高聚合度菊粉通过调节肠-脂肪组织轴改善高脂饮食诱导的犬肥胖.pdf

畜牧兽医学报 2 0 2 3,5 4(9):3 9 4 1-3 9 5 0A c t a V e t e r i n a r i a e t Z o o t e c h n i c a S i n i c ad o i:1 0.1 1 8 4 3/j.i s s n.0 3 6 6-6 9 6 4.2 0 2 3.0 9.0 3 2开放科学(资源服务)标识码(O S I D):高聚合度菊粉通过调节肠-脂肪组织轴改善高脂饮食诱导的犬肥胖陆 江1,朱道仙2,卢劲晔1*,刘 莉2,郝福星2,吴 植3,卢 炜1,刘 静1(1.江苏农牧科技职业学院宠物科技学院,泰州 2 2 5 3 0 0;2.江苏农牧科技职业学院动物医学院,泰州 2 2 5 3 0 0;3.江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,泰州 2 2 5 3 0 0)摘 要:旨在基于肠-脂肪组织轴研究高聚合度菊粉改善高脂饮食诱导犬肥胖的作用机制。试验选取4 0只贵宾犬,随机等分为5组:正常饲粮组、高脂饲粮组和高聚合度菊粉低剂量组、中剂量组及高剂量组。正常饲粮组饲喂正常饲粮,高脂饲粮组饲喂高脂饲粮,高聚合度菊粉低剂量组、中剂量组及高剂量组分别饲喂含1.0%、3.0%和5.0%高聚合度菊粉的高脂饲粮,试验期为1 2周。试验结束后,测定血清糖脂和炎症因子含量,分别用实时荧光P C R检测和W e s t e r n b l o t检测皮下脂肪组织和结肠黏膜中相关因子的mR NA相对表达和蛋白相对表达。结果表明:高聚合度菊粉可有效降低高脂饮食犬的体重、体脂率和血脂水平,改善糖耐量受损,提高结肠黏膜中闭锁蛋白(O c c l u d i n)和闭锁小带蛋白-1(Z O-1)的mR NA与蛋白表达量,降低血清脂多糖(L P S)、I L-6和TN F-水平以及脂肪组织中I L-6和T N F-蛋白表达。综上所述,高聚合度菊粉对高脂饮食诱导犬肥胖具有改善作用,其作用机制可能与调节“肠黏膜屏障功能-L P S易位-脂肪组织炎症”这一肠-脂肪组织轴有关。关键词:高聚合度菊粉;高脂饮食;犬;肥胖;肠-脂肪组织轴中图分类号:S 8 5 6;S 8 5 8.2 9 2 文献标志码:A 文章编号:0 3 6 6-6 9 6 4(2 0 2 3)0 9-3 9 4 1-1 0收稿日期:2 0 2 2-1 1-1 6基金项目:江苏省高校青蓝工程中青年带头人项目(苏教师函2 0 2 11 1号);江苏农牧科技职业学院校级课题(N S F 2 0 2 1 Z R 0 8)作者简介:陆 江(1 9 8 2-),男,江苏新沂人,副教授,硕士,主要从事小动物临床营养与代谢病研究,E-m a i l:v e t l j 1 6 3.c o m*通信作者:卢劲晔,主要从事动物营养生理研究,E-m a i l:l e o p a r d l e o 1 6 3.c o mI n u l i n w i t h H i g h D e g r e e o f P o l y m e r i z a t i o n I m p r o v e s H i g h-f a t D i e t I n d u c e d O b e s i t y i n D o g s b y R e g u l a t i n g t h e G u t-a d i p o s e T i s s u e A x i sL U J i a n g1,Z HU D a o x i a n 2,L U J i n y e1*,L I U L i2,HA O F u x i n g2,WU Z h i3,L U W e i1,L I U J i n g1(1.D e p a r t m e n t o f P e t S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y,J i a n g s u A g r i-a n i m a l H u s b a n d r y V o c a t i o n a l C o l l e g e,T a i z h o u 2 2 5 3 0 0,C h i n a;2.D e p a r t m e n t o f A n i m a l M e d i c i n e,J i a n g s u A g r i-a n i m a l H u s b a n d r y V o c a t i o n a l C o l l e g e,T a i z h o u 2 2 5 3 0 0,C h i n a;3.J i a n g s u P r o v i n c i a l K e y L a b o r a t o r y o f V e t e r i n a r y B i o-p h a r m a c e u t i c a l H i g h T e c h R e s e a r c h,T a i z h o u 2 2 5 3 0 0,C h i n a)A b s t r a c t:T h e a i m o f t h i s s t u d y w a s t o i n v e s t i g a t e t h e m e c h a n i s m o f i n u l i n w i t h h i g h d e g r e e o f p o l y m e r i z a t i o n i n i m p r o v i n g h i g h-f a t d i e t-i n d u c e d o b e s i t y i n d o g s b a s e d o n t h e g u t-a d i p o s e t i s s u e a x i s.F o r t y p o o d l e w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o f i v e g r o u p s:c o mm o n d i e t g r o u p,h i g h-f a t d i e t g r o u p,a n d l o w-d o s e,m e d i u m-d o s e a n d h i g h-d o s e i n u l i n w i t h h i g h d e g r e e o f p o l y m e r i z a t i o n g r o u p s.D o g s i n c o mm o n d i e t g r o u p w e r e f e d w i t h n o r m a l d i e t,a n d i n h i g h-f a t d i e t w e r e f e d w i t h h i g h-f a t d i e t.D o g s i n l o w-d o s e,m e d i u m-d o s e a n d h i g h-d o s e i n u l i n w i t h h i g h d e g r e e o f p o l y m e r i-z a t i o n g r o u p s w e r e f e d w i t h h i g h-f a t d i e t c o n t a i n i n g 1.0%,3.0%a n d 5.0%i n u l i n w i t h h i g h d e-g r e e o f p o l y m e r i z a t i o n,r e s p e c t i v e l y.T h e t e s t p e r i o d w a s 1 2 w e e k s.A f t e r t h e e x p e r i m e n t,t h e 畜 牧 兽 医 学 报5 4卷 l e v e l s o f s e r u m g l u c o s e,f a t a n d i n f l a mm a t o r y f a c t o r s w e r e m e a s u r e d,a n d t h e r e l a t i v e e x p r e s-s i o n s o f mR NA a n d p r o t e i n o f r e l a t e d f a c t o r s i n s u b c u t a n e o u s a d i p o s e t i s s u e a n d c o l o n m u c o s a w e r e d e t e c t e d u s i n g r e a l-t i m e f l u o r e s c e n t P C R a n d W e s t e r n b l o t,r e s p e c t i v e l y.T h e r e s u l t s s h o w e d a s f o l l o w s:I n u l i n w i t h h i g h d e g r e e o f p o l y m e r i z a t i o n e f f e c t i v e l y r e d u c e d t h e b o d y w e i g h t,b o d y f a t r a t e a n d b l o o d l i p i d l e v e l,m e a n w h i l e i m p r o v e d t h e i m p a i r e d g l u c o s e t o l e r a n c e i n d o g s f e d w i t h h i g h-f a t d i e t.M o r e o v e r,i n u l i n w i t h h i g h d e g r e e o f p o l y m e r i z a t i o n i n c r e a s e d t h e mR NA a n d p r o t e i n e x p r e s s i o n o f O c c l u d i n a n d Z O-1 i n c o l o n i c m u c o s a,a n d r e d u c e d l e v e l s o f s e r-u m l i p o p o l y s a c c h a r i d e(L P S),I L-6 a n d T N F-a n d t h e e x p r e s s i o n o f I L-6 a n d T N F-i n a d i p o s e t i s s u e.I n c o n c l u s i o n,i n u l i n w i t h h i g h d e g r e e o f p o l y m e r i z a t i o n c a n i m p r o v e t h e o b e s i t y i n d u c e d b y h i g h-f a t d i e t i n d o g s,a n d i t s m e c h a n i s m m a y b e r e l a t e d t o t h e r e g u l a t i o n o f t h e g u t-a d i p o s e t i s s u e a x i s o f i n t e s t i n a l m u c o s a l b a r r i e r f u n c t i o n-L P S t r a n s l o c a t i o n-a d i p o s e t i s s u e i n f l a mm a-t i o n.K e y w o r d s:i n u l i n w i t h h i g h d e g r e e o f p o l y m e r i z a t i o n;h i g h-f a t d i e t;d o g;o b e s i t y;g u t-a d i p o s e t i s s u e a x i s*C o r r e s p o n d i n g a u t h o r:L U J i n y e,E-m a i l:l e o p a r d l e o 1 6 3.c o m 肥胖是犬最常见的代谢性疾病之一,近年来发病率不断升高,成为宠物行业关注的热点问题,而且肥胖还可诱发糖尿病、高血压等疾病,严重危害动物健康,增加饲养成本1-2。研究表明,肠道与脂肪组织具有串扰现象,称为肠-脂肪组织轴3。肥胖与肠-脂肪组织轴关系密切,肠道黏膜屏障功能障碍导致脂多糖易位产生的代谢性内毒素血症是肥胖症最重要的启动因子之一4-6。因此,调节肠-脂肪 组 织 轴 有 望 成 为 肥 胖 防 治 的 一 种 有 效途径。菊粉是一种聚合度(d e g r e e o f p o l y m e r i z a t i o n,D P)为26 0的果糖聚合物,具有降血糖和血脂、调节肠道菌群及提高免疫等多种生理功能,已广泛应用于猪、牛及家禽等动物7-9。通常把D P1 0的称为低聚合度菊粉,D P2 3的称为高聚合度菊粉1 0,不同聚合度的菊粉可产生不同的生理功能1 1。H e等1 2研究发现,高聚合度菊粉可通过调节肠道黏膜屏障功能影响肠-胰腺轴缓解急性胰腺炎,而低聚合度菊粉无此作用。王琦1 3研究表明,菊粉可降低高脂饮食小鼠的体重,且高聚合度菊粉效果优于低聚合度菊粉。然而,高聚合度菊粉通过调节肠-脂肪组织轴改善肥胖症的作用还有待于研究。因此,本试验主要研究高聚合度菊粉对高脂饮食犬肥胖改善作用及其与肠-脂肪组织轴的关系,为高聚合度菊粉在犬抗肥胖功能性食品上的应用和开发提供依据。1 材料与方法1.1 实验动物经江苏农牧科技职业学院动物福利与伦理审查委员会批准(编号N S F 2 0 2 1 0 8),4 0只泰迪型贵宾犬由本单位美容实验犬舍提供,雄性,3岁,体重5.5 k g左右,健 康 状 况 良 好。实 验 动 物 使 用 许 可 证 为S Y X K(苏)2 0 2 1-0 0 3 7。1.2 主要材料高聚合度菊粉(O r a f t i H P,聚合度2 3,纯度9 9%)购于常州迪沙医药科技有限公司。1.3 试验设计选取4 0只泰迪型贵宾犬,随机等分为5组:正常饲粮组(C D组)、高脂饲粮组(H F D组)、低剂量高聚合度菊粉组(LH I组)、中剂量高聚合度菊粉组(MH I组)和高剂量高聚合度菊粉组(HH I组)。试验前各组均以正常饲粮进行2周适应性饲喂。然后,C D组饲喂正常饲粮,H F D组饲喂高脂饲粮,LH I组、MH I组 和HH I组 分 别 饲 喂 含1.0%、3.0%和5.0%高聚合度菊粉的高脂饲粮。试验期为1 2周。整个试验过程中,所有犬均单笼饲养,每天0 8:3 0及1 6:3 0各喂食1次,所有犬每天自由活动1 5 m i n左 右。基 础 饲 粮 参 考 犬 营 养 标 准(N R C2 0 1 6)配制,各组饲粮组成及营养水平见表1。1.4 体重、采食量和体脂率的测定试验前称量体重,然后每2周称重1次,按公式:2493 9期陆 江等:高聚合度菊粉通过调节肠-脂肪组织轴改善高脂饮食诱导的犬肥胖 表1 基础饲粮的组成及营养水平(风干基础)T a b l e 1 C o m p o s i t i o n a n d n u t r i e n t l e v e l s o f t h e b a s a l d i e t(a i r-d r y b a s i s)%项目 I t e m组别 G r o u pC D组C D g r o u pHF D组H F D g r o u pLH I组LH I g r o u pMH I组MH I g r o u pHH I组HH I g r o u p原料I n g r e d i e n t 米粉 R i c e f l o u r4 02 72 62 62 4 豆粕 S o y b e a n m e a l2 01 51 41 31 3 鸡肉粉 C h i c k e n p o w d e r2 21 51 51 51 5 猪油 L a r d02 52 52 52 5 菊粉 I n u l i n00135 鱼粉 F i s h m e a l6.56.56.56.56.5 大豆油 S o y b e a n o i l1 01 01 01 01 0 食盐 N a C l0.50.50.50.50.5 预混剂 P r e m i x1)11111 合计 T o t a l1 0 0.01 0 01 0 0.01 0 01 0 0营养水平 N u t r i e n t l e v e l s2)代谢能/(M Jk g-1)ME1 1.5 31 7.5 31 7.4 51 7.4 21 7.3 8 粗蛋白质 C P2 8.1 52 0.4 22 0.3 52 0.1 62 0.0 7 粗脂肪 E E1 3.9 33 7.2 23 7.1 93 7.1 83 7.1 5 钙 C a1.5 21.4 71.4 61.4 61.4 6 总磷 T P1.0 10.9 60.9 40.9 30.9 21).预混剂为每千克饲料提供:F e 6 0 m g,M n 1 1 0 m g,C u 7.5 m g,Z n 6 5 m g,I 1.7 m g,S e 0.1 5 m g,VA 4 8 0 0 I U,V D 1 1 0 0 I U,V E 3 5 I U,VK 1.3 m g,V B1 2.0 m g,V B2 8 m g,泛酸6.6 m g,烟酸2 0 m g,吡哆醇3.3 m g,生物素0.0 5 m g,叶酸0.5 m g,钴胺素0.0 5 m g。2).均为计算值1).T h e p r e m i x p r o v i d e d t h e f o l l o w i n g p e r k g o f t h e d i e t:F e 6 0 m g,M n 1 1 0 m g,C u 7.5 m g,Z n 6 5 m g,I 1.7 m g,S e 0.1 5 m g,VA 4 8 0 0 I U,V D 1 1 0 0 I U,V E 3 5 I U,VK 1.3 m g,V B1 2.0 m g,V B2 8 m g,p a n t o t h e n i c a c i d 6.6 m g,n i c o t i n i c a c i d 2 0 m g,p y r i-d o x i n e 3.3 m g,b i o t i n 0.0 5 m g,f o l i c a c i d 0.5 m g,c o b a l a m i n 0.0 5 m g.2).A l l c a l c u l a t e d v a l u e s体重增加率=(测量体重-初始体重)/初始体重1 0 0%,计算体重变化情况。按:采食量=给予饲粮-剩余饲粮,每周计算1次采食量,按:平均采食量=总采食量/总时间,计算平均采食量。试验结束后,用E c h o MR I体 成 分 分 析 仪(美 国,E c h o MR I L L C公司)测定体脂率。1.5 血液生化检测试验结束时,空腹经桡外侧静脉采集各组试验犬的血液,3 0 0 0 rm i n-1离心1 0 m i n得到血清。当天用试剂盒测 定血 清 甘 油 三 酯(T G)、总 胆 固 醇(T C)、高密度脂蛋白胆固醇(HD L-C)、低密度脂蛋白胆固醇(L D L-C)和葡萄糖(G l u)含量,试剂盒购于北京百奥莱博科技有限公司。用E L I S A试剂盒法(购于美国B i o l e g e n d公司)测定白细胞介素-6(I L-6)、肿瘤坏死因子-(T N F-)、脂多糖(L P S)和D-乳酸含量。1.6 口服葡萄糖耐量试验(O G T T)试验结束后,所有犬禁食1 2 h,然后按2.0 gk g-1体重服用葡萄糖。在给药后0、3 0、6 0、9 0和1 2 0m i n,通过血糖检测试剂盒测量桡侧静脉血液中的葡萄糖浓度。然后,以血糖浓度为纵坐标,时间为横坐标绘制曲线,并计算出曲线下面积(AU C)。1.7 胰岛素耐量试验(I T T)在OG T T试验结束后第3天,按0.5 Uk g-1体重肌肉注射胰岛素,在给药后0、3 0、6 0、9 0和1 2 0m i n,通过血糖检测试剂盒测量桡侧静脉血液中的葡萄糖浓度。然后,以血糖浓度为纵坐标,时间为横坐标绘制曲线,并计算出曲线下面积(AU C)。1.8 实时荧光P C R检测试验结束后,分别取腹部皮下白色脂肪组织和结肠黏膜,用T R I z o l法提取脂肪组织总R NA和结肠黏膜总R NA。然后合成c D NA并用于实时荧光P C R扩增。-肌动蛋白(-a c t i n)为内参基因,检测脂肪组织中白细胞介素-6(I L-6)、肿瘤坏死因子-(TNF-)的mR NA相对表达量以及空肠黏膜中闭锁蛋白(O c c l u d i n)、闭锁小带蛋白-1(Z O-1)和肌球3493畜 牧 兽 医 学 报5 4卷 蛋白 轻 链 激 酶(ML C K)的mR NA相 对 表 达 量。P C R扩增条件为:9 5 3 0 s,5 5 3 0 s,7 2 3 0 s,4 0个循环。目的基因引物由上海生工生物技术有限公司设计和合成,详见表2。目的基因 mR NA 的相对表达量用 2-C t 法计算。表2 P C R引物序列T a b l e 2 P r i m e r s e q u e n c e s f o r P C R基因G e n e登录号A c c e s s i o n N o.引物序列(5 3)P r i m e r s e q u e n c e s(5 3)片段长度/b pF r a g m e n t l e n g t h白细胞介素6I L-6NM_0 0 1 0 0 3 3 0 1F:T C T T G C A G T C G C A G GA T GA GR:T G C C C A G G C T A C A T T A T C C G1 1 5肿瘤坏死因子-TNF-NM_0 0 1 0 0 3 2 4 4F:C C C C AA G T G A C AA G C C A G TAR:T C AG C T G G T T G T C T G T C AG C1 2 6闭锁蛋白O c c l u d i nXM_0 3 8 6 5 7 7 2 3F:C A C C A C T G AG C C A C C C A GR:C G A C A C AG G C AAA T A T G G C G3 3 6闭锁小带蛋白-1Z O-1A F_1 6 9 1 9 5F:T C AA G AG C C A T C A T T G C C G TR:A C C AG AG G C C A T G C AAA C T A2 1 4肌球蛋白轻链激酶ML C KXM_0 2 4 4 5 3 5 3 6F:AG T A C G G T G G T G G T G AA G T GR:A T C C C C C A T G G T C T T A C C G C8 8-肌动蛋白-a c t i nUM_0 0 1 1 9 5 8 4 5.2F:GAA C G G AG AAG G T G A C A G C AR:G G C T T T T G G G AA G G C AAA G G1 6 31.9 W e s t e r n b l o t检测用R I P A裂解液提取皮下脂肪组织总 蛋白,B C A法测定蛋白浓度,用5上样缓冲液配平各蛋白样品,上样进行S D S-P AG E电泳2 h,P V D F膜转膜2 h,用5%脱脂牛奶室温封闭2 h。加抗I L-6(1 2 0 0 0)、T N F-(1 2 0 0 0)和GA P DH(1 5 0 0 0),置于4 摇床中孵育过夜,T B S T洗膜3次,每次5 m i n。加辣根过氧化物酶标记抗(1 5 0 0 0)室温下孵育1 h,T B S T洗膜3次,每次5 m i n。化学发光成像仪中显影成像。以GA P DH为内参,采用I m a g e J分析软件对各组条带的光密度值进行分析,试验重复3次,取平均值。所有抗体均购于美国S i g m a公司。按上述方法,检测结肠黏膜中O c c l u-d i n、Z O-1和ML C K表达。1.1 0 数据处理试验结果用“平均值标准差”表示,两组间数据用S P S S 2 3.0软件t检验进行比较,采用P e a r s o n方法进行相关性分析。P0.0 5表示有显著性差异,P0.0 1表示有极显著性差异。2 结 果2.1 高聚合度菊粉对高脂饮食犬体重、采食量和体脂率的影响 从图1 a可知,各组犬体重呈增加趋势,H F D组体重从第2周开始显著高于C D组(P0.0 5),MH I组和HH I组 体 重 从 第4周 开 始 显 著 低 于H F D组(P0.0 5),LH I组体重从第8周开始显著低于H F D组(P0.0 5)。从图1 b可知,试验结束时,H F D组 体 重 增 加 率 显 著 高 于C D组(P0.0 5),约增加3 4%,各剂量高聚合度菊粉组的体重增加率显著低于H F D组(P0.0 5)。各组间平均采食量无显著变化(图1 c)。H F D组犬体脂率显著高于C D组,高聚合度菊粉以剂量依赖式降低高脂饮食犬的体脂率,与H F D组差异显著(P0.0 5,图1 d)。2.2 高聚合度菊粉对高脂饮食犬血清生化指标的影响 由表3可知,H F D组血中T G、T C和L D L-C的含量显著高于C D组,HD L-C显著低于C D组(P0.0 5)。随着高聚合度菊粉剂量的增加,高脂饮食犬血中T G、T C和L D L-C的含量逐渐降低,HD L-C含量逐渐升高,且HH I组与H F D组有显著差异(P0.0 5)。所有组之间的G l u含量无显著差异。2.3 高聚合度菊粉对高脂饮食犬血糖代谢的影响从图2 a、图2 b可以看出,各组犬口服给予葡萄糖后,血糖值呈显著增加趋势,在第3 0分钟达到最高值,随后血糖值呈逐渐降低趋势;与C D组相比,H F D组AU C显著增加,高脂饮食中添加低、中、高4493 9期陆 江等:高聚合度菊粉通过调节肠-脂肪组织轴改善高脂饮食诱导的犬肥胖 a.体重变化;b.体重增加率;c.平均采食量;d.体脂率。图中C D正常饲粮组,HF D为高脂饲粮组,LH I、MHL和HH I分别为低剂量、中剂量和高剂量高聚合度菊粉组,下图同。*表示与C D组比较P0.0 5,#表示与HF D组比较P0.0 5a.B o d y w e i g h t c h a n g e;b.B o d y w e i g h t g a i n r a t e;c.A v e r a g e f e e d i n t a k e;d.B o d y f a t r a t e.I n t h e f i g u r e,C D.N o r m a l d i e t g r o u p;H F D.H i g h f a t d i e t g r o u p;LH I,MHL a n d HH I.L o w-d o s e,m e d i u m-d o s e a n d h i g h-d o s e h i g h p o l y m e r i z a t i o n i n u l i n g r o u p s,r e s p e c t i v e l y.T h e s a m e a s b e l o w.*P0.0 5 c o m p a r e d w i t h C D g r o u p,a n d#P0.0 5 c o m p a r e d w i t h H F D g r o u p图1 高聚合度菊粉对高脂饮食犬体重、采食量和体脂率的影响F i g.1 E f f e c t s o f i n u l i n w i t h h i g h d e g r e e o f p o l y m e r i z a t i o n o n b o d y w e i g h t,f e e d i n t a k e a n d b o d y f a t r a t e i n d o g s f e d w i t h h i g h-f a t d i e t表3 血液生化指标的变化T a b l e 3 C h a n g e s o f b l o o d b i o c h e m i c a l i n d e x e smm o lL-1项目I t e m组别G r o u pC DHF DLH IMH IHH IT G0.6 40.0 70.9 30.1 1*0.8 90.0 9*0.8 40.0 9*0.7 70.0 7*#T C4.8 10.4 95.6 20.5 2*5.6 00.5 4*5.4 20.5 55.2 70.5 1#L D L-C2.9 40.3 63.4 60.3 5*3.3 90.3 83.3 10.3 13.1 90.3 7#HD L-C1.4 20.1 11.0 60.0 9*1.0 90.1 2*1.1 60.1 2*1.2 80.1 3#G l u5.8 60.5 26.2 80.5 56.2 10.5 86.1 70.5 46.0 20.5 9*表示与C D组比较P0.0 5,#表示与HF D组比较P0.0 5*m e a n s v e r s u s C D g r o u p P0.0 5 a n d#m e a n s v e r s u s H F D g r o u p P0.0 5剂量高聚合度菊粉后,LH I组、MH I组和HH I组的AU C显著低于H F D组(P0.0 5)。I T T结果显示(图2 c、2 d),各组犬肌肉注射胰岛素后,血糖值呈显著降低趋势,在第6 0 m i n 达到最低值,随后血 糖值呈逐渐增加趋势;与C D组相比,H F D组AU C显著增加,高脂饮食中添加低、中、高剂量高聚合度菊粉后AU C呈降低趋势,HH I组的AU C显著低于H F D组(P0.0 5)。5493畜 牧 兽 医 学 报5 4卷 a.口服葡萄糖耐量试验(OG T T)血糖变化;b.OG T T曲线下面积;c.胰岛素耐量试验(I T T)血糖变化;d.I T T曲线下面积。*.P0.0 5a.C h a n g e s o f b l o o d g l u c o s e i n o r a l g l u c o s e t o l e r a n c e t e s t(OG T T);b.AU C o f OG T T b l o o d g l u c o s e c u r v e;c.C h a n g e s o f b l o o d g l u c o s e i n i n s u l i n t o l e r a n c e t e s t(I T T);d.AU C o f I T T b l o o d g l u c o s e c u r v e.*.P0.0 5 图2 高聚合度菊粉对高脂饮食犬血糖代谢的影响F i g.2 E f f e c t o f i n u l i n w i t h h i g h d e g r e e o f p o l y m e r i z a t i o n o n b l o o d g l u c o s e m e t a b o l i s m i n d o g s f e d w i t h h i g h-f a t d i e t2.4 高聚合度菊粉对高脂饮食犬结肠黏膜屏障功能的影响 与C D组比较,H F D组血清中D-乳酸的含量显著升 高(P0.0 1);与H F D组 比 较,MH I组 和HH I组D-乳酸显著降低(P0.0 5,图3 a)。从图3 b可以看出,与C D组比较,H F D组结肠黏膜中O c c l u d i n、Z O-1的mR NA相对表达量显著下调;不同剂量高聚合度菊粉均可回调这些mR NA相对表达量,MH I组和HH I组O c c l u d i n和Z O-1的mR NA相 对 表 达 量 均 显 著 高 于H F D组(P0.0 5);H F D组结肠黏膜中ML C K的mR NA表达较C D组显著上调,而MH I组和HH I组ML C K的mR NA表达较H F D组显著下调。W e s t e r n b l o t结果显示,与C D组比较,H F D组结肠黏膜中O c c l u-d i n、Z O-1蛋白表达显著下调,ML C K蛋白表达显著上调;与H F D组比较,MH I组和HH I组O c c l u-d i n、Z O-1蛋白表达显著上调,ML C K蛋白表达显著下调(图3 c、3 d)。2.5 高聚合度菊粉对高脂饮食犬血清及脂肪组织炎症因子表达的影响 由图4 a、4 b、4 c 可知,与C D组比较,H F D组血清I L-6、T N F-和L P S含量显著升高(P0.0 1);随着高聚合度菊粉剂量增加,高脂饮食犬血清I L-6、T N F-和L P S含量均呈下降趋势;与H F D组比较,MH I组T N F-和L P S含 量 显 著 降 低(P0.0 5),HH I组I L-6、T N F-和L P S含量显著降低(P0.0 5或P0.0 1)。高脂饮食犬血清L P S与I L-6、T N F-均 呈 正 相 关 关 系(r=0.6 6 3,P0.0 0 1;r=0.6 9 5,P0.0 0 1。图4 d、e)。H F D组脂肪组织中I L-6、TNF-的mR NA相对表达量较C D组显著上调,但随着高聚合度菊粉剂量增加呈下调 趋 势,MH I组(P0.0 5)和HH I组(P0.0 1)均与H F D组有显著差异(图4 f、4 g)。W e s t-e r n b l o t结果显示,与C D组比较,H F D组脂肪组织中I L-6、T N F-蛋白相对表达量升高,与H F D组比较,MH I组和HH I组I L-6、T N F-蛋白相对表达量降低(P0.0 5,图4 h、4 i)。6493 9期陆 江等:高聚合度菊粉通过调节肠-脂肪组织轴改善高脂饮食诱导的犬肥胖a.血清中D-乳酸含量;b.结肠黏膜中闭锁蛋白、闭锁小带蛋白-1和肌球蛋白轻链激酶的mR NA相对表达量;c d.结肠黏膜中闭锁蛋白、闭锁小带蛋白-1和肌球蛋白轻链肌酶的W e s t e r n b l o t相对定量分析。*.P0.0 5;*.P0.0 1a.T h e c o n t e n t o f D-l a c t i c a c i d i n s e r u m;b.T h e r e l a t i v e mR NA e x p r e s s i o n o f O c c l u d i n,Z o n u l a o c c l u d e n s p r o t e i n 1(Z O-1)a n d m y o s i n l i g h t c h a i n k i n a s e(ML C K);c-d.T