本研究选择 C57BL/6 雌鼠为实验动物。在阅读多篇文献以及前期实验的基础上，建立了一种新型的小鼠烟雾吸入性损伤模型，与既往的模型需要定制特殊设备相比，此模型具有操作简单、设备易得的优点，并对烟雾成分、不同烟雾吸入时间各组小鼠生存状态以及生存率、致伤后小鼠病理及炎性因子进行分析。本研究中，选用生活中常见的胶合板及松木屑为发烟材料。并且可以根据气流调节器控制烟雾输入的速率，加热垫和加热带可对产生的烟雾进行温度的维持与加热，烟雾检测器可以对烟雾的气体成分和温度进行实时监控，从而保证致伤条件的稳定性；对比以往小鼠及大鼠模型的制备，都是将实验动物放置于发烟室内任其自由吸入烟雾，无法确认烟雾是否进入肺内，为建立中重度烟雾吸入性损伤模型，参考吸入性损伤的严重程度分类12，针对中重度吸入性损伤主要为下气道与肺实质的损伤，本实验设备在对实验动物气管插管后，与传烟管道直接相连，避免气管受刺激挛缩影响烟雾吸入效果，可以将烟雾直接通入实验动物肺内，对肺部直接造成损伤。本次研究针对的是 C57BL/6 小鼠这一鼠种，若要进行大鼠或其他大动物造模实验，本设备可与不同口径大小的气管插管进行连接，从而进行烟雾的吸入。烟雾吸入导致的肺损伤是由于吸入各种有毒气体(如 CO、NO、H2S 等)、可挥发物质以及气体本身高温直接或间接导致肺部的损伤13。本研究通过对烟雾进行气体和可挥发物质测量，表明在烟雾通入后，刺激性气体(CO、NO 和 H2S)均在短时间内迅速上升且稳定在一个较高的水平。在对可挥发物质的检测中，检测到 1-丙烯、2-甲基丙烷和氯甲烷这三种主要物质，均为刺激性气体，图 4 20 min 组伤后 12 h 和 24 h 小鼠 W/D 比值和蛋白含量Fig.4 The W/D ratio and protein content in the mice at 12 h and 24 hin 20 min post-inhalation injury group图 5 20 min 组伤后 12 h 和 24 h 小鼠肺组织匀浆中炎性因子Fig.5 Inflammatory factors in lung homogenates of the mice at 12 h and 24 h in 20 min post-inhalation injury group682解放军医学院学报Acad J Chin PLA Med Sch Jun 2023，44（6）https:/对人体具有毒性作用14-16。实验证明，死亡率随着烟雾吸入时间的增加而上升，为了探究能造成小鼠吸入性损伤的准确烟雾通入时长，研究中设定了 10min、15min、20min 和 25min 致伤组，结果显示，致伤 10min组和致伤 15min 组伤后大部分小鼠存活。致伤20min 组小鼠伤后 72h 存活率为 54%。致伤25min 组小鼠伤后 12h 全部死亡。这说明在本致伤模型中，致伤 10min 对小鼠无法造成明显伤害；致伤 15min 仅对部分小鼠造成明显损伤；25min 的致伤时间对小鼠造成严重的损伤，因窒息和急性肺损伤而在短期死亡，无法进行长期观察；而 20min 致伤的小鼠，可在保证一定存活率的情况下，对小鼠进行适度的损伤，有助于观察小鼠烟雾吸入性损伤致伤后的病理生理学变化。与对照组相比，烟雾吸入 20min 组小鼠呼吸频率加快，严重者出现不同程度的发绀，将气管插管取出后可见末端灰黑色颗粒，与临床观察到的表现类似13。在对小鼠肺组织病理观察中发现，与对照组相比，伤后 12h 的小鼠肺部可见肺泡结构破坏，部分异常扩大，部分相邻肺泡破损融合，小支气管扩张，炎性细胞浸润。伤后 24h的小鼠肺泡隔增厚，小血管扩张瘀血，可见部分淋巴细胞浸润灶。提示通过本模型进行烟雾吸入性损伤造模时，20min 的烟雾吸入时间可以对小鼠造成中重程度的肺组织损伤，肺泡灌洗液中蛋白含量的上升也表明烟雾吸入导致小鼠肺部屏障功能受损。本模型由于对实验动物进行了气管插管，避免了喉部在烟雾刺激时的反射性闭合17。长时间烟雾吸入烟雾本身的高温以及所含有的有毒气体对肺部造成直接的损伤，破坏肺部防御机制，增加肺内感染的概率18。致伤后炎性因子的大量产生导致肺部剧烈炎症反应以及肺功能的抑制。TNF-、IL-1 和 IL-6为炎症早期重要的促炎介质，其含量的高低对病情严重程度的评价以及预后具有重要影响19。在本模型中，致伤后小鼠肺组织匀浆结果显示，TNF-、IL-1 和 IL-6 较对照组显著增加。TNF-在烧伤、吸入性损伤和全身感染中关键的炎症介质，在烟雾吸入致伤之后，TNF-介导 IL-1、IL-6 等炎性因子的级联反应从而对肺组织机构造成严重损害19，并且产生的 TNF-和 IL-1 进一步激活 NF-B 导致炎症反应的加剧。在伤后 24h时，IL-1、IL-6、TNF-较伤后 12h 表达降低，可能与 NF-B 负向调节促炎细胞因子表达有关20-21。IL-10 在致伤后较对照组显著下降，这可能与 IL-10是对炎症反应具有下调作用的因子，在防止宿主损伤、保持组织的完整性方面具有重要作用有关，其通过负调节 IL-1、IL-6 和 TNF-等促炎介质的释放，减缓肺部炎症反应的迁延22-24。本实验还存在局限性，在造模过程中，实验组样本过少，导致在各时间点取样数量有限，部分结果尽管有明显变化，但缺少统计学意义；烟雾吸入性损伤应补充相关动脉血气分析来增加模型的可信性。总之，通过研究表明，通过本模型，吸入 20min 由胶合板和松木混合燃烧产生的烟雾可以导致 C57BL/6 小鼠中重度吸入性损伤，伤后实验动物的生理表现和组织病理结果与临床病情相符，伤后小鼠炎性介质及细胞炎性因子的释放有明显改变，因此笔者认为该模型可以用于烟雾吸入性肺损伤的实验。作者贡献作者贡献曲毅睿：总体构思，方法设计，调查研究，撰写初稿；柴家科：资金获取，监督指导，审读与修订；胡方超：调查研究，项目管理；刘甜：规范分析，监督指导；迟云飞：监督指导，审读与修订；孙冉：调查研究，有效验证。利益冲突利益冲突所有作者声明无利益冲突。数据共享声明数据共享声明本篇论文相关数据可依据合理理由从作者处获取，Email：。参考文献Shirani KZ，Pruitt BA Jr，Mason AD Jr.The influence ofinhalation injury and pneumonia on burn mortalityJ.AnnSurg，1987，205（1）：82-87.1Brusselaers N，Hoste EA，Monstrey S，et al.Outcomeand changes over time in survival following severe burns from1985to2004J.IntensiveCareMed，2005，31（12）：1648-1653.2ChangJJ，ChenZX，ZhaoRZ，etal.Iontransportmechanismsfor smoke inhalation-injured airway epithelial 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