老年动脉瘤性蛛网膜下腔出血介入栓塞术治疗患者血清miR-124、miR-27a-3p与预后的关系.pdf

山东医药2023 年第 63 卷第 23 期老年动脉瘤性蛛网膜下腔出血介入栓塞术治疗患者血清miR-124、miR-27a-3p与预后的关系李伦，段建，幸文利遂宁市中心医院脑血管疾病科，四川遂宁629000摘要：目的观察老年动脉瘤性蛛网膜下腔出血（SAH）患者介入栓塞术治疗前后血清miR-124、miR-27a-3p水平变化，并探讨其与患者预后的关系。方法选取老年动脉瘤性SAH经颅内动脉瘤介入栓塞术治疗患者200例，根据术后28 d生存情况分为生存组182例和死亡组18例。采用实时荧光定量PCR法检测两组术前及术后3、7 d的血清miR-124、miR-27a-3p。绘制术后3、7 d血清miR-124、miR-27a-3p预测患者死亡的受试者工作特征（ROC）曲线，分析其预测价值。根据临界值，比较术后3、7 d不同血清miR-124、miR-27a-3p水平患者的28 d生存率，多因素Logistic回归分析其对患者预后的影响。结果与术前比较，两组术后3、7 d血清miR-124水平均升高、miR-27a-3p水平均降低，且死亡组变化更明显（P均0.05），术后7 d血清miR-12410.31、miR-27a-3p0.06者28 d生存率均低于血清miR-12410.31、miR-27a-3p0.06者（P均0.05）。术后3、7 d miR-124水平升高、miR-27a-3p水平降低均是患者死亡的独立影响因素（P均515 mm 98例、1525 mm 14 例，发病至入院时间：6 h 136例，624 h 46 例，Fisher 分级：1 级 29 例、2 级 51例、3级84例、4级18例，Hunt-Hess分级：级35例、级56例、级61例、级30例，合并高脂血症28例、糖尿病20例、高血压26例，吸烟史56例。死亡组男9例、女9例，年龄（71.13 4.05）岁，破裂动脉瘤直径：5 mm 7例、515 mm 10例、1525 mm 1 例，发病至入院时间：6 h 11 例，624 h 7 例，Fisher分级：1级 3例、2级 5例、3级 8例、4级 2例，通信作者：幸文利（E-mail：）开放科学（资源服务）标识码（OSID）65山东医药2023 年第 63 卷第 23 期Hunt-Hess分级：级4例、级6例、级7例、级1例，合并高脂血症3例、糖尿病4例、高血压3例，吸烟史 6 例。两组上述资料均具有可比性（P 均0.05）。本研究通过医院伦理委员会审核，患者或家属均签署知情同意书。1.2血清miR-124、miR-27a-3p检测方法采用实时荧光定量PCR法。两组于术前及术后3、7 d抽取外周静脉血3 mL，室温静置30 min，待血样凝结后，1 200 r/min离心15 min，取上清液。滴加焦炭酸二乙酯，20 冰箱保存待测。滴加TRIzol试剂提取总RNA，通过NanoDROPND-1000测定RNA浓度及纯度合格。取1 L RNA根据反转录试剂盒进行逆转录反应，合成 cDNA。PCR反应体系 20 L，反应条件：95、5 min，95、30 s，58、30 s，72、30 s，72、5 min，共40个循环9。以U6作为内参，采用2Ct法计算miR-124、miR-27a-3p相对表达量。1.3统计学方法采用SPSS22.0统计软件。计量资料采用 S-W 正态性检验，呈正态分布以-x s 表示，两组间比较采用t检验，重复测量数据采用重复测量的方差分析；非正态分布以M（P25，P75）表示，两组间比较采用秩和检验。计数资料以n（%）表示，组间比较采用2检验，等级资料采用Ridit检验。绘制术后3、7 d血清miR-124、miR-27a-3p预测患者死亡的受试者工作特征（ROC）曲线，计算曲线下面积（AUC）、截断值、敏感度及特异度，并分析AUC较大时的血清 miR-124、miR-27a-3p 联合预测患者死亡的价值。根据术后3、7 d血清miR-124、miR-27a-3p预测患者死亡的截断值，绘制不同血清 miR-124、miR-27a-3p水平患者的生存曲线，并比较其28 d生存率。以患者是否死亡为因变量，以术后3、7 d血清miR-124、miR-27a-3p为自变量，进行影响患者死亡的多因素Logistic回归分析。P0.05为差异有统计学意义。2 结果 2.1两组不同时间点血清miR-124、miR-27a-3p水平比较与术前比较，两组术后3、7 d血清miR-124水平均升高、miR-27a-3p水平均降低，且死亡组变化更明显（P均9.47、10.31者为高危患者（n=57、55），其余为低危患者（n=51、53）。术 后 3、7 d 血 清 miR-27a-3p 分 别0.07、0.06者为高危患者（n=52、58），其余为低危患者（n=56、50）。生存曲线分析结果显示，术后3 d miR-124、miR-27a-3p高危患者28 d生存率与低危患者比较差异均无统计学意义（P均0.05）；术后7 d miR-124、miR-27a-3p高危患者28 d生存率均低于低危患者（P均0.05）。见OSID码图47。2.4术后 3、7 d 血清 miR-124、miR-27a-3p 与患者死亡的关系术后 3、7 d miR-124 水平升高、miR-27a-3p 水平降低均是患者死亡的独立影响因素（P 均0.05）。见表3。3 讨论 据统计，SAH发病率占脑血管病的12%20%，其中80%左右为脑动脉瘤破裂所致10。对于老年动脉瘤性SAH患者而言，颅内动脉瘤介入栓塞术是最为有效的治疗手段，然而动脉瘤所致原发性脑损表1两组不同时间点血清miR-124、miR-27a-3p水平 比较（-x s）组别生存组 术前 术后3 d 术后7 d死亡组 术前 术后3 d 术后7 dn182 18miR-1246.67 2.017.58 2.27*#8.51 2.55*#6.48 2.229.85 2.96*11.06 3.32*miR-27a-3p0.11 0.040.09 0.03*#0.07 0.02*#0.12 0.030.06 0.01*0.05 0.01*注：与同组术前比较，*P0.05；与死亡组同时间点比较，#P0.05。表2术后3、7 d血清miR-124、miR-27a-3p预测患者死亡的ROC曲线分析结果指标术后3 d血清miR-124术后7 d血清miR-124术后3 d血清miR-27a-3p术后7 d血清miR-27a-3pAUC0.7620.8160.7450.79795%CI0.6710.8390.7230.8790.6520.8240.7090.868P0.010.010.019.4710.310.070.06敏感度（%）61.1177.7888.8988.89特异度（%）93.3375.5664.4457.7866山东医药2023 年第 63 卷第 23 期伤及继发性病理生理改变会对患者的预后产生消极影响。目前国内外医疗机构对于老年动脉瘤性SAH的鉴别诊断多依赖于影像学手段，虽具有一定价值，但缺乏客观有效的评价指标，且无法判断患者预后恢复情况，故寻找有效的生物标志物对于评估老年动脉瘤性SAH的预后尤为重要。miRNA属于高度保守的非编码小RNA，可通过促进mRNA降解、抑制mRNA翻译等途径参与转录后基因表达调控。传统观念认为，基因表达调控多发生于细胞内；新近研究显示，血清、脑脊液等细胞外液中存在稳定miRNA，并发现脑出血患者外周血与病灶组织存在几乎平行的 miRNA 表达谱11。miR-124属于脑组织特异性miRNA，最早发现于小鼠脑组织，随后发现其在果蝇、非洲爪蟾、人体大脑中均呈动态变化，在神经系统发育、损伤、修复等生理病理过程中起着重要作用，有可能成为药物治疗的作用靶点之一12。近年来越来越多的研究表明，miR-124水平变化与缺血性脑损伤有关13-14。体外实验发现，miR-124在大鼠脑组织缺血半影区的表达明显高于非缺血区，考虑原因与其可抑制细胞凋亡而发挥神经保护作用有关15。冯锦丽等16认为，血清miR-124与急性缺血性脑梗死患者梗死面积密切相关。杨剑宏17研究指出，血清miR-124在急性脑出血患者中呈高表达，特别是预后不良患者。但目前尚未见血清miR-124与动脉瘤性SAH、高血压脑出血等缺血性脑损伤疾病患者预后的关系。故本研究尝试分析其与动脉瘤性SAH术后患者预后的关系，结果显示生存组术后3、7 d的血清miR-124水平均低于死亡组，提示血清miR-124水平升高可能与患者预后不良有关。推测原因，可能是miR-124可调节下游靶基因Rho蛋白二磷酸鸟苷解离抑制因子（RhoGDIA），抑制血管内皮及血管平滑肌细胞迁移、增殖，损伤血管壁，引发脑出血；同时miR-124可下调神经元 RhoG 表达，中断 ELMO/Dock180/Rac1信号通路，阻碍神经突向外生长，减少轴突及树突分支，增加脑出血量，加剧神经功能损伤，导致疾病恶化，甚至死亡18。miR-27a 是基因间 miRNA，在多种细胞及血管丰富的组织中均有表达，可参与血管生成、炎症反应、糖脂代谢等病理生理过程。既往关于 miR-27a的研究多集中于肿瘤，近年研究发现，miR-27a可通过上调脑组织 Toll 样受体 4（TLR4）、p38 蛋白磷酸化、释放炎症因子等，加剧脑缺血小鼠的脑组织损伤19。张秀萍等20指出，miR-27a可通过调节细胞周期基因、凋亡基因参与脑缺血损伤的病理生理过程。miR-27a-3p 是 miR-27a 的剪切成熟体之一，包含B细胞淋巴瘤/白血病2基因Bcl-2相关转录因子1（BCLAF1）及Bcl-2结合成分3（BBC3）等靶基因，且两者均与凋亡基因Bcl-2密切相关。值得注意的是，脑出血疾病会增加Bcl-2表达，进而引起继发性脑损伤，若未及时诊治可加剧疾病进展，导致患者死亡21。但miR-27a-3p能否通过靶基因调控Bcl-2表达尚不得知。本研究结果显示，生存组术后3、7 d的血清 miR-27a-3p 水平均低高于死亡组，提示血清miR-27a-3p水平降低可能与患者预后不良有关。分析原因，可能是 miR-27a-3p 下调可增加 BCLAF1、BBC3等靶基因表达，增强Bcl-2基因的促凋亡作用，加剧动脉瘤性SAH术后患者的继发性脑损伤，从而造成病情恶化22。本研究进一步采取ROC及生存曲线分析发现，血清 miR-124、miR-27a-3p 对老年动脉瘤性 SAH 术后患者死亡的预测价值较高，特别是术后7 d的血清miR-124 和 miR-27a-3p，二者联合预测患者死亡的AUC为0.906，高于两项指标单独预测的AUC。本研究Logistic回归分析结果显示，术后3、7 d miR-124水平升高、miR-27a-3p水平降低是患者死亡的独立影响因素。综上所述，老年动脉瘤性SAH经颅内动脉瘤介入栓塞术患者术后血清 miR-124 水平升高、miR-27a-3p水平降低，且死亡患者变化更明显，二者联合检测有助于评估患者的生存情况。因此，做好老年动脉瘤性 SAH 术后 miR-124、miR-27a-3p 的监测工作，对预测预后、指导临床治疗均具有重要意义。参考文献：1CHO W S，KIM J E，PARK S Q，et al.Korean clinical practice guidelines for aneurysmal subarachnoid hemorrhageJ.Korean Neurosurg Soc，2018，61（2）：127-166.2余金辉，朱继，何朝晖，等.高分级动脉瘤性蛛网膜下腔出血手表3术后3、7 d血清miR-124、miR-27a-3p影响患者死亡的多因素Logistic回归分析结果变量术后3 d血清miR-124术后7 d血清miR-124术后3 d血清miR-27a-3p术后7 d血清miR-27a-3p1.0841.5211.0211.415SE0.4690.5450.4470.501Wald 25.3397.7925.2217.973P0.050.010.050.01OR（95%CI）2.956（1.387 6.298）4.578（2.07410.106）2.777（1.051 7.337）4.115（1.877 9.021）67山东医药2023 年第 63 卷第 23 期术治疗患者预后不良的影响因素分析 J.中国脑血管病杂志，2019，16（6）：288-295.3黄秋萍，袁欢，王宜林，等.miRNA对自然杀伤细胞生长发育及功能的调控作用 J.分子诊断与治疗杂志，2019，11（1）：69-73.4杨磊，张栋梁，韩永丰，等.高分级动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者血miRNA155水平预测神经源性肺水肿发生的研究 J.河北医科大学学报，2018，39（5）：543-546，551.5谢尊椿，刘彬，周美鸿，等.急性缺血性脑卒中患者血浆miR-124 表达变化及其意义J.实用医学杂志，2019，35（3）：343-345.6金枫，唐菱，王加璐，等.miR-27a-3p在高血压性脑出血患者外周血中呈下调表达 J.中国临床神经科学，2017，25（4）：361-367.7中华医学会神经病学分会，中华医学会神经病学分会，脑血管病学组中华医学会神经病学分会神经血管介入协作组，等.中国蛛网膜下腔出血诊治指南2019 J.中华神经科杂志，2019，52（12）：1006-1021.8张阿芳，姚莉，张泓，等.血糖波动对动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者预后价值的探讨J.中国急救医学，2018，38（10）：869-873.9李明超，郭永涛，李正明，等.颅内动脉瘤破裂经介入栓塞治疗前后血清 MMP-2、MMP-9 的变化与预后研究 J.现代医学，2018，46（2）：144-149.10LIDINGTON D，KROETSCH J T，BOLZ S S，et al.Cerebral artery myogenic reactivity：the next frontier in developing effective interventions for subarachnoid hemorrhageJ.J Cereb Blood Flow Metab，2018，38（1）：17-37.11周莹，孟繁兴，刘雪梅，等.微RNA与缺血性脑卒中的研究进展 J.医学综述，2019，25（17）：3355-3359.12WANG Z，LU G，SZE J，et al.Plasma miR-124 is a promising candidate biomarker for human intracerebral hemorrhage strokeJ.Mol Neurobiol，2018，55（7）：5879-5888.13杨永祥，叶玉勤，苏鑫洪，等.外泌体源性miR-124对创伤性脑损伤急性期小胶质细胞活化状态的作用研究 J.中华神经医学杂志，2018，17（12）：1189-1194.14雷荟仔，王林辉，李昱，等.MiR-124在脑血流灌注不足中的表达变化及其作用J.重庆医科大学学报，2017，42（3）：334-338.15SONG Y，LI Z，HE T，et al.M2 microglia-derived exosomes protect the mouse brain from ischemia-reperfusion injury via exosomal mir-124 J.Theranostics，2019，9（10）：2910-2923.16冯锦丽，王卫.急性脑梗死患者循环miR-124表达水平与脑梗死体积、神经功能缺损程度的关系及其诊断价值 J.卒中与神经疾病，2018，25（1）：21-24，38.17杨剑宏.微小RNA在急性脑出血患者血清中的表达及其临床意义 J.现代实用医学，2015，27（6）：736-737.18VUOKILA N，LUKASIUK K，BOT A M，et al.miR-124-3p is a chronic regulator of gene expression after brain injuryJ.Cell Mol Life Sci，2018，75（24）：4557-4581.19XI T，JIN F，ZHU Y，et al.Mir-27a-3p protects against blood-brain barrier disruption and brain injury after intracerebral hemorrhage by targeting endothelial aquaporin-11J.J Biol Chem，2018，28（52）：20041-20050.20张秀萍，翟凤国，关悦，等.脑缺血再灌注损伤大鼠皮质微小核糖核酸表达谱的变化 J.中国脑血管病杂志，2019，9（6）：307-310.21ABUZEID E H，HUSSEIN M M A，ALI H，et al.Ascorbic acid protects male rat brain from oral potassium dichromate-induced oxdative DNA damage and apoptotic changes：the expression patterns of caspase-3，p53，Bax，and Bcl-2 genes J.Environ Sci Pollut Res Int，2018，25（13）：13056-13066.22XI T，JIN F，ZHU Y，et al.miR-27a-3p protects against bloodbrain barrier disruption and brain injury after intracerebral hemorrhage by targeting endothelial aquaporin-11J.J Biol Chem，2018，293（52）：20041-20050.（收稿日期：2023-04-15）68