苦参碱调节IL-6_STAT3_NF-κB信号通路对炎症性肠病大鼠Th17_Treg平衡的影响.pdf

第 卷第期年月西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)J o u r n a l o fX ia nJ i a o t o ngU n i v e r s i ty(M e d i c a l S c i e n c e s)V o l N o S ep 本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版中医药研究苦参碱调节I L /S T A T/N F B信号通路对炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡的影响吴茸,王栋,王晶敏,张玮宇,陶庆松(东南大学附属中大医院普外科,江苏南京 )摘要:目的探讨苦参碱(MT)调节白细胞介素(I L )/信号转导和转录激活因子(S T A T)/核转录因子 B(N F B)通路对炎症性肠病大鼠辅助性T细胞(T h )/调节性T细胞(T r e g)平衡的影响.方法按照随机数字表法将S D大鼠分为空白对照组(C K组)、M o d e l组,低、中、高剂量MT组(MT L组,m g/k g;MT M组,m g/k g;MT H组,m g/k g),美沙拉嗪组(M S LM组,g/k g)、MT H r I L (I L 激活剂)组(m g/k g m g/k g),每组 只.除C K组外,其余组大鼠均采用 g/L三硝基苯磺酸(m g/k g)缓冲液与 m L/L乙醇按照 比例混匀后灌肠以构建炎症性肠病大鼠模型,建模成功后,分别进行给药处理,每天次,持续周.分别在给药、周时对大鼠进行体质量的测量;比较各组大鼠结肠长度的变化;HE染色检测大鼠结肠组织病理损伤;E L I S A法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子(TN F )、白细胞介素(I L)(I L )、I L 水平;流式细胞术检测大鼠外周血中T h 、T r e g细胞比例;W e s t e r nb l o t t i n g检测大鼠结肠组织中维甲酸相关孤核受体 t(R O R t)、叉头框蛋白P(F o x p)、I L、p S T A T、p N F Bp 蛋白表达.结果与C K组比较,M o d e l组大鼠结肠组织病理损伤严重,体质量(、周时)、I L 水平、T r e g细胞比例、F o x p 蛋白表达降低,结肠变短,T N F 、I L 水平、T h 细胞比例、T h /T r e g比值、R O R t、I L 、p S T A T、p N F Bp 蛋白表达增高(P);与M o d e l组比较,MT L组、MT M组、MT H组、M S LM组对应指标变化趋势与上述相反(P);r I L 减弱了高剂量MT对炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡的促进作用.结论MT可能通过抑制I L /S T A T/N F B信号通路,促进炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡.关键词:苦参碱;炎症性肠病;白细胞介素/信号转导和转录激活因子/核转录因子 B(I L /S T A T/N F B)通路;辅助性T细胞/调节性T细胞(T h /T r e g)中图分类号:R 文献标志码:AD O I:/j d y x b 收稿日期:修回日期:基金项目:国家自然科学基金青年项目资助(N o )S u p p o r t e db yt h eN a t u r a lS c i e n c e sF o u n d a t i o no fY o u t h(N o )通信作者:陶庆松 E m a i l:q q c o m网络出版地址:h t t p s:/k n s c n k i n e t/k c m s/d e t a i l/R h t m l()I n f l u e n c eo fm a t r i n eo nT h /T r e gb a l a n c e i nr a t sw i t h i n f l a mm a t o r yb o w e l d i s e a s eb yr e g u l a t i n gI L /S T A T/N F Bs i g n a l i n gp a t h w a yWUR o n g,WANGD o n g,WANGJ i n g m i n,Z HANG W e i y u,T AOQ i n g s o n g(D e p a r t m e n to fG e n e r a lS u r g e r y,Z h o n g d aH o s p i t a lA f f i l i a t e dt oS o u t h e a s tU n i v e r s i t y,N a n j i n g ,C h i n a)A B S T R A C T:O b j e c t i v eT oi n v e s t iga t et h ei n f l u e n c eo fm a t r i n e(MT)o nt h eb a l a n c eo fT h e lpe rc e l l(T h )/r egu l a t o ryTc e l l s(T r eg)i nr a t sw i t hi n f l a mm a t o ryb o w e ld i s e a s ebyr egu l a t i ngi n t e r l e u k i n (I L )/s ign a lt r a n s d u c e ra n da c t i v a t o ro f t r a n s c r ipt i o n(S T A T)/n u c l e a r t r a n s c r ipt i o nf a c t o r B(N F B)pa t h w ayM e t h o d s S Dr a t sw e r egr o upe d i n t oc o n t r o lc h e c kgr o up(C Kgr o up),m o d e lgr o up,l o w d o s eMTgr o up(MT Lgr o up,mg/kg),m e d i u m d o s eMTgr o up(MT Mgr o up,mg/kg),h igh d o s eMTgr o up(MT Hgr o up,mg/kg),m e s a l a z i n egr o up(M S LMgr o up,g/kg),a n dMT H r I L (I L a c t i v a t o r)gr o up(mg/kg mg/kg)a c c o r d i ngt ot h er a n d o mn u m b e r t a b l em e t h o d,w i t h i ne a c hgr o up E x c eptf o rt h eC Kgr o up,t h er a t s i no t h e rgr o upsa l l r e c e i v e dw i t ht r i n i t r o b e n z e n e s u l f o n i ca c i d(mg/kg)b u f f e rs o l u t i o nm i x e dw i t h e t h a n o la tar a t i oo f a n dt h e ne n e m at oc o n s t r u c tar a tm o d e l o f i n f l a mm a t o ryb o w e l d i s e a s e A f t e r t h e s u c c e s s f u lm o d e l i ng,西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版t h eyw e r et r e a t e dw i t hd r uga d m i n i s t r a t i o no n c ead ayf o r w e e k s T h eb o dyw e igh t o f r a t sw a sm e a s u r e da t,a n dw e e k so fa d m i n i s t r a t i o n;t h ec h a nge so fc o l o nl e ngt ho fr a t s i ne a c hgr o upw e r ec o mpa r e d;H Es t a i n i ngw a su s e dt od e t e c t t h epa t h o l ogi c a l d a m ageo f r a t c o l o nt i s s u e;t h e l e v e l s o f t u m o rn e c r o s i s f a c t o r (T N F ),i n t e r l e u k i n(I L)a n dI L i ns e r u mo f r a t sw e r ed e t e c t e dbyE L I S A;t h epr opo r t i o n so fT h a n dT r egc e l l s i npe r iph e r a lb l o o do f r a t sw e r ed e t e c t e dbyf l o wcyt o m e t ry;W e s t e r nb l o t t i ngtw a spe r f o r m e dt od e t e c t t h epr o t e i ne xpr e s s i o no fr e t i n o i ca c i d r e l a t e do rph a nr e c ept o r t(ROR t),f o r k h e a db o xpr o t e i nP(F o xp),I L ,p S T A T,a n dp N F Bp i nr a t c o l o nt i s s u e R e s u l t s C o mpa r e dw i t ht h eC Kgr o up,t h ec o l o nt i s s u eo ft h em o d e lgr o upw a ss e v e r e lyd a m age dbypa t h o l og y,a n d t h eb o dyw e igh t(a t,a n dw e e k s),t h e l e v e l o f I L ,t h epr opo r t i o no fT r egc e l l,a n dt h ee xpr e s s i o no fF o xppr o t e i nw e r ed e c r e a s e d,t h ec o l o nl e ngt hs h o r t e n e d,t h el e v e l so fT N F ,I L ,t h epr opo r t i o n so fT h c e l l,T h /T r egr a t i o,a n d t h epr o t e i ne xpr e s s i o no fROR t,I L ,p S T A T,a n dp N F Bp i n c r e a s e d(P)C o mpa r e dw i t ht h em o d e lgr o up,t h ec o r r e spo n d i ngi n d i c a t o r so ft h e MT Lgr o up,MT Mgr o up,MT Hgr o up,a n dM S LMgr o uph a d t h eop po s i t e t r e n d s(P);r I L a t t e n u a t e d t h epr o m o t i nge f f e c t o fh igh d o s eMTo nT h /T r egb a l a n c e i n i n f l a mm a t o ryb o w e l d i s e a s e r a t s C o n c l u s i o n MTm aypr o m o t eT h /T r egb a l a n c e i ni n f l a mm a t o ryb o w e l d i s e a s er a t sbyi n h i b i t i ngI L /S T A T/N F Bs ign a l i ngpa t h w ayK E Y WO R D S:m a t r i n e;i n f l a mm a t o ryb o w e ld i s e a s e;i n t e r l e u k i n /s ign a l t r a n s d u c e ra n da c t i v a t o ro ft r a n s c r ipt i o n/n u c l e a rt r a n s c r ipt i o nf a c t o r B(I L /S T A T/N F B)pa t h w ay;Th e lpe rc e l l/r egu l a t o ryTc e l l(T h /T r eg)炎症性肠病是一种慢性、炎症性和自身免疫性肠道疾病,其已成为一种全球性疾病,对人类健康构成严重威胁,发病率和癌变率都很高 .免疫失衡是公认的炎症性肠病发病机制之一,在炎症性肠病的发生、发展和预后中起重要作用.其中,既往研究已证实辅助性T细胞(Th e l p e rc e l l,T h )和调节性T细胞(r e g u l a t o r yTc e l l,T r e g)失衡可促进炎症性肠病进展.近几十年来,尽管研究对于炎症性肠病的治疗药物有所突破,但由于免疫抑制剂的不良反应及生物制剂的昂贵成本,限制了药物的使用.因此,开发新的药物以调节炎症性肠病过程中T h /T r e g平衡具有重要意义.苦参碱(m a t r i n e,MT)是一种常见中药苦参的提取物,其具有抗病毒、抗炎、抗氧化和抗肿瘤等活性,已报道MT可通过改善结肠组织病理损伤进而对溃疡性结肠炎大鼠发挥保护作用.而有关MT对炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡的影响尚未见报道.已有研究表明,抑制白细胞介素(i n t e r l e u k i n ,I L)/信号转导和转录激活因子(s i g n a lt r a n s d u c e ra n da c t i v a t o ro ft r a n s c r i p t i o n,S T AT)/核转录因子 B(n u c l e a rt r a n s c r i p t i o nf a c t o r B,N F B)通路(I L /S T AT/N F B通路)可减轻三硝基苯磺酸诱导的 克 罗 恩 病 大 鼠 结 肠 损 伤 及 炎 症 反 应;I L /S T AT 信号通路的激活可引发支原体肺炎过程中的T h /T r e g细 胞 失 衡.但 是,尚 不 明 确MT能否通过调控I L /S T AT/N F B信号通路调节炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡.因此,本研究主要探究MT对炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡的影响及其作用机制.材料与方法动物 只周龄体质量为 g的S P F级雄性S D大鼠购自广东维通利华实验动物技术有限公司,生产许可证号为S C X K(粤).所有动物实验得到东南大学附属中大医院动物伦理委员会的批准.主要试剂MT(规格 m g)购自北京伊塔生物公司;美沙拉嗪(M e s a l a m i n e,M S LM)购自上海莼试生物公司;I L 激活剂重组大鼠I L 蛋白(r I L )购自伊艾博(武汉)科技公司;大鼠肿瘤坏死因子(t u m o rn e c r o s i s f a c t o r ,T N F )、I L 、I L E L I S A试剂盒购自上海中乔新舟生物公司;a n t i R a t A P C I L 、a n t i R a t F I T C C D、a n t i R a t P E F o x p 购自武汉伊莱瑞特生物公司;兔源一抗维甲酸相关孤核受体 t(r e t i n o i ca c i d r e l a t e do r p h a nr e c e p t o r t,R O R t)、叉头框蛋白P(F o r k h e a dB o xP r o t e i nP,F o x p)、I L 、p S T AT、p N F B p 、S T AT、N F B p 、GA P DH及辣根过氧化物酶(HR P)标记的山羊抗兔二抗均购自英国A b c a m公司.实验分组、造模及给药按照随机数字表法将 只大鼠随机分为空白对照组(C K组)、M o d e l组、低 剂 量MT组(MT L期吴茸,王栋,王晶敏,等苦参碱调节I L /S T A T/N F B信号通路对炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡的影响本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版组)、中 剂 量MT组(MT M组)、高 剂 量MT组(MT H组)、美沙拉嗪组(M S LM组)、MT H r I L (I L 激活剂)组,每组 只.除C K组外,其余组大鼠均需参照文献 构建炎症性肠病大鼠模型.模型构建过程:大鼠禁食不禁水 h后,用 m g/k g戊巴比妥钠麻醉大鼠,将直径mm的塑料软管从大鼠肛门处插入c m以方便灌肠,采用 g/L三硝基苯磺酸(m g/k g)缓冲液与 m L/L乙醇按照 比例混匀后灌肠以构建模型,C K组大鼠则灌肠等量的生理盐水,灌肠 s后再让大鼠保持倒立的姿势m i n.造模成功的判定标准:大鼠出现腹泻、脓血便、厌食、体质量下降等症状.造模成功后,根据前期预实验结果及参考文献 进行给药处理,MT L组、MT M组、MT H组大鼠分别经腹腔注射、m g/k gMT(注射药物体积均为 m L/k g,注射药物分别为、m g/m L的MT),且均需灌胃等体积的生理盐水;M S LM组大鼠需灌胃 g/k gM S LM(灌胃药物体积均为 m L/k g,灌胃药物为 m g/m L的M S LM)且腹腔注射等体积的生理盐水;MT Hr I L 组 大 鼠 需 腹 腔 注 射 m g/k gMT(注 射 药 物 体 积 均 为 m L/k g,注 射 药 物 为 m g/m L的MT)和 m g/k gr I L (注射药物体积均为m L/k g,注射药物为 m g/m L的r I L ),且需灌胃等体积的生理盐水;C K组、M o d e l组大鼠均需 腹 腔 注 射 和 灌 胃 等 体 积 的 生 理 盐 水,给 药次/d,持续周.标本采集分别在给药、周时,测量各组大鼠体质量;末次给药 h后,腹腔注射 m g/k g戊巴比妥钠麻醉全部大鼠,经腹主动脉取外周血m L,其中m L经离心得血清用于T N F 、I L 、I L 水平的检测;剩余m L用于T h /T r e g比值的检测.采血结束后,处死大鼠.每组选取只大鼠用于大鼠结肠长度的检测;各组剩余的 只大鼠的结肠组织分为两部分(每部分包括只大鼠的结肠组织),一部分固定于 g/L多聚甲醛中用于HE染色,另一部分冻存于 用于W e s t e r nb l o t t i n g实验.大鼠结肠长度测定及结肠组织病理观察每组随机各选取只大鼠,在处死后取结肠,测量结肠长度.将项中收集的结肠组织样品经 g/L多聚甲醛溶液固定后,常规制作石蜡切片,HE染色.通过光学显微镜观察结肠组织病理变化.E L I S A法检测大鼠血清中T N F 、I L 、I L 水平严格按照试剂盒说明书,检测大鼠血清中T N F 、I L 、I L 水平.流式细胞术检测大鼠外周血中T h 、T r e g细胞比例外周血淋巴细胞分离液用于分离大鼠外周血单个核细胞,将单个核细胞密度调整为/m L.取 L单个核细胞悬液置于流式管中,加入流式抗 体a n t i R a t F I T C C D、分 别 将a n t i R a t A P C I L 用于标记T h 或a n t i R a t P E F o x p 用于标记T r e g,室温染色 m i n,离心、弃上清、用多聚甲醛重悬细胞后,利用流式细胞仪检测大鼠外周血单个核细胞中T h 细胞比例和T r e g细胞比例,并计算T h /T r e g比值.W e s t e r nb l o t t i n g检测大鼠结肠组织中蛋白表达利用R I P A裂解缓冲液从结肠组织中提取蛋白,蛋白通过定量、电泳、转膜、封闭等处理后,于一抗R O R t()、F o x p()、I L ()、p S T AT()、p N F Bp ()、S T AT()、N F Bp ()、GA P DH()中,孵育过夜,再与二抗()室温孵育h.加入E C L试剂观察蛋白印迹,利用I m a g eJ软件评估蛋白条带灰度值.统计学分析G r a p h P a dP r i s m用于统计分析,所有数据以均数标准差(xs)表示.各组大鼠体质量的时间变化与组别之间的比较采用重复测量设计资料的方差分析;采用单因素方差分析进行多组间比较,两两比较采用S NK q检验.P 为差异有统计学意义.结果各组大鼠体质量变化各组大鼠体质量的时间变化与组别之间具有交互效应(P);组间比较结果显示,在给药、周后组大鼠体质量组间比较差异有统计学意义(P);不同时间比较结果显示,给药、周后,除C K组之外的其余组大鼠体质量低于给药周(P);给药、周后体质量低于给药周(P );给 药周 后 体 质 量 低 于 给 药周(P ,表).西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版表M T对各组大鼠体质量的影响T a b E f f e c t so fMTo nb o d ym a s so f r a t s i ne a c hg r o u p(xs,n)组别时间周周周周C K组 a a b a b cM o d e l组 a a b a b cMT L组 a a b a b cMT M组&a&a b&a b cMT H组&M S LM组&a b&a b cMT H r I L 组 a a b a b c与C K组比较,P;与M o d e l组比较,P ;与MT L组 比 较,&P ;与MT M组 比 较,P ;与MT H组 比 较,P.与周比较,aP;与周比较,bP;与周比较,cP.各组大鼠结肠长度变化情况与C K组比较,M o d e l组大鼠结肠变短(P );与M o d e l组比较,MT L组、MT M组、MT H组、M S LM组大鼠结肠增长(P);与MT H组比较,MT H r I L 组 大 鼠 结 肠 变 短(P ,图).注:A:C K组;B:M o d e l组;C:MT L组;D:MT M组;E:MT H组;F:M S LM组;G:MT H r I L 组.与C K组 比 较,P ;与M o d e l组比较,P;与MT L组比较,&P;与MT M组比较,P;与MT H组比较,P.图各组大鼠结肠长度的比较F i g C o m p a r i s o no f c o l o n i c l e n g t h i ne a c hg r o u p各组大鼠结肠组织病理变化HE染色结果显示,C K组大鼠结肠组织结构正常,无炎性细胞浸润;M o d e l组大鼠结肠组织结构紊乱,且存在大量炎性细胞浸润的现象;与M o d e l组比较,MT L组、MT M组、MT H组、M S LM组大鼠结肠组织病理损伤减轻;与MT H组比较,MT Hr I L 组大鼠结肠组织病理损伤加重(图).A:C K组;B:M o d e l组;C:MT L组;D:MT M组;E:MT H组;F:M S LM组;G:MT H r I L 组.图H E染色检测各组大鼠结肠组织病理损伤()F i g P a t h o l o g i c a l l e s i o no f c o l o nt i s s u eo f r a t s i ne a c hg r o u pd e t e c t e db yHEs t a i n i n g()期吴茸,王栋,王晶敏,等苦参碱调节I L /S T A T/N F B信号通路对炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡的影响本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版各组大鼠外周血中T h 细胞和T r e g细胞比例的变化流式细胞术检测结果显示,与C K组比较,M o d e l组大鼠外周血中T h 细胞比例、T h /T r e g比值升高,T r e g细胞比例降低(P);与M o d e l组比较,MT L组、MT M组、MT H组、M S LM组大鼠外周血中T h 细胞比例、T h /T r e g比值降低,T r e g细胞比例升高(P );与MT H组比较,MT Hr I L 组大鼠外周血中T h 细胞比例、T h /T r e g比值升高,T r e g细胞比例降低(P,图).AG:C K组、M o d e l组、MT L组、MT M组、MT H组、M S LM组、MT H r I L 组流式细胞术检测结果.H:统计学分析.与C K组比较,P ;与M o d e l组比较,P ;与MT L组比较,&P ;与MT M组比较,P;与MT H组比较,P .图流式细胞术检测大鼠外周血中T h 、T r e g细胞的比例F i g P r o p o r t i o no fT h a n dT r e gc e l l si np e r i p h e r a lb l o o do fr a t sd e t e c t e db yf l o wc y t o m e t r y各组大鼠血清中T N F 、I L 、I L 水平变化E L I S A检测结果显示,与C K组比较,M o d e l组大鼠血清中T N F 、I L 水平升高,I L 水平降低(P);与M o d e l组比较,MT L组、MT M组、MT H组、M S LM组大鼠血清中T N F 、I L 水平降低,I L 水平升高(P);与MT H组比较,MT Hr I L 组大鼠血清中T N F 、I L 水平升高,I L 水平降低(P,表).西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版表M T对各组大鼠血清中T N F 、I L 、I L 水平的影响T a b E f f e c t so fMTo ns e r u ml e v e l so fT N F ,I L a n dI L o f r a t s i ne a c hg r o u p(xs,p g/m L,n)组别TN F I L I L C K组 M o d e l组 MT L组 MT M组&MT H组&M S LM组&MT H r I L 组 与C K组比较,P;与M o d e l组比较,P ;与MT L组 比 较,&P ;与MT M组 比 较,P ;与MT H组 比 较,P.各组大鼠结肠组织中R O R t、F o x p 及I L /S T A T/N F B通路相关蛋白表达变化W e s t e r nb l o t t i n g检测结果显示,与C K组比较,M o d e l组大鼠结肠组织中R O R t、I L 、p S T AT、p N F Bp 蛋白表达升高,F o x p 蛋 白表达降 低(P);与M o d e l组比较,MT L组、MT M组、MT H组、M S LM组大鼠结肠组织中R O R t、I L 、p S T AT、p N F Bp 蛋白表达降低,F o x p 蛋白表达升高(P );与MT H组比较,MT H r I L 组 大 鼠 结 肠 组 织 中R O R t、I L 、p S T AT、p N F Bp 蛋白表 达升高,F o x p 蛋 白 表 达 降 低(P,图).与C K组比较,P;与M o d e l组比较,P;与MT L组比较,&P;与MT M组比较,P;与MT H组比较,P.图W e s t e r nb l o t t i n g检测各组大鼠结肠组织中R O R t、F o x p、I L 、p S T A T、p N F Bp 蛋白表达(A)及统计学分析(B)F i gW e s t e r nb l o t t i n ga n a l y s i so fR O R t,F o x p,I L ,p S TA T a n dp N F Bp (A)a n ds t a t i s t i ca n a l y s i s(B)i nc o l o nt i s s u e so f r a t s i ne a c hg r o u p讨论尽管目前对于炎症性肠病的治疗已经取得了广泛的进展,但使用治疗该病药物后容易出现明显的不良反应及疗效不显著等问题.三硝基苯磺酸诱导的实验性结肠炎是模拟人类炎症性肠病发病机制的经典模型,本研究利用此方式构建炎症性肠病大鼠模型,结果显示,与C K组比较,M o d e l组大鼠在、周时体质量降低,结肠长度缩短,且结肠组织病理损伤严重,提示炎症性肠病大鼠模型构建成功.期吴茸,王栋,王晶敏,等苦参碱调节I L /S T A T/N F B信号通路对炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡的影响本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版T h l 细胞由幼稚T细胞分化而来,通过与R O R T共同调节I L 的分泌来介导炎症反应;T r e g细胞是具有负性免疫调节的T细胞亚群,也来源于幼稚T细胞,其主要表达转录因子F o x p 并分泌炎症抑制性细胞因子,如I L ,当T r e g细胞功能缺陷时,不能抵抗过度活跃的T h l 细胞的促炎作用,导致许多炎症因子增加,炎症反应放大,从而引起溃疡性结肠炎小鼠结肠组织的损伤.为此,本研究检测了血清中促炎因子I L 、T N F 、抑炎因子I L 及结肠组织中R O R t、F o x p 蛋白表达情况,结果显示,与C K组比较,M o d e l组大鼠血清中T N F 、I L 水平升高,I L 水平降低,结肠组织中R O R t蛋白表达升高、F o x p 蛋白表达降低,提示M o d e l组大鼠存在炎症反应及T h /T r e g失衡.T h 细胞和T r e g细胞数量或功能异常会导致免疫失衡,进而导致自身免疫性疾病的发生.如黄芪甲苷可通过降低T h 细胞比例,提高T r e g细胞比例来抑制结肠炎小鼠的炎症反应.本研究为了进一步检测M o d e l组大鼠T h /T r e g失衡 的 状 态,利 用 流 式 细 胞 术 检 测 了T h 、T r e g细 胞 比 例,结 果 显 示,与C K组 比 较,M o d e l组大鼠外周血中T h 细胞比例、T h /T r e g比值升高,T r e g细胞比例降低,再次证实了M o d e l组大鼠T h /T r e g失衡.MT是一种在苦参属中发现的四环喹啉类生物碱,具有多种药理作用,如抗氧化应激、抗炎症和抗细胞凋亡等.据报道,MT可改善阿尔茨海默病大鼠的认知障碍并调节T h /T r e g平衡;MT可减轻溃疡性结肠炎大鼠肠组织损伤.以上研究表明MT可恢复T h /T r e g平衡,但尚不明确MT能否调节炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡.本研究显示,MT可 抑 制 炎 症 性 肠 病 大 鼠 炎 症 反 应,促 进T h /T r e g平衡,且MT剂量越高,对应的趋势越明显.此外,高剂量MT与M S LM对炎症性肠病大鼠炎症反应的抑制作用以及对T h /T r e g平衡的促进作用差异无统计学意义,提示MT可能通过促 进T h /T r e g平衡来发挥对炎症性肠病大鼠的保护作用.I L 跨膜信号通路可诱导S T AT 激活,活化的S T AT 激活N F B信号通路,进而调节炎性细胞因子的表达,加剧机体的炎症反应.据报道,阻断I L /S T AT/N F B信号通路可减轻硫酸葡聚糖钠诱导的溃疡性结肠炎大鼠的炎症反应;抑制结肠炎小鼠结肠组织中I L 、S T AT、p N F Bp 表达可以恢复结肠炎小鼠肠系膜淋巴结中T h /T r e g平衡.而关于I L /S T AT/N F B信号通路对炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡的影响鲜有报道.本研究显示,MT可抑制炎症性肠病大鼠结肠组织中I L 、S T AT、p N F Bp 蛋白表达,且MT剂量越高,对应的趋势越明显,推测MT可能通过抑制I L/S T AT/N F B信号通路而恢复炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡.为了验证该推测,本研究在高剂量MT作用的基础上再加上I L 激活剂r I L 干预炎症性肠病大鼠,结果显示,r I L 减弱了高剂量MT对炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡的恢复作用,证实了MT可能通过抑制I L /S T AT/N F B信号通路来恢复炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡.综 上 所 述,MT可 能 通 过 抑 制I L /S T AT/N F B信号通路来恢复炎症性肠病大鼠T h /T r e g平衡.该研究可能为炎症性肠病的治疗提供新的思路.参考文献:YA L CH I NM,B AK E RAM,GRAHAMTA,e t a l P r e d i c t i ngc o l o r e c t a lc a n c e ro c c u r r e n c ei nI B DJC a n c e r s(B a s e l),():KA P L ANGG,W I ND S O RJW T h ef o u repi d e m i o l ogi c a l s t a ge s i nt h egl o b a le v o l u t i o no fi n f l a mm a t o ryb o w e ld i s e a s eJN a tR e vG a s t r o e n t e r o lH epa t o l,():L I UZ,J I AOY,YUT,e t a l Ar e v i e wo n t h e i mm u n o m o d u l a t o rym e c h a n i s mo f a c upu n c t u r e i n t h e t r e a t m e n t o f i n f l a mm a t o ryb o w e ld i s e a s eJ E v i dB a s e dC o mpl e m e n tA l t e r n a tM e d,():YANJB,L UOM M,CH E NZY,e t a l T h e f u n c t i o na n dr o l eo f t