基于注册审评的流式细胞仪配套检测试剂的临床评价概述.pdf

531药品评价 Drug Evaluation 2023,20（5）基于注册审评的流式细胞仪配套检测试剂的临床评价概述毛勇，鄢峰，李平，吴丹江西省药品认证审评中心（江西省医疗器械技术审评中心），江西 南昌 330046摘要：从体外诊断试剂注册技术审评角度出发，以流式细胞仪配套检测试剂为例，从法规依据、临床评价的分类及要求、临床评价的主要关注点等方面进行了阐述，尤其对临床评价的样本量要求、评价指标、对比试剂的选择、临床试验的监查与质控等方面进行了重点介绍，旨在为注册申请人对该类产品进行临床评价提供技术指导，同时为技术审评部门对临床评价资料的技术审评提供参考。关键词：药物评价；流式细胞仪；体外诊断试剂；临床试验；注册审评DOI:10.19939/ki.1672-2809.2023.05.03Registration Review of Clinical Evaluation on Flow Cytometry in Vitro Diagnostic Reagents Detection ReagentsMAO Yong,YAN Feng,LI Ping,WU Dan Jiangxi Center for Drug Certification and Evaluation(Jiangxi Center for Medical Device Evaluation),Nanchang Jiangxi 330046,China.Abstract:This paper discusses the evaluation approach for clinical evaluation of in vitro diagnostic reagents from the perspective of technical evaluation of in vitro diagnostic reagent registration,taking flow cytometry matching detection reagents as an example.This article elaborates on the regulatory basis,classification and requirements of clinical evaluation,and main focus points of clinical evaluation,with a focus on sample size requirements,evaluation indicators,selection of comparative reagents,and monitoring and quality control of clinical trials.The aim is to provide technical guidance for registration applicants to conduct clinical evaluation of such products,at the same time,it provides reference for the technical review of clinical evaluation data by the technical review department.Key words:Drug evaluation;Flow cytometry;In vitro diagnostic reagents;Clinical trial;Registration review流式细胞术是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析的检测手段，可以在短时内高速分析大量细胞或生物粒子的物理和化学特征参数1。随着流式细胞术研究的日益深入，以及人类生活品质、健康意识的提高，医疗需求逐渐增加。近年来，随着体外诊断试剂（in vitro diagnosis，IVD）行业飞速发展，流式细胞术在 IVD 领域的应用迎来了巨大的发展前景2-4。目前流式细胞仪配套检测试剂的主要厂家为美国的 BD 公司、贝克曼库尔特、安捷伦、深圳迈瑞、泛肽生物科技等公司，目前国内此类试剂根据产品的预期用途分为、类进行管理，其中、类已注册上市产品大约200 个，查询美国此类试剂按一二级管理，二级管理上市产品 80 个左右，因此，流式细胞仪配套检测试剂在国内外市场还有很大发展空间。本文从体外诊断试剂注册技术审评角度出发，以流式细胞仪配套检测试剂为例，讨论体外诊断试剂进行临床评价的审评思路，旨在为注册申请人对该类产品进行临床评价提供技术指导，同时为技术审评部门对临床评价资料的技术审评提供参考。1 法规依据流式细胞仪配套检测试剂，是指标记有荧光素、量子点等荧光类物质，以及针对各类血细胞或组织细胞分化抗原的单克隆抗体、相关的质控品和校准品。这类试剂通过与血细胞或组织细胞的各类抗原分子特异性结合，通过流式细胞仪进行检测，对人血液、骨髓液以及其他体液或组织标本中的被标记细胞或分子进行分类和计数5。依据国家食品药品监督管理总局发布的 2017年第 226 号通告流式细胞仪配套用体外诊断试剂分类调整产品清单6，包含 117 个流式细胞仪配套检测试剂，其中 IVD 类 76 种、类 7 种、类 34 种。为进一步确定流式配套检测试剂产品有关临床运用的安全、有效性，国家食品药品监督管理总局先后发布医疗器械临床试验质量管理规范作者简介：毛勇，硕士，工程师。研究方向：体外诊断试剂注册技术审评。E-mail:通信作者：吴丹，硕士，高级工程师。研究方向：医疗器械注册技术审评。E-mail:532药品评价 Drug Evaluation 2023,20（5）体外诊断试剂临床试验技术指导原则 国家药监局综合司关于印发医疗器械临床试验检查要点及判定原则的通知 医疗器械临床试验机构条件和备案管理办法 医疗器械临床评价技术指导原则和流式细胞仪配套用检测试剂注册技术审查指导原则7-12等文件，不断完善产品临床试验标准，这为技术审评人员对该类产品上市前临床评价资料的理解以及质量风险把控提供了重要的指导依据。2 临床评价的分类及要求根据免于临床试验的体外诊断试剂临床评价技术指导原则13，对于列入免于临床试验体外诊断试剂目录14的试剂，可以采取同品种方法学比对研究，以及与参考测量程序或诊断准确度标准进行比较研究。根据体外诊断试剂临床试验技术指导原则，对于未被列入免于临床试验体外诊断试剂目录的试剂，可以通过“金标准”对比法，“已有同品种批准上市”产品对比法或者国内无同类上市产品可以选择国外已上市、普遍认为质量较好的同类产品进行产品比对，从而开展临床试验进行数据分析、评价。依据产品分类，其中类产品试剂无须进行临床试验，第类与第类体外诊断试剂按照注册管理办法，需要进行临床试验；依据免于临床试验体外诊断试剂目录，流式细胞仪配套试剂如明确不属于该范畴内产品，须按照体外诊断试剂临床试验技术指导原则进行临床试验研究。3 临床评价的主要关注点3.1 样本量要求依据流式细胞仪配套用检测试剂注册技术审查指导原则5要求，进行临床试验研究的流式细胞仪配套用检测试剂，总样本例数不少于 500 例。根据体外诊断试剂临床试验技术指导原则要求，临床试验样本量应满足统计学要求，采用适当的统计学方法进行估算，并且考虑临床性能的各种影响因素，保证对临床性能的全面评价。对于定量体外诊断试剂，在线性范围内样本量在各个浓度应该均含有一定的样本例数，尤其在医学决定水平处需有一定的样本例数；对于定性产品，在阳性判断值附件应该包含一定数量的样本；另外还需对部分来自健康人群样本的检测，进一步对产品性能进行合理分析。目前，这方面存在的普遍问题是在临床试验中只采用固定样本量，并未出自统计学角度进行样本量的估算，在设计分组时，也没有将健康人群纳入分组中。在这种情况下，由于样本量不足易产生临床评价结果的偏倚。3.2 评价指标临床评价指标是来评价体外诊断试剂的临床性能的重要内容。在保证试验方案的严谨性和临床数据的完整性的前提下，选择适当的临床评价指标和统计模型对数据进行分析，是产品安全、有效的重要保障之一15。体外诊断试剂临床试验技术指导原则中对体外诊断试剂定性产品、半定量产品和定量产品的临床试验统计学分析及方法进行了概述。（1）定性产品：临床试验评价指标通常包括诊断准确性或检测一致性。定性检测临床试验一般以22 表的形式总结两种分析方法的检测结果，并据此计算灵敏度（阳性符合率）、特异度（阴性符合率）、总符合率、Kappa 值等指标及其置信区间8。（2）半定量产品：临床试验评价指标通常包括各等级符合率、阴/阳性符合率及 Kappa 值等。检测结果报告为几个等级值（例如：阴性、+、2+、3+），或者报告为终点稀释度的试剂等。临床试验可采用RC 表形式总结检测结果，并据此计算各等级的符合率、阴/阳性符合率及Kappa值等指标及其置信区间。（3）定量产品：临床试验评价指标通常包括回归分析的回归系数、截距、相关系数和决定系数等。可以按照临床试验数据，绘制散点图，并进行相关性分析；也可根据 Bland-Altman 法，回归分析（如Passing-Bablok 回归、Deming 回归和最小二乘回归等）来评价两种检测结果的一致性；另外还应对医学决定水平附近的检测结果，进行统计学分析。（4）受试者工作特征（ROC）分析：对于试验体外诊断试剂检测结果为定量或半定量数据，临床参考标准判断结果为定性结果的统计学分析，也可以 ROC曲线下面积来反映试验体外诊断试剂检测的诊断价值，或同时比较两种试剂的诊断价值，并进一步以推荐的阳性判断值进行灵敏度、特异度等指标的评价8。临床试验报告中出现统计分析方法与临床试验方案中的统计分析方法不一致的情况，如针对产品的临床验证，需要引入其他的统计分析方法（进一步分析），应在报告中对其进行相关的说明；另外在设计试验方案时，应充分考虑临床评价指标的合理性，切勿出现临床评价指标不全面或针对产品分类选取有误的分析方法。3.3 对比试剂的选择对于流式细胞仪配套用检测试剂，如其检测指标不针对某一个疾病判读阴阳性，而是定量检测结果，以“金标准”比对的方法则不适用于该类流式细胞仪配套用检测试剂产品的临床评价方法。因此，选择合适的对比试剂能更加全面地评价体外诊断试533药品评价 Drug Evaluation 2023,20（5）剂的临床性能。考评试剂与对比试剂应该在预期用途、适用人群、样本类型、检测方法学和检测性能等方面具有较好的可比性。在临床试验中，以下问题需要特别注意：（1）对于定量产品，其参考区间、线性范围等性能应该相近；（2）产品使用的重要材料，如采血管最好为同一材质，以最大限度地减少试验误差，从而有利于临床试验的进展；（3）对比试剂与考评试剂的检测结果应具有相同的计量单位或二者之间的计量单位可相互转化；（4）对比试剂与考评试剂的检测结果偏差应较小；（5）若产品无同类产品，则应在证明产品临床意义的同时，依据现有临床实践和理论基础，选择目前公认、合理的方法，进行比较研究，进一步确认产品临床性能16-18。3.4 临床试验的监查与质控监查与质控贯穿于整个临床试验的过程，其目的是确保体外诊断试剂临床试验遵循临床试验方案和管理法规，保证体外诊断试剂临床试验中受试者的权益，确保体外诊断试剂试验记录和报告数据准确、完整可信19-20。在临床试验过程中，监查员需要熟悉整个临床试验过程，并客观真实地反映整个试验过程中可能存在的问题，以及解决方法，这是临床试验数据真实、可靠的保障10,21。在临床试验过程中，目前主要存在的问题有：（1）在临床试验正式入组时，重复利用预实验的样本；（2）试验过程中，只描述存在的问题，并没有对问题进行分析或者处理；（3）试验报告中未对样本不一致结果进行分析，复测或者第三方试剂进行复核；（4）对于离群值的样本直接进行剔除，没有保存相关信息；（5）临床试验过程中，可能采用不同批次的产品进行，但未说明原因及具体的生产批次的情况等。4 总结临床评价资料是对体外诊断试剂临床性能、评估产品预期用途的重要凭据。因此，临床试验研究人员应以严谨的态度对待临床试验全过程。本研究着重介绍体外诊断试剂临床评价中样本量要求、评价指标、对比试剂的选择、临床试验的检查与质控等四个方面的要求及存在的问题，以期为注册申请人对该类产品进行临床评价提供技术指导，同时为技术审评部门对临床评价资料的技术审评提供参考；与此同时，加强对产品临床试验有效监管，进一步降低风险、提高体外诊断试剂产品有效性及安全性。另外，除临床试验方面，产品的安全有效还体现在设计与开发、分析性能评估、生物学评价等各方面，注册申请人应更加全面地进行相关研究，验证产品的安全及有效性，进一步提高产品注册效率。参考文献1 程小艳,武会娟.流式细胞术最新进展及临床应用 J.中国免疫学杂志,2019,35(10):1271-1276.2 苏红梅,秦育滨,周长华,等.流式细胞仪检测 HLA-B27 及其临床意义 J.医学综述,2012,18(5):795-796.3 蔡康荣,陈日玲.流式细胞仪检测 CD55 与 CD59 诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症 J.广东医学院学报,2001,19(6):411-412.4 秦宏伟,肖东杰,刘杰,等.人外周血内皮前体细胞的分离、培养及流式细胞仪动态检测 J.山东大学学报(医学版),2006,44(12):1197-1201.5 李耀华.流式细胞仪配套用检测试剂注册申报技术要求 J.中华血液学杂志,2013,34(4):370-373.6 国家药品监督管理局.总局关于过敏原类、流式细胞仪配套用、免疫组化和原位杂交类体外诊断试剂产品属性及类别调整的通告 EB/OL.(2017-12-29)2023-03-02.https:/ 国家药品监督管理局.医疗器械临床试验质量管理规范 EB/OL.(2022-03-31)2023-03-02.https:/ 国家药品监督管理局.体外诊断试剂临床试验技术指导原则 EB/OL.(2021-09-27)2023-03-02.https:/ 国家药品监督管理局综合司.医疗器械临床试验检查要点及判定原则的通知 EB/OL.(2018-11-28)2023-03-01.https:/ 国家药品监督管理局.医疗器械临床试验机构条件和备案管理办 法 EB/OL.(2017-11-24)2023-03-01.https:/ 国家药品监督管理局.医疗器械临床评价技术指导原则 EB/OL.(2021-09-18)2023-03-02.https:/ 国家药品监督管理局.流式细胞仪配套用检测试剂注册技术审查指导原则 EB/OL.(2013-05-17)2023-03-02.https:/ 国家药品监督管理局.免于临床试验的体外诊断试剂临床评价技术指导原则 EB/OL.(2021-09-18)2023-03-02.https:/ 国家药品监督管理局.免于临床试验体外诊断试剂目录 EB/OL.(2021-09-24)2023-03-02.https:/ 李新旭,周军,唐智敏,等.对体内诊断药物临床试验设计和统计分析的考虑 J.中国临床药理学杂志,2019,35(20):2639-2644.16 国家市场监督管理总局.体外诊断试剂注册与备案管理办法EB/OL.(2021-08-26)2023-03-02.https:/ 徐超,方丽,李冉.体外诊断试剂创新产品临床试验对比方法选择及案例解析 J.分子诊断与治疗杂志,2020,12(7):960-963.18 付文竹,蔡瑶.体外诊断试剂临床评价常见问题探讨 J.中国医疗器械信息,2020,26(15):9-10.19 杨明妍,吴雪姣,毕峰.药物临床试验的质量控制管理分析 J.中国当代医药,2022,29(33):128-130.20 范华莹,王瓅珏,谢振伟,等.加强对医疗器械临床试验项目的质量管理 J.沈阳药科大学学报,2021,38(4):428-432.21 刘琳,李琴,李娜,等.临床试验机构发起第三方质控检查模式初探 J.中国药物评价,2022,39(4):351-354.收稿日期：2023-03-03 定稿日期：2023-05-19