药品薄层色谱扫描法.doc

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药品薄层色谱扫描法

一 目 的：制定薄层扫描检查法，规范薄层扫描测定的操作。
二 适用范围：适用于薄层扫描法的测定。
三 责 任 者：品控部。
四 正 文：
1.简述
薄层扫描法指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点或对经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检查或含量测定。
2.仪器
2.1 仪器构成 薄层扫描法所用的仪器薄层扫描仪。该仪器主要同光源、单色器、样品室、薄层板台架、检测器、记录仪及数据处理系统等部分组成。
光源：色括氘灯（200～370nm）、钨灯（370～700nm）或氙灯，有的还加有汞灯，光源的转换通过转动反射镜而完成。
单色器：包括光栅与夹缝。入口夹缝固定，出口夹缝可根据需要调整其高度与宽度。由光源发出的复合光，经光源反射镜反射后进入入口夹缝，经光栅色散后由准直镜反射到出口夹缝得到单色光，再经平面镜向下反射到薄层板上。
薄层板台架及驱动装置：仪器中的薄层板台架可完成薄层板的X轴和Y轴方向的移动。
检测器：包括监测用光电倍增管及反射测定用与透射测定用的光电倍增管。
反射测定时，光束照射到薄层板上斑点以前的光，一部分被石英窗板反射由监测光电倍增管接受，另一部分照射到斑点，除部分光被样品吸收后作为吸收度信号。透射测定时，由透射光电倍增管代替反射光电倍增管，它的输出信号与监测光电倍增管的输出信号之比，经对数转换后得到透射测定的吸收度信号。
数据处理：设定适当参数，采集检测器的吸收度信号进行积分计算，通常仪器上还具有对信号作不同处理的功能。如背景校正、提高信噪比、工作曲线直线化、平滑基线等，按要求进行数据的再处理，然后送至打印机，打印谱图及报告。
2.2 仪器性能检定
2.2.1 仪器波长准确度的检查 用低压汞灯在200～700nm波长范围内以荧光方式对空白的硅胶薄层板扫描零吸收图谱，图谱中峰位波长与相应已知波长的差值即为波长准确度，汞灯谱线的已知波长为253.6、313.0、334.2、365.0、404.7、435.8、546.1、578.0nm，有的仪器规定波长准确度应不大于±8nm。
日常工作中波长准确度的初步核对可采用以下方法：于硅胶G薄层板上点样10ul浓度约为10mg/ml的磷酸氯喹水溶液，用氘灯以反射方式对样品斑点作光谱扫描（220～360nm），扫描所得谱图应在（257±10）nm和（343±10）nm处有最大吸收峰。
2.2.2 薄层板斑点扫描积分值重现性的考核 于硅胶G薄层板上点样10ul浓度约为0.5mg/ml的甲基黄的甲醇溶液，以苯为展开剂，展开5后，晾干，扫描10次，波长λS=400nm，λR=600nm，以甲基黄斑点的吸收度积分值计算相对标准偏差。锯齿扫描相对标准偏差应≤1.5%，线性扫描相对标准偏差应≤2.0%。
3 操作方法
薄层扫描法常用于一些药物制剂中成分的含量测定，其操作一般分为供试品前处理；点样于薄层板、展开、上机扫描和数据处理等步骤。
3.1 供试品前处理 按各品种项下规定执行，但应取样2份，平行操作。
3.2 薄层色谱操作步骤要严格按薄层色谱法标准操作规程要求进行，以保证色谱质量。
3.3 上机扫描 具体操作除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合实际情况选择进行。检测方法有光吸收法（紫外光或可见光）和荧光法，测量方法一般采用反射法，电泳谱用透射法，扫描波长选择有单波长和双波长两种，单波长较适用于分离度较好、无背景干扰的薄层，双波长扫描是用于两种波长的单色光交替照射斑点，测斑点对两种波长单色光吸收度之差。正确选择好两个波长，以减少分离度欠佳的两个斑点间的相互干扰，排除背景干扰，提高检测灵敏度，一般采用被扫描成分的最大吸收波长为样品波长（λS），用对该成分无吸收或最小吸收波长为参比波长（λR）。扫描方式有线性扫描和锯齿扫描，线性扫描是用一狭窄光带照射于薄层板的一端，薄层板相对于光带作直线运动，它较适用于较规则的圆形斑点，所能测斑点的大小，以仪器的光带长度为上限。锯齿扫描系用截面积为正方形的光束照射薄层板，光束的运动轨迹为锯齿形或矩形，由于光束反复通过斑点，积分值较大，重复性较好，并可适用于形状欠规则斑点的定量，但扫描速度较慢。薄层扫描用于含量测定时，扫描的步进跨距不宜太大，如岛津产的薄层扫描仪可设△Y=0.1mm。
3.4 薄层扫描定量方法有内标法与外标法，而以外标法较常用。外标法一般应分别精密称取对照品适量，配制高、低两种浓度的对照品溶液；供试品溶液应制备至少2份；每份对照品溶液和供试品溶液在同一薄层板上点样不少于2个斑点，交叉点样。各份溶液所点斑点测定结果对其相应平均值的偏差均不得大于3%；供试品测定结果对平均值的偏差也不得大于3%。本法为内插法算，如果供试品的响应值超出二份对照溶液的响应值范围，则应调整相应浓度，使供试品溶液测定的响应值价于高、低浓度对照品溶液响应值之间，并重新准确测定。薄层扫描定量的对照品纯度应符合含量测定用对照品的要求。
4 注意事项
4.1 色谱斑点的分离度待测成分斑点与相邻斑点的分离最好在1.5以上，至少不能小于1.0，背景干扰应尽量小。
4.2 待测成分斑点与对照品斑点的一致性待没斑点与对照品斑点目测颜色或荧光应一致，原们扫描得到的吸收光谱应与对照品基本相符。
4.3 测定记录必须包含薄层扫描图、积分记录、工作曲线及回归方程和相关系数，测定结果的计算应用两点内插法或回归方程（多水平校正法）计算。

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