固定化蛋白质色谱模型的建立及其在先导化合物筛选中的应用.pdf

h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t药物分析固定化蛋白质色谱模型的建立及其在先导化合物筛选中的应用张建丰1,梁 琦2,李刚刚1,延保国1*1.西安市第八医院药剂科,西安 7 1 0 0 6 1;2.西北大学生命科学学院,西安 7 1 0 0 6 9摘要:目的 建立基于固定化蛋白质的色谱模型,并将其应用于先导化合物的快速筛选和初步评价。方法 构建融合卤代烷烃脱卤素酶标签(h a l o g e n a t e d a l k a n e d e h a l o g e n a s e t a g g e d,H a l o-t a g g e d)的2-肾上腺素受体(2-a d r e n o c e p t o r,2-A R)重组质粒,用热击法将该重组质粒导入大肠杆菌B L 2 1(D E 3),经诱导表达获得大量融合H a l o-t a g的2-A R,通过H a l o-t a g与6-氯己酸修饰的微球的特异性反应将细胞裂解液中的2-A R一步捕获至硅胶表面,获得2-A R色谱固定相,用该色谱固定相测定甲氧那明、沙丁胺醇和妥布特罗的结合常数为4.91 03、9.91 03、2.01 04 Lm o l-1,对应的解离速率常数为8.1、1 3.8、5.7 s-1,建立固定化蛋白质色谱模型。结果 用该方法对先导化合物X C 2 6 7的成药性进行评价,测得其与2-A R的结合常数为4.4 1 03 Lm o l-1、解离速率常数为8.7 s-1,证实X C 2 6 7是2-A R的潜在激动剂。结论 建立的固定化蛋白质色谱模型能用于先导化合物的筛选和快速评价,方法特异性高,稳定性好,为其他先导化合物的前期评价提供了方法学借鉴。关键词:固定化蛋白质;2-肾上腺素受体;色谱D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 4-2 4 0 7.2 0 2 3.0 5.0 0 7中图分类号:R 9 1 7 文献标志码:A 文章编号:1 0 0 4-2 4 0 7(2 0 2 3)0 5-0 0 3 7-0 5C o n s t r u c t i o n o f a c h r o m a t o g r a p h i c m o d e l b a s e d o n t h e i mm o b i l i z e d p r o t e i n a n d i t s a p p l i c a t i o n i n l e a d c o m p o u n d s c r e e n i n gZ HAN G J i a n f e n g1,L I AN G Q i2,L I G a n g g a n g1,YAN B a o g u o1*1.D e p a r t m e n t o f P h a r m a c y,t h e E i g h t h H o s p i t a l o f X ia n C i t y,X ia n 7 1 0 0 6 1,C h i n a;2.C o l l e g e o f L i f e S c i e n c e,N o r t h w e s t U-n i v e r s i t y,X ia n 7 1 0 0 6 9,C h i n aA b s t r a c t:OO bb jj ee cc tt ii vv ee A c h r o m a t o g r a p h i c m o d e l b a s e d o n t h e i mm o b i l i z e d p r o t e i n w a s e s t a b l i s h e d a n d a p p l i e d t o t h e r a p i d s c r e e n i n g a n d p r e l i m i n a r y e v a l u a t i o n o f l e a d c o m p o u n d s.MM ee tt hh oo dd ss T h e h a l o g e n a t e d a l k a n e d e h a l o g e n a s e t a g g e d(H a l o-t a g g e d)2-a d r e n o c e p t o r(2-A R)w a s g e n e t i c a l l y e n g i n e e r e d i n t h e p l a s m i d o f p R e c e i v e r-B 0 2.T h i s p l a s m i d w a s i n t r o d u c e d i n E.c o l i B L 2 1(D E 3)b y h e a t-s h o c k t r e a t m e n t a n d e x p r e s s e d u s i n g t h e a u t o-i n d u c t i o n m e d i u m t o o b t a i n t h e H a l o-t a g g e d 2-A R.W e p r e p a r e d t h e 2-A R s t a t i o n a r y p h a s e t h r o u g h c a p t u r i n g t h e H a l o-t a g g e d 2-A R i n c e l l l y s a t e o n t o t h e s u r f a c e o f m i c r o s p h e r e s b a s e d o n t h e s p e c i f i c r e a c t i o n b e t w e e n t h e H a l o-t a g a n d 6-c h l o r o c a p r o i c a c i d.T h e c h r o m a t o g r a p h i c m o d l e b a s e d o n t h e i mm o b i l i z e d p r o t e i n w a s c o n s t r u c t e d t h r o u g h t h e d e t e r m i n a t i o n o f t h e a s s o c i a t i o n c o n s t a n t o f m e t h o x a m i n e,s a l b u t a m o l a n d t o b u t e r o l a s 4.9 1 03,9.9 1 03,a n d 2.01 04 Lm o l-1.T h e c o r r e s p o n d i n g d i s s o c i a t i o n r a t e c o n s t a n t s w e r e 8.1,1 3.8,a n d 5.7 s-1 r e s p e c t i v e l y.RR ee ss uu ll tt ss U s i n g t h i s m o d e l,t h e p o t e n t i a l c o m p o u n d(X C 2 6 7)w a s d e t e r m i n e d t o h a v e a n a s s o c i a t i o n c o n s t a n t w i t h 4.41 03 Lm o l-1 a n d a d i s s o c i a t i o n r a t e c o n s t a n t w i t h 8.7 s-1,t h u s p r o v i n g X C 2 6 7 w a s a p o t e n t i a l a g o n i s t t h a t s p e c i f i c b i n d i n g t o 2-A R.CC oo nn cc ll uu ss ii oo nn W e r e a s o n e d t h a t t h e i mm o b i l i z e d 2-A R i s a b l e t o e v a l u a t e d r u g-l i k e p r o p e r t i e s o f p o t e n t i a l c o m p o u n d s w i t h h i g h s p e c i f i c i t y a n d e f f i c i e n c y.K e y w o r d s:i mm o b i l i z e d p r o t e i n;2-a d r e n o r e c e p t o r;c h r o m a t o g r a p h y基金项目:陕西省西安市科技计划项目 编号:2 0 Y X Y J 0 0 0 9(2)作者简介:张建丰,女,硕士,主管药师*通信作者:延保国,男,副主任药师 创新药物研发是当前国际科技竞争的战略制高点之一,往往耗资巨大、耗时长久。在创新药物研发进程中,先导化合物的成药性评价对于降低药物研发风险、提升研发成功率具有重大意义。目前,先导化合物的成药性评价方法主要包括体内的吸收、分布、代谢、排泄以及毒性评价等,存在消耗时间长、样品需求大量等不足,尤其是该评价过程无法证明化合物的作用靶点及作用方式,因此,亟需开发一种准确、快速、易于操作的先导化合物的成药性评价方法。亲和色谱1-3具有高通量和高重复性的特点,目前已经成功应用于药物 受体相互作用的分析,该方法的应用首先需要合成受体色谱固定相,WA I N E R I W等已经成功实现了多种G蛋白偶联受体(G-p r o-t e i n c o u l p e d r e c e p t o r,G P C R)色谱固定相的制备,包括2肾上腺素受体(2-a d r e n o c e p t o r,2-A R)4、烟碱型受体5、阿片样受体6、嘌呤受体7及大麻素受体8等,但以上受体色谱固定相均用物理吸附法制备,无法耐受色谱分析过程中流动相的持续洗脱,因73西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8卷 第5期h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t此其稳定性较差。为了解决上述问题,将卤代烷烃脱卤素酶标签(h a l o-g e n a t e d a l k a n e d e h a l o g e n a s e t a g g e d,H a l o-t a g g e d)融合至受体的非活性末端,经诱导表达获得H a l o标记的G P C R可通过生物正交反应一步固定至大孔微球表面9。用该方法制备的受体色谱固定相具有与初始受体相当的活性,可用于药物 受体相互作用分析和中药靶向活性成分筛选。在文献基础上1 0,本课题组用该方法制备了2-A R色谱固定相并将其应用于止嗽口服液活性成分的筛选,获得了能够靶向作用于2-A R的甘草次酸,经结构修饰,得到了先导化合物X C 2 6 7,本研究用非线性色谱法,以固定化2-A R为工具,对X C 2 6 7进行了初步成药性评价,以期推动2-A R靶向药物的开发。1 仪器与试药1.1 仪器3 1 0 0高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司);U P D-I I-1 0 T超纯水机(四川优普超纯科技有限公司);Z H J H-1 1 1 5 B超净工作台(上海智诚分析仪器制造有限公司);9 8-1-N电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司);S S-3 2 6高压灭菌锅(TO-MY公司);1 0 3恒温培养箱(杭州艾普仪器设备有限公司);5 8 0 4 R冷冻离心机(美国F E I公司);Z Z X T-A装柱机(大 连 依 利 特 分 析 仪 器 有 限 公 司);D Y C Z-2 4 D N电泳仪(北京六一生物科技有限公司);J Y 9 2-2超声破碎仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)。1.2 试药氨基微球(知益微球有限公司);氯化钠、酵母提取物、蛋白胨和琼脂,均购自英国O x o i d公司;2-A R一抗购自北京索莱宝生物科技有限公司;六水琥珀酸钠、乳糖、甘油、二水柠檬酸钠、葡萄糖、六水氯化铁、磷酸氢二钠、七水硫酸镁和氯化铵,均购自天津市恒心化学试剂制造有限公司;甲氧那明、沙丁胺醇和妥布特罗,均购自上海阿拉丁股 份有限公司;色谱 级 甲 醇 购 自 美 国T h e r m o F i s h e r公司;其他试剂均为分析纯。2 方法2.1 2-A R受体色谱固定相的制备按照文献中的方法9,首先在大肠杆菌中表达了E.c o l i B L 2 1(D E 3)T 7/h a l o-t a g 2-A R质粒(p R e-c e i v e r-B 0 2)。该菌种自琼脂糖培养基、一级液体培养基孵育后,3 7 下在自诱导培养基中培养1 0 h,离心使菌体沉淀,向1 g大肠杆菌细胞中加入1 0 m L浓度为2 0 mm o lL-1的P B S缓冲液,超声破碎,收集上清,用蛋白质印迹法(W e s t e r n b l o t t i n g)确认受体表达。将6-氯己酸通过酰化反应修饰至微球表面,通过H a l o标签与微球表面氯离子的生物正交反应,将H a l o标记的2-A R一步固定至微球表面,获得2-A R色谱固定相。经湿法装柱,即得2-A R色谱柱,见图1。2.2 色谱实验本研究的色谱实验均在高效液相色谱仪进行。流动相为磷酸盐(2 0 mm o lL-1,p H 7.4)缓冲液。检测波长:甲氧那明2 3 0 n m,沙丁胺醇2 7 6 n m,妥布特罗2 2 0 n m,X C 2 6 7 2 5 4 n m。进 样 浓 度 分 别 为0.0 5、0.1 0、0.2 0、0.5 0、1.0,2.0 mm o lL-1;进样量为5 L;进样温度为2 5。2.3 数据处理本实验用P e a k f i t 4.1 2软件中的非线性功能处理所得数据。3 结果与讨论3.1 2-A R色谱固定相的制备及表征用自诱导培养基诱导H a l o标记的2-A R的表达,超声裂解细胞后,通过离心将混合物分为上清和沉淀,用W e s t e r n b l o t t i n g验证目标受体的表达情况,见图1。如图1所示,经自诱导培养基孵育,2-A R的表达量显著提高,进一步分析可知,成功表达的受体主要存在于上清中,表明H a l o标记的2-A R溶解性良好。注:1.自诱导培养基菌体细胞;2.L B培养基菌体细胞;3.细胞裂解液上清;4.细胞裂解液沉淀。图1 H a l o标签融合2-A R诱导表达W e s t e r n b l o t t i n g图F i g.1 W e s t e r n b l o t t i n g a n a l y s i s o f t h e H a l o-t a g g e d 2-A R l e v e l s通过观察甲氧那明、沙丁胺醇、妥布特罗的甲醇溶液在2-A R色谱柱上的保留行为考察该色谱系统的特异性,按照2.2项下条件进样检测,见图2。由图2可知,甲氧那明、沙丁胺醇、妥布特罗在2-A R色谱柱上的保留时间分别为4.5、4.9、7.1 m i n,远长于该色谱系统的死时间,且各药物保留时间差异较大,表明固定化2-A R色谱柱可以通过保留时间的差异来识别其配体,具有特异性。注:黑线.甲氧那明;蓝线.沙丁胺醇;红线.妥布特罗。图2 2-A R色谱柱的特异性考察F i g.2 S p e c i f i c i t y i n v e s t i g a t i o n o f i mm o b i l i z e d 2-A R83西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8卷 第5期h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t3.2 3种药物与固定化2-A R的相互作用分析非线性色谱法是一种非理想条件下的色谱系统方程,适用于亲和色谱结合速率常数的测定,该理论是基于以下2个假设:(1)假设色散和柱外效应可忽略,(2)假设吸附和解离的动力学速率是色谱峰展宽的主要原因。其方程如下1 1。y=a0a31-e x p-a3a2 a1xI12 a1xa2 e x p-x-a1a2 1-Ta1a2,xa2 1-e x p-a3a2 (1)T(u,v)=e x p(-v)a0e x p-t I0(2v t)dt(2)y表示归一化的信号强度,x是调整保留时间,I0()和I1()是调整贝尔塞函数,a0为峰面积参数,a1为动力学容量因子参数,a2为峰展宽参数,a3为峰变形参数。根据该方程可求得配体与受体的解离速率常数Kd以及平衡常数KA,计算公式为Kd=1/(a3t0);KA=a3/C0。由上述方程可知,非线性色谱法不仅能准确测定结合常数,而且能同步获得受体与配体的解离速率参数,为受体 药物相互作用参数的全面测定提供了借鉴。此外,与前沿分析法、竞争置换法等方法相比,该方法无需用大量配体饱和色谱柱,有效弥补了分析时间长和药物用量大的不足。将上述3种配体在不同浓度下的色谱参数导出为e x c e l文件,其中,X为保留时间,Y为紫外吸收强度,t0为死时间,C0为进样脉冲宽度与溶质的浓度的乘积,其中进样脉冲宽度为定量环体积与色谱系统死体积的比值,按照x=X/t0,y=Y/C0进行归一化处理即得上述方程中的x和y。将x和y导入P e a k f i t 4.1 1,用最小二乘法对所得色谱峰进行去基线处理,对色谱峰进行拟合,可得到非线性有关参数,见图3。用非线性色谱法进行药物 受体相互作用分析,在色谱柱不饱和时,a1和a2并不随着进样浓度的改变而改变。3种药物在6种进样浓度下的参数见表1。由表1可知,3种药物对应的浓度范围为甲氧那明0.0 50.2 0 mm o lL-1,沙丁胺醇0.1 00.5 0 mm o lL-1,妥布特罗0.1 00.2 0 mm o lL-1,通过3种配体对应的浓度范围内a2和a3,即可求得3种药物与2-A R的结合常数和解离速率常数,见表2。甲氧那明、沙丁胺醇和妥布特罗与2-A R的结合常数分别为4.91 03、9.91 03、2.01 04 Lm o l-1。与文献报道的结合常数相比,虽然3种药物的结合常数低一个数量级,这可能是由于受体的来源不同导致的,但3种药物的结合常数的大小排序与文献报道一致1 2,妥布特罗与2-A R的结合常数最大,表明妥布特罗与受体的结合力最强。同时,甲氧那明、沙丁胺醇和妥布特罗与2-A R的解离速率常数为8.1、1 3.8、5.7 s-1,其中,甲氧那明与妥布特罗具有相当的解离速率常数,表明这2种药物与受体结合后解离速度更慢,作用更久,与文献报道一致1 3。以上结果证明固定化2-A R可用于药物 受体相互作用的分析。图3 沙丁胺醇在2-A R色谱柱上的非线性色谱拟合图F i g.3 N o n-l i n e a r f i t t i n g p e a k p r o f i l e o f s a l b u t a m o l o n t h e 2-A R c o l u m n93西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8卷 第5期h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t表1 非线性色谱法测定甲氧那明、沙丁胺醇和妥布特罗在不同浓度下的参数T a b.1 N o n l i n e a r c h r o m a t o g r a p h i c p a r a m e t e r s c a l c u l a t e d f o r o f m e t h o x y p h e n a m i n e,s a l b u t a m o l,a n d t u l o b u t e r o l配体浓度/(mm o lL-1)a1a2/(1 0-2)a3/(1 0-2)r2甲氧那明0.0 53.2 39.1 93.1 10.9 9 60.1 03.2 88.7 43.3 40.9 9 50.2 03.1 48.7 23.7 50.9 9 50.5 02.8 98.7 74.1 20.9 9 81.0 02.5 69.0 14.0 50.9 9 62.0 03.2 48.8 35.5 40.9 9 7沙丁胺醇0.0 55.4 55.1 46.3 20.9 9 50.1 04.8 85.1 06.5 80.9 9 30.2 04.8 65.1 16.7 50.9 9 70.5 04.8 95.5 66.9 60.9 9 51.0 04.9 34.2 17.9 40.9 9 42.0 05.1 24.6 89.6 70.9 9 6妥布特罗0.0 57.9 81 0.0 21 0.3 90.9 9 80.1 07.8 51 2.3 21 3.5 10.9 9 80.2 07.8 11 2.4 01 3.9 40.9 9 70.5 07.8 41 2.5 41 4.5 10.9 9 61.0 07.9 21 2.8 11 8.0 20.9 9 52.0 08.1 21 3.0 12 4.1 30.9 9 5表2 非线性法测定甲氧那明、沙丁胺醇和妥布特罗与2-A R的相互作用参数T a b.2 T h e i n t e r a c t i o n p a r a m e t e r s o f m e t h o x y p h e n a m i n e,s a l-b u t a m o l,t u l o b u t e r o l a n d 2-A R b y t h e N L C m e t h o d配体结合常数KA/(Lm o l-11 04)解离速率常数Kd/s-1文献报道KA1 2/(Lm o l-11 04)文献报道Kd1 3/s-1甲氧那明0.4 98.10.51.9 3沙丁胺醇0.9 91 3.85.69.2 1妥布特罗2.0 25.72 4.92.5 23.3 先导化合物与固定化2-A R的相互作用分析前期研究发现了具有潜在抗哮喘作用的甘草次酸衍生物X C 2 6 7,结构式见图4,用本文所建立的固定化2-A R模型评价该化合物的成药性,结果与阳性药一致,分别按照0.0 5、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mm o lL-1的浓度将X C 2 6 7进样到2-A R色谱柱,按照公式(1)处理后,X C 2 6 7的非线性色谱参数见表3,计算得X C 2 6 7与2-A R的结合常数为4.41 03 Lm o l-1,解离速率常数为8.7 s-1,虽然远小于妥布特罗,但该化合物与甲氧那明具有相当的结合常数与解离速率常数,表明该化合物能特异性作用于2-A R,成药性良好。图4 化合物X C 2 6 7的结构F i g.4 T h e s t r u c t u r e o f X C 2 6 7表3 非线性色谱法测定X C 2 6 7在不同浓度下的参数T a b.3 N o n l i n e a r c h r o m a t o g r a p h i c p a r a m e t e r s c a l c u l a t e d f o r d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n o f X C 2 6 7配体浓度/(mm o lL-1)a1a2/(1 0-2)a3/(1 0-2)r2甲氧那明0.0 54.5 27.3 42.4 20.9 9 50.1 05.0 17.6 72.9 60.9 9 70.2 05.1 67.7 13.1 20.9 9 60.5 05.2 17.6 83.1 90.9 9 51.0 05.5 47.9 44.5 20.9 9 82.0 05.6 17.8 14.9 70.9 9 84 结论通过生物正交法将2-A R一步固定至大孔微球表面,成功制备固定化2-A R色谱模型,用非线性色谱法测定了甲氧那明、沙丁胺醇和妥布特罗作用于2-A R的结合常数和解离速率常数,证明该色谱模型可用于先导化合物的筛选和评价。进一步用该模型对X C 2 6 7的成药性进行评价,证实X C 2 6 7具有与甲氧那明相当的结合常数和解离速率常数,是一种潜在的2-A R特异性激动剂。本研究亦为先导化合物的成药性评价提供了方法学借鉴。参考文献:1 MO S E R A C,WH I T E B,KOVA C S F A.M e a s u r i n g b i n d i n g c o n s t a n t s o f H i s-t a g g e d p r o t e i n s u s i n g a f f i n i t y c h r o m a t o g r a p h y a n d N i-N T A-i mm o b i l i z e d e n z y m e s J.M e t h o d s M o l B i o l,2 0 1 4,1 1 2 9:4 2 3-4 3 4.2 李洪利,黄倢,周丽.亲和层析技术在现代蛋白质研究中的应用及新发展J.海洋湖沼通报,2 0 0 5,3(6 4 8 2):8 6-9 4.3 钟卉菲,黄嫣嫣,金钰龙,等.亲和分离在蛋白质泛素化修饰研 究中 的应 用 进展 J.色 谱,2 0 2 1,3 9(1):04西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8卷 第5期h t t p:/X B Y Z.c b p t.c n k i.n e t2 6-3 3.4 B E I G I F,CHAK I R K,X I AO R P,e t a l.G-p r o t e i n-c o u p l e d r e c e p t o r c h r o m a t o g r a p h i c s t a t i o n a r y p h a s e s.2.l i g a n d-i n d u c e d c o n f o r m a t i o n a l m o b i l i t y i n a n i mm o b i-l i z e d b e t a(2)-a d r e n e r g i c r e c e p t o r J.A n a l C h e m,2 0 0 4,7 6(2 4):7 1 8 7-7 1 9 3.5 MOA D D E L R,WA I N E R I W.I mm o b i l i z e d n i c o t i n i c r e c e p t o r s t a t i o n a r y p h a s e s:G o i n g w i t h t h e f l o w i n h i g h-t h r o u g h p u t s c r e e n i n g a n d p h a r m a c o l o g i c a l s t u d i e s J.J P h a r m a c e u t B i o m e d,2 0 0 3,3 0(6):1 7 1 5-1 7 2 4.6 B E I G I F,WA I N E R I W.S y n t h e s e s o f i mm o b i l i z e d G p r o t e i n-c o u p l e d r e c e p t o r c h r o m a t o g r a p h i c s t a t i o n a r y p h a s e s:C h a r a c t e r i z a t i o n o f i mm o b i l i z e d a n d o p i o i d r e c e p t o r s J.A n a l C h e m,2 0 0 3,7 5(1 7):4 4 8 0-4 4 8 5.7 MOA D D E L R,C A L L E R I E,MA S S O L I N I G,e t a l.T h e s y n t h e s i s a n d i n i t i a l c h a r a c t e r i z a t i o n o f a n i mm o b i-l i z e d p u r i n e r g i c r e c e p t o r(P 2 Y(1)l i q u i d c h r o m a t o g r a-p h y s t a t i o n a r y p h a s e f o r o n l i n e s c r e e n i n g J.A n a l B i o-c h e m,2 0 0 7,3 6 4(2):2 1 6-2 1 8.8 MOA D D E L R,R O S E N B E R G A,S P E LMAN K,e t a l.D e v e l o p m e n t a n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f i mm o b i l i z e d c a n n a-b i n o i d r e c e p t o r(C B 1/C B 2)o p e n t u b u l a r c o l u m n f o r o n-l i n e s c r e e n i n g J.A n a l B i o c h e m,2 0 1 1,4 1 2(7):8 5-9 1.9 Z E N G K Z,L I Q,WANG J,e t a l.O n e-s t e p m e t h o d o-l o g y f o r t h e d i r e c t c o v a l e n t c a p t u r e o f G P C R s f r o m c o m-p l e x m a t r i c e s o n t o s o l i d s u r f a c e s b a s e d o n t h e b i o o r t h o-g o n a l r e a c t i o n b e t w e e n h a l o a l k a n e d e h a l o g e n a s e a n d c h l o r o a l k a n e s J.C h e m S c i,2 0 1 8,9(2):4 4 6-4 5 6.1 0 F U X Y,Z HAO X,Z HE N G X X,e t a l.R a p i d l y i d e n t i-f y i n g b i o a c t i v e c o m p o u n d s f r o m Z h i s o u o r a l l i q u i d b y i mm o b i l i z e d r e c e p t o r-b a s e d h i g h-p e r f o r m a n c e a f f i n i t y c h r o m a t o g r a p h y J.J S e p S c i,2 0 2 1,4 4(4):3 2 1 9-3 2 2 8.1 1 THOMA S H C.H e t e r o g e n e o u s i o n e x c h a n g e i n a f l o-w i n g s y s t e m J.J Am C h e m S o c,1 9 4 4,6 6(1 0):1 6 6 4-1 6 6 6.1 2 KUO C L,WAN G R B,S h e n L J,e t a l.G-p r o t e i n c o u-p l e d r e c e p t o r s:S A R a n a l y s e s o f n e u r o t r a n s m i t t e r s a n d a n t a g o n i s t s J.J C l i n P h a r m T h e r,2 0 0 4,2 9(3):2 7 9-2 9 8.1 3 L I Q,WAN G J,Z HE N G Y Y,e t a l.C o m p a r i s o n o f z o n a l e l u t i o n a n d n o n l i n e a r c h r o m a t o g r a p h y i n d e t e r m i-n a t i o n o f t h e i n t e r a c t i o n b e t w e e n s e v e n d r u g s a n d i mm o-b i l i s e d 2-a d r e n o c e p t o rJ.J C h r o m a t o g r A,2 0 1 5,1 4 0 1:7 5-8 3.(修订日期:2 0 2 3-0 2-0 8)陕西药师风采录 出版2 0 2 3年8月,中国医药科技出版社出版了 陕西药师风采录。该书由杨世民、李百华主编,收录了三秦大地4 2位优秀执业药师(药师)的事迹。他们中既有荣获第二届至第四届中国健康传媒集团、国家药监局执业药师认证中心评选出的最美药师,也有陕西省执业药师协会历年评选出的优秀执业药师(药师);他们工作在医疗机构、药品生产企业、药品经营企业,他们认真履行药师的职责,用严谨的态度和专业的知识,有力地保障了药品质量及公众合理用药,为医药行业的发展和进步做出了应有的贡献。该书从优秀执业药师(药师)的工作简介、主要业务工作及业绩、获得的荣誉和奖励以及社会兼职等方面展示了各位药师的风采。14西北药学杂志 2 0 2 3年9月 第3 8卷 第5期