基质金属蛋白酶1在头颈部鳞癌中的表达水平及微RNA调节的生物信息学研究.pdf

山西医药杂志2 0 2 3年7 月第52 卷第14期ShanxiMedJ,July2023,Vol.52.No.141043论著基质金属蛋白酶1在头颈部鳞癌中的表达水平及微RNA调调节的生物信息学研究韩向春郑力强毛秀秀丁建花孙娜王怀涛【摘要】目的分析头颈部鳞癌含皮肤鳞癌)中基质金属蛋白酶1MMP1)和微RNA(miRNA)表达水平并筛选目标miRNA。方法下载CEO相关数据，比较头颈部鳞癌MMP1表达水平。利用miRanda、TargetScan7.2和miRDB软件在线预测miRNA，进一步与miRTarBase 结果做比对，获得目标miRNA并进行验证。分析目标miRNA与MMP1的相互关系。结果与正常组织或不典型增生病变相比,MMP1在头颈部鳞癌含皮肤鳞癌）组织中高表达，MMP1可参与癌变整个发展过程，并促进HNSCC转移；在线预测共获得3个目标miRNAs:miR-202、mi R-32 6 和miR-488，其中miR-202mirSVR评分最高。相反，与正常组织相比，miR-202头颈部鳞癌（含皮肤鳞癌）中，miR-202表达水平明显低于正常组织，从正常皮肤-KIN1/2-KIN3-cSCC,miR-202可参与疾病整个发展过程。相关分析显示miR-202表达与MMP1呈负相关（=-0.14,P0.05）。结论MMP1在头颈部鳞癌（含皮肤鳞癌）组织中高表达，miR-202低表达，miR-202可能是调节MMP1的真实miRNA,二者呈负相关。【关键词】基质金属蛋白酶1；微RNAs；头颈鳞癌；皮肤肿瘤；计算生物学Bioinformatics study on expression level of MMP1 and microRNA regulation in head and neck squamous cellcarcinoma Han Xiangchun,Zheng Liqiang,Mao Xiuxiu,Ding Jianhua,Sun Na,Wang Huaitao.Department ofPathology,TianjinBeichen Traditional Chinese Medicine Hospital,Tianjin 300400,ChinaAbstract】O b j e c t i v e T o a n a l y z e t h e e x p r e s s i o n l e v e l o f ma t r i x me t a l l o p r o t e i n a s e (M M P)1 a n d mi c r o RNA(miRNA)in head and neck squamous cell carcinoma(HNscC)(including cutaneous squamous cell carcinomarcSCC),and screen the target miRNA.Methods GEO datasets were downloaded and MMP1 expression level ofHNSCC were further compared.Then miRanda,TargetScan7.2 and miRDB online software were employed to predictmiRNAs,and to further compare with the miRTarBase results to obtain target miRNA and finally verify them.Thecorrelation between the target miRNAs and MMP1 was also analyzed.Results Compared with normal tissue oratypical hyperplasia tissue,MMP1 was highly expressed in HNSCCs(including cSCCs),MMP1 participates in thewhole process of tumorigenesis and promotes the metastasis of HNsCC.We obtained 3 targets miRNAs onlineincluding miR-202,miR-326 and miR-488,and the mirsVR score of miR-202 was the highest.On the contrary,theexpression level of miR-202 in HNSCCs(including cSCCs)was significantly lower than that in normal tissues.Fromnormal skin-KIN1/2-KIN3-csCC,miR-202 participates in the whole development process of the disease.Correlationanalysis showed that the expression of miR-202 was negatively correlated with MMP1(r=-0.14,P0.05)Conclusion MMP1 is highly expressed in HNSCCs(including cSCCs).miR-202 may be the real miRNAregulating the expression of MMP1 negatively.Key words Matrix metalloproteinase l;MicroRNAs;Squamous cell carcinomas of head and neck;skinneoplasms;Computational biology头颈部鳞状细胞癌head and neck squamouscell carcinomas,HNSCCs）来源于呼吸消化道（口DOI:10.3969/j.issn.0253-9926.2023.14.001基金项目：天津市北辰区科技计划项目SHGY-2020040）作者单位：30 0 40 0 天津市北辰区中医医院病理科韩向春、丁建花、孙娜、王怀涛）；中国人民解放军陆军第8 1集团军医院皮肤科郑力强、毛秀秀）腔、咽、喉)以及口唇、耳等头颈部鳞状上皮的恶性肿瘤，占头颈部肿瘤90%以上。其侵袭性强，复发率高,治疗效果差。目前HNSCC发病机制还不十分明确，其中基质金属蛋白酶1(matrixmetallo-proteinasel,MMP1)是一类活性依赖于锌离子和钙离子的蛋白水解酶，主要的生理作用是降解细胞外基质中胶原2 。既往研究表明,MMP1可激活胰腺导管腺癌(PDAC)细胞神经激肽1受体(NKIR）1044:表达,增强细胞迁移、侵袭和神经周侵袭(PNI);也可通过激活磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶PI3K/AKT)通路,参与了多种恶肿瘤的进展 B-5。我们前期研究结果也发现MMP1在HNSCC和皮肤鳞状细胞癌 SCC)中高表达6 l;同时国内也有研究显示 MMP1基因高表达与HNSCC 患者的发生、发展和预后相关2.7 。然而到目前为止,关于MMP1的转录水平调节机制方面的研究还少见报道。为此，本研究采用生物信息学的方法，从GEO数据库中下载GSE系列相关数据，分析MMP1的表达水平,在线预测目标微RNA microRNA,miRNA）探讨二者的相互关系,为后续研究提供理论依据。1实验方法1.1头颈部鳞癌含皮肤鳞癌)MMP1差异表达分析登录GEO数据库,以关键词“（head and necksquamous cell carcinomaORCutaneous squamouscell carcinoma)AND Homo sapiens”,搜索获得相关数据库，GEO2R在线筛选MMP1高表达芯片，下载GSE3254GSE30784GSE13397GSE9349GSE58911、GSE40185、G SE32 6 2 8、G SE8 42 93和GSE98774数据及 Series Matrix File$)。1.2软件在线预测靶向调节MMP1的相关miR-NAs81运用microrna(miRanda）数据库(http:/www.microrna.org/getGeneForm.do),Targetscan7.2http:/www.targetscan.org/).miRDB数据库http:/www.mirdb.org/3个软件在线预测靶向调节MMP1的相关miRNAs，并用miRTarBasehttp:mirtarbase.mbc.nctu.edu.tw/）进行在线比对。最后登录网址http:/b.csic.es/tools/venny/),在线取交集生成维恩图，获得目标miRNAs。1.3数据验证利用表1中 GSE31277、G SE34536.G SE10 1192和GSE57768数据及SeriesMatrixFile6），进行目标miRNAs数据验证。1.4目标miRNA与MMP1相关性分析以GSE58911数据为基础，对miR-202和MMP1表达水平进行相关分析。1.5统计方法利用GraphPad Prism8.0软件对所有表达数据进行比较分析，2 组数据方差齐选择t检验或配对t检验；如方差不齐选用非参数检验；3组以上选用山西医药杂志2 0 2 3年7 月第52 卷第14期ShanxiMedJ,July2023,Vol.52.No.14单因素方差分析，多重比较Dunnetts t检验。P0.05为差异有统计学意义。2 结 果2.1头颈部鳞癌MMP1差异表达水平比较利用GSE相关原始数据,GEO2R在线生成mRNA差异表达基因cut-off值设定为P0.05）,筛选出MMP1表达数据（表1）;同时利用GraphPadPrism8.0对所有表达数据进行比较分析,结果示在头颈部鳞癌组织中,与正常组织或不典型增生病变相比,MMP1高表达图1A1D），并促进HNSCC转移图1E)；同样，在其体外培养鳞癌细胞系，MMP1表达水平明显高于口腔上皮细胞系(图1F）。在皮肤鳞癌中,MMP1表达水平也明确高于正常组织；从NSE-SE-AK-cSCC,MMP1可参与癌变整个发展过程图1G1I）。2.2调节MMP1的miRNAs的预测结果利用miRanda、T a r g e t Sc a n 7.2、mi RD B3个软件在线预测分别获得调节MMP1的miRNAs为：33、38和18 9个，取交集生成维恩图，共获得3个目标miRNAs:miR-202、m i R-32 6、m i R-48 8 (图 2)。其中miRanda预测miRNA-target基因结合位点如表2所示,miR-202mirSVR评分最高。这些很有可能是调节MMP1 的miRNAs的真实靶基因。进一步用miRTarBase在线软件得到5个miRNAs,其中包括miR-202。2.3microRNAs数据验证利用 GSE31277、G SE34536、G SE10 1192 和 G-SE57768相关数据(表1)对所有表达数据进行比较分析,结果示在头颈部鳞癌组织中，与正常组织相比,miR-202低表达(图3A);同样，在皮肤鳞癌中,miR-202表达水平也明显低于正常组织图3B,3C);从正常皮肤-KIN1/2-KIN3-cSCC,miR-202可参与疾病整个发展过程图3D)。相关分析显示：MMP1表达与miR-202呈负相关（=-0.14）,见图3E。3 讨 论头颈部鳞状细胞癌包括呼吸消化道以及口唇，耳等头颈部肿瘤。因此，从解剖层面上来说,HNSCC与cSCC存在部分重叠。因此,我们可以推测在发病机制方面,尤其在基因水平可能存在一些共性特征。MMP作为一组在结构与功能上极为相似的锌、钙依赖性内肽酶，几乎可降解细胞外基质 ECM）中各种蛋白成分2。在病理条件下,MMP可破坏局山西医药杂志2 0 2 3年7 月第52 卷第14期ShanxiMed J,July 2023,Vol,52.No.141045表1头颈部鳞癌含皮肤鳞癌)GSE原始数据样本数invasion in OSCCGene expression profiling of oral squamous cellcarcinoma Oscc)HNSCC samples vs.normal tonsil samples:self-self hybridization designMetastasized vs:non-metastasized primary head数据库GSE3524GSE30784GPL570HG-U133Plus2 CSE13397GPL7540 AgilentCSE9349GPL201 HG-Focus GSE58911GPL6244 HuGene-1_0-st J GSE40185GSE32628GSE84293GSE98774GPL570HG-U133Plus2 13(AK)GSE31277GPL9770IluminaGSE10192GPL8300 HGU95Av2 GSE34536GPL15019 AgilentCSE57768CPL17537 nCounter注：NC:正常组织对照;AK:光线性角化病;Dysplasia:口腔黏膜不典型增生组织;OSCC:口腔鳞癌；HNSCc:头颈部鳞癌；cSCc皮肤鳞癌;NOE：正常口腔上皮细胞系；SE:曝光部位正常皮肤;NSE:非曝光部位正常皮肤序号miRNA-target基因相互作用位点13AAGGUACGGGAUAUGGAGa 5hasmiR20223CUGGUUCUUAUCGGAAAGUu5hasmiR488 312:UGACAAACAUAUCCUUUCAa3MMP133GACCUCCUUCCCGGGUCUCc5hsamiR326282:5UCCGACGUUGAUCCCAGAGa注：mirsVR：热力学稳定性大小,分值越低，表明miRNA-mRNA二者结合稳定性越强;PhastCons：为基因非翻译区在各物种中进化保守性的强弱，保守性越大越好部组织结构、增加肿瘤诱导的血管形成,抑制MMP可减轻缺血缺氧的损伤程度，同时抑制继发性血平台GPL96 HG-U133A JGPL4133 AgilentGPL6102 IluminaGPL11154 IluminaSCC类型SCCAK/Dysplasia1616781115101310146711表2 miRanda预测miRNA-target基因结合位点和评分文献标题NCAssociation b/w gene expression profile&tumor4OSCC1745811151010131310613 SE)13(NSE)1418(AK/SE)5711管生成，在肿瘤发展和侵袭的各个阶段均起重要作用 9.10。此外,MMP-2基因多态性与肿瘤微血管OSCCHNSCCHNSCCHNSCCHNSCCcSCCcSCCccSCCHNSCCcSCCcSCCcSCCand neck squamous cell carcinomas:pathway-based gene expression analysisGene expression in normal and tumor samplesfrom patients with HNSCCGene expression analysis of head and necksquamous cell carcinoma cell lines and a controlnormal oral epithelial cell lineMolecular profiling of cutaneous squamous cellcarcinomas and actinic keratoses from organtransplant recipientsIdentificationof transcriptomicdriversofsquamous cell carcinoma development through apreneoplastic intermediate human RNA-Seq Investigation of potential tumour suppressor ortumour promoter roles in cutaneous squamouscell carcinoma progressionMicroRNA expression profile in Head and NeckCancer:HOX-cluster embedded microRNA-196and microRNA-10b dysregulation is implicatedin cell proliferationAlterationsof microRNAsthroughout themalignant evolution of cutaneous squamous cellcarcinomaMicroarray analysis of microRNA expression incutaneous squamous cell carcinomaMicroRNA Expression in Cutaneous SquamousCell CarcinomamirSVR评分-1.272 0-1.074 3-0.916 8PhastCons评分0.465 80.510 30.492 11046山西医药杂志2 0 2 3年7 月第52 卷第14期ShanxiMedJ,July2023,Vol.52.No.14GSE3524*8642015-GSE30784*20-*15-10-50OSCCNCGSE9349*GSE352420-*15-10-501AOSCCDysplasiaGSE934915-10-5NCOSCCGSE4018515-*10-*5NC110Metasis HNSCONon-Metastasis1412-IdWW10-8注：NS：无意义；*P0.05；*P0.0 1；*P0.0 0 1;M M P1：基质金属蛋白酶1;OSCC：口腔鳞癌；NC：正常组织对照；dysplasia：口腔黏膜不典型增生组织；HNSCC头颈部鳞癌；metastasis:HNSCC转移型头颈部鳞癌图1头颈部鳞癌含皮肤鳞癌）中MMP1mRNA的表达水平比较A：G SE352 4口腔鳞癌组织与正常组织相比，MMP1表达水平差异有统计学意义;B:GSE30784口腔鳞癌、不典型增生及正常组织之间MMP1表达水平逐渐降低，两两比较差异显著；C：GSE13397头颈部鳞癌MMP1表达水平明显高于正常组织，具有统计学意义;D:GSE58911头颈部鳞癌MMP1表达水平同样高于正常组织;E:CSE9349转移性头颈部鳞癌组织中MMP1表达水平高于非转移鳞癌;F:GSE40185体外细胞培养,FaDu口腔鳞癌细胞、UTSCC8、U T SCC42 中MMP1表达水平均明显高于正常口腔上皮细胞;G:GSE32628与正常组织、光线性角化病相比，皮肤鳞癌组织中表达水平升高显著;H:GSE84293与正常组织相比，皮肤鳞癌组织中表达水平同样升高;I:GSE98774与非曝光部位/曝光部位正常皮肤组织相比，光线性角化病组织中MMP1表达水平均有统计学意义）P物质SP),进而激活胰腺导管腺癌PDAC)细胞miRandamiRDB280(2.8%）0%）36.4%/6.9%）215068.8%）图2 miRNA交集结果维恩图和淋巴管新生有关。研究还表明：MMP1可激活AKT和诱导蛋白酶激活受体-1PAR1)表达并释放0HHSCCMetasis HNscONon-MetastasisGSE32628GSE84293*nscSCCAKHHSCC600007ns三40 0 0 0200000NC16.5%）15.6%）34086ns+2-0cSCCAK神经激肽1受体(NK1R)表达，并通过 SP/NK1R/ERK增强细胞迁移、侵袭和神经周侵袭 PNI)。用shRNA沉默MMP1表达，或用PAR1或NK1R拮抗剂治疗均可抑制PNI5。M M P1通过激活PI3K/AKT通路促进食管鳞癌ESCC)发生,对PI3K/AKT通路的抑制可减少MMP1介导的细胞增殖和迁移B。基于生物信息学方法，我们前期研究结果发现MMP1在5例HNSCC和5例cSCC GSE系列中高表达6 1;MMP1参与上皮性癌发生发展的整个病理过程，这初步提示MMP1极有可能是肿瘤发生发展的可靠生物标志物6。国内外也有研究表明MMP1基因高表达与HNSCC患者的发生、发展和预后相FaDuUTSCC8UTSCC42GSE98774*1NCAKNOE(1E7nsSENSE山西医药杂志2 0 2 3年7 月第52 卷第14期ShanxiMedJ,July2023,Vol.52.No.141047GSE31277151二OSCCnsNCns.10-GSE34536-OSCC67NCGSE57768207cSCC*=NC15大ns605MIR-202MIE-326MIR-4882MIR-202MIE-326MIR-4883nsisS50MIR-202MIE-326MIR-48833C0-20NCSEKIN1/2KIN3cSCCDGSE5891115110503.23.43.63.84.04.2MIR-202?E编码miRNAMIRT734182hsa-miR-202-3pMIRT731775hsa-miR-526b-3pMIRT021518hsa-miR-145-5pMIRT006062hsa-miR-203a-3pMIRT000136hsa-miR-222-3p注：MMP1:基质金属蛋白酶1;PCR：聚合酶联反应关 2.7.12 。随着 GEO数据库的完善和不断更新,本研究又发现在多个头颈部鳞癌GSE系列中,MMP1同样高表达，这是对MMP1在SCC中的作用的进一步验证和补充。然而，MMP表达水平与转录、翻译等多种因素有关，其中miRNA在转录水平调节MMP表达受到越来越多的关注。miRNA 是一种具有调控功能的小分子非编码RNA，长度约为2 0 2 2 nt，当其与靶基因的mRNA3-UTR区结合时可直接降解靶基因的mRNA 或阻遏靶基因的翻译 13。miRNA 在多种病理条件中起着至关重要的作用，包括炎症、神经退行性变和恶性肿瘤。目前，研究MMP1与miRNA结合主要有生物信息学方法和实验验证方法。通常先运用生物信息学方法对MMP1的miRNAs基因进行预测和筛选,然而在体外培养细胞体系进行验证以及后续功能学的研究。多种生物信息学分析软件或数据库已经成功预测几个MMPs3-UTR中存在miRNA结合位点，在转录后水平参与MMP调控，最终影响MMP基因的翻译和表达,并得至相关实验的证实 14。在乳图3头颈部鳞癌含皮肤鳞癌）中miR-202mRNA的表达水平比较（A:GSE31277口腔鳞癌细胞组织中miR-202表达水平低于正常组织，差异有统计学意义;B:GSE34536皮肤鳞癌细。Y=-1.277*X+15.39r=-0.1427胞组织中miR-202表达水平明显低于正常组织;C:GSE57768皮肤鳞癌细胞组织中miR-202表达水平同样低于正常组织;D:GSE101192正常皮肤-KIN1/2-KIN3-cSCC,miR-202表达水平呈逐渐降低趋势；E：G SE58 911M M P1表达水平与miR-202呈负相关，有统计学意）表3miRTarBase预测调节MMP1相关miRNAs验证方法靶基因报告实验MMP1VMMP1MMP1MMP1MMP1免疫印迹腺肿瘤骨转移过程中,miR-224直接靶向RKIP3-UTR抑制其表达，间接上调MMP1水平并促进肿瘤转移 i5。在结肠癌细胞系,过表达miR-34a 可引起MMP-1/9水平下降l6。在口腔鳞癌OTSCC)细胞中，miR-222可通过直接靶向结合MMP1和间接通过SOD2调控MMP1基因表达i7。通常认为，在miRNA-mRNA调控网络中，一个miRNA可调控多个靶基因的表达，多个靶基因又可同时被多个miRNA所调控。本研究通过3种预测方法共获得MMP1的3个目标miRNAs:miR-202、mi R-32 6、mi R-48 8。其中miR-202mirSVR评分最高,miR-202与MMP1表达呈负相关,这提示miR-202很有可能是负性调节MMP1的关键miRNA。既往大量研究已经证实miR-202在食管鳞癌、胃癌、肝癌、结肠癌、多发性骨髓瘤和肺癌等多肿恶性肿瘤中异常表达18.191,提示miR-202在可以作为一个抑癌miRNA。如在ESCC中，通过对GEO数据进行分析，发现ESCC组织以及培养ESCC细胞系中,miR-202表达水平降低i8。进一步实验确定HSF2 heat shock tran-定量PCRV基因芯片VV其他总和132151048:scriptionalfactor2,HSF2)是miR-202的直接靶点，其结合位点位于ESCC细胞中热休克转录因子2mRNA的3 UTRI8。针对宫颈癌的研究发现，组织中miR-202的表达明显下调，体外miR-202过表达可抑制宫颈癌细胞系 SiHa和 HeLa细胞的增殖、转移和侵袭。进一步研究证实miR-202通过靶向抑制CyclinD1的水平发挥作用i9)。研究还发现，MMPs家族成员MMP2和MMP9在宫颈癌细胞中高表达,伴随Cy-clinD1上调1i9。因此,可以推断miR-202可以通过抑制MMP2和MMP9的表达直接或间接地影响细胞增殖,迁移和侵袭191,但是该实验未对MMPs家庭成员MMP1表达水平进行分析。最近研究表明,miR-202可负性调节MMP-1以抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭2 0 ;而且,沉默miR-202能增加MMP-1表达并促进转移性乳腺癌细胞的脑侵袭 2 1。此外,miR-202在系统性硬化症组织中的表达显著增加，抑制靶基因MMP1表达，促进组织纤维化2 。但是，在人类严重退变椎间盘中miR-202表达明显低于轻度退变椎间盘，MMP1的表达上调,其结果提示miR-202是髓核中MMP1 的重要调控因子,可能参与了椎间盘退变的发生3。国内外研究进一步证实MMP1与头颈部鳞癌发生、发展和侵袭关系十分密切6.7.2 41,这也高度提示miR-202在头颈部鳞癌中可能靶向调控MMP1表达发挥重要作用。尽管我们未对头颈部鳞癌样本中MMP1和miR-202表达水平及特异性结合实验进行验证，但是在上述的研究中,通过双荧光素酶报告基因实验均已证实miR-202可以靶向结合MMP1的3UTR,抑制其表达 0-3。与其它肿瘤中利用单一基因平台或芯片的研究相比，本实验主要对不同平台或芯片中头颈部鳞癌MMP1的转录水平进分析和验证，并筛选出调节其表达的特异性较强的miR-202,可信度高；最重要的是，目前关于miR-202对MMP1调节的研究头颈部鳞癌中至今还未报道。综上所述，本研究利用生物信息学方法分析头颈部鳞癌中MMP1和相关miRNA表达水平并获得目标miR-202。结果发现MMP1在鳞癌中高表达,miR-202低表达，二者呈负相关。这些结果进一步提示在头颈部鳞癌中miR-202可以靶向调控MMP1表达水平，与肿瘤侵袭和转移关系密切,为后续的实验研究提供了方向，也为将来鳞癌的治疗山西医药杂志2 0 2 3年7 月第52 卷第14期ShanxiMedJ,July2023，Vo l.52.No.14i J Torre LA,Bray F,Siegel RL,et al.Global cancer statistics,20121.CA Cancer J Clin,2015,65 6):87-108.DOI:10.3322/caac.21262.王凯，肖剑，宋业勋.通过生物信息学筛选头颈部鳞状细胞癌差异表达基因及相关生物学特性分析.中国耳鼻咽喉头颈外科，2 0 2 0，2 7）：37 7-38 1.DOI110.16066/j.1672-7002.2020.07.004.BJ Liu M,Hu Y,Zhang MF,et al.MMPI promotes tumor growthand metastasis in esophageal squamous cell carcinoma Cancer Lett,2016,377():97-104.DOI:10.1016/j.canlet.2016.04.034.J Shin DH,Dier U,Melendez JA,et al.Regulation of MMP-1 ex-pression in response to hypoxia is dependent on the intracellu-lar redox status of metastatic bladder cancer cells .BiochimBiophys Acta,2015,1852(2):2593-2602.DOI:10.1016/j.bbadis.2015.09.001.E Huang C,Li Y,Guo Y,et al.MMP1/PAR1/SP/NKIR paracrine loopmodulates early perineural invasion of pancreatic cancer cellsJ Theranostics,2018,8(1):3074-3086.DO1:10.7150/thno.24281.6 Zheng LQ,Wang R,Chi SM,et al.Matrix metalloproteinase1:a better biomarker for squamous cell carcinoma by multiplemicroarray analyses.G Ital Dermatol Venereol,2019,1546):327-337.DOI:10.23736/S0392-0488.17.05770-4.6刘龙庆，陈志伟，易世杰.MMP1基因在头颈部鳞状细胞癌的表达及预后相关性1临床耳鼻咽喉头颈外科杂志2 0 18,324):287-291.DO1:10.13201/j.issn.1001-1781.2018.04.011.B Roberts JT,Borchert GM.Computational prediction of microR-NA target genes,target prediction databases,and web Re-sources.Methods Mol Biol,2017,1617:109-122.DOI:10.1007/978-1-4939-7046-9_8.Bonnans C,Chou J,Werb Z.Remodelling the extracellularmatrix in development and disease .Nat Rev Mol Cell Biol,2014,15(2):786-801.DOI:10.1038/nrm3904.o刘明明，李爱玲，修瑞娟.基质金属蛋白酶的研究进展中国病理生理杂志，2 0 18,34(0）：1914-192 0.j1J Debrah LB,Albers A,Debrah AY,et al.Single nucleotidepolymorphisms in the angiogenic and lymphangiogenic path-ways are associated with lymphedema caused by Wuchereriabancrofti 1.Hum Genomics,2017,11():26.DOI:10.1186/s40246-017-0121-7.2 Bianco BC,Scotti FM,Vieira DS,et al.Immunohistochemicalexpression of matrix metalloproteinase-1,matrix metallopro-teinase-2 and matrix metalloproteinase-9,myofibroblasts andKi-67 in actinic cheilitis and lip squamous cell carcinoma.Int J Exp Pathol,2015,966):311-318.DO1:10.111/ep.12140.f3 Yang CX,Sedhom W,Song J,et al.The role of MicroRNAs in re-提供了新的靶点和理论依据。参考文献山西医药杂志2 0 2 3年7 月第52 卷第14期ShanxiMedJ,July2023,Vol.52.No.14currence and metastasis of head and neck squamous cell carci-noma CancersBasel),2019,11 6):395.DO1:10.3390/cancers11030395.fi 4 Esquela-Kerscher A,Slack FJ.Oncomirs-microRNAs with a rolein cancer 1.Nat Rev Cancer,2006,6 4):259-269.DO1:10.1038/nrc1840.i5 Huang L,Dai T,Lin X,et al.MicroRNA-224 targets RKIP tocontrol cell invasion and expression of metastasis genes in hu-man breast cancer cells Il Biochem Biophys Res Commun,2012,425 6):127-133.DO1:10.1016/j.bbrc.2012.07.025.i6 Wu J,Wu G,Lv L,et al.MicroRNA-34a inhibits migrationand invasion of colon cancer cells via targeting to Fra-1 .Carcinogenesis,2012,33 6):519-528.DOI:10.1093/carcin/bgr304.fi7 Liu X,Yu J,Jiang L,et al.MicroRNA-222 regulates cell inva-sion by targeting matrix metalloproteinase 1 MMP1)and man-ganese superoxide dismutase 2 SOD2)in tongue squamous cellcarcinoma cell lines .Cancer Genomics Proteomics,2009,66):131-139.i8 Meng X,Chen X,Lu P,et al.miR-202 promotes cell apopto-sis in esophageal squamous cell carcinoma by targeting HSF21O n c o l Re s，2 0 17，2 56):2 15-2 2 3.D O I:10.37 2 7/096504016X14732772150541.i9 Yi Y,Li H,Lv Q,et al.miR-202 in