夹脊电针刺激通过PKA_RhoA通路治疗大鼠急性脊髓损伤.pdf

Chinese Journal of Neuroanatomy志杂解经部立神2023,39(3):295302夹脊电针刺激通过PKA/RhoA通路治疗大鼠急性脊髓损伤周孝敏，鱼丽萍，李卓伦，丁天红3*（1.陕西中医药大学第二临床医学院，咸阳7 12 0 0 0；2 咸阳市第一人民医院神经内科，咸阳7 12 0 0 0；3.陕西中医药大学第二附属医院，咸阳7 12 0 0 0）摘要目的：探究电针（EA)夹脊穴对脊髓损伤（SCI)大鼠后肢运动功能及蛋白激酶A（PK A)/R a s 同源基因家族成员A（R h o A）通路表达的影响，并从PKA/RhoA通路初步探讨其机制。方法：将36 只雌性SD大鼠随机分为假手术组（Sham）、SCI模型组（SCI）、电针干预组（SCI+EA）。运用钳夹法建立SCI模型，SCI+EA组电针干预T。和T.两对夹脊穴。利用脊髓功能评分（BBB量表）检测大鼠的后肢运动功能,HE染色观察脊髓组织形态学改变，同时运用免疫荧光染色、WesternBlot及realtimeRT-PCR检测脊髓组织中蛋白激酶A（PK A）、R a s 同源基因家族成员A（R h o A）及生长相关蛋白-43（GAP-43）的表达。结果：SCI模型大鼠后肢运动功能发生严重障碍，脊髓组织结构紊乱，伴较多出血点，而电针刺激后SCI大鼠脊髓组织结构较完整，出血点减少，后肢运动功能也得到明显改善。此外，夹脊电针刺激可显著提高SCI大鼠脊髓组织中PKAmRNA表达，（P0.05）。同时，夹脊电针刺激后SCI大鼠脊髓组织中PKA、G A P-43蛋白以及磷酸化蛋白p-RhoA（s e r 18 8）表达均显著升高（P0.05）。结论：夹脊电针能改善SCI大鼠后肢运动功能，减轻脊髓组织的病理学损伤；可能是通过调节PKA/RhoA信号通路实现的。关键词脊髓损伤；夹脊穴；电针；蛋白激酶A；R a s 同源基因家庭成员A；大鼠D0I:10.16557/ki.1000-7547.2023.03.007Treatment of acute spinal cord injury in rats with Jiaji electro-acupuncturestimulation via PKA/RhoA pathwayZHOU Xiaomin,YU Liping,LI Zhuolun,DING Tianhong3*(1.The Second Clinical Medical Collgeg,Shaanxi University of Traditional Chinese Medicine,Xianyang 712000;2.Department ofNeurology,the First Peoples Hospital Xianyang City,Xianyang 712000;3.The Second Affiliated Hospital ofShaanxi University of Chinese Medicine,Xianyang 712000,China)Abstract Objective:To investigate the effect of electro-acupuncture(EA)at Jiaji points on motor function of hindlimbs and expression of protein kinase A(PKA)/Ras homolog gene family member A(RhoA)pathway in rats with spi-nal cord injury(SCI),and to explore the molecular mechanism of EA treatment on spinal cord injury from PKA/RhoApathway.Methods:Thirty-six female SD rats were randomly divided into sham group,SCI group,SCI+EA group.TheSCI model was established by clamp method,and the rats in the SCI+EA group were treated with EA at T,and T.,Jiajipoints.Behavioral recovery of rats was scored according to the BBB(Basso,Beattie,Bresnahan)scale,and HE stai-ning was performed to observe pathological changes of injured spinal cord.At the same time,immunofluorescence stai-ning,Western Blot and real time RT-PCR was used to detect the expression of PKA,RhoA and GAP-43.Results:SCImodel rats had severe hind limbs motor dysfunction,and the spinal cord tissue structure was disordered with many hem-orrhagic spots.However,after treatment with EA,the spinal cord tissue structure was more complete with fewer hemor-基金项目：陕西省科技厅重点研发计划项目（2 0 17 SF-304）；陕西省咸阳市科技局科研项目（2 0 17 K02-78）*通信作者：丁天红电话：156 6 7 2 36 6 0 9,E-mail：d a h o n g 2 0 33 16 3.c o mpathway.and pathological injury of spinal cord tissue in SCI rats,which may be achieved by regulating PKA/RhoA signalingincreased after EA treatment(PO.05).Conclusion:EA at Jiaji points can improve the motor function of hind limbsPKA,GAP-43 protein and phosphorylated protein p-RhoA(ser188)in spinal cord tissue of SCI rats were significantlymote the expression of PKA mRNA in spinal cord tissue of SCI rats(P0.05).Attheessions ofrhagic spots,and the motor function of the hind limbs was significantly improved.In addition,EAtreatmentcanpro2962023年5月第39 卷第3期神经解剖学杂志，Key wordsspinal cord injury;Jiaji point;electroacupuncture;PKA;RhoA;rat脊髓损伤（spinal cord injury,SCI)是指一系列原因导致的一种极具破坏性的中枢神经系统损伤，主要导致损伤平面以下运动、感觉及自主神经功能障碍，给患者身心造成极大的不利影响，目前SCI的治疗和康复仍是世界医学呕待攻克的一大难题OSCI后局部微环境发生改变，抑制了神经元再生及突触可塑性从而影响神经功能恢复2 。Ras 同源基因家族成员A（R a s h o m o l o g g e n e f a m i l y m e m b e r A,RhoA)介导的抑制性信号是阻碍中枢神经再生的关键靶点，通过抑制RhoA的活性，促进受损神经元再生是目前修复中枢神经损伤的研究重点3。蛋白激酶A(proteinkinaseA,PKA）作为RhoA的主要上游因子，在神经组织中高度表达，其能促进RhoA（s e r 18 8)位点磷酸化，抑制RhoA的生物活性，从而促进神经元存活、轴突再生4.5。同时，生长相关蛋白43（growth associated protein-43，G A P-43）作为RhoA的下游效应蛋白，常被用作判断神经损伤及修复的客观指标6 ，但PKA/RhoA信号通路如何调控SCI的目前尚不清楚。SCI后脉络不通、阳气不足，气血阻滞，致人体肌肉和筋脉得不到养7 。针刺夹脊穴可以调节足太阳膀胱经和督脉，调节一身之阳气，使全身气血通畅8 。电针（electro-acupuncture,EA)具有针刺和电刺激的双重功效，可以改善损伤脊髓组织局部微环境，促进轴突生长,对SCI修复具有重大意义9。因此，本实验通过观察电针夹脊穴对SCI大鼠后肢运动功能及PKA/RhoA信号通路表达的影响，并从PKA/RhoA通路初步探讨其分子机制。材料与方法1.材料1.1实验动物及分组36只成年雌性SD大鼠，体质量（2 10 2 0）g，购自成都达硕实验动物有限公司，许可证号：SCXK才（川）2 0 2 0-0 30。饲养于陕西中医药大学动物房，温度2 2 左右，相对湿度40%60%，自由饮水、摄食。垫料隔日更换一次，适应性喂养7 d,称重并标记后随机分为Sham组、SCI组、SCI+EA组，每组12 只。全部实验过程均遵从科学技术部2 0 0 6 年颁布的关于善待实验动物的指导性意见，保障动物伦理1.2主要试剂与仪器兔抗PKA多克隆抗体、兔抗GAP-43多克隆抗体、辣根过氧化物酶（horserad-ishpero-xidase,HRP）标记的山羊抗兔IgG、BCA 蛋白定量试剂盒、聚偏二氟乙烯（polyvinylidenefluor-ide,PVDF）膜均购自武汉赛维尔生物科技有限公司，兔抗RhoA多克隆抗体购自武汉三鹰生物科技有限公司，兔抗磷酸化抗体p-RhoA（s e r 18 8）多克隆抗体购自北京博奥森公司，ECL化学发光液购自美国InCellGenE公司，青霉素钠购自哈尔滨哈药集团有限公司，甲泼尼松龙琥珀酸钠购自辽宁海思科制药有限公司，华佗牌SDZ-II型六路电子针灸仪购自苏州医疗用品厂有限公司，实时荧光定量PCR仪购自美国Bio-Rad公司，酶标仪购自美国BioTek公司，蛋白转膜仪和电泳仪购自北京君意东方电泳科技有限公司，凝胶成像系统购自北京赛智创业科技有限公司，病理切片机购自金华市科迪仪器设备有限公司。2.方法2.1模型建立术前称重，2%的戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉大鼠。参考文献及预实验后运用钳夹压迫法建立SCI模型10 。待麻醉成功后，剃毛备皮，手术区消毒。以T1为中心，沿后正中线纵向切开皮肤约3cm，钝性分离皮下筋膜、肌肉等组织,充分暴露棘突、椎板等。缓慢咬除T。椎板，直至椎弓根和椎体边缘，暴露出脊髓。SCI组和SCI+EA组用血管夹夹闭脊髓，夹闭2 0 s后松开，Sham组只暴露脊髓不给予夹闭处理。生理盐水冲洗伤口后逐层缝合，伤口消毒，撒青霉素粉预防感染。SCI动物模型建立成功标准：手术夹闭过程中见大鼠后肢抽动、摆尾以及肉眼可见的损伤部位脊297周孝敏：夹脊电针刺激通过PKA/RhoA通路治疗大鼠急性脊髓损伤髓淤血提示造模成功，待麻醉完全苏醒后脊髓功能评分(Basso Beattie Bresnahan,BBB)13 分为造模成功1。剔除的标准：死亡、BBB行为学评分大于3分。BBB评分细则：无可见的后肢运动为0 分，1-2个关节的轻微运动，通常是髋关节及（或）膝关节为1分，1个关节的广泛活动或1个关节的广泛活动加上另一个关节的轻微活动为2 分，2 个关节的广泛活动为3分。2.2干预方式SCI+EA组按照实验针灸学取T，和T.两对夹脊穴进行电针干预，旁开3 4mm，直刺进针，深度为皮下4 5mm，连接电针仪，设置连续波10 0 Hz，强度为治疗过程中大鼠背部肌肉轻微抽动，无剧烈挣扎即可，每日1次，每次30 min，连续1周。SCI组和Sham组只进行相同抓取和固定。所有大鼠均单笼饲养，并按摩膀胱进行手法排尿，每日至少3次。每日腹腔注射青霉素钠2 0 万单位预防感染，连续3d。2.3首脊髓功能评分评分脊髓功能（BBB量表）是国内外评价SCI动物模型是否造模成功以及后肢运动功能恢复的主要评定方法之一12 ,该评分最高为21分，分值与脊髓损伤程度反相关。麻醉完全苏醒后评分1 3分为造模成功。本研究由固定的2 名实验员分别在手术前（0 d），术后第1、3、7 d进行评分。每次评分均选在2 0:0 0 2 1:0 0 点，在同一空旷的地方每只大鼠观察两次，每次5min，结果取均值作为该次评分。2.4HE染色最后一次BBB评分完成后，随机在每组中取出3只大鼠用2%的戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉，开胸暴露心脏，通过心脏穿刺，灌注0.9%氯化钠充分冲洗组织中的血液。然后灌注含4%多聚甲醛的磷酸缓冲液直至肝脏变白。以T1o脊髓损伤处为中心上下各取约1.0 cm长的椎管，在冰上小心取出脊髓组织，放入含4%多聚甲醛的磷酸缓冲液中后固定2 4h后取出脊髓组织进行脱水、透明、侵蜡、石蜡包埋、组织连续切为5m厚的切片，切片脱蜡至水后经苏木素染色、返蓝液返蓝、伊红染色、中性树胶封片，最后在光学显微镜下观察并采集图片。2.5RNA提取和real time RT-PCR最后一次BBB评分完成后，随机在每组中取出3只大鼠用2%的戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉后，以Tio脊髓损伤处为中心上下各取约1.0 cm长的椎管，在冰上小心取出脊髓组织，称取50 mg放人无酶EP管并加人1mlTRIzol裂解液裂解脊髓组织并提取RNA。使用Nanodrop2000超微量分光光度计检测RNA浓度及纯度。按逆转录试剂盒说明书配置反应液合成cD-NA，放人-2 0 保存备用。运用Primer5软件设计大鼠内参GAPDH、PK A、R h o A 引物，引物序列为：GAPDH上游引物5-CTGGAGAAACCTGCCAAG-TATG-3，下游引物：5-GGTGGAAGAATGGGAGTT-GCT-3;PKA上游引物：5-CCGAACTTGGACCTTGT-GTGG-3，下游引物：5-CGCACCTTC-CCAGAGACGATT-3。按 2 SYBR Green qPCRMasterMix（No n e R O X）试剂盒配置2 0 l反应体系，使用荧光定量PCR进行realtimeRT-PCR扩增，反应条件：95,30 s1个循环；95，15s;5565,10 s,7 2,30 s 共40 个循环。检测结果采用2-ACt法计算mRNA的相对表达量。2.6登蛋白提取和WesternBlott最后一次BBB评分完成后，随机在每组中取出3只大鼠用2%的戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉后，以T1o脊髓损伤处为中心上下各取约1.0 cm长的椎管，在冰上小心取出脊髓组织，按50 mg组织加1mlRIPA裂解液的比例加人RIPA裂解液，冰上匀浆提取总蛋白，并用BCA试剂盒进行蛋白定量。95金属浴10 min使蛋白充分变性，冷却置常温后分装-2 0 保存备用。按照凝胶制备试剂盒说明书制备10%分离胶和5%浓缩胶，经过上样、电泳、转膜、5%脱脂奶粉封闭1h后，分别加入兔抗PKA多克隆抗体（1:10 0 0）、兔抗GAP-43多克隆抗体（1:2 0 0 0）、兔抗RhoA多克隆抗体（1:10 0 0），兔抗磷酸化抗体p-RhoA（s e r 18 8）多克隆抗体（1:10 0 0）,4孵育过夜。用TBST洗膜后加人HRP标记的山羊抗兔IgG（1:30 0 0），并在室温下孵育1h。用TBST洗膜后，滴加适量ECL化学发光液进行暗室曝光并采集图像，ImageJ分析并计算目的蛋白相对表达量，相对表达量=目的蛋白灰度值/内参蛋白灰度值。2.7免疫荧光染色最后一次BBB评分完成后，随机在每组中取出3只大鼠用2%的戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉，开胸暴露心脏，通过心脏穿刺，灌注0.9%氯化钠充分冲洗组织中的血液。然后，灌注含4%多聚甲醛的磷酸缓冲液直至肝脏变白。以Ti脊髓损伤处为中心上下各取约1.0 cm长的椎管，在冰上小心取出脊髓组织，放人含4%多聚甲醛的磷酸缓冲液固定2 4h后取出脊髓组织进行脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、组织连续切厚为5m的切片。经过脱蜡水化、抗原修复、3%BSA封闭1h，然后加人免抗GAP43多克隆抗体（1:2 0 0），42982023年5月第39 卷第3期神经解剖学杂志，孵育过夜。用PBS漂洗后，加人Cy3（Cy a n i n e）标记的山羊抗兔IgG（1:2 0 0），避光下室温孵育1h，用PBS漂洗后加人4,6-二基-2-苯基吲哚（4,6-dia-midino-2-phenylindole,DAPI）复染细胞核10 min,PBS漂洗后滴加抗荧光淬灭剂，封片后暗室中荧光显微镜下观察并采集图像，每张切片选取3个视野ImageJ分析并计算平均荧光强度。2.8乡统计学分析采用SPSS23.0软件进行分析，计量资料以均数标准差（xS表示，数据满足正态性和方差齐性时，组间比较采用单因素方差分析（o n e-w a y A NO VA），方差齐时组间两两比较用LSD检测；方差不齐时使用DunnettsT3检验，不符合正态分布的数据，采用非参数秩和检验,P0.05,Fig.1），与Sham组比较,造模后同期各组BBB评分均显著降低（P0.05,Fig.1），但电针干预第7 d时BBB评分明显升高（P0.05,Fig.1），提示SCI可导致大鼠后肢运动功能严重受损，电针干预后得到明显改善2.夹脊电针减轻SCI大鼠脊髓组织的组织病理学损伤Sham组脊髓灰白质分界清晰，神经细胞形态正常呈多角形,细胞核大,轮廓清晰,未见出血点；SCI组脊髓组织结构紊乱，灰白质分界不清，神经细胞固缩、变形,伴较多出血点；与SCI组相比,SCI+EA组脊髓灰白质分界较清晰，出血点减少（Fig.2）。2520-Sham15-SCI-SCI+EA105aaHHaa0a0137Time(d)Fig.1 Treatment of EA improves functional recovery after SCI inrats.BBB score were performed at before operation(O day)and at 1,3,7 days post operation for assessing function re-covery after SCI.aP0.05 us Sham group;bp0.05 vsSCI group.ShamSCISCI+EAFig.2 Comparison of injury spinal cord histopathology by HE staining.The red arrows indicate contractile nerve cells;The black arrows in-dicate erythrocyte.Bar=50 m.3.夹脊电针促进SCI大鼠损伤脊髓组织中PKAmR-NA表达与sham组比较,SCI组PKAmRNA表达明显降低(P0.05,Fig.3）;与SCI组比较SCI+EA组PKAmRNA表达增加(P0.05,Fig.3)。4.夹脊电针显著增加SCI大鼠损伤脊髓组织中PKA、p-R h o A(s e r 18 8)、G A P-43蛋白表达与 sham组比较,SCI组PKA、p-R h o A(s e r 18 8）蛋白表达明显降低（P0.05,Fig.4），G A P-43蛋白表达明显升高（P0.05,Fig.4）；与SCI组相比,SCI+EA组PKA、p-R h o A（s e r 18 8）、G A P-43蛋白表达显著升高（P0.05,Fig.4)。299周孝敏：夹脊电针刺激通过PKA/RhoA通路治疗大鼠急性脊髓损伤PKA1.501.0aba0.50.0ShamSCISCI+EAFig.3 Real time RT-PCR results of the mRNA expression of PKA inspinal cord of SCI rats.aP0.05 us Sham group;bP0.05us SCI group.5.夹脊电针促进SCI大鼠脊髓组织中GAP43表达免疫荧光结果显示：GAP-43呈红色荧光，细胞核蓝色表示。与Sham组比较，SCI组GAP-43表达升高(P0.05,Fig.5);与SCI组比较,SCI+EA组GAP43表达得到进一步增加（P0.05,Fig.5），提示电针刺激能促进脊髓神经元再生，提高突触可塑性。讨论中医学中脊髓损伤属“体惰”范畴。脊髓损伤后督脉受损，累及五脏，导致脉络不通、阳气不足，气血阻滞，使人体肌肉和筋脉得不到养，导致四肢乏力、二便失禁等7 。钳夹压迫法因其具有较高的临床相似性、可重复性以及操作简便等优点，目前是国PKARhoA11.0b1.00.50.5HShamSCISCI+EA0.00.0PKA41kDaShamSCI SCIIEAShamSCISCI+EAABRhoA22kDap-RhoA(ser188)GAP-43p-RhoA(ser188)21kDa1.51.5abGAP-4343kDa1.0F1.0aGAPDH36kDaba0.5H0.5F0.00.0CDShamSCISCI+EAShamSCISCI+EAFig.4 Western Blot results of protein expression of in spinal cord of SCI rats.A:PKA protein expression.B:RhoA protein expression.C:p-RhoA(ser188)protein expression.D:GAP-43 protein expression.P0.05 us Sham group;bP0.05 us SCIgroup.3002023年5月第39 卷第3期神经解学杂志，GAP-43DAPIMergeweusGAP-4350ab40a3020100ShamSCISCI+EABAFig.5 Comparison of the GAP-43 protein expression in spinal cord of SCI rats.A:Immunofluorescent staining showed GAP-43(red),nucleus(blue),Bar=50 m.B:Quantitative analysis of the mean fluorescence intensity of GAP-43 in spinal cord tissue.P0.05 us Sham group;bp0.05 us SCI group.内外常用的建立SCI大鼠模型方法之一13。门。本研究运用该方法并结合BBB评分，成功建立了SCI大鼠模型。同时,夹脊穴与督脉、膀胱经邻近，针刺夹脊穴可以同时调节足太阳膀胱经和督脉，调节一身之阳气，使全身气血流畅8 。现代医学角度看，夹脊穴位于脊神经后支，并与交感神经纤维相联系，针刺夹脊穴能调节全身神经体液平衡，促进脊髓损伤后功能恢复14。同时电针具有普通针刺和电刺激的双重功效，之前已有研究证实，电针夹脊穴治疗SCI可以改善损伤脊髓局部微环境，促进神经功能恢复12 。临床研究也提示，电针干预有助于SCI患者功能恢复，但其作用机制尚不明确。因此本研究选用电针夹脊穴作为研究对象，并通过WesternBlot、realtimeRT-PCR检测损伤脊髓组织中PKA/RhoA信号通路表达的变化，从蛋白和基因水平阐明电针治疗脊髓损伤的分子机制，为电针在临床上治疗脊髓损伤提供一定理论基础、为进一步研究提供一定的思路。通过改善损伤部位微环境、减轻炎症反应等促进神经元再生、提高突触可塑性、重建神经网络是目前治疗SCI的关键策略之一15。PKA/RhoA 信号通路介导的抑制性信号是阻断中枢神经再生的关键途径。本研究结果提示，夹脊电针干预后SCI大鼠脊髓组织中PKA明显升高，激活后的PKA通过磷酸化RhoA（s e r 18 8）位点，抑制RhoA生物活性，RhoA生物活性被抑制后可刺激GAP43等一系列下游因子表达，改善损伤脊髓微环境，促进神经元存活、轴突再生和后肢运功功能恢复16.1PKA广泛存在于各种组织中，其能通过磷酸化不同的下游底物来调节多种信号通路，RhoA、G A P-43作为PKA的下游靶标，其在脊髓神经元的发育、存活和死亡以及突触可塑性中同样发挥重要作用4.18 ，且GAP-43通常用作判断神经损伤及修复的客观指标6 。因此，本研究以PKA及其下游RhoA、GAP43为切入点展开研究，观察到脊髓损伤后PKA蛋白及mRNA表达均显著降低，而电针干预后脊髓组织中PKA蛋白和mRNA表达均明显升高。本研究与之前的研究虽然疾病模型有所差异，但结果均证明在中枢神经受损后，损伤区PKA蛋白及mRNA表达受到抑制，而电针干预可以明显解除这种抑制，促进神经功能恢复19.2 0 。形态学观察和行为学评分结果提示，夹脊电针治疗能明显减轻损伤脊髓的炎症反应，改善SCI大鼠后肢运动功能，提示PKA可能是夹脊电针促进SCI大鼠后肢运功功能恢复的关键信号靶点。RhoA的活化是抑制中枢神经再生的重要靶点，而RhoA的磷酸化是导致其功能发生改变和调节其活性的主要方式之一,RhoA在ser188位点磷酸化能301周孝敏：夹脊电针刺激通过PKA/RhoA通路治疗大鼠急性脊髓损伤够抑制RhoA激活5。在大多数情况下,RhoA以非活性形式存在于细胞质中。当SCI时局部微环境发生变化，产生大量抑制轴突生长的因子，如：神经突生长抑制剂（NOGO-A）和少突胶质细胞髓鞘糖蛋白（o l i g o d e n d r o c y t e my e l i n g l y c o p r o t e i n，O M g p）等并与相应受体结合，从而激活RhoA及其下游效应因子，在轴突周围形成屏障阻碍轴突生长2 1。本研究采用RT-qPCR、We s t e r n Bl o t 对PKA/RhoA信号通路中基因和蛋白水平进行检测，结果提示与假手术组比较，模型组PKAmRNA表达明显降低，同时与模型组比较发现，电针干预后PKAmRNA和蛋白表达均升高，但RhoA总蛋白表达组间差异无统学意义，这与Wang2 等研究结果一致,本研究为了探究RhoA活性变化进一步检测磷酸化蛋白p-RhoA（s e r 18 8）的表达，结果显示与假手术组比较,SCI模型组中发现p-RhoA（s e r 18 8）蛋白明显降低，而通过电针干预刺激后p-RhoA（s e r 18 8）蛋白表达较模型组显著升高。提示电针夹脊穴可能是通过上调PKA的表达，进一步磷酸化RhoA（s e r 18 8）来抑制RhoA的生物活性，解除其对神经元存活、轴突再生的抑制作用，从而促进脊髓神经元再生以及运动功能恢复。GAP-43通常作为判断神经损伤及修复的客观指标6 ,其存在于神经元生长锥和突触末端，在引导神经元轴突生长、创伤后神经元轴突再生及调节突触形成中起关键作用18 。本研究结果表明，电针干预后脊髓组织中GAP-43蛋白表达较脊髓损伤模型组显著升高，提示夹脊电针在一定程度上促进损伤脊髓神经元的再生。综上，夹脊电针干预可以促进SCI大鼠模型后肢运动功能恢复、减轻脊髓组织的病理学损伤反应、改善局部微环境，促进损伤脊髓神经元的再生，且可能是通过激活PKA进一步磷酸化RhoA（s e r 18 8）这个位点，抑制RhoA的生物活性，解除RhoA信号通路对神经元存活、再生的抑制作用来实现的。参考文献1 Zhang Y,Al Mamun A,Yuan Y,et al.Acute spinal cord injury:Pathophysiology and pharmacological intervention(Review)J.Mol Med Rep,2021,23(6):417.D0I:10.3892/mmr.2021.12056.2 Anjum A,Yazid MD,Fauzi Daud M,et al.Spinal cord injury:Pathophysiology,multimolecular interactions,and underlying recov-ery mechanismsJ.Int J Mol Sci,2020,21(20):7533.D0I:10.3390/ijms21207533.3】陈素辉。电针百会、足三里对脑缺血再灌注损伤大鼠髓鞘相关抑制因子介导的RhoA/ROCK神经再生通路的影响D.北京：北京协和医学院，2 0 2 0.4 Choi EK,Kim JG,Kim HJ,et al.Regulation of RhoA GTPase andnovel target proteins for ROCKJ.Small GTPases,2020,11(2):95-102.D0I:10.1080/21541248.2017.1364831.5 Chen Y,Wen J,Chen Z.H,S protects hippocampal neurons againsthypoxia-reoxygenation injury by promoting RhoA phosphorylation atSer188J.Cell Death 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