逍遥丸治疗黄褐斑的分子机制：基于整合网络药理学和生物信息学方法.pdf

Correspondi基础研究论著2112023年6 月第30 卷第3期皮肤性病诊疗学杂志逍遥丸治疗黄褐斑的分子机制：基于整合网络药理学和生物信息学方法潘素跃，古胡敏，王朴，黄巧，阝陈东宇，王红心，杨晓雨，樊文龙，何玉清21.广东医科大学，广东东莞523808;2.东莞市寮步医院，广东东莞523400摘要目的通过生物信息学方法分析逍遥丸的有效活性成分，从而了解其治疗黄褐斑的分子机制。方法去通过BATMAB-TCM、G e n e Ca r d s、CT D、G EO 等数据库查找逍遥丸的有效活性成分及其靶点蛋白和人类黄褐斑相关的作用靶点，构建有效活性成分疾病靶点的网络图；使用STRING数据库构建蛋白互作网络，再进行基因本体（GO）和基因组百科全书（KEGG）富集分析；最后通过分子对接的方法验证有效活性成分和共同靶点。结果逍遥丸中含有当归素、1-甲基-2-十二烷基4-喹诺酮、麦角胺、棕榈酸、山箭酸、王二酸、视黄醇等多个关键活性成分，可能通过作用在AKT1、INS、T NF、T P53、IL I、K C-NAI、PPA RG、JU N等核心基因表达的蛋白上参与黄褐斑的治疗。KEGG富集分析所涉及的通路包括神经活性配体-受体相互作用、逆行内源性大麻素信号通路、多巴胺能突触、CAMP信号通路、非酒精性脂肪性肝病、促性腺激素释放激素分泌等。分子对接显示TNF-麦角胺、IL1B-麦角胺、PPARG-麦角胺、JUN-麦角胺结合能均-9 kcal/mol。结论逍遥丸主要通过抑制核转录因子，降低IL-1和TNF-的炎性级联反应，发挥抗炎和抗氧化的作用；同时，通过清除自由基、抑制黑色素合成和抗衰老等，对黄褐斑起到治疗作用关键词逍遥丸；黄黄褐斑；网络药理；分子对接；作用机制Bioactive components and molecular mechanisms of Xiaoyao pill in the treatment of chloas-ma:based on integrated network pharmacology and bioinformatics methodsPAN Suyue,HU Min,WANG Pu,HUANG Qiao,CHEN Dongyu,WANG Hongxin,YANGXiaoyu,FAN Wenlong,HE Yuqingl-?1.Guangdong Medical University,Dongguan 523808,China;2.Dongguan Liaobu Hospital,Dongguan 523400,Chinang author:HE Yuqing,E-mail:dr.hyg AbstractObjectiveTo analyze the active ingredients of Xiaoyao Pill and its molecularmechanisms in the treatment of chloasma.Methods The active ingredients of Xiaoyao Pill,itstarget proteins and the targets related to human chloasma were searched through BATMAB-TCMdatabase,GeneCards database,CTD database and GEO database,and the network diagram of ac-tive ingredient-disease targets was constructed.STRING database was used to construct protein in-teraction network,followed by GO and KEGG enrichment analysis.Finally,the active ingredientsand common targets were verified by molecular docking.ResultsXiaoyao Pill contained manyD0I:10.3969/j.issn.1674-8468.2023.03.005通信作者：何玉清，博士生导师，E-mail：d r.h y q h o t m a i l.c o m基金项目：国家自然科学基金（8 17 7 3312）；广东省“扬帆计划引进紧缺拔尖”人才项目（2 0 14330 0 5）；东莞市社会发展重点项目（2 0 2 118 0 0 9 0 5552）212JDiagnTherDermatonereol,Jun.2023.Vol.30,No.3key active ingredients such as angelica,1-methyl-2-dodecyl-4-quinolone,ergotamine,palmiticacid,behenic acid,azelaic acid,and retinol,which possibly regulated expression of proteins re-lated to core genes such as AKT1,INS,TNF,TP53,ILIB,KCNA1,PPARG,and JUN,resul-ting in the improvement of melasma.KEGG enrichment analysis revealed that the pathways in-volved in the action of Xiaoyao Pill included neuroactive ligand-receptor interactions,retrogradeendocannabinoid signaling,dopaminergic synapses,CAMP signaling,nonalcoholic fatty liver dis-ease,and gonadotropin-releasing hormone secretion.Molecular docking showed that the bindingenergies of TNF-ergotamine,ILIB-ergotamine,PPARG-ergotamine and JUN-ergotamine were all-9 kcal/mol.ConclusionsIn addition to scavenge of free radicals,inhibition of melaninsynthesis and anti-aging,Xiaoyao Pill can also inhibit nuclear transcription factor and reduce theinflammatory cascade reaction of IL-1 and tumor necrosis factor-,resulting in anti-inflammationand antioxidation,consequently leading to improvement of chloasma.KeywordsXiaoyao pill;chloasma;network pharmacology;molecular docking;mech-anism of action黄褐斑是一种慢性、面部色素沉着获得性增加的皮肤病。据最新统计,该病在亚洲女性育龄阶段的发病率达30%。研究发现,该病的三大发病因素主要是日光照射、遗传易感性和性激素水平变化，同时黑素合成增加、炎性级联反应、皮损处血管增生以及皮肤屏障严重受损均参与了黄褐斑的发生1-1。目前临床上治疗黄褐斑的方法较多，如局部用药、化学剥离剂、激光和光疗以及中医治疗3 等，但治疗后无法达到理想状态。黄褐斑易复发以及可引起刺激、炎症发生后色素沉着等并发症的特点，使其成为美容领域难以解决的问题4-5O近年来,临床上越来越重视中医在皮肤病治疗中的作用。中医学认为，黄褐斑多为肝郁化火，肾精亏虚，气滞血瘀，脾虚痰湿导致运行滞涩，颜面失养而发病。因此，黄褐斑常伴肝郁血瘀证,应从疏肝理气、活血化瘀等方面加以治疗7 。逍遥丸是调和肝脾、疏肝解郁的名方，为治疗郁证的常用方剂。方中柴胡疏肝解郁，当归养血活血，白芍养血柔肝，茯苓、白术培土健脾,共起疏肝解郁,调和肝脾之效,其疗效确切，能够快速缓解临床症状,且复发率低8 。但其有效成分及治疗机制尚不清楚。因此，本研究利用生物信息学、中药网络药理学以及分子对接等手段，鉴定逍遥丸中与治疗黄褐斑作用相关的有效成分,并探讨疾病发生过程的关键靶点，以了解其发病机制,并为临床治疗提供新的策略。1材料与方法1.1有效成分一靶点互作网络的构建通过中医药分子机制生物信息学数据库(BATMAB-TCM,http:/bionet.ncpsb.org/bat-man-tcm/）对逍遥丸的组成成分进行检索,并筛选其有效成分及对应的靶基因,其标准为 Score cut-off 值2 0。同时在 GeneCards(https:/www.gen-ecards.org/）、CT D（h t t p:/c t d b a s e.o r g/）和 GEO(https:/www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）三个数据库中检索黄褐斑相关基因。将有效成分对应的靶基因与疾病相关基因进行映射,获得药物一疾病所共有的靶点基因,以此构建逍遥丸有效成分一靶点互作网络1.2蛋白互作网络的构建将前面得到的共同靶点基因导人到STRING数据库（https：/St r i n g-d b.o r g/），构建蛋白互作网络，设置蛋白相互作用阈值为0.4，优化网络关系图，并通过Cytoscape3.9.1中的CytoNCA工具计算Degree网络的拓扑学参数，筛选出排名前8的PPI网络核心基因进行后续分子对接。1.3GO 和KEGGG富集分析使用R软件包clusterProfiler(version3.14.3)进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG)富集分析,以获得基因集富集的结果。以P0.05为显著富集筛选条件，并将结果绘制2132023年6 月第30 卷第3期皮肤性病诊疗学杂志成气泡图进行可视化分析。1.4分子对接分析对筛选出的最重要的前8 个基因进行分子对接分析。在Uniprot数据库（https:/www.uni-prot.org/）中搜索所选基因编码的受体蛋白,确定逍遥丸在治疗黄褐斑中的核心靶点相关的活性成分,使用PubChem 网站（https:/pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）检索活性成分的二维结构，并使用ChemBio3D21.0.0.38软件转化为自由能最低的三维结构；通过PDB数据库（https:/www.rcsb.org/)获得核心靶标的3D结构，并通过PyMOL2.5软件删除多余的水分子以及小分子配体；使用AutoDockTools1.5.6软件将蛋白质和药物成分转换为PDBQT格式文件并识别活性口袋；使用AutodockVina软件进行分子对接；将对接结果进行可视化。2结果2.1有效成分和潜在靶点的筛选检索BATMAB-TCM数据库，共筛选出7 4个有效成分，删去重复获得的411个药物靶基因。分别从GeneCards和CTD数据库中获得了2 8 和18478个与黄褐斑相关的基因。对从GEO检索到的GSE72140数据集进行标准化，按照1 Log2FoldChangeI1.5和P0.05进行筛选，结果得到49 1个差异表达基因，并通过绘火山图（图1A）和热图（图1B）进行可视化。对上述3个数据库的数据集取并集，去除重复部分，共获得18830个黄褐斑相关基因，再将药物靶基因和疾病相关基因取交集,最后得到37 3个共同靶基因(图1C)。Expression0SampleGroup:LesionalNon lesionalRegulated1IOXDI24.5-LOC101929268AUp-regulatedSampleGroupORIJI2LOC101928834EGF224.0-VDowr-rguatedCTD-2076M151LOC101927814LRRC25CSHL.I3.5-DISCILOC101927274CDAK8KLK9SERPINB3ISERPINB4ERPLVB3VEDCI2HOC62.5LOC285181SENCR1.OC101928098RD3MIKXRP11-18114.11INC009271.5LINC00672MRGPRX3RP11-457116.2ZCCHCL31.0-RE3AGPR173TSHRPMIEI0.5-COMIPLINC00641CPRIS80.0-KR1B10K0910281/GMDS-AS1IF1TLOC101930405-1.5-1.0-0.50.00.51.01.52.01AEEFIAIP42ESPXTlog2(FoldChange)LOC283454REXOIENTHDTIGIAIVOR22-1/IGLVIVO22-1WBP2NLRARSSTK32BMAPKSIPIDNUAIP4HDNAJAIP4CTTITTDFEB114NFROG2P2RY8L.OC102724814RP11-332H18.4PRI-PRR4PRR4TCeReceptarV-alphuregionirTRAV9-2uTRAV9.2DrugDiseaseEIF3CBIKCKMZNF33BIZNF33BADAM8COLGASC9ort15zHOXKAT0-HOXA9/HOXASHIMIR196BHOXA7LINCCOLO57THRB-ITLUITHRB-ITILOC285593RP11-201A31LOC1019282513837318157BC044614NIRLAT7DHG(O.)（2%)(97.8%)PNZ-ASIERVMER6I-1C2Lori8sLOC101929378PROXI-ASIRP11-324L171LOCL00506124/TTCZ1BCXorISIAIICXortSIBGOLTIA1CRPIL305063OC101928666DRDIOC100506107IGHMIGHATIAGHAZMIR142RUNXT-ITIIGHAGHAMIGHA2HIGHDIGHGIGHG2IGHG3AVPRIBIGHMWIGHV4-311BLOC101928937USHZA图1逍遥丸有效成分和疾病潜在靶点的筛选1A：G SE7 2 140 火山图；1B：G SE7 2 140 热图；1C：药物靶基因和疾病相关基因的交集Figure1Screening of effective components and potential targets of Xiaoyao Pill.1A:GSE72140 volcano map;1B:GSE72140 heat map;1C:The intersection of drug target genes and disease-related genes.214J Diagn Ther Dermato-Venereol,Jun.2023.Vol.30,No.32.2逍遥丸活性成分与黄褐斑基因网络构建通过Cytoscape3.9.1软件构建逍遥丸活性成分与黄褐斑靶点基因的网络关系图（图2）。其中蓝色箭头代表靶点基因，橙色三角形代表逍遥丸的有效活性成分,标签中的文字大小以“Between-ness决定。排名前7 的有效成分为：当归素（An-gelicin,W24,betweenness=29 165.69 558)、1-甲基-2-十二烷基-4-喹诺酮1-Methyl-2-Dodecyl-4-1h】-Quinolone,W30,betweenness=26 117.962 31、麦角胺(Ergotamine,W22,betweenness=19 310.908 62)、棕榈酸（Hexadecanoic Acid，W 34，b e t w e e n n e s s =17070.56 598)、山裔酸(Decanoic Acid，W 2 6,b e-tweenness=17 070.56598）、壬二酸（AzelaicAcid,W9,betweenness=17070.56598）、视黄醇(Retinol,W41,betweenness=13 325.353 99)。WDHDICEBPAEOME8HOSPHOLOH1A3OPRK1COLOCHRNA7KCNKAKCNA2IPINSBCHEHTR2CCFTRILBPPARD.COX4I1ESHRGLTAPROZMHR3ADORA2ASALL1ADAM8CHRNABOCLNPCYTIBDHRS3/KORCILHTH1BP4HA1COX8AVCAMGATMKCINA1ACHEFAUP2ALDH3A1FAUS1POLA1,SCINIAPDE4DGU-ATCBSPROS1APAF1ADUY1CNR1SLC1A3CHRNAZABRG3KCINC3LGALSOPCYTIARDH13AGRTPLOD3HDAC2FECHKCND3CUBNNAEIHTR4SBCLZAPOAZFAUS2SDHAF2.OXGTTKCNUSACVRLIAPLPTHTR2AOGOHCOX7A1ABATCACNA1DKCNU3KCNASRETSATNOO1ABUATACSS2PDE3BTPMTHMGCRPLD1ADRA1ATHaDXiaoyaoACSL3RXRGARSCN2BGABRG2CHRNB4CHRNB2TPKTLRATADRA2BKONEZCOL2TA1CKMTIAKCNA10TCNTIFINGNR4C2R6P3BGLAPACJLTIMPDHGABRASGABRG1GRIA4DLG4GCRARBPNPOJMUD6BBOX1SCH1BCACNA1CGRIA1DAB2GGCXAFAFABUC9SLCBA1P4HBKCNA4DRD3WNT4GPFC5ACKMPEXKTRSUCLAHSDI7B6ACNA1SACNB1PHG2KCNA3SCINARCHRFAM7BABRB2GARB1MMAAACIN2.OPRM1MMACHCPPARARSHTRZBALDHIA1TRMV1ASS1ABCC2ADFA2CSCINBAALDH5A1AKR1D1-SCN2APGRGABRA6GRIA2CACNGZADH1CMTPRGABRA1TF53GPR27PROCCDK15CRiAPPLODT27VKORC1A6L1SOAT1ESRTDUTACADSBSCN5ATNF33W34FABP6KCNCt340V42AW434GAMTMMAB-IMPA1SLC13A4SDHBCOX2ITGB2PRKAA1HTRIATCAF1SLC1BA12SCN9AGLRA2KCNATACVR1DNIMT3APLATALDHIA2COX7CNT5C2DMTNKCINB1VURRLHPTCOX3SRC5A2PDE4BCHRNA5ADH1AMTHERAVPF7ABB1AC-3L4HIFIANSDHARDH1LAAGIR2ACVRTPAKTIACO2ASPHSLCI3ATDABRA3KCNO1ASNSCL34HTK1DCOXTBCOX5AALDH2PRKABTHNFNPKCKBOFRTSUCLGTLAG1BCOKBCADRA1BPRKCAPPARGSLT2SLCI3ACHRNA3CHRNA4RNASE1PLD2RDH12TRPA1ADRA10CCAR2SLC9A1NPC1H1R7RARARARGHTR3A.GASRA4SLC6A8 SCN3BRXRASLCJBA3GABRB3GAURDKCNA5GABRA2KCNC2SNW1ADORA3MGPF10SLC25A4ACSS1ADH1BCYP27B1CHRM2RDH14PAX2RARRES1SDHDSLC25A1COX6B1SCIN3ASLC19A2RCHGFABCG1ADORAZBCOMTDRD1C1QINFELPCATIPTUS2RSCN4BCKMT2RXRBSLCI3A5P4HA2SUCLG1HTR3BCHRM3A6L2CALCADFD2NNMCCX1ADKKCMMA1GRIA3KCIND1MiRWuSX6A2COX5BYMSFOXLGRIN3APRJUNAFG3L2ANPEPAKR1C3TMLHECES1DHRS4CBR4NGO2RHOADORA1SLC6A2ANKATABC81SCNTAPDE3ATHTPAFRPP3HKCNU5SERPINBELOVL4NRJB1AKR1C2ENPP1SLC29AZGABRPAGAVPR1AALKTNK2SLC22A1PGLBHSD17B11SDHCNR1H4图2逍遥丸关键活性成分黄褐斑靶点网络图（蓝色箭头为靶点基因，橙色三角形为有效活性成分，红色圆圈为逍遥丸）Figure 2Target network of chloasma and the key active ingredients in Xiaoyao Pill.2.3富集分析GO富集分析结果如图3A所示，生物过程（b i o l o g i c a l p r o c e s s，BP）主要包括离子转运的调节、离子传输、跨膜转运的调控、离子跨膜转运的调控、离子跨膜转运、跨膜转运、运输的调控、膜电位的调节、阳离子转运、定位的调节。细胞组成（c e l l u l a r c o mp o n e n t，CC）结果显示，关键活性成分主要作用于离子通道复合体、跨膜转运体复合体、突触膜、质膜整体成分、膜蛋白复合体、质膜固有成分、质膜、阳离子通道复合体、突触后膜。分子功能（molecularfunction，M F）主要包括离子门控通道活性、门控通道活性、离子通道活性、通道活性、底物特异性通道活性、离子跨膜转运蛋白活性、跨膜转运蛋白活性。KEGG富集结果显示，主要的通路包括神经活性配体一受体相互作用、逆行内源性大麻素信号通路、尼古丁成瘾、多巴胺能突触、吗啡成瘾、CAMP信号通路、神经突触、非酒精性脂肪性肝病、5羟色胺能突触、味觉转导、苯丙胺成瘾、昼夜节律同步化、谷氨酸能突触、胆碱能突触、促性腺激素释放激素分泌、非洲锥虫病(图3B)。2152023年6 月第30 卷第3期皮肤性病诊疗学杂志Countregulation ofionitranspod-25ion transport30regulation oftansmenbrane transpont-35regulation ofiontransmembrane transponNeurouctiveTigand-rcceptor.interaction-40ion.transmembranetranspont-45Retrogrndeendocannabinoid signalingtransmembrane tranisportregulationoftranspont-50Nicotinendkliction-regulation of membrane potential-E55Dopaminergicsynapse-cation transpont-Countregulation oflocalizaticnGroupMorphineaddietion-5fon channel complexBP-10CCcAMPsignaling pathwaytrensmembrane plexMF15transpartercomplesGABAergicsynapse-synaptic membrane-20Non-alcoholiefatty livardiseaseintegral componentof plasmamembrine(NAFLD)membrane protcincomplexSerotonergiesynapse-intrinsiccomponentof plasma membrane-log10(pvalue)plisma mermbrane.part-Tastetransduction-eation channelcomplexAmphetamineaddierion-10postbynaplic membraneCircadian entrainment-15kon gated.channelaotivitygated channelactivityGlutamatergiesynapse-20ion chamel activitychannclactivityCholinerngiesynapsepassive transmembrane transporteractivityGnRHsecretionNew!substrate-specific channelactivitycation chanel activityAfiean trypanosomiasisfontransmembrane transporteractivity0.100.150.200.250.300.35inorganic molecular entity transmembrane transporteractivitytransmembranetransporteractiviryGeneRatio3B01020304050-loglo(pvalue)3A图3共同靶点基因的GO富集(3A）及KEGG富集分析(3B)Figure 3GO(3A)and KEGG(3B)enrichment analyses of common target genes.2.4蛋白互作网络的构建将37 3个共同靶点基因导人到STRING平台，按照已设定的参数构建蛋白互作网络，删除孤立作用的节点，加载CytoHubba插件，使用Degree算法筛选出连接度最高的前8 个基因为AKT1、I NS、TNF、T P53、IL 1B、K CNA 1、PPA RG、JU N(图4)。AGTSCN3ACOX411HTR1AKCNA3GRIA3MT-CO2GRIA4DRD1XCNC2KCND3SCN5AGRIA1GABRB3GABRB2CHRNAAACO2CATESR1CACNATDPTGS2SDHCHTR3ACACNA1CGRIA2SOHBKCNA4ALDHIA1GABRA2DRD2GABRG2INSTNFGABRGTSCN4AF2COMTPRKCASCN1AKCNJ3GABRA5AKT1TP53KCNA2SCN1BKCNB1KCNA5JUNHTR2AIL1BKCNC1KCNMATGABRABSCN2BPPARGVCAM1DLG4KCNA1PPARASCN2AKCNOTKCNJ9RBP1GABRATSCN8ASCN9AABCB1CFTRGABRDARTRPVTOHRNB2MTHFRIFNGRXRASLC6A2CNR1ADH1BCEBPA图4基于Degree筛选蛋白互作网络连接度最高的前8 个基因Figure4The top 8 genes with the highest connectivity of protein interaction network based on Degree.2.5分子对接结果采用排名前7 位的关键活性成分（当归素、1-甲基-2-十二烷基4-喹诺酮、麦角胺、棕榈酸、山酸、王二酸、视黄醇）和PPI核心靶点（AKT1、INS、T NF、T P53、IL 1B、K CNA 1、PPA RG、JU N）进行分子对接，结果见表1。其中TNF-麦角胺、IL1B-麦角胺、PPARG-麦角胺、JUN-麦角胺结合能均-9 kcal/mol,表明麦角胺这个活性成分与受体的结合能力较强，提示其可能是逍遥丸治疗黄褐斑的主要作用成分（图5A5D）。216J Diagn Ther Dermato-Venereol,Jun.2023.Vol.30,No.3表1逍遥丸有效成分与蛋白靶标的结合能(kcal/mol)Table 1Binding energy of active components and protein targets of Xiaoyao Pill(kcal/mol)成分AKT1INSTNFTP53IL1BKCNA1PPARGJUN当归素-6.1-6.1-8.7-5.0-6.3-6.3-7.3-5.5喹诺酮-5.2-5.2-6.4-4.6-6.4-6.3-7.3-5.4麦角胺-8.0-8.7-9.8-8.89.7-8.910.7-9.9棕榈酸-4.0-4.4-5.3-4.0-4.5-3.8-4.8-3.8山俞酸-3.7-3.9-6.1-3.5-4.1-4.6-5.0-3.6王二酸-4.1-3.9-5.5-4.6-4.3-3.8-4.7-3.7视黄醇-5.6-6.3-6.5-3.0-6.0-5.2-6.3-5.9LE人8 0ILE-173SER-175GLU-25SER-1255A5B259GLU-291SER-3425C5D图5逍遥丸主要有效成分与核心基因的分子对接5A：T NF-麦角胺；5B：IL 1B-麦角胺；5C：PPA RG-麦角胺；5D：JU N-麦角胺Figure 5 Molecular docking of main active components of Xiaoyao Pill with core genes.5A:TNF-ergotamine;5B:IL1b-ergotamine;5C:Pparg-ergotamine;5D:Jun-ergotamine.3讨论本研究发现,逍遥丸中含有当归素、1-甲基-2-十二烷基4-喹诺酮、麦角胺、棕榈酸、山酸、王二酸、视黄醇等多个关键活性成分,其靶点与黄褐斑基因匹配较好。当归素又称白芷内酯,为一种天然的羟基香豆精，存在于白芷等伞形科植物中，是在白芷的甲醇提取物中发现的保肝作用最强的化合物9 。在细胞毒性实验中，由于这些化合物的存在,HepG2 细胞的活性不变10 。白芷中挥发油类成分具有明显的清除DPPH自由基的作用，白芷醇提取物具有抗氧化和抗衰老的作用,其分子机制是通过抑制MAPK信号通路以及抑制21720233年6 月第30 卷第3期皮肤性病诊疗学杂志NADPH氧化酶的信号激活。许多香豆素类物质可以发挥酪氨酸酶抑制剂的功能，能够有效抑制黑色素合成，美白效果显著，被广泛用于美白祛斑产品中12 。香豆素类成分能减少组胺的释放，有一定的抗炎作用,能抑制炎症因子 TNF-、I L-1和IL4 的释放,其抗炎作用活性较强13。香豆素可以作为钙离子拮抗剂，可抑制钙离子经钙通道进入细胞，维持胞内正常的钙离子浓度水平，进而达到抑制细胞凋亡的目的14。喹诺酮属于吡啶酮酸类,是一类合成抗菌药，主要作为革兰阴性菌的抗菌药物。麦角胺具有肾上腺交感神经阻断作用，可提供广泛的治疗作用，最主要的如植物性神经紧张不全、植物神经功能紊乱15。临床上黄褐斑患者因面部色斑难以治愈、反复发作,产生精神压力，甚至诱发自卑、焦虑、抑郁等精神障碍,麦角胺可能为该类患者提供了精神方面的治疗15。黄褐斑的病理性黑色素沉着通常与黑素细胞的过度活化以及功能发生异常相关。而王二酸通过抑制NFkB,降低IL-1、IL-6 和TNF-的炎性级联反应,能够抑制表皮黑素细胞和黑素瘤细胞的酪氨酸酶活性以及减少黑色素的合成,且可专门针对异常细胞，对正常细胞不造成任何影响,在治疗痤疮、玫瑰痤疮和黄褐斑等皮肤疾病方面卓有成效16-1。视黄醇可以促进存在于表皮基底层的角质形成细胞增殖，在纤维原细胞上激发前胶原的合成,达到淡斑和抗衰老的作用18 ,且可抑制黑色素形成19 ,在黄褐斑的治疗方面很有成效2 0 。因此，逍遥丸可能主要通过当归素、王二酸、视黄醇、麦角胺等在清除自由基、抑制黑色素合成、抗衰老、抗氧化、抗炎等方面发挥主要的作用。本研究通过Degree筛选显示，逍遥丸中的活性成分可能通过作用在AKT1、INS、T NF、T P53、IL1B、K CNA 1、PPA RG、JU N等核心基因表达的蛋白上参与黄褐斑的治疗。AKT1可调节代谢、增殖、细胞存活、生长和血管生成等多个过程,并在其中发挥关键作用，主要涉及PI3K/AKT信号通路，而PI3K/AKT通路能够被许多细胞刺激或毒性损伤而激活2 1。当发生病毒感染时,促炎细胞因子如TNF和IL-1的表达被触发，进一步激活NF-kB,并诱导一组下游炎症基因,导致炎症反应,从而清除人侵病原体以及感染的细胞(2 1。OTNF-可诱导多种细胞内信号通路并具有细胞增殖、代谢活化、炎症反应和细胞死亡等多种生物学功能2 3。TP53在大多数肿瘤中都发生了突变，其主要功能有DNA合成和修复、细胞衰老和凋亡的功能,能够有效抑制癌细胞增殖2 4。本研究结果还显示，KEGG富集分析所涉及的通路包括神经活性配体一受体相互作用、逆行内源性大麻素信号通路、多巴胺能突触、CAMP信号通路、非酒精性脂肪性肝病、促性腺激素释放激素分泌等。综上所述，本研究基于整合网络药理学和生物信息学方法，发现逍遥丸主要通过抑制核转录因子,降低IL-1和TNF-的炎性级联反应,发挥抗炎和抗氧化的作用，同时通过清除自由基、抑制黑色素合成和抗衰老等，对黄褐斑起到治疗作用。本研究还提供了黄褐斑治疗的几个潜在靶点，可能有助于解释其发病机制,并为临床治疗提供新的策略。参考文献1中国中西医结合学会皮肤性病专业委员会色素病学组，中华医学会皮肤性病学分会白癜风研究中心，中国医师协会皮肤科医师分会色素病工作组中国黄褐斑诊疗专家共识（2 0 2 1版）J中华皮肤科杂志，2021,54(2):110-115.2SU G,ZHOU X.Clinical efficacy of self-designed xiao-ban huoxue prescription on chloasma derived from liverstagnation and blood stasis J.Am J Transl Res,2021,13(12):14031-14038.3HETH V M,PANDYA A G.Melasma:a comprehensiveupdate:part IIJ.J Am Acad Dermatol,2011,65(4):699 7144CHEN J P,LIU J,WU J H.Treatment of melasma by acombination of intense pulsed light with advanced optimalpulse technology and human-like collagen repair dressing:a case series studyJ.Medicine(Baltimore),2022,101(31):e29492.doi:10.1097/MD.0000000000029492.5DENG T H,CHENG F R,GUO S S,et al.Applicationof PRP in chloasma:a Meta-analysis and systematic 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